一種江南卷柏提取物在制備治療血栓性疾病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種江南卷柏水或醇水提取物及該提取物用 于治療血栓性疾病的新醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 血栓性疾病是由血栓引起的血管腔狹窄與閉塞，使主要臟器發(fā)生缺血和梗塞而引 發(fā)機(jī)能障礙的各種疾病，屬于心腦血管疾病。機(jī)體的正常止凝血，主要依賴于完整的血管壁 結(jié)構(gòu)和功能、有效的血小板質(zhì)量和數(shù)量、正常的血漿凝血因子活性。血栓形成的原因，簡(jiǎn)單 地說(shuō)是隨著人年齡的增長(zhǎng)，體內(nèi)纖溶系統(tǒng)功能逐漸降低，血液中凝血與抗凝血功能失去平 衡而出現(xiàn)凝血，即血栓。
[0003] 血栓性疾病的發(fā)病率、致死率和致殘率非常高。它是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之 一，也是世界各國(guó)醫(yī)藥學(xué)家研究的熱點(diǎn)。目前臨床上用于血栓預(yù)防和治療的藥物主要分為3 類，抗血小板的藥物、抗凝血的藥物和溶解血栓的藥物。從天然產(chǎn)物中尋找新的活性成分， 并進(jìn)而研制新的藥物也是當(dāng)今攻克臨床頑疾的重要途徑，本發(fā)明通過(guò)對(duì)江南卷柏乙醇提取 物進(jìn)行活性研究以期為尋找新的抗血栓病的藥物提供科學(xué)依據(jù)。
[0004] 江南卷柏（Selaginella moellendorfii Hieron.)，是一種多年生常綠草本植物， 為我國(guó)常用的中草藥。其性平，味微甘，能清熱利尿，活血消腫?，F(xiàn)代藥理研究表明其有廣 泛的藥理活性，例如抗腫瘤活性，抗菌活性，抗病毒及免疫調(diào)節(jié)活性，被用于治療急性傳染 性肝炎、胸脅腰部挫傷、全身浮腫等疾病。
[0005] 江南卷柏提取物是一種從江南卷柏的整體植物中經(jīng)水或醇水提取得到的混合物。 目前國(guó)內(nèi)、外對(duì)江南卷柏研究較多，但未有江南卷柏提取物在制備抗血栓性疾病藥物方面 的研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了滿足臨床需要，解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種江南卷柏提取物及 其在治療血栓性疾病藥物中的應(yīng)用；江南卷柏提取物可作為活性成份用于制備治療血栓 性疾病的藥物中，即可用于預(yù)防和/或治療冠心病、心絞痛、腦血栓或肺栓塞等疾病的藥物 中。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0008] 江南卷柏提取物，其為整株江南卷柏的水或醇水提取物。
[0009] 所述江南卷柏的水或醇水提取物具體制備過(guò)程為：
[0010] 1)將整株江南卷柏剪碎成長(zhǎng)約3mm的碎片，加70%乙醇溶液浸泡9h，然后回流提 取3h，提取溫度40-45°C，稍冷，用紗布過(guò)濾，得濾液，保留濾渣。再向?yàn)V渣中加入70%乙醇 溶液進(jìn)行二次加熱回流提取。
[0011] 所述每次回流提取時(shí)70%乙醇的用量為江南卷柏質(zhì)量的4倍（V/W)。
[0012] 2)合并上述兩次提取所得濾液，在50°C以下減壓濃縮，得到具有抗血小板聚集和 抗血栓活性的江南卷柏提取物。
[0013] 3)所述濾液經(jīng)減壓濃縮后可采用濃縮干燥、冷凍干燥或噴霧干燥方法干燥為固 體，得到具有治療血栓性疾病的提取物。
[0014] 所述提取物用于制備預(yù)防和/或治療血栓性疾病藥物、血栓性疾病的預(yù)防性保健 食品或食品添加劑。
[0015] 所述制備預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物是指權(quán)利要求1其所制成的藥物劑型 可為丸劑、散劑、片劑、膏劑、粉劑、針劑、水劑、顆粒劑或注射劑。
[0016] 所述預(yù)防和/或治療血栓性疾病的藥物是將所述植物提取物作為活性成分與藥 物學(xué)上可接受的載體作為賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成口服給藥的內(nèi)服劑型或非口服 給藥的注射劑；即可制備成為治療冠心病、心絞痛、腦血栓或肺栓塞等疾病的丸劑、散劑、片 齊IJ、膏劑、粉劑、針劑、水劑、顆粒劑、注射劑等各種劑型的藥物；保健食品形態(tài)可以是液體的 比如像清涼飲料等。
[0017] 本發(fā)明所述應(yīng)用中，所述血栓性疾病是由血小板聚集引起的動(dòng)脈血栓性疾病。
[0018] 藥理藥效實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明所述江南卷柏提取物能有效的、劑量依賴性的抑制體 外血小板聚集，降低小鼠急性肺血栓死亡率，能制備為抗血栓藥物，特別是抗血小板聚集引 起的動(dòng)脈血栓藥物。
[0019] 本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 江南卷柏提取物作為天然中藥材提取物的主要成分，其來(lái)源豐富、價(jià)格低廉，具有 高抗血栓活性等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛用于動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死等動(dòng)脈心血管性疾病。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1是本發(fā)明所述江南卷柏提取物體外抗血小板聚集實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的具體步驟，但不受實(shí)施例限制。
[0023] 在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非另有說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理 解的含義。
[0024] 下面結(jié)合具體實(shí)施例并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只 是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0025] 在以下實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。
[0026] 實(shí)施例1江南卷柏提取物的制備 將整株江南卷柏（500g)剪碎成長(zhǎng)約3mm的碎片，加8L的70 %乙醇溶液浸泡9h，然后 回流提取3h，提取溫度40-45°C，稍冷，用紗布過(guò)濾，得濾液，保留濾渣。再向?yàn)V渣中加入8L 的70%乙醇溶液進(jìn)行二次加熱回流提取。合并上述兩次提取所得濾液，在50°C以下減壓濃 縮，冷凍干燥，得到江南卷柏提取物。
[0027] 實(shí)施例2體外活性實(shí)驗(yàn)：江南卷柏提取物（簡(jiǎn)稱Psl)對(duì)血小板聚集的影響
[0028] 兔頸動(dòng)脈取血，置于含有Iml的3. 8%枸櫞酸鈉的15ml離心管中（每管最終的體 積約為10ml，保證兔血和抗凝劑體積比為9 : I) ;1000r/min離心5min，取上層液即富血小 板血楽（platelet rich plasma，PRP)，余下血樣以3000r/min離心10_15min，得到貧血小 板血楽（platelet poor plasma，PPP)。用 PPP 調(diào)整血小板濃度至（250 ?300) X IO9個(gè)/L ; 每次測(cè)試吸取300 μ I PPP置于血小板聚集儀測(cè)試區(qū)調(diào)零，再吸取270 μ I PRP置于預(yù)熱槽 中，分別加入不同濃度梯度的受試樣品和測(cè)試珠；37°C條件下，預(yù)熱5min后置于測(cè)試區(qū)；最 后加入10 μ 1相關(guān)誘導(dǎo)劑如ADP (法國(guó)Hyphen Biomed公司，終濃度10 μ M)、凝血酶（法國(guó) Hyphen Biomed 公司，終濃度 2U/ml)或 U46619(美國(guó) Sigma-Aldrich 公司，終濃度 6μΜ); 在LBY-NJ4血小板凝集儀（北京普利生）上測(cè)定5min內(nèi)血小板的最大聚集率（RPA);其中， 空白對(duì)照為生理鹽水；實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，同時(shí)通過(guò)以下公式計(jì)算血小板聚集抑制率：
[0029] 血小板聚集抑制率=[(X-Y) /X] X 100%。X代表生理鹽水組血小板最大聚集率； Y代表受試樣品血小板最大聚集率。
[0030] 結(jié)果顯示，隨濃度增加，最大血小板聚集率逐漸減小，其抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性 的升高（如圖1所示）。
[0031] 實(shí)施例3動(dòng)物體內(nèi)活性實(shí)驗(yàn)：江南卷柏提取物對(duì)小鼠急性肺血栓的影響
[0032] 1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR小鼠（18_22g)60只，雌雄各半，購(gòu)自江蘇省南京市青龍山動(dòng)物中 心。
[0033] 2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程：將小鼠分為5組，每組10只，分別為陰性對(duì)照組（生理鹽水代替樣 品及誘導(dǎo)劑）；模型對(duì)照組（生理鹽水代替樣品）；陽(yáng)性對(duì)照組（給予等體積的阿司匹林）； 低、中、高劑量樣品組（18、55、165mg/kg)。給藥體積為5ml/kg。給藥30min后，尾靜脈注 射ADP(450mg/kg)，使小鼠形成急性肺血栓栓塞，記錄注射混合誘導(dǎo)劑后15min內(nèi)各組死亡 小鼠的數(shù)量。計(jì)算出每組的死亡率并通過(guò)以下公式計(jì)算抗栓活性物急性肺血栓栓塞的保護(hù) 率。
[0034] 抗栓活性物質(zhì)急性肺血栓栓塞的保護(hù)率=[1-(X/Y)] X100%。X代表各組死亡小 鼠的數(shù)量；Y代表各組的小鼠總數(shù)量。
[0035] 表1所示江南卷柏提取物對(duì)小鼠急性肺血栓的影響
[0036]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 江南卷柏提取物，其特征在于：其為整株江南卷柏的水或醇水提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述江南卷柏提取物，其特征在于：將整株江南卷柏剪碎成長(zhǎng)約3mm 的碎片，加70%乙醇溶液浸泡9h，然后回流提取3h，回流溫度40-45°C，稍冷，用紗布過(guò)濾， 得濾液，保留江南卷柏渣。再向江南卷柏渣中加入70%乙醇溶液進(jìn)行二次加熱回流提取。 合并上述兩次提取所得濾液，在50°C以下減壓濃縮，冷凍干燥，得到具有治療血栓性疾病的 江南卷柏提取物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述江南卷柏提取物的制備方法，其特征在于：每次回流提取時(shí) 70%乙醇的用量為江南卷柏質(zhì)量的4倍（V/W)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述江南卷柏提取物的制備方法，其特征在于：所述濾液經(jīng)減壓濃 縮回收溶劑后可采用濃縮干燥、冷凍干燥或噴霧干燥方法干燥為固體，得到具有治療血栓 性疾病的植物提取物。
5. 江南卷柏提取物在制備治療血栓性疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述江南卷柏 提取物用于制備預(yù)防和/或治療為目的的治療血栓性疾病的藥物、治療血栓性疾病的預(yù)防 性保健食品或食品添加劑；所述江南卷柏提取物為權(quán)利要求1所述江南卷柏的水或醇水提 取物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述江南卷柏提取物在制備治療血栓性疾病藥物中的應(yīng)用，其特征 在于：所述制備預(yù)防和/或治療為目的的治療血栓性疾病的藥物是指權(quán)利要求1所述江南 卷柏提取物作為活性成分與藥物學(xué)上可接受的載體作為賦形劑相結(jié)合，其所制成的藥物劑 型可為丸劑、散劑、片劑、膏劑、粉劑、針劑、水劑、顆粒劑或注射劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體地說(shuō)是江南卷柏提取物及其在制備治療血栓性疾病藥物中的應(yīng)用，所述的江南卷柏提取物為整株江南卷柏的乙醇提取物，制備方法為：將整株江南卷柏剪碎成約3mm長(zhǎng)加70％乙醇溶液浸泡9h，然后回流提取3h，提取溫度40-45℃，稍冷，用紗布過(guò)濾，得濾液，保留卷柏渣。再向卷柏渣中加入70％乙醇溶液進(jìn)行二次加熱回流提取。合并上述兩次提取所得濾液，在50℃以下減壓濃縮并回收乙醇至無(wú)醇味，冷凍干燥，得江南卷柏提取物。該提取物具有抗血栓和抗血小板聚集活性，可作為治療血栓性疾病的候選藥物進(jìn)行開(kāi)發(fā)。
【IPC分類】A23L1-30, A61P9-10, A23L1-29, A61K36-11, A61P7-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104546953
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510016292
【發(fā)明人】孔毅, 蘇杏麗, 蘇雯
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月8日