專利名稱：：一種測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二垸基環(huán)丁酮的方法。技術(shù)背景輻照處理能殺滅或減少食品中的致病性微生物、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等，能有效提高食品的衛(wèi)生安全性，延長(zhǎng)貨架期，食品輻照是發(fā)展最快的輻射技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域之一。輻照食品產(chǎn)業(yè)在全球范圍內(nèi)迅速發(fā)展，商業(yè)化應(yīng)用、國(guó)際貿(mào)易以及輻照食品的市場(chǎng)監(jiān)管，迫切需要對(duì)輻照食品鑒定檢測(cè)方法開(kāi)展研究。前人研究進(jìn)展國(guó)際組織如IAEA、FAO、WHO和歐盟已率先開(kāi)展了某些輻照食品的鑒定檢測(cè)方法的研究，其中的化學(xué)方法是利用輻照處理含脂食品產(chǎn)生的碳?xì)浠衔锖?—垸基環(huán)丁酮(2-Alkylcyclobutanones，2國(guó)ACBs)(Delinc6eH，Analyticalmethodstoidentifyirradiatedfood國(guó)areview.i<2<i/a"o/7尸/yAS7'as1a"t/C7zew/s^y，2002，63:455-458){乍為鑒定食品是否經(jīng)過(guò)輻照的依據(jù)。2-ACBs類化合物是由食品中的脂肪酸和?；视徒?jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的。1972年，LeTdlier等用^Co-Y射線對(duì)三酰基甘油輻照60kGy，首次發(fā)現(xiàn)了2-ACBs(LeTellierPR,NawarWW.2-Alkylcyclobutanonesfromtheradiolysisoftriglycerides.1972,7(1):75-76)。迄今為止的大量研究表明，2-ACBs僅在輻照的含脂食品中發(fā)現(xiàn)，因此2-ACBs類化合物可作為含脂輻照食品的標(biāo)志化合物用來(lái)鑒定食品是否經(jīng)過(guò)輻照(BoydDR,CroneAVJ，HamiltonJTG,HandMV.Synthesis,characterization,andpotentialuseof2-dodecylcyclobutanoneasamarkerforirradiatedchicken.Jowrwa/o/Jgr/cw/Zweawt/FoodCTzew^^y,1991，39(4):789-792)(StevensonMH，CroneAVJ,HamiltonJTG.Irradiationdetection.iV她re，1990,344(15):202-203)，在可控條件下還可用來(lái)評(píng)估輻照食品吸收的輻照劑量(CroneAVJ,HamiltonJTG,StevensonMH.Effectofstorageandcookingonthedoseresponseof2-alkylcyclobutanones-，apotentialmarkerforirradiatedchicken.Jowrna/o/iSWence朋dFoo"g〃.ra〃廳，1992,58(2):249-252)(StevensonMH，CroneAVJ，HamiltonJandeggs.六flA'aO.o"尸/2少w.c5aw<iC/zem^st/j,1993，42(1-3):363-366)。2—十二烷基環(huán)丁酮(2-dodecylcyclobutanone，2-DCB)由食品中的棕櫚酸和棕櫚酸甘油酯輻解生成，是2-ACBs中的一種。其烴基鏈較短且是飽和的，相對(duì)其它2一ACBs較為穩(wěn)定，且由于在大部分食品中，棕櫚酸是含量較高的飽和脂肪酸，用其輻解物2-DCB作為檢測(cè)含脂輻照食品的主要標(biāo)志性化合物尤顯得更為實(shí)用(張海偉，哈益明，王鋒.含脂食品輻解產(chǎn)物2-烷基環(huán)丁酮的研究進(jìn)展.輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào)，2007，25(1):1-4)。國(guó)外很多研究都圍繞2-DCB開(kāi)展(HorvatovichP,MichelM,HasselmannC,MarchioniE.Supercriticalfluidextractionforthedetectionof2-dodecylcyclobutanoneinlowdoseirradiatedplantfoods,/ot^z"/CA/-o/wafcg""http://z_>，2002,968(1-2):251-255)(GadgilP，SmithJS,HachmeisterKA,KropfDH.Evaluationof2-dodecylcyclobutanoneasanirradiationdoseindicatorinfreshirradiatedgroundbeef.Jowma/o/々〃'cw/z^eandFooiiCA綴&^y，2005,53(6):1890-1893)。目前使用的含脂輻照食品鑒定方法(EN1785)采用佛羅里硅土柱對(duì)輻照樣品進(jìn)行凈化分離，由于佛羅里硅土價(jià)格昂貴，承載的樣品量有限，且劑量檢測(cè)限高(AnonymousEUROPEANCommitteeforStandardization.Foodstuffs.EN1785，1996b)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法。本發(fā)明所提供的測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法是將輻照樣品加入以硅膠為填料的層析柱，用正己烷為第一部分洗脫劑，洗脫中性碳?xì)浠衔镫s質(zhì)，以體積百分含量為1一2%的乙醚的正己烷溶液為第二部分洗脫劑洗脫2-十二烷基環(huán)丁酮，回收含有2-十二烷基環(huán)丁酮的所述第二部分洗脫劑的洗脫液，然后測(cè)定2-十二垸基環(huán)丁酮的含量。所述方法中，所述第二部分洗脫劑為體積百分含量為1%的乙醚的正己垸溶液。所述方法中，所述的硅膠為活化后的硅膠加入重量含量為0-8%的超純水去活化得到的硅膠(硅膠中水的百分含量為0-8%，即去活化程度為0-8%);所述的硅膠優(yōu)選為活化后的硅膠加入重量含量為4%的超純水去活化得到的去活化硅膠(硅膠中水的百分含量為4%，即去活化程度為4%)。所述硅膠顆粒的大小為100-200目。所述方法中，所述輻照樣品過(guò)柱之前用正己垸溶解。所述方法中，所述第一部分洗脫劑的用量為3倍柱體積以上；所述第二部分洗脫劑的用量為10倍柱體積以上；所述收集洗脫液的量為第6-10倍柱體積。所述方法中，所述上樣前，先用潤(rùn)洗溶劑潤(rùn)洗；所述潤(rùn)洗溶劑的用量為二倍的柱體積；所述潤(rùn)洗溶劑為正己烷。所述方法中，所述分離過(guò)程中，所述第一部分洗脫劑的洗脫速度為2ml/min。所述方法中，所述分離過(guò)程中，所述第二部分洗脫劑的洗脫速度為2ml/min。所述方法中，所述測(cè)定2-十二烷基環(huán)丁酮的含量是用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。色譜條件為T(mén)e-5毛細(xì)管柱(30mx0.25mmx0.25pm);載氣He，1.0ml'min";不分流，柱前恒壓35kPa;進(jìn)樣量2^1;進(jìn)樣口溫度25(TC，接口溫度28(TC，起始柱溫120°C，保持1min，以15°C/min至160°C，無(wú)保留；再以0.5°C/min至175°C，無(wú)保留；再以30。C/min至290。C，保留10min，檢測(cè)溫度25(TC。采用外標(biāo)法，用正己烷準(zhǔn)確配置濃度梯度為0.01、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、1.50和2.00mg/L的2-DCB標(biāo)準(zhǔn)溶液。質(zhì)譜條件離子源溫度25(TC，電離方式EI，電子能量70eV，全掃描(SCAN)質(zhì)量范圍40-250amu;選擇離子檢測(cè)(SIM)選擇的質(zhì)量碎片m/z:98、112。本發(fā)明的方法采用價(jià)格低廉的硅膠柱分離待測(cè)物，以氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)。并對(duì)洗脫劑濃度、硅膠活化程度、收集時(shí)間及氣質(zhì)色譜條件等技術(shù)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的方法對(duì)2—十二烷基環(huán)丁酮標(biāo)準(zhǔn)品的最低檢出限為0.005mg/L，不同濃度的添加回收率為75.9-103.9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于5.7%。本發(fā)明的方法利用硅膠層析柱分離提取，并用氣質(zhì)聯(lián)用定量分析檢測(cè)2-DCB法，對(duì)輻照樣品中的2-DCB分離效果良好，檢出限、精密度和回收率均達(dá)到輻照樣品分析檢測(cè)的要求。與EN1785方法比較，該方法具有提取效率高，承載樣品量大，檢出限低，成本低、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。圖1為不同洗脫劑分離的2-DCB質(zhì)譜圖離子比率檢測(cè)結(jié)果；圖1中，A為2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)譜圖，B為EN1785方法分離的2-DCB質(zhì)譜圖，C為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，D為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為2%的乙醚的正己垸溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖。圖2為不同活化程度的硅膠分離的2-DCB質(zhì)譜圖離子比率檢測(cè)結(jié)果；圖2中，A為2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)譜圖，B為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，C為硅膠柱方法，硅膠活化程度O，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1%的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，D為硅膠柱方法，硅膠活化程度8%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖。圖3為不同方法回收的2-DCB的選擇離子m/z=98,112色譜圖；圖3中A為1.0mg/L2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖；B為未輻照樣品色譜圖；C為輻照樣品(10kGy)，EN1785方法回收的2-DCB色譜圖；D為輻照樣品(10kGy)，本發(fā)明硅膠柱方法回收的2-DCB色譜圖。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中的百分含量，如無(wú)特別說(shuō)明，均為質(zhì)量百分含量。下述實(shí)施例中使用的儀器和主要試劑PolarisQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)熱電公司)；擴(kuò)口玻璃層析柱(1.8x30cm，上海錦華層析設(shè)備廠)；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；MettlerAE240電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；馬弗爐(天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司)；正己垸(天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司)；無(wú)水乙醚(分析純，北京化學(xué)試劑公司)；佛羅里硅土(60目，Sigma);硅膠(150目，青島海洋化工廠)；2-十二烷基環(huán)丁酮標(biāo)樣(Sigma-Aldrich)。實(shí)施例1、一種定量測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法的優(yōu)化本發(fā)明的方法用價(jià)格低廉的硅膠柱分離待測(cè)物，以氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)。下述步驟為對(duì)洗脫劑溶劑比例、硅膠活化程度、收集時(shí)間及氣質(zhì)色譜條件等技術(shù)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并測(cè)定該方法的回收率、檢出限及精密度等指標(biāo)，建立本發(fā)明的2-DCB的定量分析方法。一、洗脫劑成分及其比例的優(yōu)化Horvarovich等(2006)報(bào)道(HorvatovichP,WernerD,JungS,etal.Determinationof2-alkylcyclobutanoneswithelectronicimpactandchemicalionizationgaschromatography/massspectrometry(GC/MS)inirradiatedfoods.Jowrna/朋dFoot/C/^脂Wr;;，2006，54(6):1990-1996)用硅膠柱分離輻照樣品中的2-DCB，其中第二部分洗脫劑采用的是1。/。甲基-叔-丁醚(methyl-t-butylether,TBME)/正己烷(v/v;混合溶劑。而乙醚與TBME的極性相似，極性參數(shù)均在2.8左右，且乙醚價(jià)格低廉，因此采用乙醚的正己垸溶液為第二部分洗脫劑。1、樣品輻照將商業(yè)純棕櫚酸(純度99%，Sigma-Aldrich)用6()0^輻照源(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所)，劑量率為0.5kGy/h，輻照溫度25士2。C進(jìn)行輻照，輻照劑量為3kGy。吸收劑量采用重鉻酸銀劑量計(jì)標(biāo)定，該劑量計(jì)與中國(guó)計(jì)量科學(xué)院比對(duì)(NDAS)，劑量測(cè)量誤差<±3%。2、去活化硅膠的制備置硅膠(150，青島海洋化工廠)于10(TC烘箱活化12h。在干燥器中冷卻后，硅膠中加入重量百分比為4%的超純水以去活化，使硅膠中水的重量百分含量為4%，轉(zhuǎn)入三角瓶并封口。振搖此混合物至少15min，直至不含結(jié)塊并能自由流動(dòng)。去活化硅膠于干燥器中平衡12h備用，并且在三日內(nèi)是穩(wěn)定的，隨時(shí)可用。3、硅膠柱對(duì)2-十二烷基環(huán)丁酮的分離樣品處理過(guò)程是先用正己烷(天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司)(第一部分洗脫劑)將其中的中性碳?xì)浠衔锍?，再用弱極性的乙醚和正己垸混合溶劑將稍強(qiáng)極性的2-DCB洗脫下來(lái)。乙醚與正己烷的體積比，決定著混合洗脫劑的極性。在歐盟EN1785標(biāo)準(zhǔn)方法中，選擇的第二部分洗脫劑為體積百分濃度為2%的乙醚的正己烷溶液。按照下述步驟對(duì)比體積百分濃度為1X或2X的乙醚的正己烷溶液對(duì)2-DCB的分離效果取兩份30g步驟2制備的去活化硅膠，分別加入正己垸浸泡并攪拌均勻，然后分別勻速裝入1個(gè)擴(kuò)口玻璃層析柱(1.8x30cm,上海錦華層析設(shè)備廠)，頂部加入lcm無(wú)水NaS04(用之前在55(TC灼燒5h去雜質(zhì))。先以2倍柱體積的正己烷淋洗柱子，然后將兩份0.35g步驟1制備的輻照樣品分別完全溶于10ml左右正己烷中，分別加入上述制備的硅膠柱。先用150ml正己烷(第一部分洗脫劑)以2ml/min的速度淋洗層析柱，并將棄去洗脫液，再分別用500ml體積百分濃度為1。/。的乙醚的正己烷溶液或用500ml體積百分濃度為2%的乙醚的正己烷溶液(第二部分洗脫劑)以2ml/min的速度洗脫，收集最后的250ml洗脫液，用RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)于35"C分別濃縮至5ml左右，進(jìn)一步分別用氮?dú)鉂饪s至0.5ml。另外將0.35g步驟1制備的輻照樣品采用EN1785Florisil柱方法分離樣品中2-DCB，方法按照文獻(xiàn)(AnonymousEUROPEANCommitteeforStandardization.Foodstuffs.EN1785，1996b)方法進(jìn)行(歐盟EN1785標(biāo)準(zhǔn)方法)。用PolarisQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)熱電公司)檢測(cè)上述回收得到的2-DCB的濃度和質(zhì)譜圖離子比率，色譜條件為T(mén)e-5毛細(xì)管柱(30mx0.25mmx0.25pm);載氣He，l.Ombmin1;不分流，柱前恒壓35kPa;進(jìn)樣量2^1;進(jìn)樣口溫度25(TC，接口溫度280。C，起始柱溫12(TC，保持lmin，以15°C/min至16(TC，無(wú)保留；再以0.5°C/min至175°C，無(wú)保留；再以30°C/min至290°C，保留10min，檢測(cè)溫度250°C。采用外標(biāo)法，用正己烷準(zhǔn)確配置濃度梯度為0,01、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、1.50和2.00mg/L的2-DCB標(biāo)準(zhǔn)溶液。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。質(zhì)譜條件離子源溫度25(TC，電離方式EI，電子能量70eV，全掃描(SCAN)質(zhì)量范圍40-250amu;選擇離子檢測(cè)(SIM)選擇的質(zhì)量碎片m/z:98、112。樣品中2-DCB通過(guò)與2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間和離子比率相比較定性，通過(guò)峰面積定量。上述收集得到的2-DCB的濃度檢測(cè)結(jié)果表明如表1所示，結(jié)果表明，利用體積百分濃度為2%的乙醚的正己垸溶液和體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液做為洗脫劑，分離提取2-DCB的量沒(méi)有顯著差異(表l)。表1.洗脫劑乙醚的正己垸溶液體積百分比濃度對(duì)2-DCB分離效果的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>質(zhì)譜圖離子比率檢測(cè)結(jié)果如圖l所示，結(jié)果表明，上述硅膠柱分離2-DCB的方法，乙醚/正己烷洗脫劑濃度為1%時(shí)，形成m/z^98和112的離子碎片，二者比率約為6.4:1(圖1中C)，濃度為2%時(shí)，形成111/2=98和112的離子碎片的比率約為4.3:K圖1中D)。2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品形成m/z二98和112的離子碎片的比約為6.0-6.5:1(圖1中A);采用EN1785Florisil柱方法獲得的2-DCB形成m/z=98和112的離子碎片的比約為6.25:1(圖1中B)。Stewart等人研究在電子碰撞電離質(zhì)譜分析過(guò)程中，2-DCB亦形成m/z:98和112的離子碎片，二者的比接近4.0-4.5:1(StewartEM，MooreS,McRobertsWC，etal,Isolationoflipidand2-alkylcyclobutanonesfromirradiatedfoodsbysupercriticalfluidextraction.Jownw/0/JC14C/ter"af/owa/,2001,84(3):976-986)。圖l中，A為2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)譜圖，B為EN1785方法分離的2-DCB質(zhì)譜圖，C為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1X的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，D為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為2%的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖。因此從離子比率來(lái)看，洗脫劑為體積百分濃度為1%乙醚的正己烷溶液時(shí)，2-DCB色譜峰的質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)樣品的匹配度較高，且達(dá)到EN1785方法分離的效果，因此洗脫劑優(yōu)選采用體積百分濃度為1%乙醚的正己烷溶液。二、硅膠去活化程度對(duì)2-DCB分離效果的影響硅膠去活化程度，嚴(yán)重影響硅膠的吸附作用。按照下述步驟對(duì)比硅膠的去活化程度0%、4%和8%(水的質(zhì)量百分含量)對(duì)2-DCB分離效果的影響。1、去活化硅膠的制備置硅膠(150目，青島海洋化工廠)于10(TC烘箱活化12h。取3份上述活化后的硅膠，分別在干燥器中冷卻后，分別加入重量百分比為0、4%或8%的超純水去活化，分別轉(zhuǎn)入三角瓶并封口。振搖此混合物至少15min，直至不含結(jié)塊并能自由流動(dòng)即得到去活化程度為O、4%或8%的硅膠。去活化硅膠于干燥器中平衡12h備用，且在三日內(nèi)是穩(wěn)定的，隨時(shí)可用。2、不同去活化程度硅膠對(duì)2-十二烷基環(huán)丁酮的分離按照步驟一中的步驟1的方法制備輻照樣品，其中輻照劑量為12kGy。樣品處理過(guò)程是先用正己烷(天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司)將其中的中性碳?xì)浠衔锍?。分別取30g步驟1制備的去活化程度為0、4%或8%的去活化硅膠，分別加入正己烷浸泡并攪拌均勻，然后分別勻速裝入1個(gè)擴(kuò)口玻璃層析柱U.8x30cm，上海錦華層析設(shè)備廠)，頂部加入lcm無(wú)水NaS04(用之前在550。C灼燒5h去雜質(zhì))。先以2倍柱體積的正己烷淋洗柱子，然后分別將0.35g按照步驟一中的步驟1的方法制備輻照樣品(其中輻照劑量為12kGy)，分別完全溶于10ml的正己烷中，分別加入上述制備的硅膠柱。然后，先用150ml正己烷(第一部分洗脫劑)以2ml/min的速度淋洗層析柱，并棄去洗脫劑，再分別用500ml體積百分濃度為1%的乙醚的正己烷溶液(第二部分洗脫劑)以2ml/min的速度洗脫，收集最后的250ml洗脫劑，用RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)于35。C分別濃縮至5ml左右，進(jìn)一步分別用氮?dú)鉂饪s至0.5ml。用GC-MS色譜按照步驟一的步驟3的方法檢測(cè)上述收集得到的2-DCB的濃度和質(zhì)譜圖離子比率。上述收集得到的2-DCB的濃度檢測(cè)結(jié)果表明如表2所示，結(jié)果表明，硅膠采用加入質(zhì)量百分比為4%的超純水去活化(水的重量百分含量為4%)，對(duì)分離提取2-DCB效果最好，提取率最高(表2)。上述收集得到的2-DCB的質(zhì)譜圖如圖2所示，采用加入質(zhì)量百分比為4%的超純水去活化(水的重量百分含量為4%)的硅膠填料分離的2-DCB與標(biāo)準(zhǔn)樣品的匹配度最高。圖2中，A為2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)譜圖，B為硅膠柱方法，硅膠活化程度4%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1X的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，C為硅膠柱方法，硅膠活化程度0%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1X的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖，D為硅膠柱方法，硅膠活化程度8%，第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1X的乙醚的正己烷溶液分離的2-DCB質(zhì)譜圖。表2.硅膠去活化程度對(duì)2-DCB分離效果的影響棕櫚酸樣品條件測(cè)定的2-DCB量變異系數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>三、收集時(shí)間的確定按照步驟二的方法，以裝有30g去活化程度為4X(水的重量百分含量為4%)的去活化硅膠的擴(kuò)口玻璃層析柱(1.8x30cm，上海錦華層析設(shè)備廠)(柱體積為50ml左右)層析收集0.35g按照步驟1的方法制備的輻照樣品(其中輻照劑量為12kGy)中的2-DCB。層析分離過(guò)程中，當(dāng)?shù)诙糠窒疵搫?體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液)開(kāi)始淋洗時(shí)，每50ml收集一次，然后分別濃縮測(cè)定。結(jié)果表明最后的250ml洗脫液(第6—10柱體積)中含有目標(biāo)檢測(cè)物2-DCB，即收集該洗脫液作為濃縮檢測(cè)濃度的溶液。四、硅膠柱一氣質(zhì)聯(lián)用定量分析2-DCB方法評(píng)價(jià)1、標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限用正己烷準(zhǔn)確配置濃度梯度為0.01、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、1.50和2.00mg/L的2-DCB標(biāo)準(zhǔn)溶液。PolarisQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)熱電公司)進(jìn)行檢測(cè)，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。色譜條件為T(mén)e-5毛細(xì)管柱(30mx0.25mmx0.25pm);載氣He，1.0ml'min";不分流，柱前恒壓35kPa;進(jìn)樣量2pl;進(jìn)樣口溫度25(TC，接口溫度28(TC，起始柱溫120。C，保持lmin，以15°C/min至160。C，無(wú)保留；再以0.5°C/min至175。C，無(wú)保留；再以30°C/min至290。C，保留10min,檢測(cè)溫度25(TC。質(zhì)譜條件離子源溫度250'C，電離方式EI，電子能量70eV，全掃描(SCAN)質(zhì)量范圍40-250amu;選擇離子檢觀a(SIM)選擇的質(zhì)量碎片m/z:98、112。樣品中2-DCB通過(guò)與2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間和離子比率相比較定性，通過(guò)峰面積定量。結(jié)果表明，2-DCB的回歸方程為:Y=157834X-987.08，相關(guān)系數(shù)r2=0.9991，因此2-DCB在0.01-2.00mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。聲噪比(S/N&4時(shí)為檢出限，S/N^10時(shí)為定量限。本方法的最低檢出限是0.005mg/L，定量限為0.01mg/L。2、精密度取O.l、1.0、2.0mg/L三種不同濃度的2-DCB標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照步驟1的方法檢測(cè)濃度，連續(xù)自動(dòng)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積值，計(jì)算不同濃度2-DCB的日內(nèi)精密度RSD，分別為1.3%、0.4%、3.2%;連續(xù)3天進(jìn)樣，每天進(jìn)樣5次，以每天測(cè)得的峰面積平均值計(jì)算日間精密度RSD，分別為7.2%、6.5%、4.6%。3、穩(wěn)定性將按照步驟一中步驟3的方法用去活化程度為4%的硅膠為填料的層析柱，體積百分濃度為1%的乙醚的正己烷溶液為第二部分洗脫劑分離、回收、定容好的2-DCB樣品，置4土rC冰箱貯存。在第O、3、6、12、24h分別按照步驟1的方法檢測(cè)濃度，記錄峰面積，結(jié)果5次進(jìn)樣2-DCB峰面積RSD為8.3%，說(shuō)明樣品溶液中2-DCB在所測(cè)定的24h內(nèi)基本穩(wěn)定。由于所用溶劑為正己烷，揮發(fā)性較強(qiáng)，樣品處理好以后，應(yīng)盡快測(cè)定。4、重復(fù)性重復(fù)取0.35g輻照相同劑量(12kGy)的棕櫚酸樣品5份，按照步驟一中步驟3的方法用去活化程度為4%的硅膠為填料的層析柱，體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液為第二部分洗脫劑進(jìn)行分離回收，將回收樣品按照步驟1的方法檢測(cè)濃度，記錄峰面積，每次都從取樣開(kāi)始至測(cè)定完成。結(jié)果樣品處理的RSD為2.6。/。，說(shuō)明本發(fā)明的方法的重復(fù)性良好。5、回收率取三份未輻照棕櫚酸樣品0.35g，分別溶于10ml正己烷，分別添加O.l、1.0和2.0mg/L的2-DCB標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，按照步驟一中步驟3所述的以去活化硅膠柱，體積百分濃度為1%的乙醚的正己垸溶液為第二部分洗脫劑的方法分離、回收2-DCB，并用PolarisQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀按照步驟一中步驟3所述方法進(jìn)行測(cè)定計(jì)算2-DCB峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)曲線中相應(yīng)面積比較，計(jì)算回收率，每個(gè)濃度重復(fù)5次。結(jié)果表明0.1、1.0和2.0mg/L三種濃度2-DCB的回收率分別為75.9%、97.0%、103.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于4.5%，說(shuō)明2-DCB在0.1-2.0mg/L濃度范圍內(nèi)，用本發(fā)明的方法可基本分離提取完全。五、本發(fā)明的方法與歐盟標(biāo)準(zhǔn)方法EN1785比較按照步驟一的步驟1制備棕櫚酸(純度99%，Sigma-Aldrich)輻照樣品，其中輻照劑量為10kGy。分別取0.3g和0.5g輻照樣品，分別按照本發(fā)明的方法分離回收2-DCB;本發(fā)明的方法即為按照步驟一所述的第二部分洗脫劑為體積百分濃度為1%的乙醚的正己烷溶液的方法進(jìn)行分離回收。另外將0.3g和0.5g上述制備的輻照樣品采用EN1785Florisil柱方法分離樣品中2-DCB，方法按照文獻(xiàn)(AnonymousEUROPEANCommitteeforStandardization.Foodstuffs.EN1785,1996b)方法進(jìn)行(歐盟EN1785標(biāo)準(zhǔn)方法)。以未輻照樣品為對(duì)照。將上述方法收集的2-DCB，按照步驟一的步驟3的方法用PolarisQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)熱電公司)檢測(cè)2-DCB濃度及其離子色譜圖和質(zhì)譜圖。本發(fā)明的方法和歐盟EN1785標(biāo)準(zhǔn)方法回收的2-DCB濃度結(jié)果如表3所示，選擇離子色譜圖如圖3所示，結(jié)果表明未輻照樣品中沒(méi)有檢測(cè)到2-DCB;當(dāng)樣品量小于0.35g時(shí)，本發(fā)明的硅膠層析柱方法可以達(dá)到EN1785方法的提取效果，且質(zhì)譜圖的離子比率與標(biāo)準(zhǔn)樣品的匹配度更高；當(dāng)樣品量增大時(shí)，EN1785方法用Florisil柱的分離提取效果變差，而硅膠層析柱方法可以承載更大的樣品量。因?yàn)楸景l(fā)明的硅膠層析柱方法可以承載更大的樣品量，就有可能降低檢測(cè)輻照樣品的劑量檢測(cè)限，做到更低劑量輻照的食物都可以鑒定，這需要進(jìn)一步研究。圖3中A為1.0mg/L2-DCB標(biāo)準(zhǔn)樣品；B為未輻照樣品；C為輻照樣品(10kGy)，EN1785方法回收的2-DCB;D為輻照樣品(10kGy)，本發(fā)明硅膠柱方法回收的2-DCB。表3.硅膠層析柱方法與歐盟標(biāo)準(zhǔn)EN1785方法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)驗(yàn)分析與結(jié)論上述實(shí)例的實(shí)驗(yàn)采用棕櫚酸為試驗(yàn)材料，更為直觀的反映了2-DCB的產(chǎn)生。未輻照的棕櫚酸，經(jīng)過(guò)相同的處理并沒(méi)有檢測(cè)到2-DCB(圖3中B)，而經(jīng)過(guò)不同劑量輻照的棕櫚酸均產(chǎn)生了2-DCB。選擇合適的洗脫劑、硅膠去活化程度和收集時(shí)間是建立2-DCB硅膠柱提取分析方法的前提。通過(guò)分析1%、2%乙醚/正己烷洗脫劑和0、4%、8%去活化程度的硅膠對(duì)分離提取2-DCB效果的影響，確定1%乙醚/正己烷混合洗脫劑和4%去活化程度的硅膠分析效果最好，質(zhì)譜圖離子比率與標(biāo)準(zhǔn)2-DCB樣品的匹配度最高。通過(guò)分步收集洗脫劑，500ml洗脫劑洗脫時(shí)，確定最后的250ml(第6—10柱體積)洗脫劑含有目標(biāo)檢測(cè)物2-DCB。色譜和質(zhì)譜條件參照Kim等(2004)(KimKS，LeeJM,SeoHY,etal.Radiolyticproductsofirradiatedauthenticfattyacidsandtriacylglycerides.i^.fl"ow尸一/csawt/C/z謹(jǐn)勿，2004,71(l-2):45-49)的方法，并力口以改進(jìn)。通過(guò)以上試驗(yàn)結(jié)果，建立了硅膠層析柱分離提取-氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)2-DCB的定量分析方法，結(jié)果表明，該方法具有很低的檢出限和定量限。當(dāng)樣品量低時(shí)，硅膠層析柱與Florisil層析柱的分離效果沒(méi)有顯著差異，但當(dāng)樣品量大于0.35g時(shí)，F(xiàn)lorisil層析柱的分離效果變差，本發(fā)明的方法用硅膠層析柱的樣品承載量可達(dá)0.5g以上。因此硅膠柱分析含脂輻照食品更具優(yōu)勢(shì)，因?yàn)槌休d較大的樣品量，檢測(cè)輻照食品的最低劑量檢測(cè)限就可以降低。采用濕法裝柱Florisil柱比較難驅(qū)除空氣，導(dǎo)致難于控制流速，分離效果下降，因此硅膠柱更易操作。雖然該方法比EN1785方法多消耗130。/。溶劑，相應(yīng)地前處理時(shí)間也延長(zhǎng)，但層析柱填料換作硅膠后，試驗(yàn)成本降低了近90%。本發(fā)明的方法利用硅膠層析柱分離提取，并用氣質(zhì)聯(lián)用定量分析檢測(cè)2-DCB法，對(duì)輻照樣品中的2-DCB分離效果良好，檢出限、精密度和回收率均達(dá)到輻照樣品分析檢測(cè)的要求。與EN1785方法比較，該方法具有提取效率高，承載樣品量大，檢出限低，成本低等優(yōu)點(diǎn)。權(quán)利要求1、一種測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法，是將輻照樣品加入以硅膠為填料的層析柱，用正己烷為第一部分洗脫劑，洗脫中性碳?xì)浠衔镫s質(zhì)，以體積百分含量為1-2％的乙醚的正己烷溶液為第二部分洗脫劑洗脫2-十二烷基環(huán)丁酮，回收含有2-十二烷基環(huán)丁酮的所述第二部分洗脫劑的洗脫液，然后測(cè)定2-十二烷基環(huán)丁酮的含量。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于含量為1%的乙醚的正己烷溶液。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于0-8%。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于%。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于溶解。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于目。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于倍柱體積以上；所述第二部分洗脫劑的用量為IO倍柱體積以上。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述分離過(guò)程中，所述第一部分洗脫劑的洗脫速度為2ml/min。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述分離過(guò)程中，所述第二部分洗脫劑的洗脫速度為2ml/min。10、根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述測(cè)定2-十二烷基環(huán)丁酮的含量是用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。所述第二部分洗脫劑為體積百分:所述的硅膠中水的重量含量為:所述的硅膠中水的重量含量為4所述輻照樣品過(guò)柱之前用正己垸:所述硅膠顆粒的大小為100-200:所述第一部分洗脫劑的用量為全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定輻解產(chǎn)物2-十二烷基環(huán)丁酮的方法。該方法，是將輻照樣品加入以硅膠為填料的層析柱，用正己烷為第一部分洗脫劑，洗脫中性碳?xì)浠衔镫s質(zhì)，以體積百分含量為1-2％的乙醚的正己烷溶液為第二部分洗脫劑洗脫2-十二烷基環(huán)丁酮，回收含有2-十二烷基環(huán)丁酮的所述第二部分洗脫劑的洗脫液，然后測(cè)定2-十二烷基環(huán)丁酮的含量。本發(fā)明的方法利用硅膠層析柱分離提取，并用氣質(zhì)聯(lián)用定量分析檢測(cè)2-DCB法，對(duì)輻照樣品中的2-DCB分離效果良好，檢出限、精密度和回收率均達(dá)到輻照樣品分析檢測(cè)的要求。與EN1785方法比較，該方法具有提取效率高，承載樣品量大，檢出限低，成本低等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)G01N30/32GK101251516SQ20081010286公開(kāi)日2008年8月27日申請(qǐng)日期2008年3月27日優(yōu)先權(quán)日2008年3月27日發(fā)明者周洪杰,哈益明,張海偉,鋒王,芳謝申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所