5-5:1，向其中加入多酚分子和金屬離子，劇烈渦旋混合3min，得到PTX-C納米顆粒。
[0053]制備實施例1-1
[0054]I)將5mg PTX固體溶解于50mL的乙醇中，得到濃度為100 μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0055]2)將上述溶有PTX的乙醇溶液置于霧化氣溶膠發(fā)生器中，在0.5Bar氣壓下對溶液進行霧化處理，并將得到的霧化產(chǎn)物通入超純水中，收集得到PTX分散液；
[0056]3)隨后，取2mLPTX分散液，進行冷凍干燥，干燥的樣品溶于乙醇中，進行HPLC測試，得到PTX分散液中的PTX濃度；
[0057]4)取含有100 μ g溶質(zhì)的步驟2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.8mg兒茶酚和1.0mg氯化媽，劇烈禍旋混合3min，得到PTX-C納米顆粒。
[0058]掃描電子顯微鏡可以直觀地反映納米粒子的形貌特點，圖1為實施例1所制備的PTX-C納米顆粒的掃描電子顯微鏡(SEM)照片。從圖中可以看出，制備得到的PTX-C納米顆粒為100?300nm大小的顆粒狀納米藥物。圖1的插圖為單個PTX-C的放大圖像，反映了納米顆粒表面包被了一層絡(luò)合物膜。
[0059]動態(tài)光散射可以反映溶液中粒子的粒徑大小，如圖2所示，PTX-C納米顆粒的粒徑分布在100?300nm之間。
[0060]制備實施例1-2
[0061]I)將500mg PTX固體溶解于50mL的乙醇中，得到濃度為10000 μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0062]2)將上述溶有PTX的乙醇溶液置于霧化氣溶膠發(fā)生器中，在IBar氣壓下對溶液進行霧化處理，并將得到的霧化產(chǎn)物通入超純水中，收集得到PTX分散液；
[0063]3)隨后，取2mLPTX分散液，進行冷凍干燥，干燥的樣品溶于乙醇中，進行HPLC測試，得到PTX分散液中的PTX濃度；
[0064]4)取含有100 μ g溶質(zhì)的步驟2)中所述的PTX分散液，向其中加入3.0Omg鞣花酸和0.25mg氯化錳，劇烈渦旋混合3min，得到PTX-C納米顆粒。
[0065]掃描電子顯微鏡觀察，制備得到的PTX-C為100?300nm大小的顆粒狀納米藥物，納米顆粒表面包被了一層絡(luò)合物膜。
[0066]動態(tài)光散射反映出PTX-C納米顆粒的粒徑分布在100?300nm之間。
[0067]制備實施例1-3
[0068]I)將0.05mg PTX固體溶解于50mL的乙醇中，得到濃度為I μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0069]2)將上述溶有PTX的乙醇溶液置于霧化氣溶膠發(fā)生器中，在1.5Bar氣壓下對溶液進行霧化處理，并將得到的霧化產(chǎn)物通入超純水中，收集得到PTX分散液；
[0070]3)隨后，取2mLPTX分散液，進行冷凍干燥，干燥的樣品溶于乙醇中，進行HPLC測試，得到PTX分散液中的PTX濃度；
[0071]4)取含有10yg溶質(zhì)的步驟2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.06mg沒食子酸和0.5mg七水硫酸鋅，劇烈禍旋混合3min，得到PTX-C納米顆粒。
[0072]掃描電子顯微鏡觀察，制備得到的PTX-C納米顆粒為100?300nm大小的顆粒狀納米藥物，納米顆粒表面包被了一層絡(luò)合物膜。
[0073]動態(tài)光散射反映出PTX-C的粒徑分布在100?300nm之間。
[0074]下面使用制備實施例1-1制備的藥物進行如下實驗。
[0075]實施例2:紫杉醇納米顆粒對SK-BR-3細胞增殖毒性的檢測實驗
[0076]以SK-BR-3細胞作為研宄乳腺癌細胞系的模型體系。收集對數(shù)生長期的SK-BR-3細胞，將細胞重懸至RPM1-1640完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、10yg/mL鏈霉素)中，終濃度為4X104個/mL。在96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加入200 μ L上述細胞懸液(8 X 13個細胞/孔)，置37°C、5 % CO 2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，將完全培養(yǎng)基分別換成200 μ L含有不同濃度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C納米顆粒，使PTX的最終濃度分別為 0.00098 μg/mL,0.00195 μg/mL,0.0039 μg/mL、0.0078 μg/mL、0.0156 μg/mL 和0.0312 μ g/mL,以RPM1-1640完全培養(yǎng)基為陰性對照組，每個濃度設(shè)4個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次。細胞在37°C、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4h后，小心棄去上清液，每孔加入150 μ L DMS0，振蕩5min后，用連續(xù)光譜多功能酶標儀(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)測定在570nm處的OD值，計算細胞存活率(細胞存活率(％ ) = ODgjft /OD5iffi X 100% ) ?
[0077]實驗中，向51^1?-3細胞中加入 0.0078 48/11^、0.0156 48/11^和0.0312 48/11^的PTX-C分別與加入相同濃度的PTX、AB1-007相比，細胞的存活率顯著降低。在濃度為0.0312 μ g/mL時，PTX-C的細胞存活率僅為19.3%，如圖3所示。由三次重復(fù)實驗的結(jié)果擬合得出PTX、AB1-007和PTX-C對SK-BR-3細胞的半數(shù)抑制濃度分別為0.0175 μ g/mL,0.0140 μ g/mL和0.0099 μ g/mL,說明絡(luò)合物膜包被的PTX比單純的PTX藥物以及AB1-007的腫瘤抑制效果都要好。
[0078]實施例3:紫杉醇納米顆粒對HepG2細胞增殖毒性的檢測實驗
[0079]以!fePG2細胞作為研宄肝癌細胞系的模型體系。收集對數(shù)生長期的!fepG2細胞，將細胞重懸至MEM完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100^8/1^鏈霉素)中，終濃度為4X 14個/mL。在96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加入200 μ L上述細胞懸液(8 X 10 3個細胞/孔)，置37°C、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，將完全培養(yǎng)基分別換成200 μ L含有不同濃度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C，使PTX的最終濃度分別為0.00098 μ g/mL,0.00195 μ g/mL、0.0039 μ g/mL、0.0078 μ g/mL、0.0156 μ g/mL 和 0.0312 μ g/mL,以 MEM 完全培養(yǎng)基為陰性對照組，每個濃度設(shè)4個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次。細胞在37°C、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4h后，小心棄去上清液，每孔加入150 yL DMS0，振蕩5min后，用連續(xù)光譜多功能酶標儀(Tecan infinite M200，TECANJ^i )測定在570nm處的OD值，計算細胞存活率(細胞存活率) = OD藥物/OD對照 X 100% )。
[0080]實驗中，向H印G2 細胞中加入 0.0039 μ g/mL,0.0078 μ g/mL 和 0.0156 μ g/mLΡΤΧ-c,分別與加入相同濃度的PTX、AB1-007相比，細胞的存活率顯著降低。在濃度為0.0312 μ g/mL時，PTX-C的細胞存活率僅為20.9 %，如圖4所示。由三次重復(fù)實驗的結(jié)果擬合得出PTX、AB1-007和PTX-C對!fepG2細胞的半數(shù)抑制濃度分別為0.0138 μ g/mL,0.0210 μ g/mL和0.0066 μ g/mL,說明絡(luò)合物膜包被的PTX比單純的PTX藥物以及AB1-007
的腫瘤抑制效果都要好。
[0081]實施例4:紫杉醇納米顆粒對MCF-7細胞增殖毒性的檢測實驗
[0082]以MCF-7細胞作為研宄乳腺癌細胞系的另一模型體系。收集對數(shù)生長期的MCF-7細胞，將細胞重懸至DMEM完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100 μ g/mL鏈霉素)中，終濃度為4X 14個/mL。在96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加入200 μ L上述細胞懸液(8 X 13個細胞/孔)，置37°C、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，將完全培養(yǎng)基分別換成200 μ L含有不同濃度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C，使PTX的最終濃度分別為0.00098 μ g/mL,0.00195 μ g/mL,0.0039 μ g/mL、0.0078 μ g/mL、0.0156 μ g/mL 和 0.0312 μ g/mL,以 DMEM 完全培養(yǎng)基為陰性對照組，每個濃度設(shè)4個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次。細胞在37°C、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4h后，小心棄去上清液，每孔加入150 μ L DMS0，振蕩5min后，用連續(xù)光譜多功能酶標儀(Tecaninfinite M200，TECAN，瑞士)測定在570nm處的OD值，計算細胞存活率(細胞存活率(％)
=ODgj物 /OD對照 X 100% )。
[0083]實驗中，向MCF-7 細胞中加入 0.0039 μ g/mL,0.0078 μ g/mL 和 0.0156 μ g/mLΡΤΧ-c,分別與加入相同濃度的PTX、AB1-007相比，細胞的存活率顯著降低。在濃度為0.0312 μ g/mL時，PTX-C的細胞存活率僅為27.2 %，如圖5所示。由三次重復(fù)實驗的結(jié)果擬合得出PTX、AB1-007、PTX-C對MCF-7細胞的半數(shù)抑制濃度分別為0.0079 μ g/mL,0.0167 μ g/mL和0.0077 μ g/mL,說明對于MCF-7細胞，絡(luò)合物膜包被的PTX比AB1-007的腫瘤抑制效果要好，與單純的PTX藥物腫瘤抑制效果基本相當(dāng)。
[0084]實施例5:紫杉醇納米顆粒對HeLa細胞增殖毒性的檢測實驗
[0085]以HeLa細胞作為研宄宮頸癌細胞系的模型體系。收集對數(shù)生長期的HeLa細胞，將細胞