醫(yī)用組織封閉膠組合物，醫(yī)用組織封閉膠及其制備方法和應用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種醫(yī)用組織封閉膠組合物，醫(yī)用組織封閉膠及其制備方法和應用，所述醫(yī)用組織封閉膠組合物，包括：第一組分和第二組分，其中，第一組分包括：含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然物質(zhì)上修飾有巰基的第一修飾產(chǎn)物，所述含有氨基的天然物質(zhì)和所述第一修飾產(chǎn)物各自獨立的具有10個以上的活性基團，其中，所述活性基團為氨基、巰基；所述第二組分包括：在殼聚糖和/或聚賴氨酸上修飾有10個以上乙烯基的第二修飾產(chǎn)物。本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠具有較高的抗破裂強度和較低的溶脹率，并且具有良好的粘合性，可以使組織創(chuàng)面快速閉合，有效起到組織封閉的作用，防止組織液、血液或腦脊液泄漏，能夠減輕病人的痛苦，并且避免了更多的危險性。
【專利說明】
醫(yī)用組織封閉膠組合物，醫(yī)用組織封閉膠及其制備方法和 應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種醫(yī)用組織封閉膠組合物，醫(yī)用組織封閉膠及其制備方法和應用， 屬于生物醫(yī)藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 醫(yī)用組織封閉膠在醫(yī)學上主要用在手術中或手術后對出血位點封閉止血、缺損組 織物理填充、防止組織臟器黏連、防止組織液滲漏等方面。醫(yī)用組織封閉膠的主體材料按成 分可分為兩類:一是人工合成類的水凝膠基材料，如聚乙二醇、丙烯酰胺類等;二是天然生 物材料，如明膠、膠原、殼聚糖、海藻酸鈉、纖維素等。
[0003] 人工合成類的水凝膠材料分為可降解和不可降解兩大類。其中，可降解的材料多 為聚乙二醇，聚乙烯亞胺等。現(xiàn)市售使用全合成可生物降解的材料得到的醫(yī)用組織封閉膠 主要為COSEAUAngiotech醫(yī)藥品公司）和DURASEAL(Conf Iuent手術器械公司）的產(chǎn)品，此類 產(chǎn)品降解速度較快，但原材料成本較高，制備工藝較為復雜，直接導致整體的產(chǎn)品價格偏 尚。
[0004] 不可降解材料得到的醫(yī)用組織封閉膠主要是丙烯酰胺類產(chǎn)品，其中氰基丙烯酸酯 類是不可降解產(chǎn)品的典型代表，如DERMABOND(Ethicon Surgical Care)。此類產(chǎn)品成膠后 具有較強的粘附力、成膠速度快等優(yōu)點，但卻存在著較多的組分殘留、具有一定的生物毒 性、不可生物降解、除掉殘留組分非常困難等問題，因此只能用于允許材料自然脫落或長時 間需要材料填充的環(huán)境。
[0005] 相對于人工合成類材料，天然生物材料也可以作為組織密封膠的主要材料。例如 GEFOAM的可吸收性明膠(Pharmacia&Upjohn，Kalamazoo，MI)，強生（上海）醫(yī)療器材有限公 司的Bioseal和Surgif Io，以及纖維蛋白密封劑等；雖然天然生物材料具有成本低廉，來源 可靠，易于獲取等優(yōu)勢，作為植入性醫(yī)用材料已有長期的使用歷史和安全評價，但其使用時 的功能效果和使用位置始終具有很高的局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明要解決的問題
[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種以天然物質(zhì)為主體材料，制備可原位交聯(lián)成型、具有較 高的漲破強度和粘附力、并具有較低溶脹率且可生物降解的醫(yī)用組織封閉膠。
[0008] 用于解決問題的方案
[0009] 本發(fā)明提供一種醫(yī)用組織封閉膠組合物，包括:第一組分和第二組分，其中，
[0010] 所述第一組分包括:含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然物質(zhì)上修飾有 巰基的第一修飾產(chǎn)物，所述含有氨基的天然物質(zhì)和所述第一修飾產(chǎn)物各自獨立的具有10個 以上的活性基團，其中，所述活性基團為氨基、巰基；
[0011]所述第二組分包括:在殼聚糖和/或聚賴氨酸上修飾有10個以上乙烯基的第二修 飾產(chǎn)物。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其中，所述第一組分中的活性基團與所述 第二組分中的乙烯基的摩爾比為1:1~1:3,優(yōu)選1:2~1:3。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其中，所述第二修飾產(chǎn)物為修飾有乙烯基 的殼聚糖。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其中，所述含有氨基的天然物質(zhì)為殼聚糖、 聚賴氨酸中的一種或兩種。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其中，所述第一修飾產(chǎn)物是利用巰基化試 劑在所述含有氨基的天然物質(zhì)上修飾巰基得到的;優(yōu)選地，所述巰基化試劑為半胱氨酸、乙 ?；腚装彼?、巰基乙酸、巰基丙酸中的一種或多種;更優(yōu)選地，所述巰基化試劑為巰基乙 酸、巰基丙酸、乙酰基半胱氨酸中的一種或多種。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其中，所述含有氨基的天然物質(zhì)、所述第一 修飾產(chǎn)物的重均分子量為3000~5000Da。
[0017] 本發(fā)明還提供一種醫(yī)用組織封閉膠，其由本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物的第一 組分和第二組分反應后形成；優(yōu)選地，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第一組分和所述第二組 分在緩沖溶液中反應后形成。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠，其中，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第一組分溶于 第一緩沖溶液中，所述第二組分溶于第二緩沖溶液中，然后混合、反應后形成。
[0019] 本發(fā)明還提供一種根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，包括以下步驟：
[0020] 將所述第一組分溶于第一緩沖溶液中，得到第一混合液；
[0021 ]將所述第二組分溶于第二緩沖溶液中，得到第二混合液；
[0022] 將所述第一混合液與第二混合液混合，得到所述醫(yī)用組織封閉膠。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其中，所述第二修飾產(chǎn)物的制備方法 包括：
[0024] 在碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┐嬖诘臈l件下，將所述殼聚糖和/或聚賴氨酸 接枝經(jīng)活化的丙烯酸類化合物，得到所述第二修飾產(chǎn)物。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其中，所述第一修飾產(chǎn)物的制備方法 包括：
[0026] 在碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┐嬖诘臈l件下，利用巰基化試劑在所述含有氨 基的天然物質(zhì)上接枝巰基，得到所述第一修飾產(chǎn)物。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其中，所述碳二亞胺類縮合劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽及其衍生物、N，N'_二異丙基碳二亞胺及其衍生物、 二環(huán)己基碳二亞胺及其衍生物中的一種或多種。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其中，所述酰化催化劑為4-二甲氨基 吡啶及其衍生物、4-吡咯烷基吡啶及其衍生物、羥基苯并三唑及其衍生物、N-羥基琥珀酰亞 胺及其衍生物、N-羥基硫代琥珀酰亞胺及其衍生物中的一種或多種。
[0029] 本發(fā)明還提供一種醫(yī)用組織封閉膠試劑盒，其包括本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合 物以及用于溶解所述醫(yī)用組織封閉膠組合物的各組分的緩沖溶液。
[0030] 本發(fā)明還提供一種根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠在傷口粘合制品、內(nèi)臟或軟組織 傷口閉合制品、腦脊液及組織液封堵制品、大面積創(chuàng)傷止血輔助物、軟組織修復補片與軟組 織粘合制品中的應用。
[0031] 發(fā)明的效果
[0032] 本發(fā)明的組織密封膠具有較高的抗破裂強度和較低的溶脹率，并且具有良好的粘 合性，可以使組織創(chuàng)面快速閉合，有效起到組織封閉的作用，防止組織液、血液或腦脊液泄 漏，能夠減輕病人的痛苦，并且避免了更多的危險性。
[0033] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠是采用具有生物相容性的天然物質(zhì)制備得到的，在使用 時經(jīng)過物理混合，可原位交聯(lián)形成組織密封膠。具有良好的生物相容性，可以完全在人體內(nèi) 進行降解代謝，并被排除體外無殘留。并且本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法簡單，且易 于操作。
【附圖說明】
[0034] 圖1為動物實驗中的實驗組Tl接受硬腦膜修補術后，將醫(yī)用組織封閉膠II噴涂于 人工硬腦膜材料周圍后的照片。
[0035] 圖2為醫(yī)用組織封閉膠II應用于自體硬腦膜修復部位的組織切片圖。
[0036] 圖3為細胞毒實驗中，減去空白組之后的實驗組和對照組的吸光度值(0D值）。
【具體實施方式】
[0037] 本發(fā)明提供一種醫(yī)用組織封閉膠組合物，醫(yī)用組織封閉膠及其制備方法和應用， 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物主要包括含有親核試劑的第一組分和含有親電試劑的第 二組分，所述親核試劑包括含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然物質(zhì)上修飾有巰 基的第一修飾產(chǎn)物，所述含有氨基的天然物質(zhì)和所述第一修飾產(chǎn)物各自獨立的具有10個以 上的活性基團，其中，所述活性基團為氨基、巰基;所述親電試劑包括在殼聚糖和/或聚賴氨 酸上修飾有10個以上乙烯基的第二修飾產(chǎn)物。優(yōu)選地，所述第一組分中，進行修飾巰基的位 置為主鏈和/或側(cè)鏈上所含氨基(例如:伯氨基)的位置。
[0038] 本發(fā)明的含有氨基的天然物質(zhì)和/或第一修飾產(chǎn)物以及第二修飾產(chǎn)物的主鏈和/ 或側(cè)鏈上均具有多個可交聯(lián)位點，從而使得含有氨基的天然物質(zhì)和/或第一修飾產(chǎn)物與第 二修飾產(chǎn)物交聯(lián)后具有較高的交聯(lián)度，還具有突出的抗破裂強度和較低的溶脹率。
[0039] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠具有良好的粘合性，使組織創(chuàng)面快速閉合，有效起到組 織封閉的作用，能夠防止組織液、血液或腦脊液泄漏，從而減輕病人的痛苦，避免了更多的 危險性。本發(fā)明的第一組分和第二組分能夠在一定的物理共混的條件下通過邁克爾加成反 應機理形成一種交聯(lián)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從而起到組織封閉的作用。
[0040] 優(yōu)選地，所述第一組分和第二組分可以是分離的，在使用時將第一組分和第二組 分混合。在實際應用的過程中，所述第一組分和第二組分可以分別單獨儲存，使用前或使用 時再溶解于同一溶劑中。為了使用方便，也可以將第一組分和/或第二組分分別在溶劑中以 預先溶解的形式儲存，例如可以溶解到少量的緩沖溶液中，使用前采用緩沖溶液進行稀釋， 也可以按照使用時的濃度溶解于緩沖溶液中儲存。本發(fā)明對所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物 中的各組分的儲存方式?jīng)]有限制，所屬技術領域人員可以根據(jù)需要，選擇具體的儲存方式， 均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0041 ]另外，修飾有巰基的第一修飾產(chǎn)物具有更好的生物安全性，其對細胞的破壞作用 會進一步減弱，分子內(nèi)二硫鍵增強了分子的剛性結(jié)構(gòu)，減少與紅細胞膜的接觸面積。因此在 含有氨基的天然物質(zhì)上修飾巰基后，具有更好的生物學特征，在人體內(nèi)可以被完全降解。并 且還可以進一步與生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)復合物，從而具有特定的生物學功能。 [0042]本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠，所述第一組分中的活性基團與第二組分中的乙烯基的 摩爾比為1:1~1:3,優(yōu)選1:2~1:3。優(yōu)選地，當所述活性基團與乙烯基的摩爾比為1:2~1:3 時，乙烯基是過量的，多余的乙烯基可以與生物體組織表面的氨基和/或巰基鍵合，因此，具 有更加突出的粘附力。
[0043]當所述活性基團與乙烯基的摩爾比不在1:1~1:3的范圍內(nèi)時，例如氨基和/或巰 基的含量高于乙烯基時，沒有多余的乙烯基與組織細胞接觸面的氨基和/或巰基鍵合，所得 到的醫(yī)用組織封閉膠與組織的粘附性較低;例如所述活性基團的含量低于乙烯基的含量1/ 3時，所形成的交聯(lián)網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)的強度和韌性較低，從而不利于形成具有高破裂強度的醫(yī)用組 織封閉膠。
[0044] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠，其中，所述含有氨基的天然物質(zhì)為殼聚糖、聚賴氨酸中 的一種或兩種。由于殼聚糖、聚賴氨酸以及修飾有巰基的殼聚糖、修飾有巰基的聚賴氨酸具 有良好的生物相容性(例如血液相容性、組織相容性等）、安全性、生物降解性等優(yōu)良性能， 從而可以減弱對細胞的破壞作用。
[0045] 另外，本發(fā)明的聚賴氨酸可以以其鹽酸鹽或其氫溴酸鹽的形式進行反應，當然也 可以以其它鹽或其它形式進行反應，均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的聚賴氨酸可以為聚-L-賴氨酸、ε -聚賴氨酸中的一種或兩種。
[0046] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物，所述第一修飾產(chǎn)物是利用巰基化試劑在所 述含有氨基的天然物質(zhì)上修飾巰基得到的;優(yōu)選地，所述巰基化試劑為半胱氨酸、乙酰基半 胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸中的一種或多種;更優(yōu)選地，所述巰基化試劑為巰基乙酸、巰基 丙酸、乙酰基半胱氨酸中的一種或多種。
[0047]具體而言，修飾有巰基的殼聚糖包括但不限于半胱氨酸殼聚糖(Cys-CHS)、乙?；?半胱氨酸殼聚糖(NAC-CHS )、巰基乙酸殼聚糖(TGA-CHS )、巰基丙酸殼聚糖(MPA-CHS)中的一 種或多種;優(yōu)選為巰基乙酸殼聚糖(TGA-CHS)、巰基丙酸殼聚糖(MPA-CHS)、乙?；腚装彼?殼聚糖(NAC-CHS)中的一種或兩種。所述乙?；腚装彼釟ぞ厶?NAC-CHS)的分子式(部分） 為：
[004!
[0 049」優(yōu)選地，所還谷w m基的大然物質(zhì)、所述第一修飾產(chǎn)物的重均分子量為3 0 0 0~ 5000Da0
[0050] 另外，本發(fā)明醫(yī)用組織封閉膠的第二修飾產(chǎn)物優(yōu)選為修飾有乙烯基的殼聚糖。并 且本發(fā)明中，所述殼聚糖的脫乙酰度不小于87.5%。
[0051] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的成膠時間為1-120S，降解時間為10-180天，并且具有 交聯(lián)網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)。
[0052] 本發(fā)明還提供一種醫(yī)用組織封閉膠，其由本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物的第一 組分和第二組分反應后形成；優(yōu)選地，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第一組分和所述第二組 分在緩沖溶液中反應后形成。
[0053] 具體地，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第一組分溶于第一緩沖溶液中，所述第二組 分溶于第二緩沖溶液中，然后混合、反應后形成。
[0054]優(yōu)選地，用于溶解親核試劑的所述第一緩沖溶液的pH值為7.5~12.5，優(yōu)選8.0~ 10. 〇;用于溶解親電試劑的所述第二緩沖溶液的pH值為2.6~6.5，優(yōu)選3.5~6.0。
[0055] 本發(fā)明還提供一種醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，包括以下步驟：
[0056] 將所述第一組分溶于第一緩沖溶液中，得到第一混合液；
[0057]將所述第二組分溶于第二緩沖溶液中，得到第二混合液；
[0058] 將所述第一混合液與第二混合液混合，得到所述醫(yī)用組織封閉膠。
[0059] 其中第一組分包括含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然物質(zhì)上修飾有巰 基的第一修飾產(chǎn)物;第二組分包括在殼聚糖和/或聚賴氨酸上修飾乙烯基的第二修飾產(chǎn)物。
[0060] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合物中的第一混合液和第二混合液混合后(例如可以 使用雙聯(lián)混合器混合），第一混合液中的親核試劑(含有氨基的天然物質(zhì)和/或第一修飾產(chǎn) 物)與第二混合液中的親電試劑(第二修飾產(chǎn)物)發(fā)生邁克爾加成反應，可以快速成膠，從而 制得本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠。
[0061] 根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其中，所述第一修飾產(chǎn)物制備方法包 括：
[0062] 在碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┐嬖诘臈l件下，利用巰基化試劑在含有氨基的 天然物質(zhì)上接枝巰基，得到所述第一修飾產(chǎn)物。即利用碳二亞胺類縮合劑及?；呋瘎?巰基化試劑鍵合于含有氨基的天然物質(zhì)上。
[0063] 舉例而言，在碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┐嬖诘臈l件下，殼聚糖中的氨基與 乙酰基半胱氨酸中的羧基進行反應，脫去一分子水，從而得到乙?；腚装彼釟ぞ厶?NAC-CHS)。所述乙酰基半胱氨酸殼聚糖(NAC-CHS)的分子式(部分)為：
[0064：
[0065]根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，所述第二修飾產(chǎn)物的制備方法包括： 在碳二亞胺類縮合劑和酰化催化劑存在的條件下，在所述殼聚糖和/或聚賴氨酸接枝經(jīng)活 化的丙烯酸類化合物，得到所述第二修飾產(chǎn)物，即：修飾有乙烯基的殼聚糖和/或聚賴氨酸。 丙烯酸由碳二亞胺類縮合劑和酰化試劑活化后，制備可以與氨基反應的羧基活性酰胺物 質(zhì)，當反應結(jié)束后乙烯基被保留，從得制備得到乙烯基封端的殼聚糖或聚賴氨酸。
[0066] 碳二亞胺類縮合劑可以有效增強羧基官能團的活性，在通過碳二亞胺縮合劑活化 后的羧基，由于酰化催化劑的存在，可以進一步增強羧基物質(zhì)的活性，有利于羧基活性酰胺 的反應活性的保持，使縮合反應穩(wěn)定進行。
[0067] 所述丙烯酸類化合物可以為丙烯酸、戊烯酸中的一種或兩種。當然本發(fā)明對丙烯 酸類化合物的具體結(jié)構(gòu)沒有限制，只要符合通式C = C-R-COOH即可。
[0068] 優(yōu)選地，以所述氨基的摩爾數(shù)為基準，所述碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┑哪?爾數(shù)均是所述氨基的摩爾數(shù)的1~1 〇倍。
[0069]優(yōu)選地，所述的碳二亞胺類縮合劑包括但不限于1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳 二亞胺鹽酸鹽(EDC)或其衍生物、N，N'_二異丙基碳二亞胺(DIC)或其衍生物、二環(huán)己基碳二 亞胺(DCC)或其衍生物中的一種或多種。
[0070] 優(yōu)選地，所述的?；呋瘎┌ǖ幌抻?-二甲氨基吡啶(DMAP)及其衍生物、4-吡咯烷基吡啶（4-PPY)及其衍生物、羥基苯并三唑（HOBt)及其衍生物、N-羥基琥珀酰亞胺 (NHS)及其衍生物、N-羥基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-NHS)及其衍生物中的一種或多種。
[0071] 利用碳二亞胺類縮合劑及酰化催化劑將丙烯酸類化合物鍵合于含有氨基的天然 物質(zhì)上；由于碳二亞胺縮合的反應過程不太穩(wěn)定，因此加入少量的?；呋瘎偈狗磻?向正向移動。
[0072] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，所述第一緩沖溶液和/或第二緩沖溶液包 括但不限于磷酸鹽溶液、碳酸鹽溶液、硼酸鹽溶液、磷酸溶液、乙酸溶液、鹽酸溶液中一種或 多種。所述緩沖溶液的具體成分可根據(jù)第一組分或第二組分在緩沖溶液中的穩(wěn)定性和成型 的組織封閉膠的理化性能情況進行選擇，緩沖溶液不應含有有害或有毒的溶劑，通常選用 水做溶劑，緩沖液的滲透壓應與生物體血液滲透壓相同或接近。
[0073] 優(yōu)選地，所述第一緩沖溶液包括但不限于pH值為8.0-10.0的四硼酸鈉緩沖溶液或 pH為9.6~9.9的磷酸二氫鈉溶液與碳酸鈉溶液的組合的緩沖溶液;所述第二緩沖溶液包括 但不限于pH值為3.5-5.0的鹽酸溶液、pH為5.0~6.0的磷酸鈉緩沖溶液或pH為3.5-4.5的磷 酸二氫鈉溶液和碳酸溶液的組合的緩沖溶液。
[0074] 本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，所述第一緩沖溶液液和/或第二緩沖溶液 中包含有顯色劑;優(yōu)選地，所述顯色劑包含但不限于ro&C藍色#1、FD&C藍色#2、FD&C藍色#3、 D&C綠色#6、亞甲基藍中的一種或多種。
[0075] 本發(fā)明還提供一種醫(yī)用組織封閉膠試劑盒，其包括本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠組合 物以及用于溶解醫(yī)用組織封閉膠組合物的各組分的緩沖溶液。
[0076] 根據(jù)本發(fā)明所述的醫(yī)用組織封閉膠試劑盒，其包括:第一組分、第二組分、第一緩 沖溶液和第二緩沖溶液，所述第一組分包括含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然 物質(zhì)上修飾有疏基的第一修飾產(chǎn)物，所述含有氨基的天然物質(zhì)和所述第一修飾產(chǎn)物各自獨 立的具有10個以上的活性基團，其中，所述活性基團為氨基、巰基;在殼聚糖和/或聚賴氨酸 上修飾有10個以上乙烯基的第二修飾產(chǎn)物。
[0077] 根據(jù)本發(fā)明所述的醫(yī)用組織封閉膠試劑盒，其中，所述第一組分和第二組分可以 是分離的，在使用時將第一組分和第二組分混合。在實際應用的過程中，所述第一組分和第 二組分可以分別單獨儲存，使用前或使用時再溶解于同一溶劑中。為了使用方便，也可以將 第一組分和/或第二組分分別在溶劑中預先溶解的形式儲存，例如可以溶解到少量的緩沖 溶液中，使用前采用緩沖溶液進行稀釋，也可以按照使用時的濃度溶解于緩沖溶液中儲存。 本發(fā)明對所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物中的各組分的儲存方式?jīng)]有限制，所屬技術領域人 員可以根據(jù)需要，選擇具體的儲存方式，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0078] 本發(fā)明還提供一種根據(jù)本發(fā)明的所述的醫(yī)用組織封閉膠在傷口粘合制品、內(nèi)臟或 軟組織傷口閉合制品、腦脊液及組織液封堵制品、大面積創(chuàng)傷止血輔助物、軟組織修復補片 與軟組織粘合制品中的應用。
[0079] 另外，本發(fā)明中的成膠時間的測定方法為:將所述第一混合溶液與第二混合溶液 混合后開始計時，當混合后的二元混合物不再流動時即為成膠，此段時間記為成膠時間。
[0080] 本發(fā)明中的溶脹率的測試方法為:將制得的醫(yī)用組織封閉膠置于精確度為萬分之 一位的天平上，測得其重量為X g。然后將所述醫(yī)用組織封閉膠置于pH=7.4的磷酸鹽(PBS) 緩沖溶液中12小時，使得醫(yī)用組織封閉膠達到溶脹平衡后取出，用濾紙擦干表面水分，再次 將其置于精確度為萬分之一位的天平上，測得其重量為y g。重復測定十次，計算其平均值； 和?。按照以下公式計算溶脹率:溶脹率=(?- ?)/三X 100%。
[0081] 本發(fā)明中破裂強度的測定方法為:取新鮮豬皮或豬腸衣，其面積為20X20cm，將其 固定于只有一個開口的密閉箱的開口處，然后將所述密閉箱的開口密封，密閉箱的另一側(cè) 連接有壓力打氣栗，并配有壓力傳感器。在所述豬皮或豬腸衣的中心位置切開一個直徑為 0.5cm±0.02cm的小口，然后將人工硬腦膜或其他可封堵的材料置于小口表面，通過雙聯(lián)注 射器在封堵材料周圍均勻的噴上所述第一混合溶液和所述第二混合溶液，噴涂后計時1至5 分鐘，然后通過壓力栗向密閉箱內(nèi)打氣，記錄人工硬腦膜或其他封堵材料被頂開時壓力傳 感器的讀數(shù)，即破裂強度。
[0082] 本發(fā)明中的降解時間的測定方法為：稱取一定重量的醫(yī)用組織封閉膠（例如 〇.5g)，置于不可降解的聚丙烯網(wǎng)袋中，將其充分干燥后，放入pH=7.4的磷酸鹽(PBS)緩沖 溶液中，然后置于恒溫恒濕的37°C烘箱內(nèi)。每隔24小時從緩沖溶液中取出一次樣品，吸干其 表面水分并干燥樣品后測試其重量，重量損失超過其原始重量5%時記為降解開始時間；重 量損失達到100 %時為完全降解時間。
[0083] 實施例
[0084]下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會 理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0085] 殼聚糖:Aladdin公司；產(chǎn)品編號：C105803。
[0086] 巰基丙酸:Aladdin公司；產(chǎn)品編號:M103035。
[0087] 可溶性碳二亞胺：Sigma-Aldrich公司；產(chǎn)品編號:MFCD00044916。
[0088] N-羥基琥珀酰亞胺(N-羥基丁二酰亞胺）=Sigma-Aldrich公司；產(chǎn)品編號：56480。 [0089] 聚-L-賴氨酸鹽酸鹽= Sigma-Aldrich公司；產(chǎn)品編號:P2658。
[0090] 4-arm-PEG-SG:廈門賽諾邦格生物科技有限公司，Mn = 10000。
[0091] 三聚賴氨酸乙酸鹽:吉爾生化(上海)有限公司。
[0092] 丙烯酸:Aladdin公司，產(chǎn)品編號:A103525。
[0093] 實施例1
[0094]〈第一組分的制備〉
[0095] 1)稱取脫乙酰度為87.5%的殼聚糖15111111〇1(2.4188)，巰基丙酸20111111〇1(1.731^)， 可溶性碳二亞胺20111111〇1(3.835(^)，1羥基琥珀酰亞胺20臟〇1(2.301(^)，置于溫度為5°(：的 IOOmL純化水中，攪拌反應8小時。
[0096] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中滲析12小時，以除去未反應 的單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0097] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有巰基的 殼聚糖，即為第一組分。
[0098]〈第二組分的制備〉
[0099] 1)稱取脫乙酰度87 · 5 %的殼聚糖15mmo 1 (2 · 418g)，丙烯酸20mmoI (1 · 4mL)，可溶性 碳二亞胺20mmol(3.8350g)，N_羥基琥泊酰亞胺20mmol(2.3010g)，置于10°C的IOOmL純化水 中，攪拌反應12小時。
[0100] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中進行滲析12小時，以除去未 反應單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0101] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有乙烯基 的殼聚糖，即為第二組分。
[0102] 〈醫(yī)用組織封閉膠的制備〉
[0103] 1)稱取第一組分1.5mmol (0.50g)溶于2.5mL磷酸二氫鈉與碳酸鈉混合的緩沖溶液 (ρΗ=9·97±0·02)中，稱取第二組分1 · 5mmo I (0 · 50g)溶于2 · 5mL磷酸鈉緩沖溶液(pH=5 · 64 ±0.02)中。
[0104] 2)將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分通過擠出裝置等體積混合擠出，得 到醫(yī)用組織封閉膠I。
[0105] 實施例2
[0106]〈第一組分的制備〉
[0107] 1)稱取重均分子量在3600~4300之間、伯胺基的摩爾百分含量為35 %的聚-L-賴 氨酸鹽酸鹽〇.4887g，其中伯胺基的摩爾質(zhì)量為1.5mmol，疏基丙酸20mmol(l .73mL)，可溶性 碳二亞胺20mmol(3.8350g)，N-琥珀酰亞胺20mmol (2.3010g)，置于溫度為5°C的IOOmL純化 水中，攪拌反應8小時。
[0108] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中滲析12小時，以除去未反應 的單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0109] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有巰基的 聚-L-賴氨酸，即為第一組分。
[0110]〈第二組分的制備〉
[0111] 1)稱取脫乙酰度87.5%的殼聚糖15臟〇1(2.4188)，丙烯酸2〇!11111〇1(1.41^)，可溶性 碳二亞胺20mmol(3.8350g)，N_羥基琥泊酰亞胺20mmol(2.3010g)，置于5°C的IOOmL純化水 中，攪拌反應8小時。
[0112] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中進行滲析12小時，以除去未 反應單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0113] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有乙烯基 的殼聚糖，即為第二組分。
[0114] 〈醫(yī)用組織封閉膠的制備〉
[0115] 1)稱取第一組分1.5mmol (0.50g)溶于2.5mL磷酸二氫鈉與碳酸鈉混合的緩沖溶液 (pH = 9 · 97 ±0 · 02)中，稱取第二組分2 · Ommol (0 · 67g)溶于2 · 5mL磷酸二氫鈉與碳酸混合的 緩沖溶液(ρΗ=3·64±0·02)中。
[0116] 2)將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分通過擠出裝置等體積混合擠出，得 到醫(yī)用組織封閉膠II。
[0117] 實施例3
[0118] 〈第一組分的制備〉
[0119] 1)稱取脫乙酰度為87.5%的殼聚糖15臟〇1(2.4188)，置于溫度為5°(：的1001^丙烯 酸(0.5mmol)水溶液中，攪拌反應8小時。
[0120] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中滲析12小時，以除去小分子 物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0121] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到水溶性殼聚 糖，即為第一組分。
[0122] 〈第二組分的制備〉
[0123] 1)稱取脫乙酰度87.5%的殼聚糖15臟〇1(2.4188)，丙烯酸2〇!11111〇1(1.41^)，可溶性 碳二亞胺20mmol(3.8350g)，N_羥基琥泊酰亞胺20mmol(2.3010g)，置于5°C的IOOmL純化水 中，攪拌反應8小時。
[0124] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中進行滲析12小時，以除去未 反應單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0125] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有乙烯基 的殼聚糖，即為第二組分。
[0126] 〈醫(yī)用組織封閉膠的制備〉
[0127] 1)稱取第一組分1.5mmol (0.50g)溶于2.5mL磷酸二氫鈉與碳酸鈉混合的緩沖溶液 (pH = 9 · 97 ±0 · 02)中，稱取第二組分2 · Ommol (0 · 67g)溶于2 · 5mL磷酸二氫鈉與碳酸混合的 緩沖溶液(ρΗ=3·64±0·02)中。
[0128] 2)將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分通過擠出裝置等體積混合擠出，得 到醫(yī)用組織封閉膠III。
[0129] 實施例4
[0130]〈第一組分的制備〉
[0131 ] 1)選擇重均分子量在3600~4300之間、伯胺基的摩爾百分含量為35 %的聚-L-賴 氨酸鹽酸鹽〇.4887g，其中伯胺基的摩爾質(zhì)量為1.5mmol，即為第一組分。
[0132]〈第二組分的制備〉
[0133] 1)選擇重均分子量在3600~4300之間、伯胺基的摩爾百分含量為35 %的聚-L-賴 氨酸鹽酸鹽〇.4887g，其中伯胺基的摩爾質(zhì)量為I .5mmol，可溶性碳二亞胺20mmol (3.8350g)，N-羥基琥珀酰亞胺20mmol (2.3010g)，置于5°C的IOOmL純化水中，攪拌反應8小 時。
[0134] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中進行滲析12小時，以除去未 反應單體及小分子物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0135] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到修飾有乙烯基 的聚-L-賴氨酸，即為第二組分。
[0136] 〈醫(yī)用組織封閉膠的制備〉
[0137] 1)稱取第一組分1.5mmol(0.50g)溶于2.5mL磷酸二氫鈉與碳酸鈉混合的緩沖溶液 (pH = 9 · 97 ±0 · 02)中，稱取第二組分2 · Ommol (0 · 67g)溶于2 · 5mL磷酸二氫鈉與碳酸混合的 緩沖溶液(ρΗ=3·64±0·02)中。
[0138] 2)將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分通過擠出裝置等體積混合擠出，得 到醫(yī)用組織封閉膠IV。
[0139] 對比例1
[0140]〈第一組分的制備〉
[0141] 1)稱取脫乙酰度為87.5%的殼聚糖15臟〇1(2.4188)，置于溫度為5°(：的1001^丙烯 酸(0.5mmol)水溶液中，攪拌反應8小時。
[0142] 2)將經(jīng)步驟1)反應得到的混合物置于5L的生理鹽水中滲析12小時，以除去小分子 物質(zhì)，并且每隔2小時更換一次生理鹽水。
[0143] 3)將經(jīng)步驟2)滲析得到的混合物置于凍干機中進行冷凍干燥，得到水溶性殼聚 糖，即為第一組分。
[0144] 〈第二組分的制備〉
[0145] 稱取重均分子量在3600~4300之間、伯胺基含量在聚-L-賴氨酸鹽酸鹽中的摩爾 百分含量為35%的聚-L-賴氨酸鹽酸鹽0.5087g，其中伯胺基的摩爾質(zhì)量為1.6mmol，該聚-L-賴氨酸鹽酸鹽為第二組分。
[0146] 〈醫(yī)用組織封閉膠的制備〉
[0147] 1)稱取第一組分1.6mmol溶于2.5mL的磷酸二氫鈉與碳酸鈉混合的緩沖溶液(pH = 9.58 ± 0.02)中；稱取第二組分3. Ommol (0.8g)溶于2.5mL磷酸二氫鈉和碳酸混合的緩沖溶 液中（ρΗ=3·95±0·02)。
[0148] 2)將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分通過擠出裝置等體積混合擠出，得 到醫(yī)用組織封閉膠V。
[0149] 對比例2
[0150] 稱取1.5mmo 1的三聚賴氨酸乙酸鹽，溶于2.5mL的pH= 10.0的磷酸鈉緩沖溶液中， 震蕩使其完全溶解。
[0151] 稱取2 · Ommol的4-arm-PEG-SG，溶于2 · 5mL的pH=4 · 0的硼砂緩沖溶液中，震蕩使其 完全溶解。
[0152] 將經(jīng)緩沖溶液溶解后的三聚賴氨酸乙酸鹽和4-arm-PEG-SG通過擠出裝置等體積 混合擠出，得到醫(yī)用組織封閉膠VI。
[0153] 對比例3
[0154] 稱取I · 5mmol的4-arm-PEG-NH2，溶于2 · 5mL的pH= 10 · 0的磷酸鈉緩沖溶液中，震蕩 使其完全溶解。
[0155] 稱取2 · Ommol的4-arm-PEG-SG，溶于2 · 5mL的pH=4 · 0的硼砂緩沖溶液中，震蕩使其 完全溶解。
[0156] 將經(jīng)緩沖溶液溶解后的4-arm-PEG-NH2和4-arm-PEG-SG通過擠出裝置等體積混合 擠出，得到醫(yī)用組織封閉膠VII。
[0157] 測定上述實施例1-4和對比例1-3的成膠時間，溶脹率、破裂強度、剝離拉伸承載強 度、開始降解時間以及完全降解時間，結(jié)果如下表1所示：
[0158] 表1
[0160] 從表1可以看出，對比例1中未修飾有乙烯基的聚賴氨酸與天然的殼聚糖不能交聯(lián) 形成醫(yī)用組織封閉膠;本發(fā)明實施例1-4制備得到的醫(yī)用組織封閉膠I-IV與對比例2-3的組 織封閉VI-VII膠相比，本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠I-IV具有較高的破裂強度和剝離拉伸承載 強度，并且具有較低的溶脹率。因此本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠具有較好的抗破裂強度和粘 合力，在組織封閉、創(chuàng)面閉合、防止組織液、血液或腦脊液泄漏方面具有更好的優(yōu)勢。同時由 于具有較低的溶脹率，可應用于腦膜等較狹窄及神經(jīng)分布較多的部位。
[0161] 人工硬腦膜修補實驗
[0162] 采用按照實施例2的方法制備得到的經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分進 行動物實驗。
[0163] 取10只健康的新西蘭兔作為實驗兔，隨機標號T1，T2，T3，T4，T5，T6，T7，T8，T9， Τ10。將實驗兔麻醉后在其頭頂制造1.5cmX0.5cm的硬腦膜缺口，然后進行人工硬腦膜修補 手術，其中Tl~T5為實驗組，T6~TlO為對照組，實驗組Tl~T5植入人工硬腦膜，通過兩組分 注射器將經(jīng)緩沖溶液溶解后的第一組分和第二組分混合后，噴涂于人工硬腦膜材料周圍及 表面，30秒后檢查其交聯(lián)情況，待兩組分完全交聯(lián)形成醫(yī)用組織封閉膠II后將傷口封閉縫 合。圖1為實驗組T5接受硬腦膜修補術后，將醫(yī)用組織封閉膠II噴涂于人工硬腦膜周圍后的 照片。對照組T6~TlO在植入人工硬腦膜后不進行噴涂，直接將傷口封閉縫合。
[0164] 手術一周后觀察，所有的實驗兔均保持健康。解剖實驗組Tl和T2的實驗兔以及對 照組T6和T7的實驗兔后發(fā)現(xiàn):對照組T6和T7的實驗兔均發(fā)生了人工硬腦膜側(cè)向移動或與附 著位置脫離現(xiàn)象;實驗組Tl和T2的實驗兔在用組織密封膠封閉II后均未發(fā)生人工硬腦膜移 動問題。
[0165] 手術兩周后觀察，所剩余的實驗兔均保持健康。解剖觀察實驗組Τ3和對照組Τ8實 驗兔后發(fā)現(xiàn):對照組Τ8的實驗兔發(fā)生了人工硬腦膜側(cè)向移動，堆積至一側(cè)并發(fā)生腦脊液泄 漏；實驗組Τ3在用組織密封膠封閉II后均未發(fā)生人工硬腦膜移動，組織封閉膠的顏色變淡 并可觀察到已發(fā)生明顯的降解。
[0166] 手術四周后觀察，剩余的實驗兔均存活，解剖觀察實驗組Τ4，Τ5和對照組T9，TlO實 驗兔后發(fā)現(xiàn):對照組Τ9，Τ10已發(fā)生明顯的腦脊液外漏問題;實驗組Τ4，Τ5中的組織密封膠已 完全降解，消失不見，且并未發(fā)生腦脊液外漏的問題。
[0167] 另外，在實驗組Tl~Τ5中所有的實驗兔身上都沒有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)缺陷，從最初的手術 操作開始所有的實驗兔均保持健康。
[0168] 上述結(jié)果表明，當將本發(fā)明的可生物降解的組織密封膠可以有效地應用在人工硬 腦膜及鄰近組織上，實現(xiàn)組織封閉，防止腦脊液泄露。
[0169] 自體硬腦膜修復實驗
[0170]將實施例2的醫(yī)用組織封閉膠II應用于自體硬腦膜修復，兩個月后取出修復部位 組織做病理切片，采用蘇木精-伊紅染色后在顯微鏡下觀察。圖2是醫(yī)用組織封閉膠II應用 于自體硬腦膜修復部位的組織切片圖，如圖2所示，醫(yī)用組織封閉膠II已完全降解，并且醫(yī) 用組織封閉膠II與硬腦膜接觸位置未見炎癥細胞，硬腦膜組織無變性，無壞死，無纖維化增 生。另外，硬腦膜周圍其它組織細胞也未見細胞變性和壞死等病理改變。因此，本發(fā)明的醫(yī) 用組織封閉膠具有良好的組織相容性，可完全生物降解。
[0171] 細胞毒實驗
[0172]通過浸提液接觸培養(yǎng)細胞，以L929為實驗細胞，對細胞增殖觀察，評價實施例2所 制備的醫(yī)用組織封閉膠II對體外細胞的毒性作用。
[0173] 實驗的具體過程為：用完全培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清(FBS) + 1%雙抗(青 霉素和鏈霉素的混合液））按照0.1g/mL的比例浸提醫(yī)用組織封閉膠，得到組織封閉膠的浸 提液。
[0174] 實驗組:采用完全培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清(FBS)+1 %雙抗(青霉素和鏈 霉素的混合液），添加組織封閉膠的浸提液，加入細胞懸液，進行細胞培養(yǎng)。
[0175] 對照組:采用完全培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清(FBS)+1 %雙抗(青霉素和鏈 霉素的混合液））加入細胞懸液，進行細胞培養(yǎng)。對照組中不添加組織封閉膠的浸提液，其余 細胞培養(yǎng)條件與實驗組相同。
[0176] 空白組:采用完全培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清(FBS)+1 %雙抗(青霉素和鏈 霉素的混合液），空白組中不添加組織封閉膠的浸提液和細胞懸液，于相同的時間放置于與 實驗組和對照組相同的環(huán)境中，以作為實驗組和對照組測量吸光度值時的參照。
[0177] 采用實施例2的醫(yī)用組織封閉膠II進行浸提液的配制，浸提溫度為（37±1)°C，浸 提時間為(24±2)h。采用完全培養(yǎng)基重懸L929細胞，制得濃度為4 X IO4個細胞/mL的細胞懸 液。以96孔平板為培養(yǎng)板，其中實驗組和對照組為在培養(yǎng)板中加入上述細胞懸液，每孔加入 I OOyL;空白組為在培養(yǎng)板中每孔加入I OOyL的完全培養(yǎng)基，不加入細胞懸液。
[0178] 將實驗組、對照組和空白組的培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)24小時(在37°C，5%CO2 的條件下）。然后在實驗組中加入組織封閉膠的浸提液，每孔加入i〇〇yL，對照組和空白組不 加組織封閉膠的浸提液，之后將各培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時（在37°C，5%C〇2條件 下）。然后吸出孔內(nèi)的培養(yǎng)液，再向每孔內(nèi)加入IOOyL的CCK-8混合液（由90yL的完全培養(yǎng)基+ I OyL的CCK-8混合制成），再將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中孵育2小時。然后用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。
[0179] 圖3為細胞毒實驗中，實驗組、對照組分別減去空白組后（即以空白為參照）的吸光 度值(OD值）。由圖3可以得出，實驗組細胞的相對增殖率為RGR = 94.92 %。
[0180] 其中，實驗組細胞的相對增殖率RGR的計算方法為:RGR=(實驗組OD值-空白組OD 值)/(對照組OD值-空白組OD值）X 100%。因此，本發(fā)明的醫(yī)用組織封閉膠具有良好的安全 性，對細胞生長無毒副作用。
【主權項】
1. 一種醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，包括:第一組分和第二組分，其中， 所述第一組分包括:含有氨基的天然物質(zhì)和/或在含有氨基的天然物質(zhì)上修飾有巰基 的第一修飾產(chǎn)物，所述含有氨基的天然物質(zhì)和所述第一修飾產(chǎn)物各自獨立的具有10個以上 的活性基團，其中，所述活性基團為氨基、巰基； 所述第二組分包括:在殼聚糖和/或聚賴氨酸上修飾有10個以上乙烯基的第二修飾產(chǎn) 物。2. 根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，所述第一組分中的活性 基團與所述第二組分中的乙烯基的摩爾比為1:1~1:3,優(yōu)選1:2~1:3。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，所述第二修飾產(chǎn)物 為修飾有乙烯基的殼聚糖。4. 根據(jù)權利要求1-3任一項所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，所述含有氨基 的天然物質(zhì)為殼聚糖、聚賴氨酸中的一種或兩種。5. 根據(jù)權利要求1-4任一項所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，所述第一修飾 產(chǎn)物是利用巰基化試劑在所述含有氨基的天然物質(zhì)上修飾巰基得到的；優(yōu)選地，所述巰基 化試劑為半胱氨酸、乙酰基半胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸中的一種或多種;更優(yōu)選地，所述 巰基化試劑為巰基乙酸、巰基丙酸、乙?；腚装彼嶂械囊环N或多種。6. 根據(jù)權利要求1-5任一項所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物，其特征在于，所述含有氨基 的天然物質(zhì)、所述第一修飾產(chǎn)物的重均分子量為3000~5000Da。7. -種醫(yī)用組織封閉膠，其由權利要求1-6任一項所述的醫(yī)用組織封閉膠組合物的第 一組分和第二組分反應后形成;優(yōu)選地，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第一組分和所述第二 組分在緩沖溶液中反應后形成。8. 根據(jù)權利要求7所述的醫(yī)用組織封閉膠，其特征在于，所述醫(yī)用組織封閉膠由所述第 一組分溶于第一緩沖溶液中，所述第二組分溶于第二緩沖溶液中，然后混合、反應后形成。9. 一種根據(jù)權利要求7或8所述的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟： 將所述第一組分溶于第一緩沖溶液中，得到第一混合液； 將所述第二組分溶于第二緩沖溶液中，得到第二混合液； 將所述第一混合液與第二混合液混合，得到所述醫(yī)用組織封閉膠。10. 根據(jù)權利要求9所述的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其特征在于，所述第二修飾產(chǎn) 物的制備方法包括： 在碳二亞胺類縮合劑和酰化催化劑存在的條件下，在所述殼聚糖和/或聚賴氨酸上接 枝經(jīng)活化的丙烯酸類化合物，得到所述第二修飾產(chǎn)物。11. 根據(jù)權利要求9或10所述的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其特征在于，所述第一修 飾產(chǎn)物的制備方法包括： 在碳二亞胺類縮合劑和?；呋瘎┐嬖诘臈l件下，利用巰基化試劑在所述含有氨基的 天然物質(zhì)上接枝巰基，得到所述第一修飾產(chǎn)物。12. 根據(jù)權利要求10或11所述的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其特征在于，所述碳二亞 胺類縮合劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及其衍生物、N，N'_二異丙基碳 二亞胺及其衍生物、二環(huán)己基碳二亞胺及其衍生物中的一種或多種。13. 根據(jù)權利要求10-12任一項所述的醫(yī)用組織封閉膠的制備方法，其特征在于，所述 ?；呋瘎?-二甲氨基吡啶及其衍生物、4-吡咯烷基吡啶及其衍生物、羥基苯并三唑及 其衍生物、N-羥基琥珀酰亞胺及其衍生物、N-羥基硫代琥珀酰亞胺及其衍生物中的一種或 多種。14. 一種醫(yī)用組織封閉膠試劑盒，其特征在于，其包括權利要求1-6任一項所述的醫(yī)用 組織封閉膠組合物以及用于溶解所述醫(yī)用組織封閉膠組合物的各組分的緩沖溶液。15. -種根據(jù)權利要求7或8所述的醫(yī)用組織封閉膠在傷口粘合制品、內(nèi)臟或軟組織傷 口閉合制品、腦脊液及組織液封堵制品、大面積創(chuàng)傷止血輔助物、軟組織修復補片與軟組織 粘合制品中的應用。
【文檔編號】C08F283/04GK106075550SQ201610447130
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月17日
【發(fā)明人】馬騁, 鄧坤學, 袁玉宇
【申請人】廣州邁普再生醫(yī)學科技有限公司