用于施加到皮膚或者添加到紋身墨水中的個(gè)人化物質(zhì)及其制備方法
【專利摘要】本文描述了用于將材料提供到個(gè)體的組合物，所述材料例如是生物材料、沙、土壤、金屬、水、海水、圣水、合成或生物聚合物、火葬灰、陶瓷、動(dòng)物或植物組織、或者具有個(gè)人意義的另一生理學(xué)相容的組分。所述材料被包封在惰性的、不可生物侵蝕的、疏水性的聚合物材料中。本文還提供了制造包封所述個(gè)人化物質(zhì)的微粒的方法以及使用方法。所述個(gè)人化物質(zhì)可以被包封在不可生物侵蝕的聚合物微粒中。所述被包封的個(gè)人化物質(zhì)可以與載體組合以提供到個(gè)體的皮膚。在一些實(shí)施方式中，所述個(gè)人化物質(zhì)被添加到紋身墨水中并且被引入到在個(gè)體的皮膚上創(chuàng)作的紋身中。在注射到皮膚中之后，所述被包封的材料保留在所述微粒中，并且不隨時(shí)間釋放。
【專利說明】用于施加到皮膚或者添加到紋身墨水中的個(gè)人化物質(zhì)及其制 備方法
[0001 ] 相關(guān)申請
[0002] 本申請要求2014年1月10日提交的美國臨時(shí)專利申請第61/925,827號(hào)的優(yōu)先權(quán)， 該美國臨時(shí)專利申請的內(nèi)容全文并入本文。
[0003] 提交序列表
[0004] 與本申請相關(guān)的序列表通過EFS-Web以電子格式提交并且在此通過引用將其全部 內(nèi)容并入本說明書。含有該序列表的文本文件的名稱為121608_00007_PCT_S equenCe_ Listing。該文本文件大小為1KB，該文本文件創(chuàng)建于2015年1月9日。 發(fā)明領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明涉及要添加到皮膚的個(gè)人化材料，例如用于紋身墨水的添加劑。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 人類將紋身施加于皮膚已達(dá)數(shù)千年。例如，首次記錄的用于混合并施加紋身墨水 的配方追溯到五世紀(jì)并且認(rèn)為是羅馬醫(yī)生埃提烏斯所為。紋身墨水源自于天然物質(zhì)并且包 含在液體載體中的著色顆粒的混懸體。用針或類似的工具將紋身墨水施加到墨水永久保留 處的皮膚而產(chǎn)生紋身。該技術(shù)通過由皮膚的彈性與針的移動(dòng)的組合而引起的交替的壓力-抽吸作用，將顏料混懸體經(jīng)過皮膚引入。用于引入到皮膚中的顏料的水和其他載體經(jīng)過組 織擴(kuò)散并被吸收。一旦皮膚愈合，大部分顏料顆粒保留在組織間隙中。在愈合過程中，一些 顏料顆粒從皮膚表面消除。在愈合后，紋身由位于真皮中的剩余顏料顆粒構(gòu)成，在那里它們 被吞噬性皮膚細(xì)胞吞噬或者保留在細(xì)胞外基質(zhì)中。參見Mathiowitz等人的美國公布申請第 2009/0311295號(hào)。用于紋身的墨水由于它們的惰性和不溶性顏料顆粒的相對較大尺寸而防 止消除。以這種方式產(chǎn)生的紋身將隨時(shí)間而部分褪色，但通常將保持可見?？沙鲇诟鞣N各樣 的原因而使用紋身，主要是出于皮膚紋飾。參見Klitzman和Koger的美國專利第6,013，122 號(hào)。
[0008] 雖然將紋身墨水施加到皮膚的方法在進(jìn)步，如電子紋身墨水槍，但現(xiàn)在商業(yè)使用 的紋身墨水仍然與幾個(gè)世紀(jì)以前使用的那些相似。標(biāo)準(zhǔn)的紋身墨水含有包含溶解于載體 (通常是乙醇或水）中的金屬鹽的顏料，以將顏料分散于真皮中。參見美國專利6,013,122。 因此，存在對于具有改進(jìn)性質(zhì)的紋身墨水的新型制劑的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本文描述了用于將材料提供到個(gè)體的組合物，所述材料例如是生物材料、沙、土 壤、金屬、水、海水、圣水、合成或生物聚合物、火葬灰（cremated ash)、陶瓷、動(dòng)物或植物組 織、或者具有個(gè)人意義的另一生理學(xué)相容的組分。這些材料可以被包封并然后施用到個(gè)體 的皮膚以創(chuàng)作個(gè)人化紋身。
[0010] 材料被包封在不可生物侵蝕的聚合物微粒中，其中微粒包含生物相容的、不可生 物侵蝕的、疏水性聚合物。優(yōu)選地，形成微粒的聚合物(其共聚物或摻合物)具有高于60°C的 玻璃化轉(zhuǎn)變溫度或者大于50°C的熔點(diǎn)。還提供了制造和使用組合物的方法。
[0011] 個(gè)人化墨水紋身產(chǎn)生了與人、物體、地點(diǎn)或事件的物理聯(lián)系，因?yàn)閭€(gè)人化紋身將個(gè) 人化物質(zhì)引入到紋身墨水中，并因此引入到皮膚上顯示的圖像中。本文描述的組合物可被 遞送到個(gè)人的皮膚以創(chuàng)作個(gè)人化墨水紋身。例如，組合物可以是紋身墨水的添加劑?；蛘撸?組合物可被提供到未添加紋身墨水的個(gè)體的皮膚，例如，通過將組合物施用到已經(jīng)存在紋 身的位置。
[0012] 任選地與紋身墨水組合，組合物在適合載體中被提供到個(gè)體。例如，在使用時(shí)，組 合物可以與紋身墨水混合，并且混合物可以使用標(biāo)準(zhǔn)紋身針和程序而施加。
[0013] 或者，組合物與適合的載體一起施用到個(gè)體的皮膚中的一個(gè)或多個(gè)期望位置。通 常，標(biāo)記被添加到所述位置，或者所述位置含有標(biāo)記，以指示包封材料的位置。
[0014] 在提供到個(gè)體的皮膚之后，被包封的材料保留在微粒中，并且微粒不發(fā)生侵蝕。被 包封的材料不從微粒釋放。被包封的材料在微粒中保留與其在個(gè)體的身體中一樣長的時(shí) 間，例如至少5年、至少10年、至少15年、至少20年，或者更長的時(shí)間段。
[0015]在優(yōu)選實(shí)施方式中，組合物包含從對個(gè)體具有意義的一個(gè)或多個(gè)人類、非人類動(dòng) 物、或植物，或其組合獲得的DNA ANA可以通過任何標(biāo)準(zhǔn)方法獲得，例如非侵入式面頰拭子 (cheek-swab) ANA被包封在不可生物侵蝕的聚合物微粒中，其中微粒包含生物相容的、疏 水性的、不可生物侵蝕的聚合物。
[0016] 在一些方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含包封在不可生物侵蝕的聚合物微粒 中的個(gè)人化物質(zhì)，其中微粒包含生物相容的、疏水性的、不可生物侵蝕的聚合物，和其中微 粒不釋放個(gè)人化物質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，組合物還包含適合于注射到皮膚中的載體。在一 些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)呈納米顆粒形式。在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)選自DNA、沙、 土壤、金屬、火葬灰、陶瓷和植物組織。在某些實(shí)施方式中，微粒具有1微米至10微米，優(yōu)選1 至5微米范圍的尺寸。在某些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)還包含個(gè)人識(shí)別特征，其中個(gè)人識(shí)別 特征含有與個(gè)人化物質(zhì)的來源相關(guān)的獨(dú)特信息。
[0017] 在前述組合物的某些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)是DNA，并且DNA包含選自短串聯(lián)重 復(fù)（STR)、單核苷酸多態(tài)性(SNP)、表觀遺傳標(biāo)記和甲基化DNA圖譜的個(gè)人識(shí)別特征。在某些 實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)是火葬灰。
[0018] 在前述組合物的某些實(shí)施方式中，聚合物選自聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯類、聚甲 基丙烯酸酯類、及其共聚物和摻合物。在某些實(shí)施方式中，聚合物具有大于或等于60°c的玻 璃化轉(zhuǎn)變溫度或者具有大于或等于50°C的熔點(diǎn)。在某些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)是DNA，并 且其中微粒含有高達(dá)0.01 % (重量/重量)DNA。在某些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)不是DNA，并 且其中微粒含有高達(dá)10% (重量/重量)的個(gè)人化物質(zhì)。
[0019] 在前述組合物的某些實(shí)施方式中，組合物還包含紋身墨水，其中墨水包含至少一 種顏料或染料。
[0020] 在某些方面，本發(fā)明涉及一種制備權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的組合物的方法，其包 括(a)從源生物或源材料分離個(gè)人化物質(zhì)；和(b)將個(gè)人化物質(zhì)包封到微粒中。在某些實(shí)施 方式中，方法還包括(c)分析從源生物或源材料分離的個(gè)人化物質(zhì)；（d)分析組合物中的個(gè) 人化物質(zhì)；和(e)比較步驟(d)中獲得的數(shù)據(jù)與步驟(c)中獲得的數(shù)據(jù)以確認(rèn)從源生物或源 材料分離的個(gè)人化物質(zhì)與組合物中的個(gè)人化物質(zhì)相同。在某些實(shí)施方式中，方法還包括在 步驟(b)之前使個(gè)人化物質(zhì)微粉化。在某些實(shí)施方式中，方法還包括在步驟(b)之前使個(gè)人 化物質(zhì)形成納米顆粒。
[0021] 在前述方法的某些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)在步驟(b)之前呈液體形式。在某些實(shí) 施方式中，個(gè)人化物質(zhì)是DNA。在某些實(shí)施方式中，方法還包括在步驟(b)之前擴(kuò)增DNA。在某 些實(shí)施方式中，DNA包含一個(gè)或多個(gè)短串聯(lián)重復(fù)(STR)。在某些實(shí)施方式中，DNA是人類DNA。
[0022] 在前述方法的某些實(shí)施方式中，步驟(b)包括通過選自溶劑蒸發(fā)微包封、經(jīng)溶劑蒸 發(fā)的微球雙壁形成、熱恪融包封(hot melt encapsulation)、相分離包封、自發(fā)乳液、溶劑 去除微包封和凝聚的工藝形成微粒。在某些實(shí)施方式中，形成單個(gè)批量(batch)的包含干燥 微粒的組合物，其中干燥微粒的批量的質(zhì)量在約lg至3g范圍內(nèi)，優(yōu)選約2g。
[0023] 在某些方面，本發(fā)明涉及一種將個(gè)人化物質(zhì)提供到個(gè)體的皮膚的方法，其包括將 前述組合物中的任一種注射到個(gè)體的皮膚中。在某些實(shí)施方式中，注射在現(xiàn)有的紋身的位 置處進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，注射步驟在皮膚上的不同位置處重復(fù)多次以形成紋身設(shè)計(jì)。
【附圖說明】
[0024]圖1是顯示用于給顧客提供包含具有個(gè)人意義的DNA的紋身的示例性端到端方法 的步驟的流程圖。由顧客實(shí)施且然后由實(shí)驗(yàn)室實(shí)施的步驟產(chǎn)生了單獨(dú)的(干粉)或呈液體形 式的(例如，具有載體溶液)被包封的DNA，其作為添加劑添加到紋身墨水中。
[0025] 圖2是顯示用于給客戶提供包含具有個(gè)人意義的一種或多種化合物的紋身的示例 性端到端方法的步驟的流程圖。由顧客實(shí)施且然后由實(shí)驗(yàn)室實(shí)施的步驟產(chǎn)生了單獨(dú)的（干 粉)或呈液體形式的（例如，具有載體溶液)具有個(gè)人意義的化合物，其作為添加劑添加到紋 身墨水中。
【具體實(shí)施方式】
[0026] I.定義
[0027] 本文所用術(shù)語"個(gè)人化物質(zhì)"是指對個(gè)體具有意義的材料。個(gè)人化物質(zhì)可以是天然 或合成材料，在這種情況下至少一部分材料能夠被包封到聚合物微粒中。術(shù)語個(gè)人化物質(zhì) 在本文中用于同時(shí)指包封之前和之后的材料。
[0028] 術(shù)語"添加劑"和"添加性組合物"在本文中可交換使用，指的是具有或不具有載體 的、在紋身之前或在紋身過程中添加到現(xiàn)有的紋身或者添加到紋身墨水中的組合物。
[0029] 本文所用術(shù)語"不可生物侵蝕的"和"不可侵蝕的"表示在皮膚中的生理學(xué)條件下 是惰性或者非反應(yīng)性的。本文描述的不可生物侵蝕的聚合物以及由此而來的聚合物微粒在 施加到個(gè)體的皮膚之后(例如通過注射到皮膚而施加），能夠在生物組織(特別是皮膚)的生 理環(huán)境下耐受物理溶解和/或化學(xué)降解過程，通常持續(xù)至少5年、至少10年、至少15年、至少 20年、或甚至更長時(shí)間。
[0030]本文所用術(shù)語"疏水性聚合物"是指對水具有低親和性(在生理溫度下，例如37°C) 且在水中具有比聚乳酸(PLA)更低的溶解度的聚合物。
[0031] 本文所用術(shù)語"高分子量"表示高于1〇,〇〇〇道爾頓(Da)，優(yōu)選高于20,000Da的分子 量。
[0032] 本文所用術(shù)語"載體(carrier)"或"添加性載體"表示用于溶解或儲(chǔ)存被包封形式 的個(gè)人化物質(zhì)的組合物。載體通常適合于注射到人類皮膚中。
[0033] 本文所用術(shù)語"被包封的材料"表示個(gè)人化物質(zhì)的分子組分。例如，如果個(gè)人化物 質(zhì)是沙，那么被包封的材料包括二氧化硅(Si0 2)、硅酸鈣(Ca2Si〇4)、氮化鈣(CaN2)和/或氮 化硅(Si 3N4)等。
[0034] 本文所用術(shù)語"生物材料"表示任何生物物質(zhì)，包括，但不限于，生物小分子，如核 苷酸類、氨基酸類、輔因子類或激素類，生物大分子，如核酸類、多肽類、蛋白質(zhì)類(例如酶 類、受體類、分泌蛋白類、結(jié)構(gòu)和信號(hào)蛋白類、激素類、配體類等）、多糖類，和/或其任意組 合。
[0035]本文所用術(shù)語"生理學(xué)相容性組分"表示與受者（通常是人類）的生理學(xué)相容的組 合物中的任意組分。
[0036] 本文所用術(shù)語"受者"是指被包封的個(gè)人化物質(zhì)的受者。受者可以是能夠接受被包 封的個(gè)人化物質(zhì)的任何受試者、人類、動(dòng)物或植物。
[0037] 本文所用"納米顆粒"是指在納米(nm)范圍內(nèi)的顆?；蚪Y(jié)構(gòu)，通常直徑為約1至約 1000nm〇
[0038] 本文所用"微粒"是具有相對較小尺寸、但并不必然在微米尺寸范圍內(nèi)的顆粒;對 于尺寸可以是例如1至約1〇〇〇微米的顆粒，使用該術(shù)語。術(shù)語"微粒"包括微球、微囊和微粒， 除非另有說明。微?？梢跃哂袕?fù)合結(jié)構(gòu)并且不必然是純的物質(zhì)；它可以是球形或者其他任 何形狀。
[0039] 本文所用術(shù)語"負(fù)載百分率"是指個(gè)人化物質(zhì)的重量與微粒的重量的比率乘以 100〇
[0040] 本文所用術(shù)語"小批量"是指適合于被不超過一個(gè)、不超過兩個(gè)、不超過三個(gè)、不超 過四個(gè)、不超過五個(gè)、不超過六個(gè)、不超過七個(gè)、不超過八個(gè)、不超過九個(gè)、或不超過十個(gè)個(gè) 體使用的被包封的個(gè)人化物質(zhì)的批量大小，任選地在施用于個(gè)體之后剩余少量以用于驗(yàn)證 目的。在一些實(shí)施方式中，被包封的個(gè)人化物質(zhì)的批量大小為小于約10，〇〇〇、5000、4000、 3000、2000、1000、500、100、10、1、0.1或0.0111^。這些值中的任一個(gè)可以用于限定被包封的 個(gè)人化物質(zhì)的批量大小的范圍。例如，被包封的個(gè)人化物質(zhì)的批量大小可以在約10，〇〇〇mg 至約0 · Olmg、約10，000mg至約lOOOmg、或約5000mg至約500mg范圍內(nèi)。
[0041] II.組合物
[0042] 本文描述了用于將個(gè)人化物質(zhì)安置到個(gè)體的皮膚中以保留在安置位置處的組合 物。個(gè)人化物質(zhì)被包封到微粒中，在本文中也稱為"被包封的材料"。組合物可以用于使紋身 個(gè)人化和/或使對個(gè)體具有特別意義的物質(zhì)整合到他/她的皮膚中。
[0043] 在提供到個(gè)體的皮膚之后，被包封的材料保留在微粒中，并且微粒不發(fā)生侵蝕。被 包封的材料不從微粒釋放。可以使用簡單的體外試驗(yàn)以確認(rèn)在提供到個(gè)體的皮膚之后，微 粒將不釋放被包封的材料。例如，在形成含有被包封的個(gè)人化物質(zhì)的微粒之后，微粒可以浸 沒到PH7.4和水浴(bath)中37°C溫度下的水性溶液或緩沖劑中至少約1個(gè)月。定期除去樣 品，例如在1小時(shí)后、在1天后、在1周后和在1個(gè)月后，并且使用適合的檢測方法進(jìn)行分析以 確認(rèn)在水性溶液、緩沖劑或上清液中是否存在被包封的材料的任何痕跡。
[0044]適合的檢測方法是本領(lǐng)域已知的。例如，用于檢測是否釋放了任何DNA的適合方法 包括檢測釋放到水性溶液、緩沖劑或上清液中的被標(biāo)記DNA的熒光，和/或水性溶液、緩沖劑 或上清液的PCR擴(kuò)增。用于檢測樣品中的低水平DNA的PCR方法是本領(lǐng)域已知的。參見，例如， Sambrook等人，Molecular Cloning.(第4版），冷泉港，紐約:冷泉港實(shí)驗(yàn)室。具有實(shí)時(shí)擴(kuò)增 監(jiān)視的常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)PCR可以用于檢測任何DNA釋放。PCR擴(kuò)增可以使用與在包封之前用于 擴(kuò)增DNA的引物和擴(kuò)增條件相同的引物和擴(kuò)增條件。PCR擴(kuò)增可以使用多達(dá)50個(gè)擴(kuò)增循環(huán)， 并且如果有任何DNA存在于水性溶液、緩沖劑或上清液中的話，產(chǎn)生可檢測的數(shù)量的擴(kuò)增的 DNA分子(稱為"擴(kuò)增產(chǎn)物"）。在PCR之后，如果存在的話，擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過用于檢測雙鏈 DNA的常規(guī)凝膠電泳技術(shù)或者紫外-可見光光譜法檢測。參見，例如，Sambrook等人， Molecular Cloning.(第4版），冷泉港，紐約:冷泉港實(shí)驗(yàn)室。采用上述方法，存在擴(kuò)增產(chǎn)物 表明DNA從微粒釋放，而不存在擴(kuò)增產(chǎn)物則表明DNA未從微粒釋放。
[0045] 對于非DNA個(gè)人化物質(zhì)，適合的檢測方法包括IR，質(zhì)譜法，例如同位素比率質(zhì)譜法 (IRMS)或液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS)。
[0046] 本文所用術(shù)語"不釋放個(gè)人化物質(zhì)的微粒"是指如通過上文描述的體外試驗(yàn)所檢 測的、在水性溶液或緩沖劑中不釋放實(shí)質(zhì)量(substantial amount)個(gè)人化物質(zhì)的微粒。在 一些實(shí)施方式中，如通過上文描述的體外試驗(yàn)所測定的，微粒在1小時(shí)、1天、1周、2周、3周、1 個(gè)月、6個(gè)月、1年、5年、10年、20年或30年后不釋放可檢測量的個(gè)人化物質(zhì)。在一些實(shí)施方式 中，微粒釋放微粒中含有的個(gè)人化物質(zhì)的總量的小于10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、 0.01 %、0.005%或0.001 %。在一些實(shí)施方式中，微粒在1小時(shí)、1天、1周、2周、3周、1個(gè)月、6 個(gè)月、1年、5年、10年、20年或30年后釋放微粒中含有的個(gè)人化物質(zhì)的總量的小于10%、5%、 1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、0.005%或0.001%。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，微粒在2 周后釋放微粒中含有的個(gè)人化物質(zhì)(例如DNA)的總量的小于0.1%。
[0047]對于具有作為被包封的個(gè)人化物質(zhì)的DNA的組合物，在如上文描述的體外試驗(yàn)之 后的檢測方法包括通過PCR進(jìn)行擴(kuò)增，接著通過常規(guī)凝膠電泳技術(shù)或紫外-可見光光譜法進(jìn) 行檢測。對于具有作為被包封的個(gè)人化物質(zhì)的非DNA材料的組合物，質(zhì)譜可以用作如上文描 述的體外試驗(yàn)之后的檢測方法。
[0048] 1.個(gè)人化物質(zhì)
[0049] 通常，本文描述的組合物包含個(gè)人化物質(zhì)。適合的個(gè)人化物質(zhì)包括但不限于生物 材料，例如，動(dòng)物或植物組織、沙、土壤、金屬、海水、圣水、合成或天然聚合物、火葬灰、陶瓷 和其他生理學(xué)相容的組分。在液體個(gè)人化物質(zhì)如海水和圣水的情況下，凍干包含個(gè)人化物 質(zhì)的微粒將除去微粒中含有的任何液體。然而，液體中含有的任何鹽或其他非揮發(fā)性化合 物將保留。
[0050] 在一些實(shí)施方式中，組合物可以含有被包封的DNA而沒有任何另外的個(gè)人化物質(zhì)。 在其他實(shí)施方式中，組合物含有包含DNA的個(gè)人化物質(zhì)以及包含其他化合物的一種或多種 另外的個(gè)人化物質(zhì)。例如，另外的個(gè)人化物質(zhì)可以是來自沙、土壤、金屬、陶瓷和/或植物產(chǎn) 品的一種或多種樣品。
[0051 ] A.示例性個(gè)人化物質(zhì)
[0052]適合的個(gè)人化物質(zhì)包括，但不限于，沙、土壤或巖石顆粒、或者從沙、土壤或巖石提 取的化合物。
[0053]沙主要由二氧化硅（Si02)和其他有機(jī)與無機(jī)礦物（如硅酸鈣（Ca2Si〇4)、氮化鈣 (Ca3N2)、氮化娃（Si3N4)、氮化錯(cuò)(A1N3)、氧化錯(cuò)(AI2O3)、氮化硼(borazone) "氮化硼"（BN)、 氧化鎂(MgO)、氧硫化硅(SiOS)、硅酸鋰(Li2Si04)，以及其他金屬氧化物/金屬氮化物)組成， 如表1所示。
[0054]不含DNA的個(gè)人化物質(zhì)（如沙、土壤、金屬、水、海水、圣水、合成或天然聚合物、火葬 灰、陶瓷和源自植物的化合物）的種類（identify)可以通過適合的方法(如質(zhì)譜法，例如同 位素比率質(zhì)譜法(IRMS)或液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS))來確認(rèn)。
[0055]表1.示例性個(gè)人化物質(zhì) [0056]
[0058]例如，個(gè)人化物質(zhì)可以含有從土壤或巖石樣品提取的二氧化硅顆粒。適合的提取 技術(shù)是已知的。在提取之后，顆?？梢酝ㄟ^常規(guī)手段研磨以將它們的尺寸減小至小于1微 米，任選地，然后篩分微粒以獲得具有用于包封的尺寸范圍的顆粒群體，或者微粉化微粒以 產(chǎn)生具有適合尺寸的納米顆粒，通常直徑為約1至約l〇〇〇nm。任選地，顆?？稍诎庵笈c 粉末化或者預(yù)分散的紋身墨水混合。
[0059] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)包含對接受物質(zhì)的人具有意義的金屬或陶瓷物體 的顆粒。例如，這樣的金屬或陶瓷物體可以被研磨、篩分和提取以除去不想要的組分、包封 并且與紋身墨水混合以包含到紋身中。
[0060] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)包含對個(gè)體具有個(gè)人意義的木制物品的提取物。 例如，在一些實(shí)施方式中，纖維素被從木制物品提取并包封以提供給個(gè)體。
[0061] 個(gè)人化物質(zhì)可以作為固體或者以液體形式，例如以乳液形式，添加到微粒形成材 料。在包封之后，個(gè)人化物質(zhì)在微粒中呈小顆粒(通常為納米顆粒)形式。通常，個(gè)人化物質(zhì) 在微粒的核中并且由疏水性的、不可侵蝕的聚合物基質(zhì)（即，殼)包圍。被包封的個(gè)人化物質(zhì) 具有小于所得微粒的尺寸，并且通常在直徑上（或者對于非球形顆粒來說，在其最大維度 上)小于1微米。
[0062] B.個(gè)人化物質(zhì)中的DNA分子的類型
[0063] 個(gè)人化物質(zhì)旨在在提供到皮膚之后保持為惰性且非反應(yīng)性并且保持為被包封。 [0064]因此，在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)不包含載體。本文所用術(shù)語"載體(vector)" 是指在生物技術(shù)中用于儲(chǔ)存、增殖、遞送或整合重組DNA的DNA分子。載體的實(shí)例包括質(zhì)粒骨 架、病毒載體、桿狀病毒穿梭載體、粘粒(cosmid)和人工染色體。
[0065]通常，載體自身是由插入物(轉(zhuǎn)基因或重組DNA)與充當(dāng)載體"骨架"的較大序列組 成的DNA序列。載體的目的在于將插入物轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)細(xì)胞，在那里它可以分離、擴(kuò)增或表 達(dá)。在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)不包含用于將DNA序列轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的DNA。在一些實(shí)施 方式中，個(gè)人化物質(zhì)不包含出于擴(kuò)增或表達(dá)其中含有的基因信息的目的而使用的DNA。 [0066] C.任選的組分 [0067] 1.個(gè)人識(shí)別特征
[0068]任選地，組合物包含一個(gè)或多個(gè)個(gè)人識(shí)別特征。一個(gè)或多個(gè)個(gè)人識(shí)別特征含有獨(dú) 特信息，其可以用于驗(yàn)證個(gè)人化物質(zhì)是從特定來源(例如人類、非人類動(dòng)物、或植物)所獲得 的。驗(yàn)證步驟可以在包封之前或之后進(jìn)行，任選地，驗(yàn)證可以在個(gè)人化物質(zhì)置于個(gè)體皮膚中 之后發(fā)生。
[0069] DNA的示例性個(gè)人識(shí)別特征包括，但不限于，微衛(wèi)星標(biāo)記，如短串聯(lián)重復(fù)(STR)和簡 單序列重復(fù)(SSR)標(biāo)記，單核苷酸多態(tài)性(SNP)，和表觀遺傳標(biāo)記，如甲基化DNA圖譜。任何對 于源生物而言獨(dú)特的DNA序列都可以用作個(gè)人識(shí)別特征。例如，對于源生物而言獨(dú)特的DNA 序列可以使用本領(lǐng)域已知的測序方法(如Sanger測序或下一代測序，例如111 umina測序)通 過對從源生物分離的DNA的整個(gè)序列或其一部分進(jìn)行測序而識(shí)別。DNA測序方法是本領(lǐng)域公 知的并且描述于，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning.(第4版），冷泉港，紐約:冷泉港 實(shí)驗(yàn)室。
[0070] a.多態(tài)性基因標(biāo)記
[0071] DNA通常包含一個(gè)或多個(gè)多態(tài)性基因標(biāo)記。多態(tài)性基因標(biāo)記是基因組的高度可變 區(qū)，其已經(jīng)為多種應(yīng)用的開發(fā)作出了貢獻(xiàn)，如用于準(zhǔn)確識(shí)別個(gè)體的法醫(yī)學(xué)DNA分析和親子測 試。
[0072]在過去三十年來，已經(jīng)出現(xiàn)了許多多態(tài)性基因標(biāo)記的識(shí)別。例如，稱為可變數(shù)量串 聯(lián)重復(fù)(VNTR)的多態(tài)性基因標(biāo)記是含有串聯(lián)重復(fù)的、14至80堿基長度的、幾乎相同序列的 DNA的豐富且高多態(tài)性的區(qū)域。參見Jeffreys等人，1985，Nature 314:67-73;Wyman等人， 1980，PNAS 77:6754-6758;和Nakamura等人，1987，Science 235:1616-1622。這些標(biāo)記在個(gè) 體之間的不同使它們可用于識(shí)別特定個(gè)體。VNTR可以使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)而從少量 DNA檢測。參見Kasai等人，1990，Journal of Forensic Sciences 35(5):1196_1200。擴(kuò)增 的PCR產(chǎn)物中的大小差異在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上檢測出。然而，VNTR的有限數(shù)量限制 了該方法的廣泛適用性，這進(jìn)而導(dǎo)致了短串聯(lián)重復(fù)(STR)的識(shí)別。
[0073] b.短串聯(lián)重復(fù)（STR)
[0074] STR可以通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增，并且是高度豐富且多態(tài)性的（個(gè)體與個(gè)體不 同）ATR可以含有相差兩個(gè)(二核苷酸）、三個(gè)(三核苷酸）、四個(gè)（四核苷酸)或五個(gè)(五核苷 酸)堿基對的串聯(lián)重復(fù)序列。據(jù)估計(jì)，人類基因組中大約有50,000至100,000個(gè)二核苷酸重 復(fù)。三核苷酸與四核苷酸重復(fù)較不常見;據(jù)估計(jì)，人類基因組含有10,000個(gè)每種類型的重 復(fù)。參見Tautz等人，1989，Nuc.Acids Res· 17:6464-6471;和Hamada等人，1982，PNAS 79: 6465-6469。相比于更短的序列，使用四核苷酸與五核苷酸STR允許更好地區(qū)分個(gè)體受試者 之間的差異。參見Weber等人，1989,Am J Hum Genet 44:388-396。
[0075] 個(gè)人化物質(zhì)可以含有選自二核苷酸STR、三核苷酸STR、四核苷酸STR和五核苷酸 STR的人類DNA序列。
[0076] 由于來自人類四核苷酸重復(fù)區(qū)的PCR產(chǎn)物的大小通常在個(gè)體之間不同，四核苷酸 重復(fù)是用作個(gè)人化物質(zhì)的優(yōu)選個(gè)人識(shí)別分子。例如，兩種不同大小的PCR產(chǎn)物基于每個(gè)個(gè)體 從每個(gè)母體遺傳的一個(gè)拷貝的多態(tài)性標(biāo)記而被觀察到。每個(gè)遺傳的拷貝含有可變數(shù)量的四 核苷酸重復(fù)。因此，兩個(gè)不相關(guān)的個(gè)體將可能從相同的四核苷酸多態(tài)性標(biāo)記產(chǎn)生不同大小 的PCR產(chǎn)物。隨著更大數(shù)量的不同四核苷酸重復(fù)區(qū)在個(gè)體之間相比較，某些個(gè)體共同具有相 同的PCR產(chǎn)物圖譜的可能性降低。
[0077] c.單核苷酸多態(tài)性(SNP)
[0078]單核苷酸多態(tài)性是在群體內(nèi)普遍發(fā)生的DNA序列變異（1%)，其中基因組(或其他 共有序列）中的單核苷酸(A、T、C或G)在生物物種或成對染色體的成員之間不同。例如，來自 不同個(gè)體的兩個(gè)測序的DNA片段，AAGC^TA與AAGqTA，含有單核苷酸差異。
[0079] SNP可以在基因的編碼序列基因的非編碼序列內(nèi)或者基因間區(qū)（基因之間的區(qū) 域）中。由于遺傳密碼的簡并性，編碼序列內(nèi)的SNP不必然改變所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的氨基酸序 列。
[0080] 編碼區(qū)域中的SNP有兩種類型：同義和非同義SNP。同義SNP不影響蛋白質(zhì)序列，而 非同義SNP改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列。非同義SNP有兩種類型:錯(cuò)義和無義。
[0081] 不在蛋白質(zhì)編碼區(qū)中的SNP仍可以影響基因剪接、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、信使RNA降解或 者非編碼RNA的序列。受此類型的SNP影響的基因表達(dá)稱為eSNP(表達(dá)SNP)并且可以在該基 因的上游或下游。
[0082] 對表型沒有可觀測影響的SNP(所謂的沉默突變）因?yàn)樗鼈兊臄?shù)量以及代際之間的 穩(wěn)定遺傳而仍可用作全基因組關(guān)聯(lián)研究中的遺傳標(biāo)記。
[0083] 2.納米顆粒
[0084] 任選地，個(gè)人化物質(zhì)在被包封到聚合物微粒中之前被形成為納米顆?；蛘弑话?到納米顆粒中。
[0085] 前述個(gè)人化物質(zhì)中的任一種可以被微粉化以產(chǎn)生具有適合尺寸的納米顆粒。
[0086] 在一些實(shí)施方式中，納米顆粒包含來自人類或來自伴生動(dòng)物的DNA，或者由來自人 類或來自伴生動(dòng)物的DNA組成。DNA可以由磷酸鈣沉淀。在其他實(shí)施方式中，納米顆粒包含非 DNA個(gè)人化物質(zhì)、由非DNA個(gè)人化物質(zhì)組成、或者源自非DNA個(gè)人化物質(zhì)，所述非DNA個(gè)人化物 質(zhì)例如沙、土壤、金屬、水、海水、圣水、合成或生物聚合物、火葬灰或陶瓷。在某些實(shí)施方式 中，在微包封的準(zhǔn)備中，納米顆粒通過使個(gè)人化物質(zhì)微粉化以減小其尺寸而形成。
[0087] 納米顆粒的直徑可以是，例如，約 1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100、 90、80、70、60、50、40、30或20納米(腦）。在某些實(shí)施方式中，納米顆粒的直徑小于約1000、 900、800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40或30納米(腦）。這些值中的 任一個(gè)可以用于限定納米顆粒直徑的范圍。例如，納米顆粒直徑可以是約20nm至約lOOOnm 或者約20nm至約100nm。
[0088] 2.聚合物微粒
[0089] 個(gè)人化物質(zhì)被包封在聚合物微粒中。微粒的核含有個(gè)人化物質(zhì)，其由形成微粒的 外殼的聚合物基質(zhì)包圍。
[0090] 任選地，個(gè)人化物質(zhì)形成為納米顆粒，其被包封在聚合物微粒中。在一些實(shí)施方式 中，個(gè)人化物質(zhì)是通過磷酸鈣沉淀制備的DNA納米顆粒。磷酸鈣沉淀的DNA納米顆粒可以被 包封在聚合物微粒中而不將DNA溶解于溶劑中。
[0091] 在一些實(shí)施方式中，微粒同時(shí)包含個(gè)人化物質(zhì)和顏料或染料。聚合物微粒中的顏 料或染料顆粒通常小于lOOnm并且優(yōu)選小于20nm。在一些實(shí)施方式中，包含個(gè)人化物質(zhì)的微 粒不包含顏料或染料。
[0092] A.聚合物
[0093] 疏水性的、生物相容的且不可生物侵蝕的任何聚合物都可以用于形成微粒。優(yōu)選 地，形成微粒的聚合物的組成和分子量使得聚合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度大于或等于60°C或者 聚合物的熔點(diǎn)大于或等于50°C。在某些實(shí)施方式中，聚合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度大于或等于 約60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、75或80°(：。在某些實(shí)施方式中，聚合物的熔點(diǎn)大于 或等于約50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、65或70 °C。具有高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度（即玻璃 化轉(zhuǎn)變溫度大于或等于60°C)或者高熔點(diǎn)（即熔點(diǎn)大于或等于50°C)的優(yōu)選聚合物包括但不 限于聚（甲基丙烯酸甲酯）（PMMA)、聚苯乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯和聚碳酸酯。在一個(gè)特 別的實(shí)施方式中，聚合物選自聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯類、聚甲基丙烯酸酯類、及其共聚 物和摻合物。在另一個(gè)特別的實(shí)施方式中，聚合物選自聚丙烯酸酯類、聚甲基丙烯酸酯類、 及其共聚物和摻合物。優(yōu)選地，如果微粒形成自聚合物的共聚物或摻合物，則共聚物或摻合 物形成自具有高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度或高熔點(diǎn)的聚合物，并且不含具有低玻璃化轉(zhuǎn)變溫度（即 低于60 °C的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度)或者低于50 °C的熔點(diǎn)的任何聚合物。
[0094]具有大于或等于60°C的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的適合的聚合物或者具有大于或等于50 °c的熔點(diǎn)的適合的聚合物包括，但不限于，聚丙烯酸酯類、聚甲基丙烯酸酯類、聚碳酸酯類、 聚丙烯類、聚烯烴類、聚亞烷基二醇類、聚環(huán)氧烷類、聚對苯二甲酸二醇酯類、聚乙烯基醚 類、聚乙烯基鹵化物類、聚硅氧烷類、聚氨酯類，及其共聚物，羥烷基纖維素類、纖維素醚類、 硝基纖維素類、甲基纖維素、乙基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、三乙 酸纖維素、硫酸纖維素鈉鹽、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸乙酯）、聚（甲基丙烯酸丁 酯）、聚（甲基丙烯酸異丁酯）、聚（甲基丙烯酸己酯）、聚（甲基丙烯酸異癸酯）、聚（甲基丙烯 酸月桂酯）、聚（甲基丙烯酸苯酯）、聚（丙烯酸甲酯）、聚（丙烯酸異丙酯）、聚（丙烯酸異丁 酯）、聚（丙烯酸十八酯）、聚乙烯、聚(對苯二甲酸乙二醇酯）、聚（乙酸乙烯酯）、和聚乙烯基 氯化物、聚苯乙烯，及其混合物、共聚物和摻合物。
[0095] 優(yōu)選的聚合物包括聚丙烯酸酯類和聚甲基丙烯酸酯類。
[0096] 在某些實(shí)施方式中，聚甲基丙烯酸酯是聚（甲基丙烯酸甲酯）（PMMA)。醫(yī)用級(jí)PMMA (Mff=35kDa;殘留MMA單體〈0.1%)可商購自Vista Optics Ltd.(Widnes，UK)〇
[0097] B.形狀和尺寸
[0098] 微粒可以具有任何形狀。通常，微粒是球形。其他適合的形狀包括，但不限于，薄片 形(flakes)、三角形、橢圓形、桿狀、多邊形、針形、管形、立方體形和長方體形結(jié)構(gòu)。
[0099] 在某些實(shí)施方式中，微粒具有小于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0·9、0·8、0·7、0·6、 0.5、0.4、0.3、0.2或0.1微米的直徑。這些值中的任一個(gè)可以用于限定微粒的直徑的范圍。 例如，微粒的直徑可以是約0.1至約10微米、約0.1至約1微米、或者約0.1至約2微米。通常， 微粒的直徑小于5微米。優(yōu)選地，對于用作紋身墨水中的添加劑的組合物，微粒的直徑在約1 至約10微米，更優(yōu)選約1至2微米。直徑為10微米和更小的微?？梢越柚y身槍或任何類似 裝置引入到皮膚中。
[0100]在其他實(shí)施方式中，可以使用更大的微?；蝾w粒。例如，微粒可以具有10微米至 1 〇〇〇微米的直徑。在這些實(shí)施方式中，微?？梢酝ㄟ^皮內(nèi)注射提供到皮膚。
[0101] C.微粒中的被包封的個(gè)人化物質(zhì)的負(fù)載
[0102] 通常，包封在微粒中的個(gè)人化物質(zhì)的濃度表示為百分比負(fù)載。由于百分比負(fù)載的 值取決于個(gè)人化物質(zhì)的重量，不同的個(gè)人化物質(zhì)的百分比負(fù)載值可以明顯不同。因此，可預(yù) 期不同的個(gè)人化物質(zhì)的百分比負(fù)載的不同范圍。
[0103] 在一些實(shí)施方式中，微粒中個(gè)人化物質(zhì)的低濃度(例如，最多0.1 %重量/重量或更 低)是防止個(gè)人化物質(zhì)從微粒瀝濾(1 each ing)所要求的。
[0104] 在一些實(shí)施方式中，如在包封材料是DNA時(shí)，只有小樣品提供給包封。在這些實(shí)施 方式中，微粒通常含有低濃度的DNA。然而，如果提供大量的包封材料，則微粒中包封材料的 負(fù)載可以更高，只要所得微粒不允許DNA釋放。
[0105] 在一些實(shí)施方式中，微粒包含約0.00001、0.00005、0.0001、0·0005、0·001、0·005、 0·01、0·02、0·03、0·04、0·05、0·06、0·07、0·08、0·09、0·1、0·5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10% 包封材料重量/微粒重量（重量/重量）。在一些實(shí)施方式中，微粒包含小于約0.00001、 0·00005、0·0001、0·0005、0·001、0·005、0·01、0·02、0·03、0·04、0·05、0·06、0·07、0·08、 0.09、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10%包封材料重量/微粒重量(重量/重量）。這些值中 的任一個(gè)可以用于限定微粒中包封材料的濃度的范圍。例如，微?？梢院屑s0.00001至約 10%重量/重量或約0.001至約2%重量/重量的量的包封材料。在一些實(shí)施方式中，微粒中 的包封材料的量小于約0.1%重量/重量。
[0106] 1.DNA的百分比負(fù)載
[0107] 通常，微粒中DNA的百分比負(fù)載在0.000001 %至0.1 %DNA重量/微粒總重量（％重 量/重量）范圍內(nèi)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，微粒中DNA的量小于0.01 % (重量/重量)DNA，更優(yōu)選 地，微粒中DNA的量在0.001 %至0.00001 % (重量/重量）范圍內(nèi)。這些負(fù)載范圍通?？蓱?yīng)用 于單壁微粒。
[0108] 然而，對于微粒是雙壁微粒的實(shí)施方式，可以使用更高的DNA負(fù)載。預(yù)期雙壁微粒 的結(jié)構(gòu)保護(hù)DNA免于瀝濾出微粒。在這些實(shí)施方式中，微粒中DNA的量可以在0.000001 %至 約5%DNA重量/微粒總重量（％重量/重量)范圍內(nèi)，任選地為約1 %-5% (重量/重量）。
[0109] 2.其他個(gè)人化物質(zhì)的百分比負(fù)載
[0110]通常，微粒中除DNA以外的個(gè)人化物質(zhì)的百分比負(fù)載高于DNA的負(fù)載。例如，微粒中 個(gè)人化物質(zhì)的量可以在約0.001至約10%重量/重量或者約0.001至約2%重量/重量的范圍 內(nèi)。任選地，微粒中個(gè)人化物質(zhì)的量小于約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、 0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10%重量/重量。這些值中的任一個(gè) 可以用于限定微粒中物質(zhì)的濃度的范圍。例如，微粒中個(gè)人化物質(zhì)的量可以在約0.001至約 10%重量/重量或者約0.001至約2%重量/重量的范圍內(nèi)。在一個(gè)特別的實(shí)施方式中，微粒 包含小于約0.1 %重量/重量％的除DNA以外的個(gè)人化物質(zhì)。
[0111] 3.載體
[0112] 在某些實(shí)施方式中，本文描述的組合物被配制用于注射到人類皮膚中。例如，組合 物可以包含用于通過注射提供給人類的適合的生物相容性載體。適合的載體包括任意的 醇，包括但不限于乙醇、異丙醇，或者水。適合的載體還包括醇與水的任意組合。通常，載體 中醇的量在約5%至約30% (重量/重量）范圍內(nèi)，并且載體中水的量在約40%至約70% (重 量/重量)范圍內(nèi)。
[0113] 在優(yōu)選實(shí)施方式中，載體是60%水、30%甘油(甘油）和10%乙醇的溶液。還可以預(yù) 期其他載體溶液，包括55%水、30 %甘油和15 %乙醇；50%水、30 %甘油和20 %乙醇；45 % 水、30%甘油和25%乙醇；或者40%水、30%甘油和30%乙醇。
[0114] 4.含有DNA的示例性組合物
[0115] 在某些實(shí)施方式中，要提供給個(gè)體的個(gè)人化物質(zhì)含有來自人類、非人類動(dòng)物（例 如，寵物)或植物的DNA。
[0116] 在一個(gè)特別的實(shí)施方式中，DNA來自人類。沒有兩個(gè)人在他們的細(xì)胞中具有完全相 同的DNA序列。個(gè)體人類的DNA差異產(chǎn)生可以用于區(qū)分個(gè)體的獨(dú)特DNA譜。此外，各個(gè)個(gè)體的 獨(dú)特DNA譜提供了用于驗(yàn)證個(gè)人化物質(zhì)是來自于特定個(gè)體的手段。因此，將DNA包含到載體 中或紋身墨水中給紋身墨水或載體提供了可以驗(yàn)證(例如通過DNA測序或遺傳標(biāo)記分析)的 獨(dú)特特征。
[0117] DNA可以是編碼或非編碼基因組DNA、編碼或非編碼線粒體DNA或者互補(bǔ)DNA (cDNA)。cDNA使用逆轉(zhuǎn)錄酶從RNA合成而來?；蚪MDNA、線粒體DNA和用于cDNA合成的RNA可 以分離自任何生物，包括但不限于人類、動(dòng)物和植物。在一些實(shí)施方式中，DNA分離自單個(gè)生 物，例如，一個(gè)人。在其他實(shí)施方式中，DNA分離自兩個(gè)或更多個(gè)生物，例如，兩個(gè)或更多個(gè) 人。分離基因組DNA、線粒體DNA和RNA的方法以及cDNA合成方法是本領(lǐng)域公知的并且描述 于，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning.(第4版），冷泉港，紐約:冷泉港實(shí)驗(yàn)室。
[0118] D.DNA分離和擴(kuò)增
[0119] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA直接分離自生物，如基因組DNA或線 粒體DNA。在其他實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA擴(kuò)增自從生物收集的樣品，例如，通 過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。用于四核苷酸PCR擴(kuò)增的多個(gè)DNA區(qū)段通?？梢栽趩蝹€(gè)管中擴(kuò)增。 這樣的多個(gè)DNA區(qū)的多重?cái)U(kuò)增在本領(lǐng)域中稱為多重PCR。如本領(lǐng)域所知，多個(gè)PCR產(chǎn)物例如通 過電泳分離，并且儀器讀取電泳凝膠或圖像以自動(dòng)分析PCR產(chǎn)物大小。在一些實(shí)施方式中， 個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA是從分離自上文所述生物的RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA。
[0120] 可以測序DNA使得可以進(jìn)行下文描述的驗(yàn)證步驟。（Sambrook等人，Molecular Cloning ·(第4版），冷泉港，紐約:冷泉港實(shí)驗(yàn)室）。
[0121]可以按照如下方法制備用作個(gè)人化物質(zhì)的DNA樣品，雖然本領(lǐng)域技術(shù)人員已知制 備類似的DNA樣品的其他方法。一個(gè)優(yōu)選方法包括以下通用步驟：
[0122] 用于制備個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA的樣品是從面頰拭子、皮膚、毛發(fā)、唾液或血液 樣品或者如本領(lǐng)域已知的來自生物的其他組織的樣品收集而來。面頰拭子樣品是優(yōu)選的。 用于收集和處理樣品的方案是本領(lǐng)域已知的。
[0123] 例如，適合用于從頰部細(xì)胞分離基因組DNA的DNA分離套件(kit)可以用于從面頰 拭子分離DNA。這些套件是可商購的，并且通常產(chǎn)生0.5-2微克的總DNA。然后通過PCR擴(kuò)增含 有被分離的DNA的多態(tài)性基因標(biāo)記(如STR和SNP)的期望基因組區(qū)以產(chǎn)生微克級(jí)(通常為1至 10微克）的要用作個(gè)人化物質(zhì)的DNA。擴(kuò)增的DNA可被測序，因而可以進(jìn)行下文描述的驗(yàn)證步 驟。這種擴(kuò)增的DNA是被包封到微粒中的個(gè)人化物質(zhì)。
[0124] 任選地，個(gè)人化DNA分子的包封可以包括具有已知序列的對照DNA分子，其以與個(gè) 人化DNA分子相同的量而被包括。對照DNA可以用于測試以確認(rèn)是否釋放了任一被包封的 DNA，如通過上文描述的體外方法。
[0125] 替代性地或任選地，個(gè)人化DNA可以部分或全部用熒光團(tuán)標(biāo)記，如Alexa Fluor? 染料(Molecular Probes，Inc.)。被標(biāo)記的DNA可以用于確認(rèn)DNA被成功包封，例如使用被包 封顆粒的流式細(xì)胞術(shù)。替代性地或另外地，被標(biāo)記的DNA可以用于確認(rèn)是否任一被包封的 DNA會(huì)在提供到個(gè)體的皮膚之后釋放。這項(xiàng)測試可以通過測量水性溶液、緩沖劑或上清液的 熒光而進(jìn)行，其中空的微粒或者包封被標(biāo)記DNA的微粒在例如上文描述的體外方法中被檢 測DNA釋放。
[0126] 透射電鏡(TEM)可以用于驗(yàn)證擴(kuò)增的DNA的包封。
[0127] 在一些實(shí)施方式中，基因組DNA、線粒體DNA和/或RNA使用本領(lǐng)域已知的方法而從 樣品分離，例如在Sambrook等人(在上文中引用）中描述的那些方法。可以測定提取的DNA或 RNA的濃度和完整性，例如，以告知用PCR或反轉(zhuǎn)錄繼續(xù)進(jìn)行檢測或者獲取另一樣品的決定。
[0128] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA可以通過PCR產(chǎn)生。如本領(lǐng)域已知的， 例如，包含STR的DNA可以通過使用引物的PCR進(jìn)行擴(kuò)增，所述引物擴(kuò)增基因組DNA樣品的三 個(gè)至五個(gè)四核苷酸重復(fù)區(qū)段，任選地包含可檢測的標(biāo)記，如放射性或熒光標(biāo)記。用于擴(kuò)增 DNA的PCR引物可以從商業(yè)來源獲得或者可以使用本領(lǐng)域已知的方法合成。用于PCR引物設(shè) 計(jì)的軟件是本領(lǐng)域公知的。
[0129] 可以通過PCR擴(kuò)增的優(yōu)選STR的實(shí)例在下表2中陳述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到還 可以擴(kuò)增另外的合適四核苷酸與五核苷酸重復(fù)。合適四核苷酸DNA重復(fù)的優(yōu)選性質(zhì)之一是 在受試者群體中的高度雜合性(個(gè)體之間的變異性）。合適四核苷酸DNA重復(fù)的另一個(gè)優(yōu)選 性質(zhì)是它們不編碼生物活性產(chǎn)物，例如，蛋白質(zhì)、tRNA、rRNA、miRNA或siRNA。合適四核苷酸 DNA重復(fù)的又一個(gè)優(yōu)選性質(zhì)是它們在受者中不誘導(dǎo)免疫應(yīng)答并且不產(chǎn)生治療作用。
[0130]表2.用于擴(kuò)增的DNA中的優(yōu)選重復(fù)
[0131]
[0132] 為了成功產(chǎn)生四核苷酸重復(fù)，并且為了確認(rèn)樣品顯示了來自個(gè)體的DNA樣品的相 對獨(dú)特的表現(xiàn)，通常通過例如電泳分析所得PCR產(chǎn)物。
[0133] E.擴(kuò)增的DNA的驗(yàn)證
[0134] 在一些實(shí)施方式中，分析DNA以確認(rèn)個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA來自或產(chǎn)生自期望的 源生物。例如，對于包含STR的DNA，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA的PCR產(chǎn)物圖譜可以與從源生物 獲得的對照樣品相比較。個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA還可以通過DNA測序進(jìn)行分析，例如，cDNA 測序或全基因組測序，以確認(rèn)個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA是來自期望的源生物。
[0135] DNA的測序可以使用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。這些方法包括，但不限于，基礎(chǔ)測序 方法，如Sanger法、Maxam-Gilbert測序和鏈終止法（Franca等人，Quarterly Review of Biophysics，35 (2) : 169-200，2002)，先進(jìn)方法和從頭測序，如鳥槍法測序和橋式PCR (Braslavky等人，Proc .Natl .Acad· Sci，100(7): 3960-3964,2003)，或下一代方法。下一代 測序應(yīng)用于基因組測序、基因組重測序、轉(zhuǎn)錄組分析（RNA-Seq)、DNA-蛋白質(zhì)相互作用 (Chip-測序）、和表觀基因組表征（duMagalhSes等人，Ageing Res Rev.9(3)315-323， 2010;Liu等人，Journal of Biomedicine and Biotechnology，2012:1-11，文章 ID251364， 2012;和Hall，The Journal of Experimental 8丨〇1(^7,209:1518-1525,2007)。重測序是 必要的，因?yàn)槲锓N的單個(gè)個(gè)體的基因組不會(huì)指示同一物種的其他個(gè)體中的基因組變異。
[0136] 下一代測序包括大量方法，包括，但不限于，單分子實(shí)時(shí)測序、大規(guī)模平行簽名測 序（MPSS)、聚合酶克隆測序、454焦磷酸測序、離子激流半導(dǎo)體測序、DNA納米球測序、 heliscope單分子測序、連接法測序(SOLiD測序)和單分子實(shí)時(shí)測序(SMRT)。這些方法在Liu 等人，Journal of Biomedicine and Biotechnology，2012:1-11，文章 ID 251364,2012和 Hall，The Journal of Experimental Biology，209:1518_1525,2007中詳細(xì)描述并進(jìn)行比 較。
[0137] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA在個(gè)人化物質(zhì)在與載體組合或組合 到紋身墨水中之前進(jìn)行分析。在其他實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)中含有的DNA在與個(gè)人化物質(zhì) 與載體或紋身墨水組合之后進(jìn)行分析。
[0138] DNA可以純化以獲得適合地不含污染物的藥品級(jí)/生物制品級(jí)DNA。
[0139] II.制造組合物的方法
[0140] 微粒可以使用多種已知微包封方法制造，如溶劑蒸發(fā)、多壁(或雙壁)微包封、凝聚 和熔融加工。
[0141] 上文描述的不可生物侵蝕的、疏水性聚合物中的任一種可以用于形成聚合物微 粒。
[0142] 1.溶劑
[0143] 可以用于形成微粒的溶劑包括有機(jī)溶劑如二氯甲烷，其會(huì)留下通常認(rèn)為安全的低 水平殘留物。適合的水不溶性溶劑包括二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、乙酸乙酯和環(huán)己烷。另外 的溶劑包括，但不限于，醇類，如甲醇（甲醇）、乙醇（乙醇）、1_丙醇（正丙醇）、2_丙醇（異丙 醇）、1_ 丁醇（正丁醇）、2_ 丁醇（仲丁醇）、2_甲基-1-丙醇（異丁醇）、2_甲基-2-丙醇（叔丁 醇）、1_戊醇(正戊醇）、3_甲基-1-丁醇(異戊醇）、2,2_二甲基-1-丙醇(新戊醇）、環(huán)戊醇(環(huán) 戊醇）、1_己醇(正己醇）、環(huán)己醇(環(huán)己醇）、1_庚醇(正庚醇）、1_辛醇(正辛醇）、1_壬醇(正壬 醇）、1-癸醇(正癸醇）、2_丙烯-1-醇(烯丙醇）、苯甲醇(芐醇）、二苯甲醇(二苯甲醇）、三苯甲 醇（三苯甲醇）、甘油、苯酚、2-甲氧乙醇、2-乙氧乙醇、3-乙氧-1，2-丙二醇、二（乙二醇）甲 醚、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、2，3-丁二醇、1，4-丁二醇、1，2-戊二醇、1，3-戊二 醇、1，4-戊二醇、1，5-戊二醇、2，3-戊二醇、2，4-戊二醇、2，5-戊二醇、3，4-戊二醇、3，5-戊二 醇、及其組合。優(yōu)選的醇是異丙醇。
[0144] 可以用于配制凝聚體體系的材料包含陰離子型、陽離子型、兩性型和非離子型表 面活性劑。陰離子型表面活性劑包括二-(2-乙基己基)磺基琥珀酸鈉;非離子型表面活性劑 包括脂肪酸類及其酯類;兩性型組中的表面活性劑包括(1)分類為簡單蛋白質(zhì)、偶合蛋白質(zhì) 和衍生蛋白質(zhì)的物質(zhì)，如白蛋白類、明膠類和糖蛋白類，和(2)磷脂類別中含有的物質(zhì)，如卵 磷脂。陽離子型組中的胺鹽和季銨鹽也包括有用的表面活性劑。可用于形成凝聚體的其他 表面活性劑化合物包括多糖類及其衍生物、粘多糖類和聚山梨醇酯類及其衍生物?？捎米?表面活性劑的合成聚合物包括組合物，如聚乙二醇和聚丙二醇?？梢杂糜谥苽淠垠w體系 的適合的化合物的另外的實(shí)例包括糖蛋白類、糖脂類、半乳糖、明膠類、改良液體明膠類和 半乳糖醛酸。
[0145] 3.表面活性劑
[0146] 疏水性表面活性劑如脂肪酸類和膽固醇可以在微粒的制備過程中添加以改善疏 水性個(gè)人化物質(zhì)在疏水性聚合物微粒中的所得分布。適合的脂肪酸的實(shí)例包括丁酸、戊酸、 己酸、庚酸、辛酸、壬酸、辛酸、i 酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕櫚酸、十七酸、 硬脂酸、十九酸、花生酸、異巴豆酸、十一碳烯酸、油酸、反油酸(elaidic acid)、山梨酸、亞 油酸、亞麻酸和花生四烯酸。
[0147] 疏水性表面活性劑如0土?20和聚乙烯醇(PVA)改善親水性染料在聚合物中的 分布。如果染料是親水性的且聚合物是疏水性的，則兩親型表面活性劑是優(yōu)選的。
[0148] 表面活性劑如脂肪酸或其藥學(xué)上可接受的鹽通常以0.2至1重量份脂肪酸或其鹽/ 1重量份染料的比率添加。
[0149] 4.微粉化和納米顆粒形成
[0150] 使個(gè)人化物質(zhì)微粉化以產(chǎn)生納米顆粒的方法，如果需要的話，包括例如聲處理和/ 或產(chǎn)生剪切力，以及在例如5，000RPM至25，000RPM的速度下的轉(zhuǎn)子定子混合或用同心軸碾 磨。
[0151] 在DNA是個(gè)人化物質(zhì)的一些實(shí)施方式中，DNA可以通過使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)沉淀而制備， 如乙醇或異丙醇沉淀，或者鹽沉淀。在一些實(shí)施方式中，DNA通過用磷酸鈣沉淀而微粉化，并 且沉淀物不是被溶解到而是作為納米顆粒被直接包含到微粒中。在一些實(shí)施方式中，DNA作 為水中的乳液而被包封，水隨后在包封過程之后被除去以產(chǎn)生DNA的小固體顆粒。DNA也可 以結(jié)合到固體納米顆粒如二氧化硅或金，或者交聯(lián)在一起以形成聚集體。
[0152] 將DNA包封到納米顆粒中的方法在本領(lǐng)域中描述。參見，例如，US2009/0311295和 van de Berg等人，2010，Journal of Controlled Release 141:234-240。
[0153] 5.納米顆粒在微粒內(nèi)的分布
[0154] 優(yōu)選地，含有個(gè)人化物質(zhì)的納米顆粒均勻分布在聚合物微粒內(nèi)，并且處于低負(fù)載 水平以避免被包封的個(gè)人化物質(zhì)的任何瀝濾。在包封材料是DNA或含有DNA時(shí)，這是特別期 望的。
[0155] 大多數(shù)微粒生產(chǎn)方法的問題在于在納米顆粒在添加到聚合物溶液之后開始分散 時(shí)，納米顆粒朝著底部快速沉降。然后在除去溶劑時(shí)，納米顆粒在聚合物中一部分中比另一 部分中更優(yōu)先存在。難以在除去聚合物溶劑以形成微粒的同時(shí)使納米顆粒保持分散。因此， 已經(jīng)開發(fā)了方法，其中納米顆粒分散于聚合物溶液中使得溶液是"穩(wěn)定化的"，從而納米顆 粒在聚合物內(nèi)保持均勻分布并持續(xù)一段時(shí)間以形成微粒。這個(gè)時(shí)間可以短至十分鐘或者長 至數(shù)小時(shí)。納米顆粒將在聚合物中保持混懸的時(shí)間的量取決于納米顆粒的大小和組成。
[0156] 穩(wěn)定性是聚合物、溶劑組成以及分散方法和被包封材料密度的選擇的函數(shù)。例如， 必須調(diào)整有機(jī)聚合物溶液的濃度以使納米顆粒保持分散并且防止納米顆粒在包封過程中 沉降。在理論上（如果不是機(jī)械地)與打蛋清類似的方法中，聚合物溶液被聲處理或以其他 方式經(jīng)受剪切力，使用5000-25，000RPM的開放式葉片混合器或轉(zhuǎn)子定子，或者被使用同心 軸碾磨，直到穩(wěn)定。替代性地或另外地，溶劑和表面活性劑(如果存在的話)可以用于改變納 米顆粒的表面性質(zhì)使得它們在聚合物溶液中保持懸浮。然后除去溶劑以形成在聚合物內(nèi)具 有均勻納米顆粒分布的微粒。
[0157] 6.制造微粒的方法
[0158] 存在多種制造微粒的方法，包括，例如，多壁微包封、熱熔融包封、相分離包封、自 發(fā)乳液、溶劑蒸發(fā)微包封、溶劑去除微包封和凝聚。這些方法是本領(lǐng)域已知的。方法的詳細(xì) 描述在Mathiowitz等人，〃Microencapsulation"，Encyclopedia of Controlled Drug Delivery，第2卷，第495-546頁，John Wiley&Sons，Inc ·，New York，N. Y.中論述，并在下文 中簡要展示。優(yōu)選的方法是溶劑蒸發(fā)微包封(特別高的油/水相比率以獲得小顆粒，并添加 表面活性劑如油酸以改善個(gè)人化片段在聚合物相中的分散）。對于溶劑蒸發(fā)，最小濃度為 0.1%重量/體積(聚乙烯醇/水）。另一個(gè)優(yōu)選方法包括將納米顆粒添加到通過熔融而液化 的聚合物中以確保均勻分布。
[0159] 納米顆粒在聚合物基質(zhì)內(nèi)的分散可以通過改變以下條件而提高：（1)用于使聚合 物溶劑化的溶劑或溶劑組合；（2)聚合物與溶劑的比率；（3)要包封的納米顆粒的尺寸；和 (4)納米顆粒相對于聚合物的百分比（即，納米顆粒負(fù)載）。納米顆粒在聚合物基質(zhì)內(nèi)的分散 也可以通過使用表面活性劑而提高。
[0160] 在某些實(shí)施方式中，在制備微粒的過程中分析個(gè)人化物質(zhì)，例如，在微粉化后和/ 或在包封后，以確認(rèn)個(gè)人化物質(zhì)的種類。通常，微粒以小批量制備。
[0161] A.熱熔融微包封
[0162] 在熱熔融微包封中，要包封的個(gè)人化物質(zhì)(任選地呈納米顆粒形式)添加到熔融的 聚合物中。該混合物作為熔融小滴懸浮在對聚合物而言的非溶劑(通常為油基）中，所述非 溶劑已經(jīng)被加熱到聚合物熔點(diǎn)的大約l〇°C以上。通過劇烈攪拌維持乳液，同時(shí)使非溶劑浴 快速冷卻到聚合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度之下，導(dǎo)致熔融小滴固化并夾帶核材料。
[0163] B.相分離微包封
[0164] 在相分離微包封中，要包封的個(gè)人化物質(zhì)(任選地呈納米顆粒形式)通過攪拌分散 在聚合物溶液中。在連續(xù)攪拌以使材料均勻混懸時(shí)，對聚合物而言的非溶劑緩慢添加到溶 液中以降低聚合物的溶解度。取決于聚合物在溶劑和非溶劑中的溶解度，聚合物沉淀或者 相分離成為富聚合物相和貧聚合物相。在適當(dāng)?shù)臈l件下，富聚合物相中的聚合物將移動(dòng)至 與連續(xù)相的界面，在具有外聚合物殼的小滴中包封個(gè)人化物質(zhì)(任選的呈納米顆粒形式）。
[0165] C.自發(fā)乳化
[0166] 自發(fā)乳化包括通過改變溫度、蒸發(fā)溶劑或添加化學(xué)交聯(lián)劑而使乳化的液體聚合物 小滴固化。包封劑以及要包封的個(gè)人化物質(zhì)的物理和化學(xué)性質(zhì)決定適合的包封方法。例如 疏水性、分子量、化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性等因素影響包封。
[0167] D.熔融-溶劑蒸發(fā)法
[0168] 在熔融溶劑蒸發(fā)法中，聚合物加熱到足夠的流動(dòng)性以使操作容易（例如，用刮刀攪 拌)的點(diǎn)。這樣做所要求的溫度取決于聚合物的固有性質(zhì)。例如，對于晶體聚合物，該溫度將 高于聚合物的熔點(diǎn)。在達(dá)到期望溫度后，個(gè)人化物質(zhì)（任選地呈納米顆粒的形式)添加到熔 融的聚合物并物理地混合，同時(shí)維持溫度。使熔融的聚合物與個(gè)人化物質(zhì)混合直到混合物 達(dá)到對該特定體系而言最大的均一性水平。使混合物冷卻至室溫并硬化。該項(xiàng)技術(shù)導(dǎo)致個(gè) 人化物質(zhì)在聚合物中分散。
[0169] 可以使用高剪切渦輪以攪拌該分散體，通過將納米顆粒逐漸添加到聚合物溶液中 而進(jìn)行補(bǔ)充，直到獲得期望負(fù)載?；蛘撸梢哉{(diào)節(jié)聚合物溶液密度以防止納米顆粒在攪拌過 程中沉降。
[0170] E.溶劑蒸發(fā)微包封
[0171] 在溶劑蒸發(fā)微包封中，聚合物通常溶解于水不混溶性有機(jī)溶劑中，并且要包封的 個(gè)人化物質(zhì)(通常呈納米顆粒形式)添加到聚合物溶液中，作為有機(jī)溶劑中的分散體、混懸 體或乳液。通過將該分散體、混懸體或乳液添加到燒杯中并劇烈攪拌體系而形成乳液（即， 第二乳液，如果包封材料作為乳液加入的話）。任何適合的表面活性劑可以用于穩(wěn)定乳液。 典型的表面活性劑包括但不限于聚乙二醇或聚乙烯醇(PVA)。蒸發(fā)有機(jī)溶劑，同時(shí)連續(xù)攪 拌。蒸發(fā)導(dǎo)致聚合物沉淀，形成含有核包封材料的固體微囊，其中被包封材料呈乳狀液或固 體形式。
[0172] 溶劑蒸發(fā)法可以用于使液體核材料包埋于聚合物或共聚物微囊中，而液體在聚合 物已經(jīng)包封了物質(zhì)之后通過常規(guī)方法除去。
[0173] 溶劑蒸發(fā)法是用于包封DNA的優(yōu)選方法。
[0174] F.溶劑去除微包封
[0175] 在溶劑去除微包封中，聚合物通常溶解于油混溶性有機(jī)溶劑中，并且要包封的個(gè) 人化物質(zhì)(通常呈納米顆粒形式)添加到聚合物溶液中，作為有機(jī)溶劑中的混懸體或溶液。 可以添加表面活性劑以改善要包封的材料的分散。通過將該混懸體或溶液添加到劇烈攪拌 的油中而形成乳液，其中油對聚合物而言是非溶劑并且聚合物/溶劑溶液在油是中不混溶 的。有機(jī)溶劑通過擴(kuò)散到油相中同時(shí)連續(xù)攪拌而除去。溶劑去除導(dǎo)致聚合物沉淀，形成含有 核材料的固體微囊。
[0176] G.凝聚
[0177] 使用凝聚技術(shù)的用于不同物質(zhì)的包封程序已經(jīng)在本領(lǐng)域中描述于，例如，68_8_ 929 406，GB-B-929 401，美國專利第3,266,987、4,794,000和4,460,563號(hào)中。凝聚是涉及 使膠體溶液分成兩個(gè)或更多個(gè)不混溶的液體層的方法（Ref . Dowben，R . General Physiology，Harper&Row,New York, 1969,第142-143頁）。通過凝聚法，可以產(chǎn)生稱為凝聚 體的包含兩個(gè)或更多個(gè)相的組合物。包含兩相凝聚體體系的成分同時(shí)存在于兩個(gè)相中；然 而，富膠體相具有比貧膠體相更高的組分濃度。
[0178] 在凝聚法中，聚合物或共聚物在稍微（immediately)低于將產(chǎn)生相分離的濃度 (即，濁點(diǎn)）的非溶劑濃度下，溶解于溶劑與非溶劑的混溶性混合物中。液體核材料添加到溶 液中，同時(shí)攪動(dòng)以形成乳液并使材料分散為小滴。蒸發(fā)溶劑與非溶劑，其中溶劑以較快速率 蒸發(fā)，導(dǎo)致聚合物或共聚物相分離并朝向核材料小滴的表面移動(dòng)。該相分離溶液然后轉(zhuǎn)移 到攪動(dòng)的一定體積的非溶劑中，導(dǎo)致任何剩余的溶解的聚合物或共聚物沉淀，并從形成的 膜萃取任何殘留溶劑。結(jié)果是由聚合物或共聚物殼與液體材料核構(gòu)成的微囊。
[0179] 例如，DNA可以溶解于水中，然后溶解的DNA的乳液形成為有機(jī)聚合物溶液。該乳液 然后添加到水性溶液并混合(任選地，對于長度小于2千堿基(kb)的DNA，可以使用高剪切） 直到有機(jī)溶劑蒸發(fā)，然后洗滌整個(gè)混合物并冷凍和凍干，產(chǎn)生在聚合物內(nèi)部的DNA干燥顆 粒。
[0180] 材料可以使用乳化劑包封，如吐溫80?、油酸、卵磷脂、Brij?92、Span?80、 Arlacel?83和Span?85屬者，材料可以不使用乳化劑而包封。
[0181] H.多壁微包封
[0182] 多壁聚合物微球可以通過使兩種聚合物溶解于溶劑中而制備。使要包含的個(gè)人化 物質(zhì)分散在聚合物溶液中，并且使混合物混懸于連續(xù)相中。然后緩慢蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生具有由 一種聚合物形成的內(nèi)核和第二種聚合物形成的外層的微球。連續(xù)相可以是有機(jī)油、揮發(fā)性 有機(jī)溶劑、或含有第三聚合物的水性溶液，所述第三聚合物不溶于聚合物最初的混合物并 且將導(dǎo)致最初的兩種聚合物隨著混合物攪拌而相分離。
[0183] 可以使用任何兩種或更多種不同的不可生物降解的疏水性聚合物，其在由可使用 的相圖所決定的特定濃度下不溶于彼此。多層微囊具有尺寸一致的聚合物層并且可以包含 一系列物質(zhì)。
[0184] 為了制備雙壁微球，每種聚合物在分隔的容器中溶解于對該聚合物而言適合的溶 劑中，并且與表面活性劑如油酸混合;個(gè)人化物質(zhì)（任選地呈納米顆粒形式)添加到聚合物 溶液之一。然后混合兩種(或更多種)聚合物溶液，并且然后將混合物添加到含有表面活性 劑如PVA的大體積水相中以形成乳液(水與一些表面活性劑的水性溶液）。施加高剪切。油與 水相的比率通常為1:20,以確保在1-5微米范圍內(nèi)的小微粒大小，或者甚至更小的微粒，如 在1至2微米范圍內(nèi)。
[0185] 含有由第一聚合物構(gòu)成的聚合物核以及第二聚合物的均勻涂層(coating)、以及 包含在至少一種聚合物中的物質(zhì)的微球可以如在美國專利第4,861，627號(hào)中描述的那樣制 造。
[0186] I.溶劑蒸發(fā)對于納米顆粒微包封而言是有利的
[0187] 溶劑蒸發(fā)微包封可以導(dǎo)致納米顆粒在聚合物溶液中穩(wěn)定化并持續(xù)足以包封納米 顆粒的一段時(shí)間。在某些實(shí)施方式中，納米顆粒在聚合物溶液中穩(wěn)定約1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 分鐘。在某些 實(shí)施方式中，納米顆粒在聚合物溶液中穩(wěn)定至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30分鐘。在某些實(shí)施方式中，納米顆 粒在聚合物溶液中穩(wěn)定少于約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21、22、23、24、25、26、27、28、29或30分鐘。這些值中的任一個(gè)可以用于限定納米顆粒在聚合 物溶液中穩(wěn)定的時(shí)間的量的范圍。例如，納米顆?？梢栽诰酆衔锶芤褐蟹€(wěn)定約10分鐘至約 30分鐘。
[0188] 使個(gè)人化物質(zhì)在分散相(通常是揮發(fā)性有機(jī)溶劑）內(nèi)穩(wěn)定可以對大部分依賴分散 相的微包封方法有幫助，包括鑄膜、溶劑蒸發(fā)、溶劑去除、噴霧干燥、相轉(zhuǎn)化和許多其他方 法。
[0189] 通過使混懸的納米顆粒在分散相內(nèi)穩(wěn)定，納米顆粒在整個(gè)聚合物溶液以及在微包 封過程中形成的所得聚合物基質(zhì)中保持均勻分散。
[0190]溶劑蒸發(fā)微包封具有幾個(gè)優(yōu)勢。例如，溶劑蒸發(fā)微包封允許確定最佳的聚合物-溶 劑-納米顆粒混合物，其將幫助形成可以用于包封納米顆粒的均質(zhì)混懸體。溶劑蒸發(fā)微包封 使納米顆粒在聚合物溶液中穩(wěn)定。這種納米顆粒的穩(wěn)定化在小規(guī)模操作過程中是優(yōu)勢，因 為人們將能夠讓不溶性顆粒的混懸體靜置短的時(shí)間段，使方法更安全并且避免在客戶之間 混淆。溶劑蒸發(fā)微包封允許產(chǎn)生不釋放被包封材料的微粒。溶劑蒸發(fā)微包封避免了"突釋效 應(yīng)(burst effect)"問題，即被包封的材料在施用1小時(shí)內(nèi)釋放，其在允許非常低負(fù)載的納 米顆?；騻€(gè)人化物質(zhì)并且產(chǎn)生具有最少孔的微粒的其他包封方法中出現(xiàn)。
[0191] 7.小批量制備
[0192] 在一些實(shí)施方式中，組合物以小批量制造。批量大小可以受限于個(gè)人化物質(zhì)的性 質(zhì)和量、或者終端用戶數(shù)量。
[0193] 在優(yōu)選實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)被包封在聚合物微粒中以供一個(gè)或數(shù)個(gè)個(gè)體個(gè)人 使用。因此，制備小批量的包封個(gè)人化物質(zhì)的聚合物微粒是優(yōu)選的。在一些實(shí)施方式中，制 備的批量的大小可以小至供單個(gè)個(gè)體單次使用。在其他實(shí)施方式中，制備的批量的大小可 以小至供數(shù)個(gè)個(gè)體單次使用，如不超過兩個(gè)、不超過三個(gè)、不超過四個(gè)、不超過五個(gè)、不超過 六個(gè)、不超過七個(gè)、不超過八個(gè)、不超過九個(gè)、或不超過十個(gè)個(gè)體。在其他實(shí)施方式中，批量 大小可以小至供同一個(gè)體多次使用。
[0194] 在其他實(shí)施方式中，小批量制備的大小可以由可用的個(gè)人化物質(zhì)的量所決定。例 如，如果DNA用作個(gè)人化物質(zhì)，則通過面頰拭子從一個(gè)個(gè)體獲得的DNA的量可以正好小到足 夠生產(chǎn)供單個(gè)受者單次使用的批量。在優(yōu)選實(shí)施方式中，單次小批量產(chǎn)生供一個(gè)終端用戶 單次使用的足夠量的包封個(gè)人化物質(zhì)的微粒。
[0195] 在優(yōu)選實(shí)施方式中，小批量制備方法產(chǎn)生約l-10g干燥形式的包封個(gè)人化物質(zhì)的 微粒，優(yōu)選約1 -2g干燥形式的包封個(gè)人化物質(zhì)的微粒。例如，在一些實(shí)施方式中，制備了 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、 7.0、8.0、9.0或10克微粒。例如，在一些實(shí)施方式中，制備了少于0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、 0·6、0·7、0·8、0·9、1·0、1·5、2·0、2·5、3·0、3·5、4·0、4·5、5·0、6·0、7·0、8·0、9·0或 10克微 粒。這些值中的任一個(gè)可以用于限定以此制備的微粒的量的范圍。例如，可以制備0.5至5克 或者2至5克微粒。在一個(gè)特別的實(shí)施方式中，制備了約2克微粒。
[0196] IV.使用方法
[0197] 本文描述的組合物可以獨(dú)立使用，與載體組合使用，或者用作物質(zhì)的添加劑，如紋 身墨水的添加劑，以提供到皮膚，通常通過注射。
[0198] 1.用作組合物
[0199] 在一些實(shí)施方式中，本文描述的組合物適合用作具有個(gè)人意義的組合物。組合物 的使用可以由終端用戶選擇。例如，組合物可以由終端用戶使用以使具有個(gè)人意義的物質(zhì) 保存長的時(shí)間段。終端用戶可以儲(chǔ)存組合物，或者選擇將組合物作為禮物送給另一個(gè)個(gè)體。 或者，終端用戶可以選擇使用組合物作為其他物質(zhì)的添加劑。
[0200] 在一些實(shí)施方式中，組合物通過注射施用到個(gè)體的期望皮膚位置。通常，所述位置 含有標(biāo)志，或者標(biāo)志被添加到所述位置，以指示被包封的個(gè)人化物質(zhì)在該位置的存在。
[0201] 2.用作添加劑
[0202] 在一些實(shí)施方式中，個(gè)人化物質(zhì)可以用作紋身墨水的添加劑。添加劑可以用于創(chuàng) 作一類具有與人或地點(diǎn)或事件的物理聯(lián)系的紋身。
[0203] 獲得個(gè)人化墨水紋身產(chǎn)生了與人、物體、地點(diǎn)或事件的物理聯(lián)系，因?yàn)閭€(gè)人化紋身 將個(gè)人化物質(zhì)引入到紋身墨水中，并因此引入到皮膚上顯示的圖像中。
[0204] 可商購的紋身墨水顏料通常是呈粉末形式的組合物，常常包含用于著色的重金屬 鹽。紋身墨水顏料溶解于載體中，優(yōu)選醇或水，以注射到皮膚中并使顏料分布到真皮內(nèi)。醇 還可以給予抗微生物效果。含有與載體預(yù)混合顏料的預(yù)分散墨水也是可商購的。
[0205] 在某些實(shí)施方式中，被微包封的個(gè)人化物質(zhì)配制成適合于由紋身師將其與載體混 合的干粉形式。在一些實(shí)施方式中，被微包封的個(gè)人化物質(zhì)可以與載體混合并作為預(yù)分散 的溶液供應(yīng)。與個(gè)人化物質(zhì)組合使用的紋身墨水可以具有本領(lǐng)域已知的任何期望顏色。
[0206] 在一些實(shí)施方式中，包含個(gè)人化物質(zhì)的紋身墨水可以通過將含有個(gè)人化物質(zhì)的微 粒與混懸在液體(如水、甘油或金縷梅(witch hazel))中的紋身墨水混合而制備。微粒與紋 身墨水可以通過振搖、攪拌、渦旋或輕度聲處理微粒與紋身墨水而混合。在一些實(shí)施方式 中，微粒在微粒與紋身墨水的混合物中的濃度為0.001 %、0.005 %、0.01 %、0.05 %、0.1 %、 0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%重量/重量。
[0207] -旦含有個(gè)人化物質(zhì)的微粒與紋身墨水混懸，紋身墨水可以通過將少量(例如，少 于10克）的微粒-裝飾性紋身墨水漿料倒到杯或其他容器中而施用，所述杯或其他容器具有 足夠的大小以供人將包括紋身針或針組的紋身工具蘸到杯或容器中。紋身可以通過將紋身 針蘸到含有微粒-紋身墨水混合物的杯或容器中，然后用針刺穿皮膚以將微粒-紋身墨水混 合物注射到皮膚中而創(chuàng)作。
[0208] 個(gè)人化物質(zhì)在施加到皮膚時(shí)必須在受者中是非免疫原性的。在一些實(shí)施方式中， 個(gè)人化物質(zhì)在它被包含到紋身墨水中之前被包封在納米顆粒和/或微粒中，以防止在受者 中的免疫應(yīng)答。
[0209] V.套件
[0210] 提供了用于從終端用戶獲得個(gè)人化物質(zhì)的套件以及用于將被包封的個(gè)人化物質(zhì) 提供給終端用戶的套件。圖2顯示了描述獲得個(gè)人化物質(zhì)，然后分離、制備并將被包封的個(gè) 人化物質(zhì)提供給終端用戶的端到端方法的流程圖。圖1顯示了DNA用作示例性個(gè)人化物質(zhì)的 相似流程圖。
[0211] 在圖1說明的方法中，給顧客提供面頰拭子套件。顧客使用面頰拭子以從顧客感興 趣的人類或非人類動(dòng)物獲得樣品。然后顧客將樣品郵寄或以其他方式交付給實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn) 室分離、擴(kuò)增(如果需要的話)和純化(如果需要的話)DNA，然后將DNA包封在微粒中。然后被 包封的DNA凍干成粉末。任選地，粉末添加到適合于注射(未顯示）的載體。然后粉末或溶液 交付給顧客。顧客然后將溶液或粉末交付給紋身店，其將它注射到顧客的期望位置或者將 它添加到紋身墨水并在顧客身上創(chuàng)作紋身。
[0212] 在圖2說明的方法中，給顧客提供收集套件。顧客將來自顧客感興趣的來源的樣品 放置到收集器皿(例如，小瓶）中。然后顧客將樣品郵寄或以其他方式交付給實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室 從個(gè)人化物質(zhì)提取、任選地純化和/或滅菌一種或多種化合物，然后將個(gè)人化物質(zhì)包封到微 粒中。然后被包封的個(gè)人化物質(zhì)凍干成粉末。任選地，粉末添加到適合于注射(未顯示)的載 體。然后粉末或溶液交付給顧客。顧客然后將溶液或粉末交付給紋身店，其將它注射到顧客 的期望位置或者將它添加到紋身墨水并在顧客身上創(chuàng)作紋身。
[0213] 在一些實(shí)施方式中，套件提供用于獲得個(gè)人化物質(zhì)樣品的工具。工具可以根據(jù)待 提供個(gè)人化物質(zhì)的性質(zhì)而制作。例如，如果個(gè)人化物質(zhì)是DNA，則套件可以包括尖端為泡沫 或棉的面頰拭子、用于該拭子的防護(hù)容器以及使用說明。如果個(gè)人化物質(zhì)是沙，則套件可以 包括防水容器和使用說明。
[0214] 在其他實(shí)施方式中，套件提供供終端用戶使用的最終產(chǎn)品。在這些實(shí)施方式中，套 件可以包括個(gè)人化物質(zhì)、載體和使用說明。套件可以根據(jù)終端用戶偏好而定制。例如，套件 含有粉末形式的個(gè)人化物質(zhì)以及載體。在其他實(shí)施方式中，套件可以含有與載體預(yù)混合的 個(gè)人化物質(zhì)。
[0215] 套件可以提供給終端用戶?；蛘?，套件可以提供給紋身店，在那里套件組分可以由 終端用戶在紋身店使用。
[0216] 實(shí)施例
[0217] 材料
[0218]醫(yī)用級(jí)PMMA(MW = 35kDa;殘留MMA單體〈0· 1% )購自 Vista Optics Ltd. (Widnes， UK)，PVA(Mw = 25kDa; 88% 水解）購自 Poly sc iences，Inc · (Warrington，Pa.，USA)。二氯甲燒 (DCM;Burdick and Jackson,Muskegon,Mich.，USA)、乙酸乙酯（EA;Mallinckrodt， Hazelwood，Mo ·，USA)和 1-辛醇（Sigma-Aldrich，St .Louis，Mo ·，USA)是分析級(jí)溶劑。顆粒通 過溶劑蒸發(fā)微包封而制備。
[0219]實(shí)施例1.制備空白聚（甲基丙烯酸甲酯）（PMMA)微粒
[0220] 材料與方法
[0221] 在20ml玻璃閃爍瓶中稱重500mg PMMA(約25,000MW);15ml二氯甲烷(DCM)添加到 PMMA、渦旋30秒并聲處理5分鐘，直到溶液變得澄清（1)。在這時(shí)，聚合物完全溶解，沒有顆粒 狀物質(zhì)。
[0222] 250ml表面活性劑（1.0%聚（乙烯醇）（PVA)(MW~25,000Da;88%水解））倒入到1L Virtis?燒瓶⑵中。
[0223] 100ml 0.5%PVA(MW^25,000Da;88%水解)倒入到800ml燒杯(3)中。燒杯放置在 速度設(shè)定為3，000RPM的葉輪下(離燒杯底部約0.5cm)。
[0224] Virtis?旋風(fēng)分離器(cyclone)設(shè)定為"55"（13,7501^1〇;然后100微升1-辛醇添 加到1.0 % PVA溶液(2)中并使其靜置5分鐘(4)。PMMA溶液（1)添加到在1LVktis?燒瓶中。 該混合物在旋風(fēng)分離器上在13，750rpm下混合15分鐘。
[0225] 內(nèi)容物從Virtis?燒瓶倒入到含有〇. 5%PVA的800ml燒杯(3)中，并且攪拌約24小 時(shí)以形成顆粒漿料。
[0226] 顆粒漿料倒入到50mlEppend〇rf?管中，擰上蓋子并在4,000RPM(3345Xg)下離 心20分鐘。PVA溶液使用50ml移液管尖頭抽走;保留該溶液以作進(jìn)一步評估。40ml蒸餾水添 加到管中；充分混合并振搖直到顆粒在蒸餾水中再混懸。擰回蓋子并在4,500RPM下再離心 20分鐘。蒸餾水用50ml移液管尖頭抽走。40ml蒸餾水添加到管中；充分混合并振搖直到顆粒 在蒸餾水中再混懸。擰回蓋子并在4,000RPM(3345Xg)下再離心20分鐘。蒸餾水用50ml移液 管尖頭抽走。顆粒漿料合并到一個(gè)或兩個(gè)管中，急速冷凍并凍干48-72小時(shí)。
[0227] 變化：用不同質(zhì)量的PMMA(約1M MW)重復(fù)上文記載的步驟。僅有的區(qū)別出現(xiàn)在PMMA 溶液的形成中。
[0228] 在實(shí)施例1的變化中，在50ml Falcon管中稱重500mg PMMA;30ml二氯甲烷(DCM)添 加到PMMA、渦旋(30秒)并聲處理(5分鐘)直到溶液變得澄清。
[0229] 題
[0230] 在該方法中使用的約80 %的PMMA形成了空白PMMA微粒。
[0231] 在實(shí)施例1的變化中獲得了基本上相同的收率。
[0232] 實(shí)施例2.制備含有低負(fù)載的DNA的聚（甲基丙烯酸甲酯）（PMMA)微粒和包含PMMA微 粒的紋身墨水
[0233] 材料與方法
[0234] 在40ml玻璃閃爍管（1)中稱重lOOOmg PMMA(25,000MW)。制備在線粒體基因座處擴(kuò) 增的DNA。通過在10%CheleX樹脂的存在下煮沸10分鐘，從收獲的人類頰部粘膜細(xì)胞提取 DNA。使用對人類線粒體基因組的非編碼區(qū)（堿基15,971-16411)具有特異性的以下引物， PCR擴(kuò)增提取的DNA的一部分：
[0235] 5'-TTAACTCCACCATTAGCACC-3'（SEQ ID N0:1)
[0236] 5，-GAGGATGGTGGTCAAGGGAC-3，（SEQ ID N0:2)
[0237] 使用Invitrogen PureLink凝膠提取&PCR純化聯(lián)合試劑盒純化PCR產(chǎn)物。純化的 DNA的一部分用AlexaFluor 488標(biāo)記、乙醇沉淀以除去過量的標(biāo)記、在水中再混懸、并與剩 余DNA混合以產(chǎn)生含有5.6納克DNA/微升的適合于包封的溶液。DNA溶解于水中，并且溶液濃 度為5微克/ml(2)。取約100微升DNA溶液以制備微粒，相當(dāng)于0.56微克。
[0238] 30ml二氯甲烷(DMC)添加至IjPMMA小瓶（1)中。10微升Span⑩80(山梨糖醇酐單油 酸酯)添加到PMMA溶液中并且浴中聲處理15分鐘（3)』ΝΑ(2)用移液管吸取到PMMA溶液(3) 中，并在10,000rpm下混合1分鐘以形成乳狀液(4)。
[0239] 250ml表面活性劑（1 · 0 %PVA(MW~25，000Da; 88%水解））倒入到lLVirtis_? 燒瓶 中。Virtis?旋風(fēng)分離器設(shè)定為10000RPMJ50微升1-辛醇添加到1%PVA中、混合1分鐘、然 后使其沉降5分鐘(5)。
[0240] PMMA-DNA乳狀液(4)添加到1.0%PVA溶液(5)中，并在7，OOOrpm下混合15分鐘(6)。
[0241] 200ml 0.5 %PVA(Mff ^ 25，000Da; 88 %水解)倒入到800ml燒杯中。燒杯放置在葉輪 下(離燒杯底部約〇.5〇1〇，并且葉輪速度設(shè)定為3,0001?^。
[0242] 來自Virtis?燒瓶(6)的內(nèi)容物倒入到含有0.5%PVA的800ml燒杯中，并且攪拌約 24小時(shí)以形成顆粒漿料。
[0243] 顆粒漿料倒入到50mlEppeH(torf?管中，擰上蓋子并在4,000RPM(3345 Xg)下離 心20分鐘。PVA溶液用50ml移液管尖頭抽走。保留該溶液以作進(jìn)一步評估。40ml蒸餾水添加 到管中；充分混合并振搖直到顆粒在蒸餾水中再混懸。需要時(shí)，使用聲處理以打碎卡在管底 的任何顆粒團(tuán)聚體。擰回蓋子并在4,500RPM下再離心20分鐘。蒸餾水用50ml移液管尖頭抽 走。40ml蒸餾水添加到管中；充分混合并振搖直到顆粒在蒸餾水中再混懸。擰回蓋子并在4， 000RPM(3345Xg)下再離心20分鐘。蒸餾水用50ml移液管尖頭抽走。顆粒漿料合并到一個(gè)或 兩個(gè)管中，急速冷凍并凍干48-72小時(shí)。
[0244] 結(jié)果
[0245] 在該方法中使用的約60 %的PMMA形成了具有低量DNA的PMMA微粒。
[0246] 用掃描電鏡(SEM)觀察微粒形態(tài)。大體上，微粒形狀為球形，并且具有光滑表面形 態(tài)。沒有可見的孔，甚至在高倍數(shù)(4,000x)下。微球大體上具有1-2微米的顆粒直徑。顯微圖 像中沒有觀察到聚合物或DNA的片段。在熒光顯微鏡下的觀察這些微粒揭示了它們中的一 部分含有用AlexaFluor 488標(biāo)記的DNA。
[0247] 含有個(gè)人化物質(zhì)的紋身墨水通過使lg上文描述的含有DNA的PMMA微粒與19g裝飾 性黑色紋身墨水混合，并手動(dòng)振搖混合物而制備。裝飾性黑色紋身墨水包含約70% (重量/ 重量)的液體混合物(水、甘油和金縷梅)和約30% (重量/重量)的D&C黑色2號(hào)炭黑顏料。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其包含包封在不可生物侵蝕的聚合物微粒中的個(gè)人化物質(zhì)，其中所述 微粒包含生物相容的、疏水性的、不可生物侵蝕的聚合物，和其中所述微粒不釋放所述個(gè)人 化物質(zhì)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其還包含適合于注射到皮膚中的載體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)呈納米顆粒形式。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)選自DNA、沙、土壤、 金屬、火葬灰、陶瓷和植物組織。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述微粒具有1微米至10微米，優(yōu)選 1至5微米的尺寸。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)還包含個(gè)人識(shí)別特 征，其中所述個(gè)人識(shí)別特征含有與所述個(gè)人化物質(zhì)的來源相關(guān)的獨(dú)特信息。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)是DNA，并且所述DNA包含選自短 串聯(lián)重復(fù)(STR)、單核苷酸多態(tài)性(SNP)、表觀遺傳標(biāo)記和甲基化DNA圖譜的個(gè)人識(shí)別特征。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)是火葬灰。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述聚合物選自聚乙酸乙烯酯、聚 丙烯酸酯類、聚甲基丙烯酸酯類、及其共聚物和摻合物。10. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述聚合物具有大于或等于60°C 的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度或者具有大于或等于50 °C的熔點(diǎn)。11. 根據(jù)權(quán)利要求1至7或9至10中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)是DNA，并 且其中所述微粒含有最多〇. 01 % (重量/重量)DNA。12. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8至10中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述個(gè)人化物質(zhì)不是DNA， 并且其中所述微粒含有最多10 % (重量/重量)的所述個(gè)人化物質(zhì)。13. 根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的組合物，其還包含紋身墨水，其中所述墨水包 含至少一種顏料或染料。14. 一種制備根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的組合物的方法，其包括： (a) 從源生物或源材料分離所述個(gè)人化物質(zhì);和 (b) 將所述個(gè)人化物質(zhì)包封到所述微粒中。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其還包括： (c) 分析從所述源生物或源材料分離的所述個(gè)人化物質(zhì)； (d) 分析所述組合物中的所述個(gè)人化物質(zhì);和 (e) 比較步驟(d)中獲得的數(shù)據(jù)與步驟(c)中獲得的數(shù)據(jù)以確認(rèn)從所述源生物或源材料 分離的所述個(gè)人化物質(zhì)與所述組合物中的所述個(gè)人化物質(zhì)相同。16. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其還包括在步驟(b)之前微粉化所述個(gè)人化物質(zhì)。17. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其還包括在步驟(b)之前使所述個(gè)人化物質(zhì)形成納米 顆粒。18. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述個(gè)人化物質(zhì)在步驟(b)之前呈液體形式。19. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述個(gè)人化物質(zhì)是DNA。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其還包括在步驟(b)之前擴(kuò)增所述DNA。21. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述DNA包含一個(gè)或多個(gè)短串聯(lián)重復(fù)(STR)。22. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述DNA是人類DNA。23. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中步驟(b)包括通過選自溶劑蒸發(fā)微包封、經(jīng)溶劑 蒸發(fā)的微球雙壁形成、熱熔融包封、相分離包封、自發(fā)乳液、溶劑去除微包封和凝聚的工藝 形成所述微粒。24. 根據(jù)權(quán)利要求14-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中形成單個(gè)批量的包含干燥微粒的所 述組合物，其中干燥微粒的所述批量的質(zhì)量為約lg至3g，優(yōu)選約2g。25. -種將個(gè)人化物質(zhì)提供到個(gè)體的皮膚的方法，其包括將根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一 項(xiàng)所述的組合物注射到所述個(gè)體的皮膚中。26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述注射在現(xiàn)有的紋身的位置處進(jìn)行。27. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中注射步驟在皮膚上的不同位置處重復(fù)多次以形 成紋身設(shè)計(jì)。
【文檔編號(hào)】A61K8/81GK106061558SQ201580008405
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2015年1月9日
【發(fā)明人】P·J·小達(dá)菲, E·D·喬根森, E·T·A·伯格, E·馬蒂奧維茨
【申請人】室內(nèi)作品有限責(zé)任公司