本發(fā)明屬于疾病防治和水產(chǎn)養(yǎng)殖，涉及已知蛋白質(zhì)的特點治療活性，具體涉及一種蛋白質(zhì)在制備防治急性肝胰腺壞死癥的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

2、急性肝胰腺壞死癥（ahpnd）的致死率極高，通常在病發(fā)幾天內(nèi)就會導(dǎo)致整個蝦群死亡。該病癥主要攻擊蝦的肝胰腺，造成嚴(yán)重的器官損傷和功能障礙，最終造成日本囊對蝦的大量死亡。相關(guān)研究表明，ahpnd的主要傳播途徑是通過感染攜帶表達(dá)pir毒素質(zhì)粒的弧菌。這種細(xì)菌分泌的pir毒素是ahpnd的主要致病因素。在自然狀態(tài)下ahpnd的感染途徑為弧菌經(jīng)口進(jìn)入日本囊對蝦體內(nèi)，分泌pir毒素對日本囊對蝦組織造成損傷。盡管日本囊對蝦的胃部幾丁質(zhì)層和腸道中主要由幾丁質(zhì)和糖蛋白構(gòu)成的圍食膜結(jié)構(gòu)是抵御外來病原菌的第一道防線，然而pir毒素的強(qiáng)大侵入能力仍能有效突破這些防御屏障侵入宿主體內(nèi)。pir毒素穿透第一道屏障后在宿主體內(nèi)迅速擴(kuò)散，干擾正常的生理功能，造成極高的死亡率。

3、雖然目前對于ahpnd的致病機(jī)理還未完全解析，但已經(jīng)有一些手段來預(yù)防。例如通過使用抗生素或消毒劑，但這種方法效果有限而且由于其會導(dǎo)致耐藥性菌株的出現(xiàn)，因此并不能廣泛使用；通過改善溫度、ph值和鹽度等環(huán)境因素，將水質(zhì)環(huán)境調(diào)節(jié)到不利于病原菌生長的條件；通過使用益生菌調(diào)節(jié)日本囊對蝦的腸道微生物群，增強(qiáng)其整體的免疫能力以及存活率等方法。但這些方法都不是針對ahpnd這一病癥或針對致病因子pir毒素的，因此發(fā)現(xiàn)針對ahpnd的預(yù)防以及治療方法至關(guān)重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種蛋白質(zhì)在制備防治急性肝胰腺壞死癥的藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)一種最初來源為日本囊對蝦（ marsupenaeus? japonicus）的蛋白質(zhì)具有中和弧菌pir毒素的能力，其能夠有效阻隔pir毒素穿透屏障侵染日本囊對蝦組織，并增強(qiáng)日本囊對蝦對于弧菌pir毒素的抵抗能力，從而實現(xiàn)對急性肝胰腺壞死癥的防治。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

3、第一方面，一種蛋白質(zhì)在制備防治急性肝胰腺壞死癥的藥物中的應(yīng)用，所述藥物包括所述蛋白質(zhì)或其衍生產(chǎn)品，所述蛋白質(zhì)的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

4、本發(fā)明所述蛋白質(zhì)可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到，也可以通過送至生物公司合成或利用自動多肽合成儀合成全序列，還可以通過制備與利用該蛋白的多克隆或單克隆抗體于日本囊對蝦體內(nèi)分離純化獲得。

5、本發(fā)明所述蛋白質(zhì)的形式可以是天然蛋白質(zhì)、重組蛋白質(zhì)或者合成多肽，亦或者在天然或重組蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)進(jìn)行化學(xué)或物理修飾，以提高其在腸道內(nèi)的穩(wěn)定性、活性或靶向性，在此不做具體限定。

6、本發(fā)明的蛋白質(zhì)的衍生產(chǎn)品為能夠產(chǎn)生所述蛋白質(zhì)的產(chǎn)品，在一些實施方案中，蛋白質(zhì)的衍生產(chǎn)品可以為工程菌、重組表達(dá)載體或編碼所述蛋白質(zhì)的核酸分子，所述重組表達(dá)載體含有所述核酸分子，所述工程菌含有所述重組表達(dá)載體。具體地，所述工程菌可為真核菌類或原核菌類，例如農(nóng)桿菌、酵母菌、大腸桿菌等。具體地，所述重組表達(dá)載體通過所述核酸分子有效地連接到表達(dá)載體上獲得，所述表達(dá)載體為質(zhì)粒、噬菌體、病毒載體、噬菌粒、黏粒、f黏粒等。具體地，所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因組dna或重組dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna或hnrna等。更為具體地，所述核酸分子的核苷酸序列如seq?idno.2所示。

7、在一些實施方案中，所述藥物包含有效量所述蛋白質(zhì)。在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)可以以單位劑量形式存在于所述藥物中，以便施用。

8、在一些實施方案中，所述藥物的施用方式為直接投喂或飼料添加。具體地，所述飼料添加，可以將所述藥物作為飼料添加劑，加入至飼料中，隨飼料一同對水產(chǎn)動物進(jìn)行飼喂。

9、在一些實施方案中，所述藥物的有效量為：每只日本囊對蝦施用10~20?μg所述蛋白質(zhì)。

10、在一些實施方案中，所述藥物的施用對象為水產(chǎn)動物。具體地，所述水產(chǎn)動物為日本囊對蝦。

11、在一些實施方案中，所述藥物為粉末、可溶性粉劑、顆粒預(yù)混料、復(fù)合制劑、液體涂層和微膠囊包埋等。所述藥物的具體形式可根據(jù)實際需要進(jìn)行選擇。

12、在一些實施方案中，所述急性肝胰腺壞死癥由為副溶血弧菌引起的弧菌病。

13、在一些實施方案中，所述急性肝胰腺壞死癥的致病因素為pir毒素。具體地，所述pir毒素為pirab毒素。

14、在一些實施方案中，所述藥物具有以下一種或多種作用：

15、（1）中和弧菌pir毒素；

16、（2）阻攔弧菌pir毒素侵入水產(chǎn)動物消化道組織；

17、（3）提高水產(chǎn)動物抵抗含有pir毒素弧菌的能力；

18、（4）提高水產(chǎn)動物在弧菌pir毒素感染下的存活率。

19、本發(fā)明的有益效果為：

20、本發(fā)明提供的氨基酸序列如seq?id?no.1所示的蛋白質(zhì)與日本囊對蝦消化道內(nèi)的幾丁質(zhì)層相結(jié)合并通過與弧菌pir毒素蛋白互作從而阻止毒素蛋白透過幾丁質(zhì)層侵染上皮組織造成組織損傷。具體的，原核表達(dá)純化該重組蛋白并經(jīng)口飼喂日本囊對蝦，通過存活率實驗、he染色實驗以及免疫熒光實驗等驗證該重組蛋白具有中和弧菌pir毒素以及抗消化道感染的能力。

21、本發(fā)明提供的氨基酸序列如seq?id?no.1所示的蛋白質(zhì)在預(yù)防和控制ahpnd方面表現(xiàn)出優(yōu)異的效果。該蛋白質(zhì)可以中和pir毒素并減少毒素侵染上皮組織進(jìn)入細(xì)胞的量，可用于日本囊對蝦養(yǎng)殖中的病害防治，能夠有效防治ahpnd。

技術(shù)特征：

1.一種蛋白質(zhì)在制備防治急性肝胰腺壞死癥的藥物中的應(yīng)用，所述藥物包括所述蛋白質(zhì)或其衍生產(chǎn)品，所述蛋白質(zhì)的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，蛋白質(zhì)的衍生產(chǎn)品為工程菌、重組表達(dá)載體或編碼所述蛋白質(zhì)的核酸分子，所述重組表達(dá)載體含有所述核酸分子，所述工程菌含有所述重組表達(dá)載體。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是，所述核酸分子的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述藥物的施用方式為直接投喂或飼料添加。

5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述藥物的有效量為：每只日本囊對蝦施用10~20?μg所述蛋白質(zhì)。

6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述藥物的施用對象為水產(chǎn)動物。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征是，所述水產(chǎn)動物為日本囊對蝦。

8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述藥物為粉末、可溶性粉劑、顆粒預(yù)混料、復(fù)合制劑、液體涂層或微膠囊包埋。

9.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述急性肝胰腺壞死癥由為副溶血弧菌引起的弧菌??；

10.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述藥物具有以下一種或多種作用：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于疾病防治和水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，涉及已知蛋白質(zhì)的特點治療活性，具體涉及一種蛋白質(zhì)在制備防治急性肝胰腺壞死癥的藥物中的應(yīng)用。所述蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白質(zhì)具有中和弧菌Pir毒素的能力，其能夠有效阻隔Pir毒素穿透屏障侵染日本囊對蝦組織，并增強(qiáng)日本囊對蝦對于弧菌Pir毒素的抵抗能力，從而實現(xiàn)對急性肝胰腺壞死癥的防治。

技術(shù)研發(fā)人員：王顯偉,鄭義,王偉光
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/12