氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制藥中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。涉及氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽的新的醫(yī)藥用途，具體涉及氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療惡性腫瘤放射增敏制劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)報(bào)道，乳腺癌已是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢并趨于年輕化。放射治療作為一種重要的治療手段，其降低乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)率、提高患者生存率的治療效果已得到普遍肯定。但是，遺傳的高度異質(zhì)性使得部分乳腺癌尤其是三陰性乳腺癌(TNBC)的療效欠佳。TNBC是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2 (HER-2)均為陰性表達(dá)的乳腺癌，約占所有乳腺癌病理類型的10%?20%，多發(fā)生于絕經(jīng)前的年輕女性，具有發(fā)病年齡早、病理組織學(xué)分化差、侵襲性強(qiáng)、5年內(nèi)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移率高和死亡率高、缺乏特異性治療和分子靶向治療手段的特點(diǎn)，是近年來乳腺癌診治研究的難點(diǎn)和關(guān)注的焦點(diǎn)。由于其特殊的分子表型，TNBC喪失了乳腺癌內(nèi)分泌治療這一有效措施，也無法從常規(guī)的抗HER-2治療中獲益；更重要的是，TNBC放療后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及多次照射后的輻射抵抗仍是TNBC放射治療面臨的重要難題。因此，探索新的靶向放射增敏劑，促進(jìn)射線對TNBC細(xì)胞的殺傷作用，是目前臨床治療TNBC中亟待解決的關(guān)鍵問題。
[0003]越來越多的證據(jù)表明，Wnt/ β -catenin (ffnt/ β_連環(huán)蛋白)信號通路異?；罨诙喾N人類腫瘤包括乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌等的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，尤其是TNBC中β -catenin異常高表達(dá)與放/化療抵抗、預(yù)后不良密切相關(guān)，可以作為其獨(dú)立的預(yù)后因子；而且電離輻射能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞fct/β-catenin信號通路過度激活，提示抑制Wnt/ β -catenin信號通路可能是TNBC的放射增敏祀點(diǎn)。目前公認(rèn)的Wnt/ β -catenin信號通路的作用機(jī)制是:當(dāng)分泌型糖蛋白fct與細(xì)胞膜表面受體卷曲蛋白(Fz或FZD)及其共受體低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6(LRP5/6)的胞外區(qū)結(jié)合，致使Wnt/β-catenin信號通路激活。當(dāng)不存在Wnts信號與受體Fz和共受體LRP5/6相互作用時(shí)，胞漿中β-catenin水平受APC、Axin和GSK-3 β形成的蛋白多聚體所調(diào)控。多聚體中的β-catenin被GSK-3 β誘導(dǎo)磷酸化，磷酸化的β-catenin進(jìn)一步被泛素化,最后被26S蛋白酶體所降。當(dāng)Wnt蛋白與Fz和LRP5/6受體結(jié)合時(shí)，GSK-3 β失活，β -catenin的磷酸化和降解被阻斷，導(dǎo)致β -catenin在胞衆(zhòng)內(nèi)積聚并進(jìn)入細(xì)胞核,與Tcf/Lef結(jié)合,增強(qiáng)下游祀基因的轉(zhuǎn)錄,包括涉及細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的基因，如原癌基因c-Myc和CyclinDl表達(dá)，抗凋亡基因Survivin表達(dá)等，促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化、侵襲與轉(zhuǎn)移，抑制細(xì)胞凋亡。由此可見，β-catenin不能被降解是該通路激活致癌的一個(gè)關(guān)鍵成分。
[0004]近年來有研究表明，Wnt/ β -catenin信號通路的異常激活導(dǎo)致胞核內(nèi)β-catenin積聚介導(dǎo)了人和小鼠乳腺癌及其干/祖細(xì)胞的輻射抵抗，而且與提高輻射誘導(dǎo)的DNA雙鏈斷裂(DSBs)的修復(fù)能力密切相關(guān)。研究表明，DSBs是電離輻射誘發(fā)的最嚴(yán)重的損傷形式，抑制DSBs修復(fù)能力能明顯提高細(xì)胞的放射敏感性。DSBs修復(fù)機(jī)制的研究顯示，DSBs損傷一旦發(fā)生，細(xì)胞將快速啟動(dòng)DNA損傷應(yīng)答機(jī)制，通過非同源末端連接(NHEJ)和同源重組(HR)兩條重要通路進(jìn)行修復(fù)。其中組蛋白2A變異體的磷酸化(YH2AX)是DSBs發(fā)生后最早期的事件之一，它作為重要的DSB傳感蛋白，繼之募集多種修復(fù)相關(guān)蛋白快速聚集在損傷部位，形成防止DNA進(jìn)一步裂解和刺激DNA修復(fù)的微環(huán)境，稱之為電離輻射誘發(fā)的灶(IRIF)。目前Y H2AX已成為公認(rèn)的DSBs的分子標(biāo)志物，y H2AX foci分析技術(shù)也成為監(jiān)測DSBs及其修復(fù)的敏感方法。DNA依賴性蛋白激酶DNA-PK是參與NHEJ修復(fù)的關(guān)鍵成分，它由一個(gè)催化亞基DNA-PKcs和兩個(gè)識別亞基Ku70和Ku86組成，其中DNA-PKcs Thr2609磷酸化標(biāo)志著NHEJ修復(fù)通路被激活。修復(fù)蛋白Rad51依賴性鏈侵入過程是HR修復(fù)的關(guān)鍵步驟，HR通路被激活時(shí)，細(xì)胞核內(nèi)能檢測到明顯的Rad51 foe i，研究已證實(shí)它精確定位于DSB處，可作為觀察HR修復(fù)的理想指標(biāo)。
[0005]乳腺癌的輻射抗性機(jī)制十分復(fù)雜，與其參與輻射抵抗的多條信號通路的交互作用密切相關(guān)。磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (AKT/PKB)信號通路是廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)的重要生存信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，其激活與細(xì)胞存活、增殖、分化和凋亡等密切相關(guān)，它通常在人類很多腫瘤中過度激活，其中在乳腺癌中的異?；罨矢哌_(dá)70%以上，特別是在TNBC中高達(dá)92%，對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、放/化療抵抗和預(yù)后不良起到了非常重要的作用。其中，AKT是PI3K/AKT/mT0R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心，PI3K激活的AKT通過影響下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài)而發(fā)揮作用，主要包括抑制凋亡、促進(jìn)細(xì)胞生存和增殖等，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及放/化療抵抗密切相關(guān)，目前正成為腫瘤放射增敏的一個(gè)重要靶標(biāo)。有研究顯示，AKT抑制劑能明顯提高多種腫瘤對輻射的敏感性。
[0006]氯硝柳胺是FDA批準(zhǔn)的驅(qū)腸蟲的首選藥物，在臨床上使用近50年，毒性低。近年來有研究表明，氯硝柳胺通過促進(jìn)LRP6降解祀向抑制乳腺癌細(xì)胞的Wnt/ β -catenin信號通路而發(fā)揮抗腫瘤活性，并且對前列腺癌、結(jié)直腸癌等亦具有較好的抗腫瘤作用。關(guān)于氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對射線的敏感性用途目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制藥中的用途，尤其是氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備惡性腫瘤放射增敏制劑中的用途。
[0008]本發(fā)明進(jìn)行了系列的試驗(yàn)，其中包括:氯硝柳胺對人三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、Hs578T和非三陰性乳腺癌細(xì)胞T47D、MCF-7增殖的抑制作用試驗(yàn)；氯硝柳胺對MDA-MB-231、Hs578T、T47D、MCF-7細(xì)胞放射敏感性的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合照射對 MDA-MB-231 細(xì)胞 ρ- β -catenin (S675)、β -catenin 及下游祀蛋白 CyclinDl 表達(dá)的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合照射對MDA-MB-231細(xì)胞β-catenin蛋白在胞核中分布的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合照射對MDA-MB-231細(xì)胞周期的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合照射對MDA-MB-231細(xì)胞p_AKT (S473)、AKT和自噬蛋白LC-3 β表達(dá)的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺對輻射誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合LiCl對MDA-MB-231細(xì)胞ρ-β-catenin (S675)、β-catenin、Cyclin Dl表達(dá)和細(xì)胞周期的影響試驗(yàn)；LiCl對MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制作用及其對氯硝柳胺放射增敏作用的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺聯(lián)合照射對MDA-MB-231細(xì)胞YH2AX foci形成的影響試驗(yàn)；氯硝柳胺對輻射誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞p-DNA-PKcs(T2609)形成的影響試驗(yàn)；以及氯硝柳胺對輻射誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞Rad51foci形成的影響試驗(yàn)；試驗(yàn)結(jié)果顯示，Wnt/ β -catenin信號通路抑制劑氯硝柳胺能顯著提高TNBC MDA-MB-231和Hs578T細(xì)胞的放射敏感性，但對非三陰性乳腺癌MCF-7和T47D細(xì)胞則無放射增敏作用；其作用機(jī)制研究表明，所述的氯硝柳胺不但能顯著降低輻射誘導(dǎo)的TNBC細(xì)胞β -catenin表達(dá)從而降低福射誘導(dǎo)的G2/M期阻滯,還能明顯抑制福射誘導(dǎo)的AKT活性的增加，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，同時(shí)明顯抑制輻射誘導(dǎo)的DSBs修復(fù)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對射線的敏感性。
[0009]本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在放射增敏Wnt/β -catenin信號通路異常激活的三陰性乳腺癌細(xì)胞中的用途，促進(jìn)射線對三陰性乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用。
[0010]本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述氯硝柳胺或其藥學(xué)上可接受的鹽在對三陰性乳腺癌細(xì)胞無毒性的藥