專利名稱：：冬蟲(chóng)夏草藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療白細(xì)胞減少癥的藥物，具體涉及以冬蟲(chóng)夏草為主的中藥組方。目前，雖然G-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子)或GM-CSF(粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)對(duì)治療白細(xì)胞減少癥有較好的療效，但作為生物制品，存在半衰期短、反復(fù)使用毒付作用較強(qiáng)以及費(fèi)用較高的缺點(diǎn)，在臨床應(yīng)用中受到很大的限制；中醫(yī)臨床中用于治療白細(xì)胞減少癥的組方(湯劑)雖也有一定的療效，但由于中醫(yī)治療需要辯證施治，不便于臨床廣泛使用，且對(duì)白細(xì)胞減少癥有效的中藥如雞血藤、女真子、枸杞等單獨(dú)使用的療效也均有限，因而臨床上對(duì)原發(fā)性血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥的治療尚缺乏有效的常規(guī)藥物，因此，研究和開(kāi)發(fā)對(duì)白細(xì)胞減少癥有較好療效、且給藥方便、費(fèi)用較低的常規(guī)藥，有利于臨床白細(xì)胞減少癥的患者尤其是腫瘤放療或化療后白細(xì)胞減少癥的治療及為進(jìn)一步接受放療或化療創(chuàng)造條件。冬蟲(chóng)夏草是具有補(bǔ)肺益腎、止血化痰作用的傳統(tǒng)名貴中藥，用于治療久咳虛喘、營(yíng)嗽咯血、陽(yáng)痿遺精、腰膝酸痛等癥具有較好的療效。近年來(lái)的研究證明，冬蟲(chóng)夏草為麥角菌科真菌冬蟲(chóng)夏草(Cordycepssinensis(Berr.)Sacc.)寄生在蝙蝠科昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)上的子座及幼蟲(chóng)尸體的復(fù)合體，其菌絲已被分離和人工培養(yǎng)。通過(guò)其有效成分的研究發(fā)現(xiàn)，人工菌絲與冬蟲(chóng)夏草的有效成分相同或相似，除了含人體必需氨基酸和微量元素、維生素、麥角甾醇及生物堿外，其發(fā)揮治療作用的藥理活性成分為蟲(chóng)草多糖及蟲(chóng)草素即腺嘌呤核苷(adeninenucleotide)等成分。這些活性成分具有以下幾方面的藥理作用。(一)對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用(1)對(duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的增強(qiáng)作用可明顯提高小鼠脾腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率，能對(duì)抗可的松引起的腹腔巨細(xì)胞吞噬功能的降低，增加單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面Fc受體數(shù)目，并能通過(guò)刺激小鼠腹腔粘附細(xì)胞分泌高滴度的IL-1參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。(2)對(duì)細(xì)胞免疫的影響對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞具致有絲分裂作用，能直接刺激T淋巴細(xì)胞增殖，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。對(duì)環(huán)磷酰胺引起的脾臟T淋巴細(xì)胞EAC玫瑰花結(jié)形成減少有拮抗作用。蟲(chóng)草能明顯增強(qiáng)小鼠體內(nèi)、外NK的殺傷活性，并保護(hù)環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠NK活性的降低。(二)造血促進(jìn)作用冬蟲(chóng)夏草能夠抑制人血小板聚集，升高血小板數(shù)量，能顯著促進(jìn)小鼠造血干細(xì)胞(CFU-S)、骨髓紅系祖細(xì)胞(CFU-E、BVFU-E)、骨髓成纖維祖細(xì)胞(CFU-F)和骨髓粒-單系祖細(xì)胞(CFU-GM)的增殖，并能拮抗三尖杉酯堿、可的松、環(huán)磷酰胺對(duì)造血機(jī)能的損害和外周血白細(xì)胞的降低作用。但是，我們的研究也發(fā)現(xiàn)，單一的蟲(chóng)草制劑用于保健滋補(bǔ)的效果雖好，但用于白細(xì)胞減少癥的治療則臨床療效仍有限。因此，如何更有效地提高療效，則是蟲(chóng)草藥用的關(guān)鍵。本發(fā)明的目的即在于提供一種冬蟲(chóng)夏草藥物組合物，以提高冬蟲(chóng)夏草治療白細(xì)胞減少癥的藥效。本發(fā)明的目的還在于提供所述冬蟲(chóng)夏草藥物組合物的制備方法。本發(fā)明者根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果，將冬蟲(chóng)夏草配以具有改善微循環(huán)的丹參以及增強(qiáng)免疫功能、刺激骨髓造血的刺五加和滋補(bǔ)肝腎、促進(jìn)造血的枸杞，組成新的藥物組合物，來(lái)達(dá)到刺激骨髓造血、提高白細(xì)胞數(shù)量的目的。本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物包含(以重量百分比計(jì))冬蟲(chóng)夏草25-40％、丹參15-30％、刺五加15-30％和枸杞15-30％。較佳為包含冬蟲(chóng)夏草30％、丹參25％、刺五加25％和枸杞20％。本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物的制備方法包括將冬蟲(chóng)夏草和蟲(chóng)草菌絲按所述比例配以丹參、刺五加和枸杞，進(jìn)行水提、濃縮、干燥或灌裝及滅菌操作。本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物的具體制備工藝如下將冬蟲(chóng)夏草和蟲(chóng)草菌絲(25-40％)用水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，過(guò)濾后減壓濃縮；將丹參、刺五加和枸杞(各15-30％)洗凈后用水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2-3小時(shí)，過(guò)濾濃縮；將水提液混合后霧化干燥，制成10-25目的粉末；質(zhì)檢，裝填成膠囊，干燥密封包裝后于60Co源下5000Rad照射滅菌?；?qū)⒍x(chóng)夏草水提液減壓濃縮至500ml；取丹參、刺五加、枸杞的水提液減壓濃縮至1500ml將兩種水提濃縮液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，過(guò)濾(3G砂芯濾器)；用10ml易拉罐分裝成口服液，100℃蒸汽滅菌40分鐘。毒性試驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)小鼠(20±2g)40只，用最大濃度(30g/kg體重，相當(dāng)于推薦臨床劑量3000mg/60kg的600倍)、最大容積一次給予小鼠灌胃后，連續(xù)觀察7天，未見(jiàn)動(dòng)物死亡。慢性毒性試驗(yàn)用本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物干粉給16只家兔(2.0+0.5kg)口服，10g/kg/天(相當(dāng)于臨床推薦劑量的200倍)，連續(xù)口服90天，觀察動(dòng)物的一般狀況，并進(jìn)行血常規(guī)、腎功能肝功能及心、肺、肝、腎、脾、睪丸、腦垂體、胃腸道病理檢查等項(xiàng)目的檢查，結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，表明該劑量下無(wú)明顯的不良反應(yīng)。因此，本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物是安全無(wú)毒的。實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)研究將昆明種小鼠(20±2g)腹腔內(nèi)注射5-氟尿嘧啶(5-Fu,150mg/kg體重)后，隨機(jī)分組(每組10只小鼠)，分別給予皮下注射重組人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF2μg/次，1次/天，連續(xù)注射5天)、口服冬蟲(chóng)夏草藥物組合物干粉(5000mg/kg體重)、口服冬蟲(chóng)夏草菌絲干粉(5000mg/kg體重)、口服刺五加浸膏干粉(5000mg/kg體重)、口服枸杞浸膏干粉(5000mg/kg體重)治療，并以口服生理鹽水(PS)為對(duì)照組，治療后每三天動(dòng)態(tài)觀察小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量及分類和血小板計(jì)數(shù)，并于治療后15天進(jìn)行脾臟和骨髓造血功能的檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1冬蟲(chóng)夏草藥物組合物對(duì)大劑量化療小鼠外周血白細(xì)胞、血小板水平的影響(x±s,n=10)*與B組相比，P＜0.05；Δ與B組相比，P＜0.01。以上結(jié)果表明，大劑量化療小鼠服用本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物后，6天后即可見(jiàn)化療小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量由對(duì)照組的3620±1120/mm3上升至4693±912/mm3，與化療的對(duì)照組相比，具有明顯的差異；至第12天時(shí)，與化療的對(duì)照組相比，差異有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后第12天時(shí)血小板的數(shù)量(6896±1018)也顯著高于對(duì)照組(4433±953)，第15天時(shí)的血小板數(shù)更是遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于化療的對(duì)照組。然而，口服單純的冬蟲(chóng)夏草菌絲干粉，雖也可提高化療小鼠外周血白細(xì)胞和血小板的數(shù)量，但效果明顯低于冬蟲(chóng)夏草藥物組合復(fù)方，而口服單純的刺五加或枸杞則僅見(jiàn)白細(xì)胞在第12天有所提高。因此，本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物能明顯減輕大劑量化療后小鼠外周血白細(xì)胞和血小板的降低程度，而且其作用是單獨(dú)使用冬蟲(chóng)夏草、刺五加或枸杞所不能比擬的。進(jìn)一步研究其促進(jìn)造血作用的機(jī)理發(fā)現(xiàn)，治療后第15天時(shí)，該制劑可明顯促進(jìn)骨髓粒細(xì)胞一單核細(xì)胞克隆形成單位(CFU-GM)、巨核細(xì)胞克隆形成單位(CFU-MK)及脾臟克隆形成單位(CFU-S)的形成，結(jié)果見(jiàn)表2。表2．冬蟲(chóng)夏草藥物組合物對(duì)大劑量化療小鼠CFU-GM、CFU-MK和CFU-S水平的影響(x±s,n=10).*與B組相比，P＜0.05；Δ與B組相比，P＜0.01。由此可見(jiàn)，本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物能刺激骨髓造血，促進(jìn)機(jī)體造血功能的恢復(fù)。臨床藥理學(xué)研究選擇一般情況良好、接受全程化療的腫瘤病人，共57例，白細(xì)胞均降至低于3.5×109/L，分為給藥組和對(duì)照組，兩組病種組成及所受化療方案基本相同，按WHO抗癌藥物急性與亞急性毒性反應(yīng)分度標(biāo)準(zhǔn)，兩組病例骨髓抑制情況、白細(xì)胞下降程度基本相似。治療組男17例，女15例，平均年齡47歲；對(duì)照組男14例，女11例，平均年齡45歲。治療組患者服用冬蟲(chóng)夏草藥物組合物膠囊，每日3次，每次4粒；對(duì)照組服用鯊肝醇(0.1/次，1日3次)、利血生(20mg/次，1日3次)。連服20天為一療程，每周查血1次，以3周為限，3周后無(wú)效者采用其它治療。療效評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)顯效3周內(nèi)白細(xì)胞數(shù)提高1.0×109/L且白細(xì)胞總數(shù)在4.0×109/L以上。有效3周內(nèi)白細(xì)胞數(shù)提高0.6～1.0×109/L且白細(xì)胞總數(shù)在3.5×109/L以上。無(wú)效3周內(nèi)白細(xì)胞數(shù)提高不足0.6×109/L或白細(xì)胞總數(shù)在3.5×109/L以下。結(jié)果見(jiàn)表3。表3冬蟲(chóng)夏草藥物組合物對(duì)化療患者外周血白細(xì)胞的影響<tablesid="table1"num="003"><table>組別例數(shù)治療前均值治療后均值顯效(％)有效(％)無(wú)效(％)組合物組322910±4124623±63410(31.25)18(56.5)4(13.5)對(duì)照組252932±4253741±5834(16)11(44)10(40)</table></tables>從上述結(jié)果可見(jiàn)，化療患者服用冬蟲(chóng)夏草復(fù)方膠囊20天后，外周血白細(xì)胞數(shù)量由治療前的29104±412/mm3上升至治療后的4623±634/mm3，總有效率為87.7％，表明口服復(fù)方制劑能明顯減輕大劑量化療后患者外周血白細(xì)胞和血小板的降低程度，效果優(yōu)于常規(guī)的升白藥物鯊肝醇和利血生。綜上所述，本發(fā)明的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物可用于各種原因(包括腫瘤放、化療)引起的白細(xì)胞、血小板減少癥；也適用于提高機(jī)體抗感染、抗腫瘤免疫力和促進(jìn)機(jī)體造血功能及疲勞恢復(fù)。以下用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例說(shuō)明，它們旨在闡述本發(fā)明的最佳實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的啟示，結(jié)合本領(lǐng)域的常識(shí)所做的各種變更，均落在本申請(qǐng)權(quán)利要求的范圍內(nèi)。實(shí)施例1將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲600g水浸泡2-3小時(shí)后，用水煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參500g、刺五加500g、枸杞400g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，用水煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮；將水提液混合后霧化干燥，制成10-25目的粉末；裝填成1000粒膠囊(2號(hào))，干燥密封包裝后于60Co源下5000Rad照射滅菌。質(zhì)檢結(jié)果(1)、膠囊的內(nèi)容物呈咖啡色，速溶于水，有少許沉淀物，取0.2mg溶于2ml雙蒸水后，pH為4.5-5.5；(2)、稀釋100倍后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型，以丹參酮、異秦皮啶作對(duì)照進(jìn)行薄層層析，可作為鑒別；(3)、活性成分中多糖含量為0.08％、核苷酸含量＞0.025％。實(shí)施例2將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲500g水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參、刺五加、枸杞各500g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮；將水提液混合后霧化干燥，制成10-25目的粉末；裝填成膠囊1000粒，干燥密封包裝后于60Co源下5000Rad照射滅菌。質(zhì)檢結(jié)果(1)、膠囊的內(nèi)容物呈咖啡色，速溶于水，有少許沉淀物，取0.2mg溶于2ml雙蒸水后，pH為4.5-5.5；(2)、稀釋100倍后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型，以丹參酮、異秦皮啶作對(duì)照進(jìn)行薄層層析，可作為鑒別；(3)、活性成分中多糖含量為0.09％、核苷酸含量＞0.02％。實(shí)施例3將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲800g水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參、刺五加、枸杞各400g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮；將水提液混合后霧化干燥，制成10-25目的粉末；裝填成膠囊1000粒，干燥密封包裝后于60Co源下5000Rad照射滅菌。質(zhì)檢結(jié)果(1)、膠囊的內(nèi)容物呈咖啡色，速溶于水，有少許沉淀物，取0.2mg溶于2ml雙蒸水后，pH為4.5-5.5；(2)、稀釋100倍后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型，以丹參酮、異秦皮啶作對(duì)照進(jìn)行薄層層析，可作為鑒別；(3)、活性成分中多糖含量為0.07％、核苷酸含量＞0.03％。實(shí)施例4將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲500g水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參、刺五加、枸杞各500g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮1500ml；將水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，過(guò)濾(3G砂芯濾器)；分裝10ml易拉罐，100℃蒸汽滅菌40分鐘。質(zhì)檢結(jié)果(1)、口服液呈咖啡色，有少許沉淀物，pH為4.0-5.5；(2)、100倍稀釋后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量為0.07％、核苷酸含量＞0.02％。實(shí)施例5將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲600g水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參500g、刺五加500g、枸杞400g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮1500ml；將水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，過(guò)濾(3G砂芯濾器)；分裝10ml易拉罐，100℃蒸汽滅菌40分鐘。質(zhì)檢結(jié)果(1)、口服液呈咖啡色，有少許沉淀物，pH為4.0-5.5；(2)、100倍稀釋后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量為0.07％、核苷酸含量＞0.025％。實(shí)施例6將冬蟲(chóng)夏草10g、蟲(chóng)草菌絲800g水浸泡2-3小時(shí)后，煎提2次，每次2-3小時(shí)，減壓濃縮成500ml；取丹參、刺五加、枸杞各400g洗凈后水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，減壓濃縮1500ml；將水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，過(guò)濾(3G砂芯濾器)；分裝10ml易拉罐，100℃蒸汽滅菌40分鐘。新型冬蟲(chóng)夏草復(fù)方制劑的特征在于(1)、口服液呈咖啡色，有少許沉淀物，pH為4.0-5.5；(2)、100倍稀釋后作波長(zhǎng)190-600nm的連續(xù)掃描，在262nm處呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量為0.06％、核苷酸含量＞0.03％。權(quán)利要求1．一種冬蟲(chóng)夏草藥物組合物，以重量百分比計(jì)包含冬蟲(chóng)夏草25-40％丹參15-30％剌五加15-30％和枸杞15-30％。2．如權(quán)利要求1所述的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物，其中各組分的重量百分比為冬蟲(chóng)夏草30％、丹參25％、剌五加25％和枸杞20％。3．如權(quán)利要求1所述的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物，所述組合物為膠囊。4．如權(quán)利要求1所述的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物，所述組合物為口服液，其中還包含蜂蜜和砂糖。5．如權(quán)利要求1所述的冬蟲(chóng)夏草藥物組合物的制備方法，其特征包括將冬蟲(chóng)夏草和蟲(chóng)草菌絲按所述比例配以丹參、剌五加和枸杞，進(jìn)行水提、濃縮、干燥或罐裝及滅菌操作。6．如權(quán)利要求5所述的制備方法，其中水提操作包括將冬蟲(chóng)夏草用水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次；及將丹參、剌五加和枸杞洗凈后用水浸泡2-3小時(shí)，煎提2次，每次2小時(shí)。7．如權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其中水提液經(jīng)過(guò)濾、減壓濃縮后，合并，霧化干燥，制成10-25目粉末，裝填膠囊，干燥密封包裝后于60Co源下5000Rad照射滅菌。8．如權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其中冬蟲(chóng)夏草水提液減壓濃縮至500ml，丹參剌五加和枸杞水提液減壓濃縮至1500ml，合并后加5％蜂蜜、2％砂糖、過(guò)濾；分裝成口服液，100℃蒸汽滅菌40分鐘。全文摘要本發(fā)明提供冬蟲(chóng)夏草藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明以冬蟲(chóng)夏草為主要原料,配以丹參、刺五加,枸杞,將各藥水提,水提液混合后制成口服液;或混合后霧化干燥,制成粉末,裝填膠囊。該藥物組合物能刺激骨髓造血、升高外周血白細(xì)胞和血小板、提高機(jī)體抗病毒及抗腫瘤的免疫功能,適用于各種原因(包括腫瘤放、化療)引起的白細(xì)胞、血小板減少癥,也適用于提高機(jī)體抗感染、抗腫瘤免疫力和促進(jìn)機(jī)體疲勞恢復(fù)。文檔編號(hào)A61P35/02GK1301564SQ99127488公開(kāi)日2001年7月4日申請(qǐng)日期1999年12月30日優(yōu)先權(quán)日1999年12月30日發(fā)明者曹雪濤,王全興申請(qǐng)人:上海華晨生物技術(shù)研究所