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      一種β-葡聚糖肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:3554554閱讀:683來源:國知局
      專利名稱:一種β-葡聚糖肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種由灰樹花菌絲體制備β-葡聚糖肽的方法及其在免疫調(diào)節(jié)和抗癌中的應(yīng)用。
      背景技術(shù)
      灰樹花(Grifola.frondosa)屬于擔子菌綱,多孔菌屬,擔子菌,為名貴食用和藥用真菌,利用液體發(fā)酵工藝可以獲得大量灰樹花菌絲體。研究表明,灰樹花多糖具有廣泛的藥理活性,但從灰樹花子實體和發(fā)酵菌絲體中制備的多糖具有不同的結(jié)構(gòu),在不同的培養(yǎng)條件下得到的灰樹花多糖的結(jié)構(gòu)也有差別;結(jié)構(gòu)不同,活性也不同。在一中國專利(CN1398898A)中,披露了一種灰樹花子實體多糖肽的制備方法,該方法采用水提取、酸提取、堿提取以及乙醇沉淀獲得多糖肽,所得到的多糖肽中雜蛋白采用氯仿-正丁醇混合溶液(Sevag)法,三氯乙酸法和酶盒法處理,其糖鏈以β-1,3-糖苷鍵為主;在另一專利(CN1398979A)中,披露了一種灰樹花多糖肽的生產(chǎn)方法,該方法采用熱水提取和乙醇沉淀得到多糖肽,該糖肽也是一種混合物,未經(jīng)進一步分離,且其糖鏈結(jié)構(gòu)不確定。目前,從灰樹花中制備β-葡聚糖肽還缺乏有效的方法,并且所得到的產(chǎn)品純度不高,還不能有效地用作免疫調(diào)節(jié)劑和抗癌劑。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是提供一種以灰樹花發(fā)酵菌絲體為原料制備出一種結(jié)構(gòu)上有新特點的β-葡聚糖肽,以彌補現(xiàn)有技術(shù)的上述不足。
      一種β-葡聚糖肽,其特征是它的糖鏈以β-1,6-葡聚糖為主鏈,β-1,3-葡聚糖為支鏈。
      一種β-葡聚糖肽的制備方法,其特征是將灰樹花菌絲體用乙醇脫脂,用熱水提取,用堿提取,用酸中和,超濾濃縮脫鹽,用乙醇沉淀,再經(jīng)柱色譜分離,用鹽溶液梯度洗脫,按洗脫峰收集合并,并超濾濃縮脫鹽、干燥。
      β-葡聚糖肽用作免疫調(diào)節(jié)劑。
      β-葡聚糖肽用作抗腫瘤劑。
      本發(fā)明一次分離即可容易除去其中的雜蛋白、雜多糖和其它雜質(zhì)得到高純度β-葡聚糖肽,大大簡化了操作并提高了β-葡聚糖肽的制備速度與得率,同時也避免了采用酶法容易破壞β-葡聚糖肽中肽鏈結(jié)構(gòu)的缺點,該產(chǎn)品具有免疫調(diào)節(jié)和抗癌活性。
      附圖表說明附

      圖1為本發(fā)明制備的β-葡聚糖肽的紅外光譜圖。
      附圖2為本發(fā)明制備的β-葡聚糖肽的13C-NMR譜圖從圖1可以看出,本發(fā)明的產(chǎn)品在3382cm-1處為O-H的伸縮振動吸收峰,且存在分子間氫鍵,2894cm-1處為糖環(huán)上C-H振動峰,1631cm-1和1413cm-1處為糖肽中酰胺(-NH-CO-)鍵吸收峰,1075-1180cm-1處三個峰為吡喃葡萄糖特征吸收峰,896cm-1為葡萄糖端基βC-H的變角振動特征吸收峰,由此可以證明該產(chǎn)品為β-葡聚糖肽。
      從圖2可知,所得β-葡聚糖肽中糖鏈的13C-NMR信號歸屬如下103.6ppm和103.2ppm為βC1→取代信號峰;86.9ppm和86.3ppm為βC3→取代信號峰;70.4ppm為βC6→取代信號峰;76.5ppm,68.6ppm,和76.7ppm分別為未取代C3,C4,C5信號峰。
      具體實施例方式
      向100克灰樹花菌絲體中加入1000毫升濃度為95%的乙醇水溶液,80℃提取2小時,離心收集沉淀,然后向該沉淀中加入1500毫升蒸餾水,于100℃回流提取2小時,離心收集沉淀,然后向該沉淀中加入1000毫升5%(重量百分比,下同)NaOH水溶液,于4℃攪拌提取6小時,離心收集清液,該清液用醋酸中和并離心收集上清液,將后者超濾濃縮、脫鹽,加入無水乙醇使乙醇濃度為85%,離心收集沉淀,該沉淀進一步用Q-Sepharose FF柱色譜分離,用含有氯化鈉(pH7)的水溶液進行梯度洗脫,得到β-葡聚糖肽,它的分子量1萬-20萬道爾頓,其中總糖含量65%-98%,肽含量35-2%。
      本發(fā)明中所述的95%乙醇可以是75%-95%的乙醇;所述的NaOH可該用KOH,濃度可以是2%-20%,堿液提取溫度可以是-5℃-75℃,堿液提取時間可以是2-24小時。所述的醋酸中和可以用稀鹽酸或者稀硫酸;所述的Q-Sepharose FF可以改用DOWEX MSA-1或者DEAE-Sephacel。
      用本發(fā)明的產(chǎn)品按現(xiàn)有的方法對小鼠作了免疫調(diào)節(jié)和抗癌活性實驗,結(jié)果如表1和表2所示。表1為β-葡聚糖肽對小鼠免疫器官的影響,表2為β-葡聚糖肽對小鼠抑瘤率的影響。從表1和表2實驗結(jié)果可以看出,本發(fā)明的β-葡聚糖肽能明顯提高荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù),抑瘤率達73%,具有明顯的提高免疫和抗癌活性。
      表1 β-葡聚糖肽對小鼠免疫器官的影響

      表2 β-葡聚糖肽對小鼠抑瘤率的影響

      權(quán)利要求
      1 一種β-葡聚糖肽,其特征是它的糖鏈中以β-1,6-葡聚糖為主鏈,β-1,3-葡聚糖為支鏈。
      2 一種β-葡聚糖肽的制備方法,其特征是將灰樹花菌絲體用乙醇脫脂,用熱水提取,用堿提取,用酸中和,超濾濃縮脫鹽,用乙醇沉淀,再經(jīng)柱色譜分離,用鹽溶液梯度洗脫,按洗脫峰收集合并,并超濾濃縮脫鹽、干燥。
      3 如權(quán)利要求2所述的方法,其特征是所述的堿為NaOH或者KOH。堿提取濃度為2-20%,堿液提取的溫度-5-75℃,堿提取的時間為2-24小時;所述的酸可以是稀醋酸,稀鹽酸或稀硫酸。
      4 如權(quán)利要求2所述的方法,其特征是所述的柱色譜分離填料為DOWEX MSA-1,Q-Sepharose F.F或者DEAE-Sephacel,洗脫用的鹽溶液為含氯化鈉的水溶液,采用梯度洗脫,并用紫外監(jiān)測器檢測。
      5 β-葡聚糖肽用作免疫調(diào)節(jié)劑。
      6 β-葡聚糖肽用作抗腫瘤劑。
      全文摘要
      一種β-葡聚糖肽,其特征是它的糖鏈中以β-1,6-葡聚糖為主鏈,β-1,3-葡聚糖為支鏈。制備時將灰樹花菌絲體用乙醇脫脂,用熱水提取,用堿提取,用酸中和,超濾濃縮脫鹽,用乙醇沉淀,再經(jīng)柱色譜分離,用鹽溶液梯度洗脫,按洗脫峰收集合并,并超濾濃縮脫鹽、干燥。本發(fā)明一次分離即可容易除去其中的雜蛋白、雜多糖和其它雜質(zhì)得到高純度β-葡聚糖肽,大大簡化了操作并提高了β-葡聚糖肽的制備速度與得率,同時也避免了采用酶法容易破壞β-葡聚糖肽中肽鏈結(jié)構(gòu)的缺點。該產(chǎn)品可用于制備免疫調(diào)節(jié)劑和抗癌藥物。
      文檔編號C07K1/00GK1663959SQ200410023840
      公開日2005年9月7日 申請日期2004年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月27日
      發(fā)明者于廣利, 徐澤平, 趙峽, 李春林 申請人:中國海洋大學(xué), 徐澤平
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