一種補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途，所述用途是指以補骨脂二氫黃酮甲醚或/和其類似物作為活性成分用于制備增強PPARα或/和PPARγ激動活性的組合物。本發(fā)明的研究結(jié)果顯示：補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物不僅可顯著提高PPARγ激動劑對PPARγ的轉(zhuǎn)錄活性，而且能增強PPARα激動劑對PPARα的轉(zhuǎn)錄活性，可作為PPARα或/和PPARγ激動增效劑的活性成分用于制備預(yù)防或治療代謝綜合癥的組合物，不僅可拓寬補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的應(yīng)用范圍，而且可實現(xiàn)PPARα或/和PPARγ激動劑的減量增效，以降低其毒副作用，實現(xiàn)PPARα或/和PPARγ激動劑在臨床中的廣泛應(yīng)用。
【專利說明】
一種補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明是涉及一種補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 代謝綜合癥是以葡萄糖與脂質(zhì)代謝異常為特征的常見病，伴有低密度脂蛋白升高 和高密度脂蛋白膽固醇降低，其常見的病癥為肥胖病、糖尿病、高血脂癥和動脈粥樣硬化， 其中，糖尿病患者還常并發(fā)有高脂血癥、心血管病、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變等疾病。
[0003] 據(jù)世界衛(wèi)生組織公布，目前世界范圍內(nèi)超過2. 2億人患糖尿病，其中，中國已成為 全球糖尿病人最多的國家，共有9200萬糖尿病患者，據(jù)2010年3月25日出版的《新英格蘭 醫(yī)學雜志》研究報告的數(shù)據(jù)顯示，中國目前有超過9200萬糖尿病患者，而且我國目前的發(fā)病 還是上升期，增長速度也明顯加快，據(jù)估算中國目前糖尿病前期患者是1. 5億。持續(xù)擴大的 糖尿病人群已給社會帶來了巨大的經(jīng)濟與醫(yī)療負擔。世界衛(wèi)生組織指出，如果不采取有效 措施來應(yīng)對糖尿病的發(fā)展，預(yù)計在未來10年內(nèi)，僅心臟病、中風和糖尿病就將給中國帶來 至少5500億美元的經(jīng)濟損失。
[0004] 過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)是一種配體激活轉(zhuǎn)錄因子，屬于核受體超家族成員。它存在3種亞型， 艮口卩?六1^、0/^、丫?，F(xiàn)有研究證實：??41?通過調(diào)控相關(guān)基因表達，在脂肪形成、糖脂代 謝、胰島素敏感性及細胞增殖與分化中都發(fā)揮重要作用，并與多種疾病包括肥胖、糖尿病、 高血脂的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[Azadeh Matin 等，J. Med. Chem. 2009. 52,6835-6850 ;Shen 等， J. Nutr. 2006. 899-905]。因此，關(guān)于過氧化物酶體增殖物激活受體PPAR α / γ激動劑的研 究近來成為熱點，目前已作為藥物應(yīng)用的有PPARy激動劑-噻唑烷類（TZDs)藥物，如：羅 格列酮、比格列酮等，PPARa激動劑-貝特類藥物，如：非諾貝酸等；現(xiàn)有研究表明雖然上述 藥物具有明顯的PPAR γ或PPAR α激動活性可用作治療代謝綜合癥的藥物，但其同時具有 明顯的毒副作用（如水腫、肝毒性、心力衰竭及膀胱癌），以致影響和限制了它們的臨床應(yīng) 用。
[0005] 補骨脂二氫黃酮甲醚（bavachinin)是常用中藥補骨脂的有效成分， 其CAS號為：19879-30-2,分子式為=C 21H22O4,分子量為：338. 4,化學結(jié)構(gòu)式為：
現(xiàn)有研究表明：該化合物具有抗氧化、抗細菌、抗真菌、抗炎、抗 腫瘤、退熱性、止痛等多種生物和藥理活性，但至今未見補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物可 增強PPAR α或/和PPAR γ激動活性的相關(guān)用途報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的新用途，尤其是提供 補骨脂二氫黃酮甲醚或/和其類似物用作PPARa或/和PPARy激動增效劑的用途，以拓 寬補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的應(yīng)用范圍，且實現(xiàn)PPARa或/和PPARy激動劑的減 量增效，降低其毒副作用，實現(xiàn)PPAR a或/和PPAR γ激動劑在臨床中的廣泛應(yīng)用。
[0007] 具體說，本發(fā)明所述的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途，是指以補骨脂二 氫黃酮甲醚或/和其類似物作為活性成分用于制備增強PPARa或/和PPARy激動活性的 組合物。
[0008] 進一步說，本發(fā)明所述的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途，是指以補骨脂 二氫黃酮甲醚或/和其類似物作為活性成分用于制備PPARa或/和PPARy激動增效劑。
[0009] 進一步說，本發(fā)明所述的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的用途，是指以補骨脂 二氫黃酮甲醚或/和其類似物作為PPARa或/和PPARy激動增效劑的活性成分用于制備 預(yù)防或治療代謝綜合癥的組合物。
[0010] 作為優(yōu)選方案，上述組合物包含補骨脂二氫黃酮甲醚或/和其類似物及噻唑烷類 (TZDs)藥物或/和貝特類藥物。
[0011] 作為進一步優(yōu)選方案，上述組合物包含補骨脂二氫黃酮甲醚及羅格列酮、吡格列 酮或非諾貝酸。
[0012] 上述組合物為藥物組合物、保健品組合物或食品組合物。
[0013] 所述的代謝綜合癥包括葡萄糖代謝異常疾病或/和脂質(zhì)代謝異常疾病，尤其包括 糖尿病、肥胖癥、高血脂癥、動脈粥樣硬化疾病中的至少一種。
[0014] 本發(fā)明所述的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物為具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或所述 化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或前體化合物：
[0015]
[0016] 通式中：C環(huán)的2位與3位之間為雙鍵或單鍵！R1為烷氧基；R2為羥基或酯基；R 3為 氫或羥基；R4為異戊烯基或烷基。
[0017] 作為優(yōu)選方案，所述的烷氧基選自Cl~C4的烷氧基；所述的酯基選自Cl~C4的 醋基；所述的烷基選自Cl~ClO的烷基。
[0018] 作為進一步優(yōu)選方案，所述的烷氧基選自甲氧基或乙氧基；所述的酯基選自甲酯 基或乙酯基；所述的烷基選自異戊烷基。
[0019] 作為更進一步優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物為具有如 下結(jié)構(gòu)式的化合物或所述化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或前體化 合物：
[0020]
[0022] 本發(fā)明所述組合物的劑型可以是多種多樣的，只要是能夠使活性成分有效地到達 體內(nèi)的劑型都是可以的。比如可選自：片劑、膠囊劑、粉末、顆粒劑、糖漿、溶液、懸浮液、注射 劑、酊劑、口服液、氣霧劑、口含劑、沖劑、丸劑、散劑等常見劑型或納米制劑等緩釋劑型。
[0023] 本發(fā)明所述活性成分的有效施用劑量可隨所用的組合物、給藥的模式和待治療的 疾病的嚴重程度而變化。
[0024] 另外，本領(lǐng)域人員應(yīng)理解，在得知了本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)以后，還可通過多種本領(lǐng) 域熟知的方法、利用公知的原料，來獲得本發(fā)明的類似物，比如化學合成或從植物中提取 等。
[0025] 本發(fā)明中所述術(shù)語的定義如下：
[0026] 術(shù)語"藥學上可接受的鹽"是指所述化合物與藥學上可接受的無機酸或有機酸所 形成的鹽，所述的無機酸包括：鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；所述的有機酸包括：甲酸、 乙酸、丙酸、丁二酸、萘二磺酸（1，5)、亞細亞酸、草酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、戊酸、 二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、庚二酸、己二酸、馬來酸、蘋果酸、氨基磺酸、苯丙酸、 葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸，以及氨基酸。
[0027] 術(shù)語"互變異構(gòu)體"是指因分子中某一原子在兩個位置迅速移動而產(chǎn)生的官能團 異構(gòu)體，例如：烯醇與相應(yīng)的酮。
[0028] 術(shù)語"立體異構(gòu)體"是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產(chǎn)生的異構(gòu)體，例 如：順反異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體等。
[0029] 術(shù)語"前體化合物"是指在體外無活性，但能夠在生物體內(nèi)進行代謝或化學反應(yīng)轉(zhuǎn) 化為本發(fā)明的活性成分，從而發(fā)揮其藥理作用的化合物。
[0030] 術(shù)語"組合物"是指在組合物中，除了含有主要活性成分之外，還可含有少量的且 不影響有效成分的次要成分和/或藥學上可接受的載體。例如，可以含有甜味劑以改善口 味、抗氧化劑以防止氧化，以及各種制劑所必要的輔料。
[0031] 術(shù)語"藥學上可接受的"是指適用于人而無過度不良副反應(yīng)（如毒性、刺激和變態(tài) 反應(yīng)），即有合理的效益/風險比的物質(zhì)。
[0032] 本發(fā)明的研究結(jié)果顯示：補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物不僅可顯著提高 PPARy激動劑對PPARy的轉(zhuǎn)錄活性，而且能增強PPARa激動劑對PPARa的轉(zhuǎn)錄活性，可 作為PPARa或/和PPARy激動增效劑的活性成分用于制備預(yù)防或治療代謝綜合癥的組 合物，不僅可拓寬補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物的應(yīng)用范圍，而且可實現(xiàn)PPAR a或/和 PPARy激動劑的減量增效，以降低其毒副作用，實現(xiàn)PPARa或/和PPARy激動劑在臨床中 的廣泛應(yīng)用。
【附圖說明】
[0033] 圖1體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對羅格列酮引起的PPARy轉(zhuǎn)錄 活性的影響；
[0034] 圖2體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對吡格列酮引起的PPARy轉(zhuǎn)錄 活性的影響；
[0035] 圖3體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對非諾貝酸引起的PPARa轉(zhuǎn)錄 活性的影響。
[0036] 圖4體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）與羅格列酮聯(lián)合用藥對db/db小 鼠血糖的影響；
[0037] 圖5體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）與非諾貝酸聯(lián)合用藥對DIO小鼠 甘油三酯水平的影響。
【具體實施方式】
[0038] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。
[0039] 實施例1 :補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）的制備
[0040] 將10.0 kg補骨脂藥材用8倍體積（80L)的體積分數(shù)為95 %的乙醇水溶液回流 提取，每次回流2小時，共回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏（約SOOmL);向該 浸膏中加1倍量（800mL)水混懸后，依次用石油醚（1000mLX3)和乙酸乙酯（1000mLX3) 萃取，收集乙酸乙酯萃取液；減壓回收乙酸乙酯后進行硅膠柱層析，依次用石油醚和乙酸 乙酯進行梯度洗脫（10:1-1:5);將所得流分用硅膠柱層析：先用環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫 (9:1-1:1)，然后用反向柱層析甲醇-水梯度洗脫（60%甲醇-80%甲醇），最后用Sephadex LH-20純化（甲醇），即得式A化合物，為白色粉末。
[0041] 1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ : L 70 (3H，s，CH3-5 " )，1. 74 (3H，s，CH3-4 " )，2. 78 (1H，d d，J = 2. 8, 16. 8Hz，H-3)，3. 04 (1H，dd，J = 13. 2, 16. 8Hz，H-3)，3. 24 (2H，d，J = 7. 2Hz，H-I " )，3.85(3H，s，0CH3)，5.27(lH，m，H-2")，5.38(lH，dd，J = 2.8，13.2Hz，H-2)，6.45(lH，s，H-8)，7. 34 (2H，d，J = 8. 4Hz，H-3'，5'），6. 90 (2H，d，J = 8. 4Hz，H-2'，6'），7. 68 (1H，s，H-5);
[0042] 13C-NMR (CDCl3, 100MHz) δ : 18. 0 (C-5 " )，26. I (C-4 " )，28. 0 (C-Γ )，44. 4 (C-3)，5 6. 0(7-0Me)，79. 8(C-2)，98. 8(C-8)，114. I(C-IO), 115. 9(03,，5,），121. 9(C-2" )，125. 2(C -6)，127. 3 (C-5)，128. 2 (C-2'，6'），131. I (C-Γ )，133. 3 (C-3 " )，156. 3 (C-4'），162. 5 (C-9)， 164. 4(C-7), 191. 5 (C-4)；
[0043] ESI-MS: (Pos. mode) [M+H] +339〇
[0044] 上述數(shù)據(jù)分析結(jié)果與文獻（Biol Pharm Bull. 2005, 28(12) :2253-2257.)中報道 的一致。
[0045] 實施例2 :式B化合物的制備
[0046] 取20mg補骨脂二氫黃酮甲醚【式A化合物】溶于ImL吡啶中，再加入ImL醋酸酐，室 溫放置24h，然后加入IOmL乙酸乙酯溶劑，用水反萃取，收集有機相，濃縮，S印hadex LH-20 柱層析，即得式B化合物，為白色粉末。
[0047] 1H-NmiUCDCI3, 400MHz) δ : 1. 72 (3H，s，CH3-5 ")，1. 76 (3H，s，CH3-4 " )，2.35(3H，s，CH3C0)，2.83(lH，dd，J = 2.8，16.8Hz，H-3)，3.04(lH，dd，J = 13. 2, 16. 8Hz, H-3), 3. 27(2H, d, J = 7. 2Hz, H-I " )，3. 88 (3H, s, 0CH3)，5. 29 (1H, m，H-2 " )，5.47(lH，dd，J = 2.8，13.2Hz，H-2)，6.47(lH，s，H-8)，7.18(2H，d，J = 8. 4Hz，H-3'，5'），7. 52 (2H，d，J = 8. 4Hz，H-2'，6'），7. 70 (1H，s，H-5)。
[0048] 實施例3 :補骨脂黃酮甲醚（式C化合物）的制備
[0049]
[0050] 式3中間體：2' -異戊烯基氧基-4' -甲氧基苯乙酮的制備：
[0051] 將500mg 2'-羥基-4'-甲氧基苯乙酮（式1化合物）、I. 25g無水碳酸鉀、15mL丙 酮及0. 4mL異戊烯基溴（式2化合物）加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至回流，保溫反應(yīng)；待 TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)5h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，用30mL乙酸乙酯和15mL水 萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液進行洗滌、無水硫酸鈉干燥、過濾，濾液經(jīng)硅膠柱 層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式3中間體，黃色油狀物（548mg，77. 74% )。
[0052] 1H NMR(400MHz, Chloroform-d) δ 7. 86 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 6. 53 (dd, J = 8. 7, 2. 2Hz, 1H), 6. 47 (d, J = 2. 1Hz, 1H), 5. 56 - 5. 49 (m, 1H), 4. 61 (d, J = 6. 6Hz, 2H), 3. 87 ( s, 3H), 2. 60 (s, 3H), 1.82(s, 3H), 1.77(s, 3H) ；MS (EI) m/z = 234 [M+], 166(60%), 151(100% ),69(24% )〇
[0053] 式4中間體：2' -羥基-4' -甲氧基-5' -異戊烯基苯乙酮的制備：
[0054] 將521mg式3中間體和IOmL二乙胺加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至回流，保溫反 應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)4h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯和 IOmL 2N鹽酸溶液萃取，收集乙酸乙酯層，先用IOmL水洗滌，再用飽和NaCl溶液洗滌，然后 用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式4中間 體，黃色油狀物（387mg，74. 30 % )。
[0055] 4匪1?(4001抱，〇11(^(^〇^11-(1)5 12.74(8，1!1)，7.42(8，1!1)，6.41(8，1!1)，5.30- 5. 24 (m, 1H), 3. 88 (s, 3H), 3. 24 (d, J = 7. 2Hz, 2H), 2. 56 (s, 3H), L 78 (s, 3H), 1. 73 (s, 3H)； MS(EI)m/z = 234[M+], 219(100% )，191(20% )，177(40% )。
[0056] 式7中間體：4-甲氧甲氧基苯甲醛的制備：
[0057] 將I. 5g 4-羥基苯甲醛（式5化合物）、6. 8g無水碳酸鉀、50mL丙酮及I. 23mL氯 甲基甲醚（式6化合物）加入反應(yīng)瓶中，在室溫下反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng) 2h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入IOOmL乙酸乙酯和50mL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和 NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚 淋洗，即得到式7中間體，無色油狀物（I. 632g，79. 95% )。
[0058] 1H NMR(400MHz，Chloroform-d) δ 9. 92 (s，1H)，7. 86 (d，J = 8. 7Hz，2H)，7. 17 (d，J =8. 7Hz, 2H),5. 27(s, 2H),3. 51(s, 3H) ；MS(EI)m/z = 166[M+], 152(20%), 135(28%), 121 (20% ), 65(24% ) 〇
[0059] 式8中間體：1-(2-羥基-4-甲氧基-5-異戊烯基）-3-(4'_甲氧甲氧基苯 基） _2Ε_稀丙基-1酮的制備：
[0060] 將287mg式4中間體、204mg式7中間體、IOmL乙醇及583mg三甲基硅醇鉀加入反 應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)3h)，使反應(yīng) 液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯和IOmL飽和氯化銨水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，先用 IOmL水洗滌，再用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純 化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式8中間體，黃色固體（215mg，45. 90% )。
[0061] 1H NMR (400MHz, Chloroform-d) δ 13. 52 (s, 1H) , 7. 87 (d, J = 15. 4Hz, 1H), 7. 63 (d, J = 8. 9Hz, 3H), 7. 48 (d, J = 15. 4Hz, 1H), 7. 28 (s, 1H), 7. 12 (d, J = 8. 7Hz, 2H), 6. 47 (s, 1H), 5. 31 (t, J = 7. 3Hz, 1H), 5. 26 (s, 2H), 3. 90 (s, 3H), 3. 52 (s, 3H), 3. 28 (d, J = 7. 2Hz, 2H), I. 80 (s, 3H), I. 76 (s, 3H) ；MS(EI)m/z = 382 [M+], 263 (16 % ), 218(28 % ), 203(24% ) 〇
[0062] 式C化合物：4' -羥基-6-異戊烯基-7-甲氧基黃酮的制備：
[0063] 將205mg式8中間體、IOmL DMSO及140mg碘加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至90°C， 保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng)3h)，將反應(yīng)液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯 和IOmL飽和硫代硫酸鈉水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，先用IOmL水洗滌，再用飽和NaCl溶 液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即 得到式C化合物，淺黃色粉末（25mg，13. 87% )。
[0064] 1H NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 10. 28 (s, 1H)，7. 95 (d, J = 8. 8Hz, 2H)， 7. 70 (s, 1H) , 7. 29 (s, 1H), 6. 93 (d, J = 8. 9Hz, 2H) , 6. 78 (s, 1H) , 5. 30 (t, J = 7. 5Hz, 1H), 3. 96 (s, 3H) , 3. 32 (d, J = 7. 4Hz, 2H), I. 74 (s, 3H) , I. 68 (s, 3H). 13 C NMR(126MHz, DMS〇-d6) δ 176. 22, 162. 38, 161. 52, 160. 65, 156. 00, 132. 72, 128. 03, 127. 97, 123. 95, 121. 72, 121. 42, 116. 42, 115. 83, 104. 58, 99. 25, 56. 32, 27. 59 ,25. 55, 17. 58. MS(ESI)m/z = 337. 3 [M+H]+, m/z = 335. I [M-H]+. HRMS (ESI) Calc. Mass[C21H2004+H]+337. 1440, found 337. 1441 〇 「00651 實施例4 :補骨脂昔酮甲醚（式C化合物）的制備
[0067] 將250mg補骨脂二氫黃酮甲醚（式9化合物）、IOmL DMSO及94mg碘加入反應(yīng)瓶 中，使反應(yīng)液升溫至90°C，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng)3h)，使反應(yīng)液降溫至 室溫，加入20mL乙酸乙酯和IOmL飽和硫代硫酸鈉水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，先用IOmL 水洗滌，再用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化， 乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式C化合物，淺黃色粉末（151mg，60. 88% )。
[0068] 實施例5 :式D化合物的制備
[0070] 式11中間體：3,4-二甲氧甲氧基苯甲醛的制備：
[0071] 將0.583,4-二羥基苯甲醛（式10化合物）、2.58無水碳酸鉀、201^丙酮及0.711^ 氯甲基甲醚（式6化合物）加入反應(yīng)瓶中，在室溫下反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng) 2h)，加入40mL乙酸乙酯和20mL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無 水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式11中間體， 無色油狀物（〇· 646g，78. 88% )。
[0072] 1H NMR (400MHz, Chloroform-d) δ 9. 88 (s, 1H), 7. 70 (d, J = 0. 7Hz, 1H), 7. 53 (dd, J =8. 3, 0. 6Hz, 1H), 7. 30 (d, J = 8. 4, 1H), 5. 37 (s, 2H), 5. 32 (s, 2H), 3. 55 (s, 3H), 3. 54 (s, 3H) · MS (ESI) m/z = 227. 3 [M+H]+。
[0073] 式12中間體：1-(2-羥基-4-甲氧基-5-異戊烯基）-3-(3'，4'-二甲氧甲氧基苯 基） _2E_稀丙基-1酮的制備：
[0074] 將652mg式4中間體、630mg式11中間體、20mL乙醇及I. 32g三甲基硅醇鉀加入 反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)3h)，將反 應(yīng)液降溫至室溫，加入40mL乙酸乙酯和20mL飽和氯化銨水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，先 用20mL水洗滌，再用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析 純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式12中間體，黃色固體（460mg，37. 38% )。
[0075] 1H NMR (400MHz，Chloroform-d) δ 13. 50 (s，1H)，7. 83 (d，J = 15. 4Hz, 1H), 7. 61 (s, 1H), 7. 53 - 7. 50 (m, 1H), 7. 45 (d, J = 15. 4Hz, 1H), 7. 23 (d, J = 8. 4Hz ,1H), 6. 46 (s, 1H), 5. 32 (s, 5H), 3. 90 (s, 3H), 3. 58 (s, 3H), 3. 55 (s, 3H), 3. 32 (d, J = 7. 2Hz, 2H), I. 81(s, 3H), I. 76(s, 3H).MS(ESI)m/z = 442. 9[M+H]+。
[0076] 式13中間體：3'，4'_二甲氧基甲氧基-6-異戊烯基-7-甲氧基二氫黃酮的制備：
[0077] 將460mg式12中間體、IOmL甲醇及230mg無水氟化鉀加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升 溫至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)6h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入 20mL乙酸乙酯和IOmL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉 干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式13中間體，白色固體 (269mg,58. 51% ) 〇
[0078] 1H NMR(400MHz，Chloroform-d) δ 7· 69 (s，1H)，7· 31 (d，J = 2. 0Hz，1H)，7· 23 (d，J =8. 3Hz, 1H), 7. 10 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 6. 48 (s, 1H), 5. 44 (dd, J = 13. 4, 2. 9Hz, 1H), 5. 29 (s, 2H), 5. 28 (s, 2H), 3. 87 (s, 3H), 3. 55 (s, 3H), 3. 55 (s, 3H), 3. 26 (d, J = 7. 5Hz, 2H), 3. 05 (dd, J =16. 8, 13. 4Hz, 1H), 2. 80 (dd, J = 16. 9, 2. 9Hz, 1H), L 76 (s, 3H), L 72 (s, 3H). MS (ESI) m/z =443. 0[M+H] + 〇
[0079] 式14中間體：3'，4' -二羥基-6-異戊烯基-7-甲氧基二氫黃酮的制備：
[0080] 將200mg式13中間體、IOmL甲醇及2. 26mL 3N鹽酸加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫 至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)0. 5h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入 20mL乙酸乙酯和IOmL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉 干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式14中間體，白色固體 (112mg,70. 71% ) 〇
[0081] 1H NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ 9. 07 (s, 1Η), 9. 02 (s, 1Η), 7. 47 (s, 1Η), 6. 90 (s, 1Η),6. 76(d, J = 2. 9Hz, 2Η), 6. 60(s, 1Η), 5. 40(dd, J = 12. 7, 3. 0Hz, 1Η), 5. 23 (t, J =7.5Hz, lH),3.84(s,3H),3. 18(d,J = 7. 4Ηζ, 2Η) , 3. 06 (dd, J = 16. 8, 12. 7Hz, 1Η), 2. 63 (dd, J = 16. 8, 3. 0Hz, 1Η), 1. 71 (s, 3Η), 1. 65 (s, 3Η). MS (ESI)m/z = 355. 1[Μ+Η]+〇
[0082] 式D化合物的制備：
[0083] 將IOOmg式14中間體、IOmL DMSO及36mg碘加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至90°C， 保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng)3h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯 和IOmL飽和硫代硫酸鈉水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水 硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式D化合物，淺 黃色固體（63mg，63. 36% )。
[0084] 1H NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ ： 7. 70 (s, 1H), 7. 43 (s, ΙΗ), 7. 42 (d, 1Η), 7. 24 (s, ΙΗ), 6 .89 (d, J = 7. 8Ηζ), 6. 66 (s, 1Η), 5. 30 (t, J = 7. 5Hz, 1Η), 3. 97 (s, 3Η), 3. 30 (overlapped, 2Η )，L 73 (s, 3Η), L 68 (s, 3Η) · MS (ESI) m/z = 353. 2 [Μ+Η]+。
[0085] 實施例6 :式E化合物的制備
[0086]
[0087] 式15中間體：2' -羥基-4' -甲氧基-5' -異戊基苯乙酮的制備：
[0088] 將500mg式4中間體、50mg 10% Pd-C及20mL乙醇加入反應(yīng)瓶中，在室溫下通入 H2反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng)3h)，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石 油醚淋洗，即得到式15中間體，淺黃色固體（420mg，83. 29% )。
[0089] 1H NMR (400MHz，Chloroform-d) δ 12. 72 (s，1H)，7. 42 (s，1H)，6. 39 (s，1H)，3. 86 (s， 3Η)，2· 57 (s，3Η)，2· 55-2. 51 (m，2Η)，I. 65-1. 56 (m，1Η)，I. 46-1. 41 (m，2Η)，0· 97 (s，3Η)，0· 9 5 (s，3H) ;MS(EI)m/z = 234[M+]，219(100% )，191(20% )，177(40% )。
[0090] 式16中間體：1-(2-羥基-4-甲氧基-5-異戊基）-3-(4' -甲氧甲氧基苯 基）_2E_稀丙基-1酮的制備：
[0091] 將400mg式15中間體、281mg式7中間體、IOmL乙醇及620mg三甲基硅醇鉀加入 反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)3h)，使反 應(yīng)液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯和IOmL飽和氯化銨水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，用 飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石 油醚淋洗，即得到式16中間體，黃色固體（235mg，36. 11% )。
[0092] IH NMR (400MHz, Chloroform-d) 5l3.51(s,lH),7.90,7.86 (d,J = 15. 5Hz, 1H) , 7. 66, 7. 64 (d, J = 8. 5Hz, 2H) , 7. 6 I (s, 1H) , 7. 52, 7. 48 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 7. 13, 7. 11 (d, J = 8. 4Hz, 2H), 6. 46 (s, 1H), 5. 25 (s, 2H), 3. 89 (s, 3H), 3. 52 ( s, 3H), 2. 61-2. 56 (m, 2H), I. 67-1. 61 (m, 1H), I. 50-1. 44 (m, 2H), I. 00 (s, 3H), 0. 98 (s, 3H)； MS(EI)m/z = 382[M+], 263(16% ), 218(28% ), 203(24% ) 〇
[0093] 式17中間體：4' -甲氧基甲氧基-6-異戊基-7-甲氧基二氫黃酮的制備：
[0094] 將220mg式16中間體、IOmL甲醇及IlOmg無水氟化鉀加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升 溫至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)6h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入 20mL乙酸乙酯和IOmL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉 干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式17中間體，白色固體 (134mg,61. 00% ) 〇
[0095] 1H NMR (400MHz，Chloroform-d) δ 7· 70 (s，1H)，7· 44, 7· 42 (d，J = 8. 4Ηζ, 2Η) , 7. 13, 7. 11 (d, J = 8. 4Hz, 2Η) , 6. 46 (s, 1Η) , 5. 45-5. 41 (dd, J = 13. 5, 2. 8Hz, 1Η) , 5. 2 3 (s, 2Η) , 3. 86 (s, 3Η) , 3. 51 (s, 3Η) , 3. 10-3.03 (dd, J = 16. 9, 13. 5Hz, 1Η), 2. 82-2. 77 (dd, J = 16. 9, 2. 9Hz, 1Η), 2. 58-2. 54 (m, 2Η), 1. 62-1. 57 (m, 1 Η), L 49-1. 43(m, 2Η), 0· 96(s, 3Η), 0· 95(s, 3Η) ;LRMS(EI)m/z = 382[Μ+], 218(44% )。
[0096] 式18中間體：4' -羥基-6-異戊基-7-甲氧基二氫黃酮的制備：
[0097] 將120mg式17中間體、IOmL甲醇及1.0 mL 3Ν鹽酸加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫 至回流，保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約回流反應(yīng)0. 5h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入 20mL乙酸乙酯和IOmL水萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉 干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式18中間體，白色固體 (89mg,83. 77% ) 〇
[0098] 1H NMR (40 0MHz, Chloroform-d) 57.71(s,lH),7.38,7.36(d,J = 8. 3Hz, 2H), 6. 93, 6. 91 (d, J = 8. 3Hz, 2H), 6. 46 (s, 1H), 5. 62 (s, 1H), 5. 43-5. 39 (dd, J = 13. 5, 2. 8Hz, 1H), 3. 86 (s, 3H), 3. 11-3. 03 (dd, J = 16. 8, 13. 5Hz, 1H), 2. 85-2. 75 (dd, J = 16. 8, 2. 8Hz, 1H), 2. 58-2. 54 (m, 2H), I. 63-1. 55 (m, 1H), I. 48-1. 42 (m, 2H), 0. 96 (s, 3H), 0. 9 4(s, 3H) ；LRMS(EI)m/z = 338 [M+], 219 (68% ), 203(40% ) 〇
[0099] 式E化合物的制備：
[0100] 將80mg式18中間體、IOmL DMSO及30mg碘加入反應(yīng)瓶中，使反應(yīng)液升溫至90°C， 保溫反應(yīng)；待TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束時（約反應(yīng)3h)，使反應(yīng)液降溫至室溫，加入20mL乙酸乙酯 和IOmL飽和硫代硫酸鈉水溶液萃取，收集乙酸乙酯層，用飽和NaCl溶液洗滌，然后用無水 硫酸鈉干燥，過濾，濾液經(jīng)硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚淋洗，即得到式E化合物，淺 黃色粉末（41mg，51.55% )。
[0101] 1H NMR (400MHz，DMSO-(I6) δ :10.29 (s，1H)，7. 96, 7.94 (d，J = 8.6Hz，2H) ,7.74( s, 1H), 7. 28 (s, 1H), 6. 94, 6. 92 (d, J = 8. 6Hz, 2Η), 6. 77 (s, 1Η), 3. 95 (s, 3Η), 2. 66-2. 62 ( m, 2Η), 1. 59-1. 51 (m, 1Η), 1. 48-1. 42 (m, 2Η), 0. 94 (s, 3Η), 0. 92 (s, 3Η) ；LRMS (ESI) m/z = 339. 2[Μ+Η]+。
[0102] 實施例7:利用雙熒光素酶報告基因法分析式I化合物對羅格列酮和吡格列酮引 起的PPARy轉(zhuǎn)錄活性及對非諾貝酸引起的PPARa轉(zhuǎn)錄活性的影響
[0103] 使用PPAR全長基因和配體結(jié)合域（ligand binding domain, LBD)兩種質(zhì)粒檢測 式A-E化合物對核受體轉(zhuǎn)錄因子活性的影響；將其轉(zhuǎn)染到293T細胞后，經(jīng)藥物干預(yù)24h，檢 測其螢火蟲熒光素酶活性；并使用水母熒光素酶活性做轉(zhuǎn)染效率對照。
[0104] (I)293T 細胞培養(yǎng)
[0105] 293T細胞株（人胚腎細胞株）用含10%小牛血清及1%雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基于 37°C、5% 0)2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；取對數(shù)生長期的293T細胞鋪板，細胞密度為IX 10 5~2X 10 5 個/mL鋪板于48孔板中。
[0106] (2)供轉(zhuǎn)染質(zhì)粒
[0107] pCMX-Gal-mPPAR γ LBD 質(zhì)粒，PPAR a-LBD 質(zhì)粒，Gal4reporter vector MHlOO X 4-TK-Luc重組質(zhì)粒和reni I la Iuciferase內(nèi)參質(zhì)粒；PPARy全長質(zhì)粒； PPARa 全長質(zhì)粒，質(zhì)粒構(gòu)建可參考文獻：Biochemical and Biophysical Research Communications 2006(348) :571-578 ；Cell Metabolism. 2(2005)239-249 ；J.Biol. Chem. 272(1997) 18779-1878 ;Cell 83 (1995)803-812。
[0108] (3)轉(zhuǎn)染
[0109] 過夜，待細胞長至50~80%的密度時，進行轉(zhuǎn)染；用DMEM(無血清無雙抗）配制 轉(zhuǎn)染體系：在每毫升的DMEM中含有10 μ g的總質(zhì)粒，以及15 μ L的轉(zhuǎn)染試劑-FuGENE HD 【Roche】，然后將轉(zhuǎn)染體系渦旋混勻，并室溫放置15min，然后將轉(zhuǎn)染體系共轉(zhuǎn)染于293Τ細 胞中，用完全培養(yǎng)基（DMEM，10% FBS，1%雙抗）繼續(xù)培養(yǎng)至24h。
[0110] ⑷加藥干預(yù)
[0111] 24h后，加入用完全培養(yǎng)基稀釋的不同濃度梯度（5、10、25 μM)的式I化合物或不 同濃度的式I化合物與20 μ M羅格列酮或20 μ M吡格列酮混勻之后（為PPAR γ的特異性 激動型配體）進行干預(yù)；或加入用完全培養(yǎng)基稀釋的不同濃度梯度（5、10、25μΜ)的式I化 合物或不同濃度的式I化合物與20 μ M非諾貝酸混勻之后（為PPARa的特異性激動型配 體）進行干預(yù)。
[0112] (5)細胞處理
[0113] ①24h后，用PBS清洗細胞兩次，除去剩余的細胞培養(yǎng)液；
[0114] ②每孔加入65 μ L的裂解液，搖床振蕩15min，待細胞裂解完全，將細胞裂解液轉(zhuǎn) 移到I. 5mL離心管中；
[0115] ③將細胞裂解液于1000 rpm離心5min，取上清液10 μ L于新的離心管中，待測。
[0116] (6)測定與分析熒光素酶強度
[0117] ①加 LAR II液【購自于Promega公司】20 μ L，混勾，測熒光，2秒延遲，讀10秒；轉(zhuǎn) 染效率利用內(nèi)參Renilla熒光素酶活性校正，所有轉(zhuǎn)染實驗至少獨立重復(fù)三次，每個實驗 組至少2個副孔。
[0118] ②利用Bio-Tek, Synergy HT多功能酶標儀進行螢火蟲和海洋腔腸螢光強度檢測； 螢火蟲螢光素酶表達強度用螢火蟲螢光和海洋腔腸螢光強度的比值表示，相對熒光強度= 螢火蟲螢光強度/海洋腔腸螢光強度，即，主要利用熒光素酶相對表達活性反映外加藥物 是否通過與PPARs受體發(fā)生功能性結(jié)合來影響PPARs轉(zhuǎn)錄活性。
[0119] (7)數(shù)據(jù)分析
[0120] 利用軟件SPSS16. 0進行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均采用Mean土SE表示，不同轉(zhuǎn)染組的 差異性比較采用單因素方差分析（ANOVA)，p〈0. 05認為組間差異具有統(tǒng)計學意義。
[0121] (8)實驗結(jié)果
[0122] 圖1體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對羅格列酮引起的PPARy轉(zhuǎn)錄 活性的影響。其中：A圖為對PPAR γ -LBD轉(zhuǎn)錄活性的影響，GAL4-DBD-PPAR γ -LBD表達質(zhì)粒 和GAL4-熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293Τ細胞后經(jīng)式A化合物或/和羅格列酮處理 24h ;Β圖為對全長PPARy轉(zhuǎn)錄活性的影響，PPARy全長表達質(zhì)粒與PPRE-熒光素酶報告 基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293Τ細胞后經(jīng)式A化合物或/和羅格列酮處理24h ;以Renilla活性作 為內(nèi)參判斷報告基因活性，數(shù)據(jù)為三次實驗結(jié)果，用means土SE表示，*P〈0. 05, **P〈0. 01， ***P〈0. 001 ;圖中的ROS表示羅格列酮；由圖1可見：補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物） 對PPARy表現(xiàn)出很好的激動活性，同時可以濃度梯度的方式促進羅格列酮引起的PPARy 轉(zhuǎn)錄活性，說明式A化合物對PPAR γ激動劑：羅格列酮具有明顯增效作用。
[0123] 圖2體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對吡格列酮引起的PPARy轉(zhuǎn)錄 活性的影響。其中：A圖為對PPAR γ -LBD轉(zhuǎn)錄活性的影響，GAL4-DBD-PPAR γ -LBD表達質(zhì)粒 和GAL4-熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293Τ細胞后經(jīng)式A化合物或/和吡格列酮處理 24h ;Β圖為對全長PPARy轉(zhuǎn)錄活性的影響，PPARy全長表達質(zhì)粒與PPRE-熒光素酶報告 基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293Τ細胞后經(jīng)式A化合物或/和吡格列酮處理24h ;以Renilla活性作 為內(nèi)參判斷報告基因活性，數(shù)據(jù)為三次實驗結(jié)果，用means土SE表示，*P〈0. 05, **P〈0. 01， ***P〈0. 001 ;圖中的PIO表示吡格列酮；由圖2可見：補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物） 可以濃度依賴方式顯著激動PPARy轉(zhuǎn)錄活性，同時還可以濃度依賴方式促進吡格列酮引 起的PPARy轉(zhuǎn)錄活性，說明式A化合物對PPARy激動劑：吡格列酮具有明顯增效作用。
[0124] 由以上圖1和圖2結(jié)果可知，補骨脂二氫黃酮甲醚對噻唑烷類PPARy激動劑具有 明顯增效作用。
[0125] 圖3體現(xiàn)了補骨脂二氫黃酮甲醚（式A化合物）對非諾貝酸引起的PPARa轉(zhuǎn)錄 活性的影響。其中：A圖為對PPARa -LBD轉(zhuǎn)錄活性的影響，GAL4-DBD-PPARa -LBD表達質(zhì) 粒和GAL4-熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293T細胞后經(jīng)式A化合物或/和非諾貝酸 (PPARa受體激動劑）處理24h;B圖為對全長PPARy轉(zhuǎn)錄活性的影響，PPAR a全長表達質(zhì) 粒與PPRE-熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于293T細胞后經(jīng)式A化合物或/和非諾貝酸處 理24h ;以Renilla活性作為內(nèi)參判斷報告基因活性。數(shù)據(jù)為三次實驗結(jié)果，用means 土 SE 表示，*P〈0. 05，#P〈0. 01，*#P〈0. 001 ;圖中的FA表示非諾貝酸；由圖3可見：補骨脂二氫 黃酮甲醚（式A化合物）可顯著促進PPARa的激動活性，同時可以濃度梯度的方式促進非 諾貝酸引起的PPARa轉(zhuǎn)錄活性，說明式A化合物對PPARa激動劑：非諾貝酸具有明顯增效 作用。
[0126] 表1中列舉了本發(fā)明所述的式A、B、C、D和E五種化合物（20 μΜ)與羅格列酮 (20 μ Μ)聯(lián)合使用時對PPARy激動活性的影響：
[0127] 表 1
[0129] 倍數(shù)=聯(lián)合用藥干預(yù)組的相對熒光強度/羅格列酮干預(yù)組的相對熒光強度，ROS : 羅格列酮。與羅格列酮干預(yù)組相比，*Ρ〈〇. 05, **Ρ〈0. 01。
[0130] 表2中列舉了本發(fā)明所述的式A、B、C、D和E五種化合物（20μΜ)與非諾貝酸 (20 μ Μ)聯(lián)合使用時對PPARa激動活性的影響：
[0131]表 2
[0133] 倍數(shù)=聯(lián)合用藥干預(yù)組的相對熒光強度/非諾貝酸干預(yù)組的相對熒光強度，F(xiàn)A : 非諾貝酸。與非諾貝酸干預(yù)組相比，*Ρ〈〇. 05, #Ρ〈0. 01。
[0134] 由表1和表2可見：本發(fā)明所述式A、B、C、D、E化合物均對PPAR a和PPARy激動 劑具有明顯增效作用，不僅可作為PPARa或PPARy激動劑的增效劑，還可作為PPARa和 PPARγ雙重激動劑的增效劑，具有廣泛應(yīng)用前景。
[0135] 實施例8 :式A化合物對羅格列酮引起的db/db小鼠血糖下降趨勢的影響
[0136] db/db小鼠經(jīng)羅格列酮4mg/kg/天、式A化合物100mg/kg/天、羅格列酮2mg/kg/ 天或/和式A化合物50mg/kg/天治療2周；數(shù)據(jù)用means 土 SE表示，每組η = 6 ;小鼠禁食 10小時后測空腹血糖；數(shù)據(jù)為mean土SE，各組N = 6 ;*Ρ〈0· 05 ;**P〈0.0 l0
[0137] 1印tin受體突變db/db小鼠在4周時開始表現(xiàn)出肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗、高 血糖等癥狀，為理想的肥胖、高脂血癥及II型糖尿病的小鼠動物模型。
[0138] (I) db/db小鼠的飼養(yǎng)
[0139] db/db小鼠飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)小鼠實驗飼養(yǎng)室（溫度：22~23°C，濕度：50~70%， 工作照度：150~300Lx，動物照度：15~20Lx，噪聲標準<60dB);試驗前，適應(yīng)環(huán)境一周。
[0140] (2) db/db小鼠的分組
[0141] db/db小鼠禁食10h，稱重并測空腹血糖，篩選血糖穩(wěn)定的db/db小鼠54只，按體 重和血糖值隨即分為6組：模型對照組、羅格列酮2mg/kg/天、羅格列酮4mg/kg/天、式A化 合物組50mg/kg/天、式A化合物組100mg/kg/天和羅格列酮2mg/kg/天+式A化合物50mg/ kg/天組進行藥效學實驗；同時將11只野生型C57BL/KSJ小鼠作為正常對照組模型。
[0142] (3)藥物處理
[0143] 正常對照組：正常野生型小鼠給予含有10% (v/v)助溶劑的超純水灌胃；
[0144] 模型對照組：給予db/db小鼠含有10% (v/v)助溶劑的超純水灌胃；
[0145] 羅格列酮2mg/kg/天：將羅格列酮藥物溶解于助溶劑中，然后超純水稀釋，最終給 予 2mg/kg/ 天；
[0146] 羅格列酮4mg/kg/天：將羅格列酮藥物溶解于助溶劑中（10% v/v)，然后超純水稀 釋，最終給予4mg/kg/天；
[0147] 式A化合物組50mg/kg/d :將式A化合物溶解于含有10%助溶劑的超純水中，給予 50mg/kg/d式A化合物；
[0148] 式A化合物組100mg/kg/天：將式A化合物溶解于含有10 %助溶劑的超純水中， 給予100mg/kg/天式A化合物；
[0149] 式A化合物50mg/kg/天+羅格列酮組2mg/kg/天：將式A化合物和羅格列酮同時 溶解于含有10%助溶劑的超純水中，給予50mg/kg/天式A化合物和2mg/kg/天羅格列酮；
[0150] 治療2周后，分別測定7組不同處理后小鼠的空腹血糖。
[0151] 詳細測試結(jié)果如圖4所示：數(shù)據(jù)用means土SE表示，與模型對照組相比，*P〈0. 05， **Ρ〈0·01，*#Ρ〈0·001 ;與式 A 50mg/kg+R0S 2mg/kg 組相比，·Ρ〈0·001 ;圖中的 ROS 表示 羅格列酮。由圖4可見：在連續(xù)灌胃給藥2周之后，式A化合物可明顯降低db/db小鼠的空 腹血糖，且隨著濃度的增大降低趨勢愈明顯。此外，50mg/kg/天式A化合物與2mg/kg/天羅 格列酮聯(lián)合使用時，與2mg/kg/天羅格列酮組或式A 50mg/kg/天化合物治療組小鼠相比， 可有效降低db/db小鼠血糖水平，其作用強度與高劑量4mg/kg/天羅格列酮相當，說明式A 化合物與羅格列酮聯(lián)合使用，產(chǎn)生了明顯協(xié)同增效作用。
[0152] 實施例9 :式A化合物對非諾貝酸引起的DIO小鼠甘油三酯下降趨勢的影響
[0153] 高脂食物喂養(yǎng)的C57BL/6J小鼠則在16-20周時出現(xiàn)肥胖型II型糖尿病的典型 癥狀，其發(fā)病機制與人類肥胖、高脂血癥及II型糖尿病接近；通過動物口服給藥，觀察糖 尿病動物空腹葡萄糖水平、血漿胰島素，血脂，體內(nèi)脂肪含量等指標，可比較式A化合物與 PPARa激動劑非諾貝酸（FA)的協(xié)同效應(yīng)。
[0154] (I) C57BL/6J 小鼠的飼養(yǎng)
[0155] db/db小鼠飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)小鼠實驗飼養(yǎng)室（溫度：22~23°C，濕度：50~70%， 工作照度：150~300Lx，動物照度：15~20Lx，噪聲標準<60dB);試驗前，適應(yīng)環(huán)境一周；高 脂餐誘導12周成為高脂餐誘導肥胖小鼠模型（DIO)。
[0156] (2) DIO小鼠分組
[0157] DIO小鼠禁食12h，稱重并測空腹血糖，按體重和血糖值隨即分為6組：模型高脂對 照組、非諾貝酸50mg/kg/天、非諾貝酸100mg/kg/天、式A化合物組50mg/kg/天、式A化合 物組100mg/kg/天和非諾貝酸50mg/kg/天+式A化合物50mg/kg/天組進行藥效學實驗。
[0158] (3)藥物處理
[0159] 正常低脂對照組：正常野生型C57BL小鼠給予含有10% (v/v)助溶劑的超純水灌 田 冃；
[0160] 模型高脂對照組：DIO小鼠給予含有10% (v/v)助溶劑的超純水灌胃；
[0161] 非諾貝酸50mg/kg/天：將非諾貝酸藥物溶解于助溶劑中，然后超純水稀釋，最終 給予DIO小鼠2mg/kg/天；
[0162] 非諾貝酸100mg/kg/天：將非諾貝酸藥物溶解于助溶劑中（10% v/v)，然后超純水 稀釋，最終給予DIO小鼠4mg/kg/天；
[0163] 式A化合物組50mg/kg/天：將式A化合物溶解于含有10%助溶劑的超純水中，給 予DIO小鼠50mg/kg/天式A化合物；
[0164] 式A化合物組100mg/kg/天：將式A化合物溶解于含有10 %助溶劑的超純水中， 給予DIO小鼠100mg/kg/天式A化合物；
[0165] 式A化合物50mg/kg/天+非諾貝酸組50mg/kg/天：將式A化合物和非諾貝酸同 時溶解于含有1〇%助溶劑的超純水中，給予〇10小鼠5〇11^/1^/天式4化合物和5〇11^/1^/ 天非諾貝酸；
[0166] 治療3周后，分別測定7組不同處理后小鼠的甘油三酯水平。
[0167] 詳細測試結(jié)果如圖5所示：數(shù)據(jù)用means土SE表示，與模型高脂對照組相比， *P〈0. 05，#P〈0. 01 ;與非諾貝酸50mg/kg組相比，#P〈0. 05 ;圖中的FA表示非諾貝酸。由圖 5可見：在連續(xù)灌胃給藥3周之后，式A化合物可明顯降低DIO小鼠的甘油三酯水平，且隨著 濃度的增大降低趨勢愈明顯；此外，式A化合物50mg/kg與50mg/kg非諾貝酸聯(lián)合使用時， 與50mg/kg非諾貝酸組或50mg/kg式A化合物組小鼠相比，可有效降低DIO小鼠甘油三酯 水平，其作用強度與l〇〇mg/kg非諾貝酸相當，說明式A化合物與非諾貝酸聯(lián)合使用，產(chǎn)生了 明顯協(xié)同增效作用。
[0168] 綜上實驗可見：本發(fā)明式I所示的補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物對PPARa和 PPARy激動劑具有明顯增效作用，不僅可作為PPARa或PPARy激動劑的增效劑，還可作為 PPARa和PPARy雙重激動劑的增效劑，可作為PPARa或/和PPARy激動增效劑的活性成 分用于制備預(yù)防或治療代謝綜合癥的組合物，不僅可拓寬補骨脂二氫黃酮甲醚及其類似物 的應(yīng)用范圍，而且可實現(xiàn)PPARa或/和PPARy激動劑的減量增效，以降低其毒副作用，實 現(xiàn)PPAR a或/和PPAR γ激動劑在臨床中的廣泛應(yīng)用。
[0169] 最后有必要在此說明的是：本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以在上述實施例基礎(chǔ)上，進行補 骨脂二氫黃酮甲醚其它類似物的上述活性論證實驗，在此不再一一列舉。此外應(yīng)理解，在閱 讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，但所做的 等價形式同樣落于本申請權(quán)利要求書所要求的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種補骨脂二氨黃酬甲酸及其類似物的用途，其特征在于：W補骨脂二氨黃酬甲酸 或/和其類似物作為活性成分用于制備增強PPAR a或/和PPAR 丫激動活性的組合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：W補骨脂二氨黃酬甲酸或/和其類似物 作為活性成分用于制備PPAR a或/和PPAR 丫激動增效劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：W補骨脂二氨黃酬甲酸或/和其類似物 作為PPARa或/和PPAR丫激動增效劑的活性成分用于制備預(yù)防或治療代謝綜合癥的組合 物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的用途，其特征在于：所述組合物包含補骨脂二氨黃酬甲 酸或/和其類似物及嚷挫燒類藥物或貝特類藥物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的用途，其特征在于：所述組合物為藥物組合物、保健品組 合物或食品組合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于：所述的代謝綜合癥包括葡萄糖代謝異常 疾病或/和脂質(zhì)代謝異常疾病。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于：所述的代謝綜合癥包括糖尿病、肥胖癥、 高血脂癥、動脈粥樣硬化疾病中的至少一種。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的用途，其特征在于：所述的補骨脂二氨黃酬甲酸 及其類似物為具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或所述化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立 體異構(gòu)體或前體化合物：通式中：C環(huán)的2位與3位之間為雙鍵或單鍵；Ri為烷氧基；R 2為徑基或醋基；R 3為氨 或徑基；Ra為異戊締基或烷基。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于：所述的烷氧基選自Cl~C4的烷氧基；所 述的醋基選自Cl~C4的醋基；所述的烷基選自Cl~ClO的烷基。10. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的用途，其特征在于：所述的補骨脂二氨黃酬甲酸 及其類似物為具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物或所述化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、 立體異構(gòu)體或前體化合物；
【文檔編號】A61K31/352GK105982884SQ201510087002
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月25日
【發(fā)明人】李醫(yī)明, 黃誠, 馮麗, 郭夫江, 杜國新, 朱維良, 李波, 陳凱先
【申請人】上海中醫(yī)藥大學