藏藥錫金報春抗氧化提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及含有抗氧化作用的錫金報春有效提取物及其制備方法，所述有效提取物選自從錫金報春醇提物中萃取得到的石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物之一及其組合，研究證明，其中石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物具有明顯的體外清除羥基自由基能力；乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有明顯體外清除DPPH（二苯代苦味肼）脂性自由基的能力，因此，所述有效提取物可用于制備抗氧化藥物和化妝品。
【專利說明】藏藥錫金報春抗氧化提取物及其制備方法和用途
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藏藥錫金報春抗氧化提取物及其制備方法；本發(fā)明進一步涉及所述提取物的藥物組合；本發(fā)明還涉及所述提取物在抗氧化藥物或化妝品中的應用；屬于中藥領域。
【背景技術】
[0002]1956年，英國人Harman提出“自由基學說”，該學說認為自由基攻擊生命大分子造成組織損傷，是引起機體衰老的根本原因，也是誘發(fā)腫瘤惡性疾病的重大原因。隨著人們對自由基研究的深入，這一學說也為越來越多的人接受。自由基是指“任何包含一個未成對電子的原子或原子團”，對人體健康影響極大。在生理情況下，氧處于較低水平，其產(chǎn)生和清除處于動態(tài)平衡，但在某些病理情況下，自由基過剩，導致機體損傷。自由基除本身對生物大分子(蛋白質(zhì)、DNA)有損傷作用外，還會造成多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過氧化(LP0)，而LPO反應的終產(chǎn)物是丙二醛(MDA)，從而使蛋白質(zhì)、核酸、腦磷脂發(fā)生交聯(lián)并喪失其活性。大量研究表明，與老化相關的疾病和基因的突變，如癌癥、心血管疾病、風濕性關節(jié)炎、糖尿病、神經(jīng)性疾病、衰老等都同自由基導致的損傷相關，清除了體內(nèi)多余的自由基就能預防衰老和疾病。因此尋求利用人體易于吸收的、能清除體內(nèi)過量自由基的外源抗氧化劑成為一個新的研究熱點。然而，隨著合成抗氧化劑日益突出的潛在毒性和致癌作用被人們排斥，從植物中尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑就成為了目前抗氧化劑發(fā)展的一個必然趨勢，同時也為現(xiàn)代醫(yī)學和保健行業(yè)的指明了方向。
[0003]報春花科(/?'皿)屬雙子葉植物綱五極果亞綱的一科，多年生或一年生草本，約22屬800種，廣布全球，主產(chǎn)于北半球溫帶；中國產(chǎn)12屬約500種，全國各地都有分布。該科植物種類多，藥理作用廣泛，主要有降低小鼠的血清尿酸水平，促進大鼠膽汁分泌，減少膽色素結石的成石率，免疫調(diào)節(jié)等功能，據(jù)報道其主要化學成分有黃酮類、萜類、甾醇類、有機酸類、醌類等。錫金報春`iPrimula Sikkimensdis Hook),又名鐘花報春花,屬于報春花科報春花屬植物，是一種常見的藏藥材，以花入藥，是藏藥“像志色?！痹参??；S色，鐘狀，聚生于花葶頂端，主產(chǎn)于西藏東部及南部、青海東南部、四川西部、云南西北部；主要用于清熱解毒，心脈瘀阻、血脈不暢等疾病，經(jīng)幾個藏醫(yī)院的臨床醫(yī)生實踐證明，在治療心脈瘀阻、血脈不暢方面，療效確切，在甘孜藏族地區(qū)，藏民們也廣泛使用，經(jīng)過資源調(diào)查，資源十分豐富。其化學成分未見報道，更未見到錫金報春及其有效部位抗氧化作用研究與應用方面的報道。我們對其總提物及不同溶劑極性部位進行了抗氧化活性的初步研究，活性實驗表明:其總提物和某些極性部位具有良好抗氧化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一是，提供一種錫金報春的抗氧化提取物及其制備方法。本發(fā)明的目的之二是，提供一種以所述提取物為有效成分的藥物組合物。本發(fā)明的目的之三是，提供所述提取物在制備抗氧化及其相關藥物和化妝品中的應用。[0005]本發(fā)明比較了不同溶劑的萃取物的抗氧化活性，確定了具有抗氧化作用的提取物及其制備方法。
[0006]本發(fā)明所述錫金報春提取物選自從錫金報春醇提物中萃取得到的石油醚提取物(Xj-l)、氯仿提取物(XJ-2)、乙酸乙酯提取物(XJ-3)、正丁醇提取物(XJ-4)和水提取物(XJ-5)之一或其組合；優(yōu)選從錫金報春醇提物中萃取得到的石油醚提取物(XJ-1)、氯仿提取物(XJ-2)、正丁醇提取物(XJ-4)或其組合；或者優(yōu)選從錫金報春醇提物中萃取得到的乙酸乙酯提取物(XJ-3 )、正丁醇提取物(XJ-4 )或其組合。
[0007]本發(fā)明的提取物可以經(jīng)過提取、濃縮、系列萃取得到，其制備方法包括以下步驟: ⑴取錫金報春全草粗粉，用乙醇浸泡，超聲波助溶提取，過濾，濾渣重復上述提取，過濾，合并提取液；
⑵將提取液減壓濃縮得到濃縮液，再將濃縮液與水混合，得到稀釋后的濃縮液。
[0008]⑶用不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每種溶劑重復 萃取，合并相同有機相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物。
[0009]所述方法優(yōu)選包括以下步驟:⑴取錫金報春全草粗粉，用30倍質(zhì)量的不同濃度乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過濾，濾渣重復上述提取過程2次，過濾，合并三次提取液，其中所用乙醇優(yōu)選60-90%乙醇。⑵將提取液減壓濃縮至相對密度為1.10-1.24 mg/mL(55°C )，得到濃縮液，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液；⑶用與稀釋后濃縮液等體積的不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每種溶劑分別重復萃取2次，合并相同有機相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物。
[0010]本發(fā)明還提供以所述方法制備的各溶劑提取物的藥物組合物。所述藥物組合物是以本發(fā)明的提取物為有效成分，與藥學上可接受的載體所組成，并以合適的藥用制劑形式存在，這些制劑可以是片劑(優(yōu)選糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑)、膠囊劑(優(yōu)選硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑)、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴丸、滴丸劑、貼劑等。
[0011]本發(fā)明進一步提供了各種提取物在制備治療和或預防氧化藥物和化妝品中的應用。為此進行的抗氧化相關實驗以清除DPPH自由基、羥基自由基為活性指標。實驗結果表明，乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有明顯體外清除DPPH脂性自由基的能力；石油醚提取物、氯仿提取物和正丁醇提取物具有較好清除羥基自由基，具有抗氧化作用，可用于制備抗氧化藥物和化妝品。
[0012]具體實施方案:
實施例1:
各提取物的制備方法:
I)總提物提取
取錫金報春全草粗粉20 g，用600 ml 90%乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過濾，濾渣重復上述提取過程2次，過濾，合并三次提取液。
[0013]2)濃縮
將提取液減壓回收乙醇得濃縮液(相對密度為1.15g/mL, 55°C)，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液(90 ml)。[0014]3)梯度萃取
依次用石油醚(90 ml/次X3次)、氯仿(90 ml/次X3次)、乙酸乙酯(90 ml/次X3次)、正丁醇(90 ml/次X3次)萃取稀釋后的濃縮液，合并相同有機相，減壓濃縮，得到石油醚提取物(XJ-1，0.33 g,提取率:1.65%)、氯仿提取物《1-2，0.16 g,提取率:
0.8%)、乙酸乙酯提取物《了-3，0.38 g,提取率:1.9%)、正丁醇提取物(XJ-4，0.07 g，提取率:0.35%)和水提取物(XJ_5，0.8 g，提取率:4%)。
[0015]實施例2:
各提取物的制備方法:
I)總提物提取 取錫金報春全草粗粉30 g，用900 ml 65%乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過濾，濾渣重復上述提取過程2次，過濾，合并三次提取液。
[0016]2)濃縮
將提取液減壓回收乙醇得濃縮液(相對密度為1.10g/ml, 55°C)，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液(100 ml)。
[0017]3)梯度萃取
依次用石油醚(100 ml/次X3次)、氯仿(100 ml/次X3次)、乙酸乙酯(100 ml/次X3次)、正丁醇(100 ml/次X3次)萃取稀釋后的濃縮液，合并相同有機相，減壓濃縮，得到石油醚提取物(XJ-1，0.36 g,提取率:1.20%)、氯仿提取物《1-2，0.05 g,提取率:0.17%)、乙酸乙酯提取物(XJ-3，0.07 g,提取率:0.23%)、正丁醇提取物《1-4，0.27g，提取率:0.90%)和水提取物(XJ-5，1.2 g，提取率:4.0%)。
[0018]實施例3:
清除DPPH自由基活性實驗:
采用實施例1中所制備各極性部位進行活性實驗。
[0019]抗氧化活性以清除DPPH自由基能力大小表示。根據(jù)預實驗確定的實驗條件，測定錫金報春不同樣品清除脂性自由基DPPH的活性。取不同濃度樣品溶液2.0 mL，加入2.0 mL
1.52X 10_4 mmol/L的DPPH無水乙醇溶液充分混勻，室溫避光靜置30 min后，以溶劑為空白對照，517 nm處測吸光度A1 ；以同體積溶劑代替樣品溶液做陰性對照，測定吸光度A2 ；以同體積無水乙醇代替DPPH溶液做空白組，測定吸光度A3。以VC為對照，每組做3個重復，求其平均值。按下式計算清除率:
樣品對 DPPH.的清除率(%) = [1- (A1-A3) /A2] X 100%
實施例4:
清除羥基自由基活性試驗:
采用實施例1中所制備各極性部位進行活性實驗。
[0020]抗氧化活性以清除羥基自由基能力大小表示。根據(jù)預實驗確定的實驗條件，測定錫金報春不同樣品清除羥基自由基的活性。將1.5 mL 1.8 mol/L水楊酸溶液與2.0 mL1.8 mol/L FeSO4溶液于試管中混勻后，加入I mL不同濃度樣品溶液，然后加入0.1 mL0.03% H2O2，搖勻，于37 °C保溫30 min, 510 nm處測得樣品組吸光度Ai ;同時將樣品組中H2O2換成0.1 mL蒸餾水，測得樣品參照組吸光度Aj ;將樣品組中樣品換成1.0 mL溶劑，測得空白組吸光度以VC為對照，每組做3個重復，求其平均值。按下式計算清除率:?OH 清除率(%) = [A0 — (A1-Aj)] /A0X 100%
表I錫金報春各部位體外清除DPPH自由基活性實驗
【權利要求】
1.一種具有抗氧化作用的錫金報春活性提取物，其特征是所述提取物選自錫金報春醇提物中萃取得到的石油醚提取物(Xj-l)、氯仿提取物(XJ-2)、乙酸乙酯提取物(XJ-3)、正丁醇提取物(XJ-4)之一或其組合。
2.一種根據(jù)權利要求1所述的錫金報春活性提取物，其特征是所述提取物選自從錫金報春醇提物中萃取得到的石油醚提取物(XJ-1)、氯仿提取物(XJ-2)、正丁醇提取物(XJ-4)或其組合。
3.一種根據(jù)權利要求1所述的錫金報春活性提取物，其特征是所述提取物選自從錫金報春醇提物中萃取得到的乙酸乙酯提取物(XJ-3)、正丁醇提取物(XJ-4)或其組合。
4.一種制備如權利要求1-3任一所述的活性提取物的方法，其特征是所述方法包括以下步驟:⑴取錫金報春全草粗粉，用乙醇浸泡，超聲波助溶提取，過濾，濾渣重復上述提取，過濾，合并提取液；⑵將提取液減壓濃縮得到濃縮液，再將濃縮液與水混合，得到稀釋后的濃縮液；⑶用不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每種溶劑重復萃取，合并相同有機相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物； 所述方法優(yōu)選包括以下步驟:(1)取錫金報春全草或地下部分粗粉，用30倍質(zhì)量的不同濃度乙醇浸泡24 h，超 聲波助溶提取I h，過濾，濾渣重復上述提取過程2次，過濾，合并三次提取液，其中所用乙醇優(yōu)選60-90%乙醇；(2)將提取液減壓濃縮至相對密度為1.10-1.24 mg/mL(55°C )，得到濃縮液，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液；(3)用與稀釋后濃縮液等體積的不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每種溶劑分別重復萃取2次，合并相同有機相，減壓濃縮得到各相關部位。
5.一種藥物組合物，其包括權利要求1-3所述任一活性提取物為有效成分與藥學上可接受的載體。
6.根據(jù)權利要求5所述藥物組合物，所述藥物組合物的制劑形式可以是片劑、膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴丸、滴丸劑、貼劑等。
7.根據(jù)權利要求6所述藥物組合物，其特征在于:所述片劑選自糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑或緩釋片劑；所述膠囊劑選自硬膠囊劑、軟膠囊劑或緩釋膠囊劑。
8.權利要求1-3任一所述的活性提取物在制備治療和或預防氧化藥物和化妝品中的應用。
【文檔編號】A61Q19/08GK103446198SQ201310415409
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月13日 優(yōu)先權日:2013年9月13日
【發(fā)明者】梁曉霞, 鄭志翔, 范巧佳, 阿呷爾布 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學