1、1:6 ~1:1、1:4 ~1:1、1:3 ~1:1、1:2. 5 ~1:1、1:2 ~1:1、 1:8 ~20:1、1:6 ~20:1、1:4 ~20:1、1:2 ~20:1、1:1 ~20:1、2:1 ~20:1、4:1 ~20:1、 5:1 ~20:1、8:1 ~20:1、10:1 ~20:1、15:1 ~20:1、1:18 ~20:1、1:8 ~15:1、1:6 ~12:1、 1:5 ~10:1、1:4 ~8:1、1:3 ~5:1、1:3 ~2:1、1:3 ~1:1、1:2. 5 ~1:1. 5、1:2. 3 ~1:1. 8 或 1:2. 1 ~1:1. 9〇
[0047] (c)減壓除去所沭油水混合物中的所沭有機(jī)溶劑
[0048] 本申請所述的減壓可以通過本領(lǐng)域的任何適合的方式進(jìn)行，例如，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓 干燥等。在一些實(shí)施方式中，通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑。在一些實(shí)施方式中，減壓 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的真空度低于〇. 6個(gè)大氣壓、0. 5個(gè)大氣壓、0. 4個(gè)大氣壓、0. 3個(gè)大氣壓、0. 2個(gè) 大氣壓、0. 1個(gè)大氣壓。在一些實(shí)施方式中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的真空度為0. 1-0. 6個(gè)大氣壓、 0. 1-0. 5個(gè)大氣壓、0. 1-0. 4個(gè)大氣壓、0. 1-0. 3個(gè)大氣壓或0. 1-0. 2個(gè)大氣壓。
[0049] 包封率
[0050] 可以使用本領(lǐng)域常用的方法測量包封率，例如葡聚糖凝膠、超速離心法或透析法。 在一些實(shí)施方式中，使用透析法測量包封率。
[0051] 在一些實(shí)施方式中，本申請方法制得的組合物的包封率不低于80%、83%、85%、 87%、89%、90%、92%、93%、94% 或 95%。
[0052] 本發(fā)明的再一個(gè)方面提供了本申請的組合物在制備用于治療疾病的藥物中的用 途。在一些實(shí)施方式中，所述疾病是癌癥。
[0053] 本發(fā)明的又一個(gè)方面提供了聚乙二醇-聚丁二醇共聚物在制備用于治療疾病的 藥物中的用途。在一些實(shí)施方式中，所述藥物進(jìn)一步包括活性物質(zhì)。
[0054] 本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種制備藥物的方法，所述方法包括混合活性物質(zhì)和 聚乙二醇-聚丁二醇共聚物。
【附圖說明】
[0055] 圖1是納米粒的粒徑分布圖和透射電鏡（TEM)圖。
[0056] 圖2是與泰素相比的載紫杉醇（PTX)EB納米粒的體外釋放圖。
[0057] 圖3是與泰素相比的載紫杉醇（PTX)EB納米粒的藥動學(xué)曲線。
[0058] 圖4是載FITC的EB納米粒的細(xì)胞攝取圖。
[0059] 圖5是載DIR的EB納米粒的荷瘤裸鼠活體成像和組織成像圖。
[0060] 圖6是體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)中荷瘤裸鼠腫瘤和體重體積隨注射時(shí)間的變化圖。其包括陰 性對照PBS、陽性對照泰素和本申請實(shí)施例1制備的載紫杉醇的EB納米粒。
【具體實(shí)施方式】
[0061] 以下對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用 于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0062] 除另有明確表示，本實(shí)施例使用的聚乙二醇-聚丁二醇共聚物是獲得自加拿大先 進(jìn)聚合物材料公司的如式I所示的聚乙二醇-聚丁二醇共聚物。
[0063] 實(shí)施例1紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的制備
[0064] 將40mg聚乙二醇-聚丁二醇共聚物（η = 45, m = 20)和8mg紫杉醇共同溶于10ml 丙酮溶劑中作為有機(jī)相；將l〇ml水作為水相；將有機(jī)相以5ml/min的速度滴入水相中，在 300rmp機(jī)械攪拌下形成淺藍(lán)色的納米粒，攪拌lOmin后轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，真空-0.1 MPa 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min以去除丙酮，得到穩(wěn)定的納米粒。
[0065] 使用激光動態(tài)散射儀（貝克曼庫爾特LS 13320)檢測粒徑，平均粒徑為 22. 4±1. 6nm，分散系數(shù)為0. 118,粒徑分布結(jié)果和透射電鏡圖如圖1所示。納米粒的包封率 為86. 4±3%，包封率的具體檢測方法參見實(shí)施例7。
[0066] 實(shí)施例2卡巴他賽聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的制備
[0067] 40mg聚乙二醇-聚丁二醇（η = 45, m = 20)共聚物和4mg卡巴他賽共同溶于10ml 丙酮溶劑中作為有機(jī)相；將l〇ml水作為水相；將有機(jī)相以5ml/min的速度滴入水相中，在 300rmp機(jī)械攪拌下形成淺藍(lán)色的納米粒，攪拌lOmin后轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，真空-0.1 MPa 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min以去除丙酮，得到穩(wěn)定的長循環(huán)納米粒。
[0068] 使用激光動態(tài)散射儀檢測粒徑，平均粒徑為40. 44±2. 5nm，分散系數(shù)為0. 158。納 米粒的包封率為90. 4±3%，包封率的具體檢測方法參見實(shí)施例7。
[0069] 實(shí)施例3其他聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的制備
[0070] 使用與實(shí)施例1和實(shí)施例2的類似方法，使用紫杉醇、多烯紫杉醇或卡巴他賽作為 活性物質(zhì)，使用不同的式I所示的乙二醇-聚丁二醇共聚物（包括（η = 17, m = 16)，（η = 17, m = 20)，（η = 17, m = 22)，（η = 45, m = 10)，（η = 45, m = 15)，（η = 45, m = 20)，（η =45, m = 23)，（η = 45, m = 25)，（η = 45, m = 28)，（η = 50, m = 70)，（η = 68, m = 22)， (η = 68, m = 27)，（η = 113, m = 90))或式 II 所示的乙二醇-聚丁二醇共聚物（nl = 45, m =46, n2 = 20)，并且調(diào)整不同的乙二醇-聚丁二醇共聚物同活性物質(zhì)的比例（包括5:1、 10:1和20:1)，來制備納米粒。在上述條件下均應(yīng)能夠制備出粒徑小于lOOnm、粒徑分布均 勻并且包封率大于70%的納米粒，具體數(shù)據(jù)省略。
[0071] 實(shí)施例4反向滴加制備紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的制備
[0072] 40mg聚乙二醇-聚丁二醇（η = 113, m = 90)共聚物和4mg紫杉醇共同溶于10ml 丙酮溶劑中作為有機(jī)相；將l〇ml水作為水相；將水機(jī)相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中， 在300rmp機(jī)械攪拌下形成納米粒，攪拌lOmin后轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，真空-0.1 MPa下旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min以去除丙酮，得到穩(wěn)定的長循環(huán)納米粒。
[0073] 使用激光動態(tài)散射儀檢測粒徑，平均粒徑為60. 02±3. lnm，分散系數(shù)為0. 128。納 米粒的包封率為91. 3±2%，包封率的具體檢測方法參見實(shí)施例7。
[0074] 實(shí)施例5轉(zhuǎn)膜法制備反向滴加制備紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的制備
[0075] 40mg聚乙二醇-聚丁二醇（η = 50, m = 70)共聚物和4mg紫杉醇共同溶于10ml 丙酮溶劑中，于60°C旋轉(zhuǎn)溫度下減壓旋轉(zhuǎn)成膜，成膜后在真空條件下繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)lh，然 后轉(zhuǎn)移到真空干燥箱繼續(xù)干燥12h，真空干燥結(jié)束后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀常壓下于60°C加水水合 30min得到納米粒。
[0076] 使用激光動態(tài)散射儀檢測粒徑，平均粒徑為80. 13 ±2. 7nm，分散系數(shù)為0. 154。納 米粒的包封率為90. 1±3. 1%，包封率的具體檢測方法參見實(shí)施例7。
[0077] 實(shí)施例6紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的穩(wěn)定性研究
[0078] 將實(shí)施例1制備的紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇（η = 45, m = 20)納米粒加0. 9% 氯化鈉注射稀釋至紫杉醇含量為1 mg/ml，并混勻。將樣品置于25°C和4°C恒溫箱中，觀察 樣品析出的情況。
[0079] 經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)：樣品在25°C條件下可穩(wěn)定48小時(shí)以上，4°C條件下可穩(wěn)定36小時(shí)以 上?？梢?，本申請的紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒的穩(wěn)定性非常好。
[0080] 實(shí)施例7紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇納米粒包封率的測定
[0081] 使用液相高效色譜測紫杉醇的含量。色譜柱：安捷倫C18柱；流動相：乙腈：水 (50:5〇V:V);檢測波長227nm;流速l.Oml/min;進(jìn)樣量20μ1。分另IJ取濃度為0.25~ 50 μ g/ml的紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行測試，以峰面積對紫杉醇濃度進(jìn)行 曲線擬合，建立回歸方程。
[0082] 將本申請的納米?；鞈乙合萳OOOrmp低速離心10min去掉沒有包進(jìn)去