專利名稱：：具有延長(zhǎng)目標(biāo)肽的血漿半衰期作用的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種肽，其通過改善目標(biāo)肽的體內(nèi)動(dòng)態(tài)而賦予適于治療目的的體內(nèi)動(dòng)態(tài)，從而在治療上有用，另外涉及體內(nèi)動(dòng)態(tài)被改善且具有目標(biāo)肽的生理活性的復(fù)合肽、包含該復(fù)合肽的藥物組合物、和該復(fù)合肽的制造方法。
背景技術(shù)：
：即便存在能作為藥物應(yīng)用的生理活性肽，在該肽中具有血漿半衰期較短的物質(zhì)，在應(yīng)用于治療目的時(shí)，需要通過向靜脈內(nèi)或皮下持續(xù)投與、或投與持續(xù)釋放型DDS制劑等而得以實(shí)現(xiàn)。因此，在實(shí)際應(yīng)用中需要長(zhǎng)期花費(fèi)大量的時(shí)間和費(fèi)用。例如，作為延長(zhǎng)生理活性肽的血漿半衰期而作為藥物開發(fā)的例子，已知胰高血糖素樣肽-KGlucagon-likePeptide-1)的例子(非專利文獻(xiàn)1)。用于明確生理活性肽的作用的臨床研究大多使用了持續(xù)靜脈內(nèi)投與(非專利文獻(xiàn)2)，為了治療II型糖尿病創(chuàng)制了能夠皮下快速濃注的延長(zhǎng)了半衰期的肽。這樣，為了作為實(shí)際的治療藥而進(jìn)行開發(fā)，開發(fā)延長(zhǎng)了半衰期的衍生物是必要的，存在這樣的例子，該例子中，生理活性肽衍生物被化學(xué)合成，或者雖然是異種的天然的肽但開發(fā)了半衰期長(zhǎng)的物質(zhì)(非專利文獻(xiàn)35)。另外，在將半衰期短的生理活性肽作為藥物而進(jìn)行應(yīng)用時(shí)，嘗試了通過與半衰期長(zhǎng)的蛋白質(zhì)結(jié)合，而使生理活性肽的半衰期與該蛋白質(zhì)的半衰期接近，例如在血清白蛋白上介由具有結(jié)合基的間隔物(spacer)而使目標(biāo)生理活性肽與該蛋白質(zhì)結(jié)合等方法正處于試驗(yàn)階段(非專利文獻(xiàn)6)。因此，為了將半衰期短的生理活性肽供于實(shí)用，期待通過附加能夠延長(zhǎng)其半衰期的物質(zhì)而改善體內(nèi)動(dòng)態(tài)，將現(xiàn)有技術(shù)中無(wú)法顯示治療效果的生理活性肽在醫(yī)療中應(yīng)用。至今為止廣泛進(jìn)行了改變短半衰期的生理活性肽，而使其作為藥物應(yīng)用的嘗試，例如嘗試了使肽穩(wěn)定化、對(duì)制劑進(jìn)行鉆研而使其具有持續(xù)性等，已知也有實(shí)用化中成功的例子。另一方面，生長(zhǎng)素釋放肽(Ghrelin)為1999年在胃中發(fā)現(xiàn)的一種激素，其具有由28殘基構(gòu)成的氨基酸序列，其為具有該序列的氨基末端起第3位的氨基酸被脂肪酸?；臉O其少見的化學(xué)結(jié)構(gòu)的肽(非專利文獻(xiàn)6，專利文獻(xiàn)1)。生長(zhǎng)素釋放肽作用于生長(zhǎng)激素促分泌素受體la(GrowthHormoneSecretagogue-Receptorla:GHS_Rla)(非專利文獻(xiàn)7)，為使來(lái)自垂體的生長(zhǎng)激素(GH)的分泌亢進(jìn)的內(nèi)源性的腦-消化道激素(非專利文獻(xiàn)7)。另外，生長(zhǎng)素釋放肽作為針對(duì)GHS-Rla的內(nèi)源性的GHS，首先在大鼠中被分離純化，在大鼠以外的脊椎動(dòng)物、例如人、小鼠、豬、雞、兔、牛、馬、綿羊、青蛙、虹鱒魚、狗等中也分離出了具有類似一級(jí)結(jié)構(gòu)的生長(zhǎng)素釋放肽，它們的氨基酸序列是已知的(專利文獻(xiàn)1，非專利文獻(xiàn)8)。上述生長(zhǎng)素釋放肽均為具有第3位的絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基的側(cè)鏈羥基被辛酸、癸酸等脂肪酸?；傻奶禺惤Y(jié)構(gòu)的肽，除生長(zhǎng)素釋放肽以外，不存在從生物體中分離具有這種疏水性修飾結(jié)構(gòu)的生理活性肽的例子。在最近的研究中，明確了生長(zhǎng)素釋放肽具有亢進(jìn)食欲、通過皮下投與而增加體重和體脂肪(非專利文獻(xiàn)911)、以及改善心臟功能等作用(非專利文獻(xiàn)1214)。此外生長(zhǎng)素釋放肽具有GH分泌促進(jìn)作用和食欲亢進(jìn)作用，期待介由GH的作用燃燒脂肪而使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟芰康淖饔?，或者通過食欲亢進(jìn)進(jìn)一步有效引出表現(xiàn)GH的合成代謝作用而增強(qiáng)肌肉的效果(非專利文獻(xiàn)15)。然而，已經(jīng)表明生長(zhǎng)素釋放肽的活性中心為具有?；腘末端部分(專利文獻(xiàn)1)，目前對(duì)于C末端部分的生理學(xué)意義還有許多問題不明確?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:W001/07475非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1:MojsovS，WeirGC,HabenerJF.JClinInvest.1987,79(2)616-619.非專禾Ij文獻(xiàn)2:NauckMA,HeimesaatMM,OrskovC,HolstJJ,EbertR,CreutzfeldtW.,JClinInvest.1993，91(1)301-307.非專利文獻(xiàn)30'HarteFP,MooneyΜΗ,LawlorA,FlattPR.，BiochimBiophysActa.2000,6；1474(1):13_22·非專禾O文獻(xiàn)4:MadsbadS,Schmitz0,RanstamJ,JakobsenG,MatthewsDR,.DiabetesCare.2004,27(6):1335-1342.5=DeFronzoRA,RatnerRE,HanJ,KimDD,FinemanMS,BaronAD.，DiabetesCare.2005,28(5):1092_1100.非專利文獻(xiàn)6:KimJG,BaggioLL,BridonDP,CastaigneJP,RobitailleMF,JetteL,BenquetC,DruckerDJ.，Diabetes.2003，；52(3):751_759·非專禾丨J文獻(xiàn)7KojimaM,HosodaH,DateY,NakazatoΜ,MatsuoH,KangawaK.,1=Nature.1999,9；402(6762):656_660.非專利文獻(xiàn)8児島將康，寒川賢治，生化學(xué)，第79卷，第9號(hào)，pp.853-867，2007年非專利文獻(xiàn)9=ChoiK,RohSG,HongYH,ShresthaYB,HishikawaD,ChenC,KojimaΜ,KangawaK,SasakiS.,Endocrinology.2003,144(3):754_9·非專利文獻(xiàn)10=Neary匪，SmallCJ,WrenAM,LeeJL,DruceMR,PalmieriC,FrostGS,GhateiMA,CoombesRC,BloomSR.，JClinEndocrinolMetab.2004,89(6)2832-6非專利文獻(xiàn)11AkamizuΤ,IwakuraH,AriyasuH,HosodaH,MurayamaΤ,YokodeΜ,TeramukaiS,SenoH,ChibaΤ,NomaS,NakaiY,FukunagaΜ,NakaiY,KangawaK,FDClinicalStudyTeam.EurJEndocrinol.2008,158(4):491_812NagayaN,KojimaΜ,UematsuΜ,YamagishiΜ,HosodaH,OyaH,HayashiY,KangawaK.,AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol.2001,80(5):R1483_7.非專禾Ij文獻(xiàn)13=NagayaN,MiyatakeK,UematsuΜ,OyaH,ShimizuW,HosodaH,KojimaΜ,NakanishiN,MoriH,KangawaK.，1JClinEndocrinolMetab.2001,86(12)5854-5859.非專禾Ij文獻(xiàn)14=NagayaN,UematsuΜ,KojimaΜ,IkedaY,YoshiharaF,ShimizuW,HosodaH,HirotaY,IshidaH,MoriH,KangawaK.，Circulation.2001,18；104(12)1430-1435非專禾丨J文獻(xiàn)15:KorbonitsΜ,GoldstoneAP,GueorquievΜ,GrossmanAB,FrontNeuroendocrinol.，2004，25:27_68
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的目的在于提供具有延長(zhǎng)由于血漿中的半衰期短而不適合作為藥品的生理活性肽的半衰期的作用的肽，具有目標(biāo)肽的生理活性、且通過血漿半衰期被延長(zhǎng)而能夠作為藥品實(shí)際應(yīng)用的復(fù)合肽，以及該復(fù)合肽的制造方法等。用于解決問題的方案本發(fā)明人等對(duì)血漿中的半衰期短、且為了作為藥品應(yīng)用而必須在靜脈內(nèi)或皮下持續(xù)注入等的、具有目標(biāo)生理活性的肽(以下，稱為目標(biāo)肽)進(jìn)行附加，從而嘗試了開發(fā)一種能夠延長(zhǎng)血漿半衰期的肽，在生長(zhǎng)素釋放肽的氨基酸序列的C末端部分發(fā)現(xiàn)了作為半衰期延長(zhǎng)基序的氨基酸序列。本發(fā)明中，將該具有能夠延長(zhǎng)半衰期的氨基酸序列的肽稱為半衰期延長(zhǎng)肽。S卩，發(fā)現(xiàn)通過將該半衰期延長(zhǎng)肽與目標(biāo)肽(例如，心房鈉尿肽(ANP)、C型鈉尿肽(CNP)、促胃動(dòng)素等)的N末端側(cè)、C末端側(cè)或兩端結(jié)合，從而能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，且延長(zhǎng)血漿中的半衰期。本發(fā)明中，將通過使半衰期延長(zhǎng)肽與目標(biāo)肽結(jié)合而獲得的、可保持該目標(biāo)肽的生理活性、且與該目標(biāo)肽相比血漿中的半衰期延長(zhǎng)了的肽稱為復(fù)合肽。另外，發(fā)現(xiàn)半衰期延長(zhǎng)肽的氨基酸序列不僅在天然的氨基酸序列的情況下能夠使用，而且在將其N末端和C末端反向變換而成的反向序列、或N末端和C末端部分地反向變換而成的序列的情況下也能夠使用。另外，發(fā)現(xiàn)復(fù)合肽對(duì)于分解目標(biāo)肽的酶(例如，NeutralEndopeptidase,中性肽鏈內(nèi)切酶)具有耐性，另外與天然型的目標(biāo)肽同樣地，即便進(jìn)行反復(fù)投與也不會(huì)顯示抗原性而能夠安全使用。此外，將天然型的目標(biāo)肽和復(fù)合肽對(duì)于個(gè)體以相同的用量和用法進(jìn)行投與時(shí)，發(fā)現(xiàn)即便以僅有目標(biāo)肽而無(wú)法獲得充分的目標(biāo)生理作用的用量，通過對(duì)該肽結(jié)合半衰期延長(zhǎng)肽而延長(zhǎng)半衰期，從而能夠在生物體中顯示充分的目標(biāo)生理作用。由此，顯示通過不依賴持續(xù)注入的用法而能夠賦予作為藥品的適合性。即，發(fā)現(xiàn)通過對(duì)由于為短半衰期而需要在靜脈內(nèi)或皮下持續(xù)投與的目標(biāo)肽附加本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽，從而能夠進(jìn)行快速濃注，且與天然的目標(biāo)肽相比，復(fù)合肽更容易獲得目標(biāo)活性。本發(fā)明是基于上述見解而完成的，涉及以下事項(xiàng)。項(xiàng)1.以下的(I)或(II)的肽，(I)該肽由式B、A-B、B_C、或A-B-C表示，式中，A、B和C分別為以下的(1)、(2)、和(3)所表示的物質(zhì)，該肽在與其他目標(biāo)肽結(jié)合時(shí)，能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，同時(shí)與該目標(biāo)肽相比能夠延長(zhǎng)血漿中的半衰期；(II)該肽由如下序列構(gòu)成與(I)的肽反向的序列，在⑴中由A-B表示且A或B反向的序列，在(I)中由B-C表示且B或C反向的序列，或在(I)中由A-B-C表示且A、B、C、A和B、B和C、或A和C反向的序列；(I)A為由114個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽，(2)B為由式1(Wk-Xl-Y-Zm-Wn)-(ffo-Xp-Y-Zq-ffr)s所表示的肽，式1中，W為堿性氨基酸，X和Z為任意的氨基酸，Y為酸性氨基酸，k=1或2，1為整數(shù)且4彡1彡0，m為整數(shù)且2彡m彡0，4彡1+m彡0，η=1或2，ο=1或2，ρ為整數(shù)且4彡ρ彡0，q為整數(shù)且2彡q彡0，4彡p+q彡0，r=1或2，s=0或1，(3)C為由214個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽。項(xiàng)2.根據(jù)項(xiàng)1所述的肽，其中，B為式1中s=1的肽。項(xiàng)3.根據(jù)項(xiàng)2所述的肽，其中，在上述式1中，ο=0，ρ=0，q=0，r=2。項(xiàng)4.根據(jù)項(xiàng)1所述的肽，其中，C包含能夠取得α螺旋結(jié)構(gòu)的49個(gè)氨基酸序列。項(xiàng)5.根據(jù)項(xiàng)4所述的肽，其中，C在其末端與能夠取得α螺旋結(jié)構(gòu)的氨基酸序列之間具有Pro序列。項(xiàng)6.一種肽，其由式B、A-B、B_C、或A-B-C所表示，式中，A、B、和C為以下的(1)或(2)，該肽在與其他肽結(jié)合時(shí)，能夠保持其生理活性，同時(shí)能夠延長(zhǎng)其半衰期，(I)A為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)14的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)59的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1017的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列；(2)A為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)18的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)913的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1417的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列。項(xiàng)7.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5357中的氨基酸號(hào)59、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48、和序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)26、序列號(hào)61，62中的氨基酸號(hào)36、序列號(hào)6365中的氨基酸號(hào)37、和序列號(hào)66中的氨基酸號(hào)13。項(xiàng)8.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5357中的氨基酸號(hào)59、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48、和序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)26、序列號(hào)61，62中的氨基酸號(hào)36、序列號(hào)6365中的氨基酸號(hào)37、和序列號(hào)66中的氨基酸號(hào)13，A為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5257中的氨基酸號(hào)14的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)13的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)1的序列，和序列號(hào)6165中的氨基酸號(hào)12的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5354中的氨基酸號(hào)1017的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)916的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)57中的氨基酸號(hào)1016的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)58中的氨基酸號(hào)720的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)61中的氨基酸號(hào)713的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)63中的氨基酸號(hào)814的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)66中的氨基酸號(hào)418的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)9.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中A、B、C與項(xiàng)8相同。項(xiàng)10.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)913、序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)1519、序列號(hào)94中的氨基酸號(hào)811、序列號(hào)96中的氨基酸號(hào)812、和序列號(hào)99中的氨基酸號(hào)1618。項(xiàng)11.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)913、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)812、序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)1519、序列號(hào)94中的氨基酸號(hào)811、序列號(hào)96中的氨基酸號(hào)812、和序列號(hào)99中的氨基酸號(hào)1618，A為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)18的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)17的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)114的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)94，96中的氨基酸號(hào)17的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)99中的氨基酸號(hào)115的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為下述序歹Ij序列號(hào)67，69，7274，80，81，83，8687中的氨基酸號(hào)1417的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)68，70，71，7579，82，85中的氨基酸號(hào)1416的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)1316的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)20、序列號(hào)94中的氨基酸號(hào)1213的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)96中的氨基酸號(hào)1314的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)12.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)11相同。項(xiàng)13.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5357中的氨基酸號(hào)59、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48、和序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)26。項(xiàng)14.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5357中的氨基酸號(hào)59、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48、和序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)26，A為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5357中的氨基酸號(hào)14的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)13的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)5860中的氨基酸號(hào)1，C為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50，5354中的氨基酸號(hào)1017的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)916的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)57中的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)58中的氨基酸號(hào)720的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)15.根據(jù)項(xiàng)14所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)14相同。項(xiàng)16.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)913、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)812、和序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)1519。項(xiàng)17.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)913、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)812、和序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)1519，A為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)6787中的氨基酸號(hào)18的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)17的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)114的C末端例起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)67，68，7274,80,81,83,8687中的氨基酸號(hào)1417的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)68，70，71，7579，82，85中的氨基酸號(hào)1416的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)90中的氨基酸號(hào)1316的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)91中的氨基酸號(hào)20。項(xiàng)18.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)17相同。項(xiàng)19.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50中的氨基酸號(hào)59，和序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48。項(xiàng)20.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50中的氨基酸號(hào)59，和序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)48，A為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50中的氨基酸號(hào)14的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)35，37，38，4246,49,52中的氨基酸號(hào)13的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)34，36，3941，47，48，50中的氨基酸號(hào)1017的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、和序列號(hào)35，37，38，4246，49，52中的氨基酸號(hào)916的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)21.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)20相同。項(xiàng)22.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為選自由序列號(hào)6785中的氨基酸號(hào)913所組成的組中的序列。項(xiàng)23.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為選自由序列號(hào)6785中的氨基酸號(hào)913所組成的組中的序列，A為選自由序列號(hào)6785中的氨基酸號(hào)18的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列所組成的組中的序列，C為選自由下述序列所組成的組中的序列序列號(hào)67，69，7274，80，81，83中的氨基酸號(hào)1417的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列、序列號(hào)68，70，71，7579，82，85中的氨基酸號(hào)1416的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)24.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)23相同。項(xiàng)25.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由B所表示，式中，式B為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)59的序列。項(xiàng)26.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)59的序列，A為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)14的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)1017的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)27.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)26相同。項(xiàng)28.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式B所表示，式中，B為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)913的序列。項(xiàng)29.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B或B-C所表示，式中，B為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)913的序列，A為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)18的C末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列，C為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)1417的N末端側(cè)起連續(xù)的至少1個(gè)氨基酸構(gòu)成的序列。項(xiàng)30.根據(jù)項(xiàng)6所述的肽，其由式A-B-C所表示，式中，A、B、C與項(xiàng)29相同。項(xiàng)31.一種復(fù)合肽，其中，選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端結(jié)合，能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，同時(shí)與該目標(biāo)肽相比延長(zhǎng)了血漿中的半衰期。項(xiàng)32.根據(jù)項(xiàng)31所述的復(fù)合肽，其中，選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端結(jié)合。項(xiàng)33.根據(jù)項(xiàng)31所述的復(fù)合肽，其中，選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的C末端結(jié)合。項(xiàng)34.根據(jù)項(xiàng)31所述的復(fù)合肽，其中，選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的兩末端結(jié)合。項(xiàng)35.根據(jù)項(xiàng)3134中任一項(xiàng)1項(xiàng)所述的復(fù)合肽，其中，目標(biāo)肽為心房鈉尿肽、C型鈉尿肽或促胃動(dòng)素、或它們的衍生物。項(xiàng)36.一種藥物組合物，其以項(xiàng)3135中任一項(xiàng)1項(xiàng)所述的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。項(xiàng)37.根據(jù)項(xiàng)36所述的藥物組合物，其中，復(fù)合肽為項(xiàng)35所述的肽。項(xiàng)38.根據(jù)項(xiàng)37所述的藥物組合物，其中，復(fù)合肽中的目標(biāo)肽為心房鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)39.根據(jù)項(xiàng)38所述的藥物組合物，其用于治療選自急性心功能不全、慢性心功能不全、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、局部缺血性心臟病(ischemiccardiacdisease)、高血壓癥、水腫病、心肌病、腎炎、糖尿病性腎病、腎硬化和心肌梗塞中的疾病。項(xiàng)40.根據(jù)項(xiàng)37所述的藥物組合物，其中，復(fù)合肽中的目標(biāo)肽為C型鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)41.根據(jù)項(xiàng)40所述的藥物組合物，其用于治療選自非典型性軟骨發(fā)育不全(atypicalchondrogenesisinsufficiency)、冠狀動(dòng)脈狹窄后的PTCA(經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù))后的再狹窄、肺動(dòng)脈高壓癥、末梢動(dòng)脈閉塞性疾病(peripheralarteryobliterativedisease)、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化、心肌梗塞和心肌炎中的疾病。項(xiàng)42.根據(jù)項(xiàng)37所述的藥物組合物，其中，復(fù)合肽中的目標(biāo)肽為促胃動(dòng)素或其衍生物。項(xiàng)43.根據(jù)項(xiàng)42所述的藥物組合物，其用于治療選自功能性消化不良、反流性食管炎、糖尿病性胃運(yùn)動(dòng)麻痹(diabeticgastricmotilityparalysis)、便秘型腸易激綜合癥、慢性假性腸梗阻、術(shù)后腸梗阻、慢性胃炎和萎縮性胃炎中的疾病。項(xiàng)44.一種復(fù)合肽的制造方法，該復(fù)合肽與目標(biāo)肽相比血漿中的半衰期延長(zhǎng)，且具有該目標(biāo)肽的生理活性，其特征在于，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端結(jié)合。項(xiàng)45.根據(jù)項(xiàng)44所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端結(jié)合。項(xiàng)46.根據(jù)項(xiàng)44所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的C末端結(jié)合。項(xiàng)47.根據(jù)項(xiàng)44所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的兩末端結(jié)合。項(xiàng)48.根據(jù)項(xiàng)4447中任一項(xiàng)1項(xiàng)所述的方法，其中，目標(biāo)肽為鈉尿肽或促胃動(dòng)素、或者它們的衍生物。項(xiàng)49.根據(jù)項(xiàng)48所述的方法，其中，目標(biāo)肽為心房鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)50.根據(jù)項(xiàng)48所述的方法，其中，目標(biāo)肽為C型鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)51.根據(jù)項(xiàng)48所述的方法，其中，目標(biāo)肽為促胃動(dòng)素或其衍生物。項(xiàng)52.一種能夠利用藥物組合物中所含的目標(biāo)肽而進(jìn)行治療的疾病的治療方法，其包括向個(gè)體投與選自項(xiàng)3643中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。項(xiàng)53.根據(jù)項(xiàng)52所述的治療方法，其中，藥物組合物為項(xiàng)37所述的藥物組合物。項(xiàng)54.根據(jù)項(xiàng)53所述的治療方法，其中，藥物組合物為項(xiàng)38所述的藥物組合物。項(xiàng)55.根據(jù)項(xiàng)54所述的治療方法，其中，上述疾病為選自急性心功能不全、慢性心功能不全、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、局部缺血性心臟病、高血壓癥、水腫病、心肌病、腎炎、糖尿病腎病、腎硬化和心肌梗塞中的疾病。項(xiàng)56.根據(jù)項(xiàng)53所述的治療方法，其中，藥物組合物為項(xiàng)40所述的藥物組合物。XM57.根據(jù)項(xiàng)56所述的治療方法，其中，上述疾病為選自假性軟骨發(fā)育不全、冠狀動(dòng)脈狹窄后的PTCA后等的再狹窄、肺動(dòng)脈高壓癥、末梢動(dòng)脈閉塞性疾病、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化、心肌梗塞和心肌炎中的疾病。項(xiàng)58.根據(jù)項(xiàng)53所述的治療方法，其中，藥物組合物為項(xiàng)42所述的藥物組合物。項(xiàng)59.根據(jù)項(xiàng)58所述的治療方法，其中，上述疾病為選自功能性消化不良、反流性食管炎、糖尿病性胃運(yùn)動(dòng)麻痹、便秘型腸易激綜合癥、慢性假性腸梗阻、術(shù)后腸梗阻、慢性胃炎和萎縮性胃炎中的疾病。項(xiàng)60.一種延長(zhǎng)目標(biāo)肽的血漿中的半衰期的方法，其特征在于，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端結(jié)合。項(xiàng)61.根據(jù)項(xiàng)60所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端結(jié)合。項(xiàng)62.根據(jù)項(xiàng)60所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的C末端結(jié)合。項(xiàng)63.根據(jù)項(xiàng)60所述的方法，其中，將選自由項(xiàng)130中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的兩末端結(jié)合。項(xiàng)64.根據(jù)項(xiàng)6063中任一項(xiàng)1項(xiàng)所述的方法，其中，目標(biāo)肽為鈉尿肽、或促胃動(dòng)素、或者它們的衍生物。項(xiàng)65.根據(jù)項(xiàng)64所述的方法，其中，目標(biāo)肽為心房鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)66.根據(jù)項(xiàng)64所述的方法，其中，目標(biāo)肽為C型鈉尿肽或其衍生物。項(xiàng)67.根據(jù)項(xiàng)64所述的方法，其中，目標(biāo)肽為促胃動(dòng)素或其衍生物。發(fā)明的效果通過將本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽附加于半衰期短的目標(biāo)肽上，從而能夠改善體內(nèi)動(dòng)態(tài)，成為具有作為藥物可實(shí)用的半衰期的肽?？乖耘c天然型的目標(biāo)肽大致相同，因此安全性優(yōu)異，另外對(duì)于在體內(nèi)分解生理活性肽的酶顯示耐性。通過使用該半衰期延長(zhǎng)肽，則能夠大幅消減到目前為止開發(fā)體內(nèi)動(dòng)態(tài)被改善的生理活性肽所花費(fèi)的成本和時(shí)間。另外，期待通過持續(xù)靜脈內(nèi)或持續(xù)皮下投與而進(jìn)行治療的生理活性肽的投與方法能夠變成單次快速濃注，從而能夠改善個(gè)體(患者)和醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)的依從性。圖1所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)或皮下投與ANP及其復(fù)合ANP(AC)(0.lmg/kg)時(shí)的血漿中ANP免疫活性濃度變化的圖。圖2所示為對(duì)雄性大鼠單次靜脈內(nèi)或皮下投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(A、B)(0.lmg/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度變化的圖。圖3所示為對(duì)雄性大鼠皮下投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(B)(0.lmg/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度和血漿中cGMP濃度變化的圖。圖4所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(B)(0.02mg/kg)時(shí)，NEP抑制劑對(duì)于血漿中CNP免疫活性濃度變化的影響的圖。圖5所示為對(duì)雌性小鼠以1天2次反復(fù)皮下投與29天天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(B)(0.25mg/kg)時(shí)的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重變化的圖。圖6所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與促胃動(dòng)素及其復(fù)合促胃動(dòng)素(AM)(IOnmol/kg)時(shí)的血漿中促胃動(dòng)素免疫活性濃度變化的圖。圖7所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(CI)(IOnmol/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度變化的圖。圖8所示為靜脈內(nèi)投與復(fù)合促胃動(dòng)素(NV、XZ、IXIII)(lOnmol/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度變化的圖。圖9所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(D、J和K)(20nmol/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度變化的圖。圖10所示為對(duì)雌性小鼠以1天1次反復(fù)皮下投與56天復(fù)合CNP(D和J)(50和200nmol/kg)時(shí)的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重變化的圖。圖11所示為對(duì)雌性小鼠以1天1次反復(fù)皮下投與56天復(fù)合CNP(J)(50和200nmol/kg)后的全身圖像。圖12所示為對(duì)雌性大鼠以1天1次反復(fù)皮下投與28天復(fù)合CNP(D)(12.5,50和200nmol/kg)時(shí)的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重變化的圖。圖13所示為對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22和CNP-53以及復(fù)合CNP(D)(10nmol/kg)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度變化的圖。具體實(shí)施例方式以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。(1)半衰期延長(zhǎng)肽本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽由B、A-B、B_C、A-B-C所表示，式中，A、B、和C為以下的(1)(3)，該肽與其他目標(biāo)肽(生理活性肽)結(jié)合時(shí)，能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，同時(shí)與該目標(biāo)肽相比能夠延長(zhǎng)血漿中的半衰期。(1)如青蛙生長(zhǎng)素釋放肽來(lái)源的C末端片段(序列號(hào)91)中的1-14位的氨基酸序列(14氨基酸表5)、復(fù)合促胃動(dòng)素(AF、和GK)(以上，表14)、MG-dl2/14(表16)、復(fù)合CNP(J)和復(fù)合CNP(K)(表17)所示，A可以不存在或者也可以存在任意的氨基酸數(shù)的序列。該序列存在時(shí)的長(zhǎng)度能夠選擇114氨基酸左右的序列，優(yōu)選為310氨基酸，更優(yōu)選為3氨基酸。具體而言，可列舉出VQQ或AGSVDHKGKQ。(2)B為與后述人生長(zhǎng)素釋放肽來(lái)源的本發(fā)明肽的對(duì)半衰期延長(zhǎng)作用而言必要的結(jié)構(gòu)(核心序列=RKESKK序列部分)相對(duì)應(yīng)的部分，關(guān)于人生長(zhǎng)素釋放肽來(lái)源的本發(fā)明肽的B，例如可能推出以下事項(xiàng)。下述具體的肽記載于表16和表17中。關(guān)于RKESKK中的E(Glu)，如復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-17E/N)、⑶(MG-17E/Q)禾口(W)(MG-dES)所示，是必要的氨基酸，另外如復(fù)合促胃動(dòng)素(V)(MG-ES/DS)、⑴(MG-17E/D)、復(fù)合CNP(J)和復(fù)合CNP(K)所示，也可以是D(Asp)。S卩，上述E(Glu)的位置的氨基酸只要是酸性氨基酸即可，優(yōu)選為Glu。關(guān)于RKESKK中的S(Ser)，如復(fù)合促胃動(dòng)素(0)(MG-18S/F)、(P)(MG-18S/T)、(Q)(MG-18S/P)、(R)(MG-18S/L)和(S)(MG-18S/A)所示，能夠用芳香族氨基酸、疏水性氨基酸、和極性不帶電荷氨基酸等任何具有側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的氨基酸置換。即，上述S(Ser)的位置的氨基酸可以是任何具有側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的氨基酸，優(yōu)選為Ser、Pr0、Leu、Phe或Ala，更優(yōu)選為Ser、Thr、Pro、Ala，最優(yōu)選為Ser?；蛘呷珉腗G_dS所示，上述S(ser)的位置的氨基酸也可以不存在。關(guān)于RKESKK中的R(Arg)和K(Lys)，如復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-17E/D)所示，只要是堿性氨基酸即能夠置換。RKESKK的特征在于包含堿性氨基酸簇(2個(gè)堿性氨基酸的連續(xù)序列)和酸性氨基酸，如復(fù)合促胃動(dòng)素⑵(MG-il7G)、(I)(MG-il9G)、(II)(MG_il7G2)和(III)(MG-il7G2-il9G)所示，簇間的距離能夠通過插入任意的氨基酸而擴(kuò)大。如表16和表17等中記載的各肽所示，堿性氨基酸簇間的距離優(yōu)選存在15氨基酸左右。此外，如復(fù)合促胃動(dòng)素(Z)(MG_il7G)、(I)(MG_il9G)、(II)(MG_il7G2)、(III)(MG-il7G2-19iG)、(IV)(MG-dPP)、(V)(MG-dPPHl)、(VI)(MG-Hl)、(VII)(MG-H3)、(VIII)(MGH4)、(XI)(MG-dl2/14)、(XII)(MGPl)、(XIII)(MGP)2等和復(fù)合CNP(K)所示，在RKESKK中的堿性氨基酸簇與E(Glu)之間可以存在任意的氨基酸。例如，能夠使堿性氨基酸簇(相當(dāng)于RK的部位)與E之間存在G、A、Y、S、P和/或V，使E與堿性氨基酸簇(相當(dāng)于KK的部位)之間存在S、H和/或P。通過以上內(nèi)容，本申請(qǐng)發(fā)明的對(duì)于半衰期延長(zhǎng)作用而言必要的結(jié)構(gòu)B(核心序列對(duì)于人為RKESKK部分)，首先具有以下的式2所表示的序列。式2=Wk-Xl-Y-Zm-Wn其中，W為堿性氨基酸，X和Z為任意的氨基酸，Y為酸性氨基酸。另外，k、l、m、n為0或自然數(shù)，k=1或2，4彡1彡0，2彡m彡0(其中，1和m滿足4彡1+m彡0)，η=1或2。此外，關(guān)于RKESKK的排列方法，如復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-BR)所示，也可以為反向(KKSEKR)。另外，如復(fù)合促胃動(dòng)素(XII)(MGPl)和(XIII)(MGP2)所示，在串聯(lián)配置2個(gè)核心序列的情況下(例如KKAYSPDK+ERK)，從增強(qiáng)半衰期延長(zhǎng)作用的觀點(diǎn)出發(fā)，為了實(shí)現(xiàn)更長(zhǎng)的半衰期延長(zhǎng)，如以下通式所示那樣分子內(nèi)具有多個(gè)核心序列的情況在半衰期延長(zhǎng)作用方面也是有效的手段。因此，對(duì)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)作用而言必要的結(jié)構(gòu)(核心序列=RKESKK部分)如以下式1所示。式1(Wk-Xl-Y-Zm-Wn)+(ffo-Xp-Y-Zq-ffr)s其中，W、X、Y、Z、k、l、m、n與上述式2的定義相同，s=0或1。另外，o、p、q、r為0或自然數(shù)，2彡0彡0，4彡ρ彡0，2彡q彡0(其中，ρ和q滿足4彡p+q彡0)，r=1或2。酸性氨基酸Y為E(Glu)或D(Asp)，優(yōu)選為E(Glu)。作為任意的氨基酸的X、Z，X和Z可以相互相同或不同，另外，在具有多個(gè)酸性氨基酸的情況下，它們可以相互相同或不同。乂、2優(yōu)選為561~、？1~0、1^11、？1^或413，更優(yōu)選為561~、1111~、？1~0、413，最優(yōu)選為561·。關(guān)于堿性氨基酸W，兩個(gè)W可以相互相同或不同，另外，在具有多個(gè)堿性氨基酸的情況下，它們可以相互相同或不同。W優(yōu)選為R(Arg)或K(Lys)。另外，在式1中，優(yōu)選的是，s為l，o、p、q為0，r為2。如復(fù)合促胃動(dòng)素(J)中的22-23位的氨基酸序列(2氨基酸表14)、青蛙生長(zhǎng)素釋放肽來(lái)源的C末端片段(序列號(hào)58)中的7-20位的氨基酸序列(14氨基酸表5)、或配置了通過公知的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)法(例如，Chou-Fasman法biochemistry.1974Jan15；13(2)222-45Predictionofproteinconformation.ChouPY,FasmanGD等，Garnier法JMolBiol.1978Mar25；120(1):97_120·Analysisoftheaccuracyandimplicationsofsimplemethodsforpredictingthesecondarystructureofglobularproteins.GarnierJ,OsguthorpeDJ,RobsonB.等)而能夠被預(yù)測(cè)為形成α螺旋結(jié)構(gòu)的序列(例如AK(或E)LAALK(或Ε)Α)的復(fù)合促胃動(dòng)素(VI)(MG-Hl)、(VII)(MG-H3)、(VIII)(MG-H4)所示，C能夠選擇214氨基酸左右的任意的氨基酸數(shù)的序列。優(yōu)選為由能夠形成α螺旋結(jié)構(gòu)的311氨基酸構(gòu)成的任意的序列，更優(yōu)選為，KKPPAKLQPR(由復(fù)合促胃動(dòng)素(C)中的N末端起22位29位的氨基酸構(gòu)成的序列)、或PPAELAALEA(由復(fù)合促胃動(dòng)素(VII)(MG-H3)中的N末端起22位31位的氨基酸構(gòu)成的序列)，進(jìn)一步優(yōu)選為PPAELAALEA。另外，也可以使用通過前述的預(yù)測(cè)法而能夠形成折疊(sheet)結(jié)構(gòu)的任意的序列。此外，如復(fù)合促胃動(dòng)素(IV)(MG-dPP)與復(fù)合促胃動(dòng)素(D)的比較、復(fù)合促胃動(dòng)素(V)(MG-dPPHl)與復(fù)合促胃動(dòng)素(VI)(MG-Hl)的比較、復(fù)合促胃動(dòng)素(IX)(MG-dPPS)與復(fù)合促胃動(dòng)素(X)(MG-S)的比較所示，本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽在相當(dāng)于式C的氨基酸序列與相當(dāng)于式B的氨基酸序列之間不存在Pro的情況下，優(yōu)選在該相當(dāng)于式C的氨基酸序列的末端部位配置Pro序列(Pro數(shù)為使C的氨基酸數(shù)在214的范圍，優(yōu)選為Pro-Pro)。另外，如復(fù)合CNP(J)和(K)所示，包含相當(dāng)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式B(核心序列)的序列的復(fù)合CNP也顯示出了半衰期延長(zhǎng)作用，由與復(fù)合促胃動(dòng)素的半衰期的比較中能推出的、將本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式A和C特征應(yīng)用于復(fù)合CNP時(shí)能獲得同樣的半衰期延長(zhǎng)作用效果，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是能夠容易地預(yù)測(cè)的。相反地，由與復(fù)合CNP的半衰期的比較中能推出的、將本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式B和C特征應(yīng)用于復(fù)合促胃動(dòng)素時(shí)能獲得同樣的半衰期延長(zhǎng)作用效果，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是能夠容易地預(yù)測(cè)的。另外本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地預(yù)測(cè)，在與其他目標(biāo)肽的復(fù)合體中，應(yīng)用本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式A、B和C特征時(shí)能得到同樣的半衰期延長(zhǎng)作用效果。A、B和/或C可以各自為順方向或逆方向。即，可以是A、B和C各自獨(dú)立地為順方向或逆方向，也可以是A-B、B-C和A-B-C作為整體而為順方向或逆方向。其中順方向和逆方向是指N末端至C末端的序列方向顛倒過來(lái)的意思。本發(fā)明的肽單獨(dú)為B的情況中，包括在目標(biāo)肽側(cè)存在滿足A和/或C特征的序列的情況。本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽優(yōu)選以下的(1)或(2)的肽。(I)A為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)14的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)59的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1017的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列。(2)A為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)18的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)913的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1417的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列。序列號(hào)67為序列號(hào)34的逆序列。B為必須的核心序列。換言之，本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽包含序列號(hào)34中氨基酸號(hào)59的氨基酸序列或其逆序列即序列號(hào)67中氨基酸號(hào)913的氨基酸序列，為由最大17氨基酸的氨基酸序列構(gòu)成的肽，或由該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列構(gòu)成的肽。該情況中的“1個(gè)或多個(gè)”例如為135個(gè)，優(yōu)選為115個(gè)，更優(yōu)選為110個(gè)，更優(yōu)選為18個(gè)，更優(yōu)選為16個(gè)，更優(yōu)選為15個(gè)，更優(yōu)選為14個(gè)，更優(yōu)選為13個(gè)，更優(yōu)選為12個(gè)。本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽包括下述種屬的生長(zhǎng)素釋放肽的C末端部分序列所構(gòu)成的半衰期延長(zhǎng)肽人、猴、牛、馬、豬、狗、鹿、綿羊、山羊、貓、兔、鼠、臭駒屬(臭駒)、鯨那樣的哺乳類；火雞、雞那樣的鳥類；龜那樣的爬行類；青蛙那樣的兩棲類；鰻魚、鯰魚、鯊魚那樣的魚類等。關(guān)于上述序列號(hào)34或序列號(hào)67的各A、B、C的氨基酸序列中的氨基酸的缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸，由各種來(lái)源的氨基酸序列的比較，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適宜選擇用于進(jìn)行該修飾的合適的氨基酸的位置和種類。將各種生物來(lái)源的生長(zhǎng)素釋放肽的氨基酸序列、其C末端部分的半衰期延長(zhǎng)肽、核心序列B的全長(zhǎng)、核心序列的N末端側(cè)可能存在的序列A的全長(zhǎng)、和核心序列的C末端側(cè)可能存在的序列C的全長(zhǎng)示于以下的表1表7。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>以下示出表1表7中的各生物來(lái)源的生長(zhǎng)素釋放肽的氨基酸序列。下劃線部分為相當(dāng)于半衰期延長(zhǎng)肽的部分。人GSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)1)GSSFLSPEHQRVQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)2)猴GSSFLSPEHQRAQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)3)牛GSSFLSPEHQKLQ-RKEAKKPSGRLKPR(序列號(hào)4)GSSFLSPEHQKLQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)5)GSSFLSPEHHKYQHRKESKKPPAKLKPR(序列號(hào)6)馬GSSFLSPEHQKVQQRKESKKPAAKLKPR(序列號(hào)7)豬GSSFLSPEHQKLQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)8)狗GSSFLSPEHQKLQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)9)鹿GSSFLSPDHQKLQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)10)GSSFLSPEHQKLQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)11)綿羊GSSFLSPEHQKLQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)12)山羊GSSFLSPEHQKVQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)13)貓GSSFLSPEHQKVQQRKESKKPAAKLKPR(序列號(hào)14)兔GSSFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)15)鼠GSSFLSPEHQKAQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)16)GSSFLSPEHQKTQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)17)臭駒屬GSSFLSPEHQKGP-KKDPRKPPKLQPR(序列號(hào)18)鯨GSSFLSPEHQKLQ-RKEAKKPSGRLKPR(序列號(hào)19)火雞GSSFLSPAYKNIQQQKDTRKPTARLHPR(序列號(hào)20)雞GSSFLSPTYKNIQQQKDTRKPTARLHRR(序列號(hào)21)GSSFLSPTYKNIQQQKDTRKPTARLH(序列號(hào)22)GSSFLSPTYKNIQQQKDTRKPTAR(序列號(hào)23)龜GSSFLSPEYQNTQQRKDPKKHTK-LNRR(序列號(hào)24)青蛙GLTFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNMNRR(序列號(hào)25)GLTFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNMN(序列號(hào)26)GLTFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNM(序列號(hào)27)鰻魚GSSFLSPS-QRPQG-KD-KKP-PRVGRR(序列號(hào)28)GSSFLSPS-QRPQG-KD-KKP-PRV-NHo(序列號(hào)29)鯰魚GSSFLSPT-QKPQNR-⑶RKPP-RVGRR(序列號(hào)30)GSSFLSPT-QKPQNR-GDRKPP-RVG(序列號(hào)31)GSSFLSPT-QKPQNR-⑶RKPP-RV-Mi(序列號(hào)32)鯊魚GVSFHPRLKEKDDNSSGNSRKSNPKR(序列號(hào)33)另外，以下示出表1表7中的各生物來(lái)源的半衰期延長(zhǎng)肽(正序列)的氨基酸序列。下劃線部分為相當(dāng)于核心序列B的部分，核心序列B的N末端側(cè)為相當(dāng)于序列A的部分，核心序列B的C末端側(cè)為相當(dāng)于序列C的部分。人VQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)34)VQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)35)猴AQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)36)牛LQ-RKEAKKPSGRLKPR(序列號(hào)37)LQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)38)馬VQHRKESKKPPAKLKPR(序列號(hào)39)豬VQQRKESKKPAAKLKPR(序列號(hào)40)狗LQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)41)鹿LQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)42)LQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)43)綿羊LQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)44)山羊LQ-RKEPKKPSGRLKPR(序列號(hào)45)貓VQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)46)兔VQQRKESKKPAAKLKPR(序列號(hào)47)鼠AQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)48)AQ-RKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)49)TQQRKESKKPPAKLQPR(序列號(hào)50)臭鼠句屬GP-KKDPRKPPKLQPR(序列號(hào)5D鯨LQ-RKEAKKPSGRLKPR(序列號(hào)52)火雞IQQQKDTRKPTARLHPR(序列號(hào)53)雞IQQQKDTRKPTARLHRR(序列號(hào)54)IQQQKDTRKPTARLH(序列號(hào)55)IQQQKDTRKPTAR(序列號(hào)56)龜TQQRKDPKKHTK-LNRR(序列號(hào)57)青蛙QKIAERQSQNKLRHGNMNRR(序列號(hào)58)QKIAERQSQNKLRHGNMN(序列號(hào)59)QKIAERQSQNKLRHGNM(序列號(hào)60)鰻魚QG-KD-KKP-PRVGRR(序列號(hào)61)QG-KD-KKP-PRY(序列號(hào)62)鯰魚QNR-⑶RKPP-RVGRR(序列號(hào)63)QNR-⑶RKPP-RVG(序列號(hào)64)QNR-⑶RKPP-RV(序列號(hào)65)鯊魚KEKDDNSSGNSRKSNPKR(序列號(hào)66)另外，以下示出表1表7中的各生物來(lái)源的半衰期延長(zhǎng)肽(逆序列)的氨基酸序列。下劃線部分為相當(dāng)于核心序列B的部分，核心序列B的N末端側(cè)為相當(dāng)于序列A的部分，核心序列B的C末端側(cè)為相當(dāng)于序列C的部分。人RPQLKAPPKKSEKRQQV(序列號(hào)67)RPQLKAPPKKSEKR-QV(序列號(hào)68)猴RPQLKAPPKKSEKRQQA(序列號(hào)69)牛RPKLRGSPKKAEKR-QL(序列號(hào)70)RPKLRGSPKKPEKR-QL(序列號(hào)71)馬RPKLKAPPKKSEKRHQV(序列號(hào)72)豬RPKLKAAPKKSEKRQQV(序列號(hào)73)狗RPQLKAPPKKSEKRQQL(序列號(hào)74)鹿RPKLRGSPKKPEKR-QL(序列號(hào)75)RPKLRGSPKKPEKR-QL(序列號(hào)76)綿羊RPKLRGSPKKPEKR-QL(序列號(hào)7了)山羊RPKLRGSPKKPEKR-QL(序列號(hào)78)貓RPQLKAPPKKSEKR-QV(序列號(hào)79)兔RPKLKAAPKKSEKRQQV(序列號(hào)80)鼠RPQLKAPPKKSEKRQQA(序列號(hào)81)RPQLKAPPKKSEKR-QA(序列號(hào)82)RPQLKAPPKKSEKRQQT(序列號(hào)83)臭鼠句屬RPQLKPPKRPDKK-PG(序列號(hào)84)鯨RPKLRGSPKKAEKR-QL(序列號(hào)8δ)火雞RPHLRATPKRTDKQQQI(序列號(hào)86)雞RRHLRATPKRTDKQQQI(序列號(hào)8了)HLRATPKRTDKQQQI(序列號(hào)88)RATPKRTDKQQQI(序列號(hào)89)龜RRNL-KTHKKPDKRQQT(序列號(hào)90)青蛙RRNMNGHRLKNQSQREAIKQ(序列號(hào)91)NMNGHRLKNQSQREAIKQ(序列號(hào)92)MNGHRLKNQSQREAIKQ(序列號(hào)93)鰻魚RRGVRP-PKK-DK-GQ(序列號(hào)94)VRP-PKK-DK-GQ(序列號(hào)95)鯰魚RRGVR-PPKRDG-RNQ(序列號(hào)96)GVR-PPKRDG-RNQ(序列號(hào)97)VR-PPKRDG-RNQ(序列號(hào)98)鯊魚RKPNSKRSNGSSNDDKEK(序列號(hào)99)這些半衰期延長(zhǎng)肽優(yōu)選用于其來(lái)源的物種的個(gè)體，例如對(duì)于人優(yōu)選使用人來(lái)源的生長(zhǎng)素釋放肽的C末端序列。另外，半衰期延長(zhǎng)肽由AB、BC、或ABC的序列構(gòu)成的情況下，序列A、B、C優(yōu)選使用同一生物物種來(lái)源的序列，也可以為將相互不同的物種來(lái)源的序列A、B、C組合而成的嵌合肽。嵌合肽優(yōu)選組合哺乳類、鳥類、爬行類、和兩棲類來(lái)源的序列，更優(yōu)選組合哺乳類來(lái)源的序列，進(jìn)一步優(yōu)選組合人來(lái)源的序列。本發(fā)明中，在與目標(biāo)肽結(jié)合時(shí)保持其生理活性是指，在與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端中任一者結(jié)合時(shí)，目標(biāo)肽的活性均維持在以上的活性。另外，延長(zhǎng)目標(biāo)肽的半衰期是指，在與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端中任一者結(jié)合時(shí)，與該目標(biāo)肽相比半衰期即使略微延長(zhǎng)也好均有延長(zhǎng)。(2)復(fù)合肽通過對(duì)具有生理活性的肽在N末端側(cè)、C末端側(cè)或兩末端側(cè)結(jié)合上述說明的本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽，可以獲得體內(nèi)動(dòng)態(tài)得以改善的本發(fā)明的復(fù)合肽。在兩末端結(jié)合半衰期延長(zhǎng)肽時(shí)，兩者的肽可以相同也可以不同。A和/或C可以在目標(biāo)肽的N末端和/或C末端進(jìn)行肽結(jié)合?；蛘撸瑢和/或C附加于B中所含的氨基酸的側(cè)鏈例如賴氨酸殘基的氨基、谷氨酸或天冬氨酸的羧基等也是本發(fā)明的一種形態(tài)。附加時(shí)的形態(tài)能夠根據(jù)肽鍵或期望而適宜選擇其他合適的結(jié)合方法。作為目標(biāo)肽，可以使用天然的生理活性肽，或者使用所述肽的如下衍生物具有該肽的氨基酸序列中缺失、置換和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列、且具有該肽的生理活性的肽。本說明書中只要沒有特別言及，則關(guān)于氨基酸，只要由該氨基酸序列構(gòu)成的肽或其衍生物具有所期望的功能則“置換、缺失、插入、和/或附加1個(gè)或多個(gè)”時(shí)被置換等的氨基酸的個(gè)數(shù)就沒有特別限定，例如為14個(gè)、或12個(gè)左右，進(jìn)而也可以選擇多個(gè)位置。認(rèn)為若置換為性質(zhì)(電荷和/或極性)相似的氨基酸等，則即使置換多個(gè)氨基酸，也不會(huì)使所期望的功能消失。另外，本說明書中，“氨基酸”包括L-氨基酸、D-氨基酸、α-氨基酸、β-氨基酸、Y-氨基酸、天然氨基酸、合成氨基酸等所有氨基酸。此外，在目標(biāo)肽為天然的生理活性肽的衍生物時(shí)，作為其氨基酸序列，優(yōu)選的是與天然型的氨基酸序列相比具有70%以上、優(yōu)選80以上、更優(yōu)選90%以上、尤其優(yōu)選95以上、最優(yōu)選97%以上的同源性。若半衰期延長(zhǎng)肽結(jié)合側(cè)的目標(biāo)肽的結(jié)構(gòu)滿足A或/和C的結(jié)構(gòu)因素的話，則也可以單獨(dú)結(jié)合B。作為優(yōu)選的目標(biāo)肽，可列舉出例如鈉尿肽，優(yōu)選為心房鈉尿肽(ANP來(lái)源不限，例如序列號(hào)100的人ANP)、腦鈉尿肽(BNP來(lái)源不限，例如序列號(hào)160的人BNP)、C型鈉尿肽(CNP來(lái)源不限，例如序列號(hào)101的CNP-22)、促胃動(dòng)素(來(lái)源不限，例如序列號(hào)102的人促胃動(dòng)素)、胰高血糖樣肽-1(GLP-1來(lái)源不限，例如序列號(hào)103的人GLP-I(7-36)酰胺)、甲狀旁腺激素(PTH來(lái)源不限，例如序列號(hào)104的人PTH(1-34))、降血鈣素(CT來(lái)源不限，例如序列號(hào)105的人CT)等顯示短半衰期的生理活性肽或它們的衍生物。該衍生物可以通過如下方式選擇在作用于表達(dá)原生理活性肽的受體的培養(yǎng)細(xì)胞后，測(cè)定培養(yǎng)液中的指標(biāo)物質(zhì)。例如，在ANP或CNP中，在作用于表達(dá)它們的受體即GC-A或GC-B的培養(yǎng)細(xì)胞后，測(cè)定培養(yǎng)液中環(huán)磷酸鳥苷(cyclicGMP)，從而選擇該衍生物。另外，作用于表達(dá)GLP-I或促胃動(dòng)素那樣的GPC-R的細(xì)胞的活性肽的情況下，可以通過測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣或測(cè)定培養(yǎng)液中的環(huán)磷酸腺苷(cyclicAMP)等測(cè)定信號(hào)傳遞系統(tǒng)活化而選擇。本發(fā)明也包括復(fù)合肽的鹽。鹽只要沒有毒性即可，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽，可列舉出例如與無(wú)機(jī)堿的鹽、與有機(jī)堿的鹽、與無(wú)機(jī)酸的鹽、與有機(jī)酸的鹽、與堿性或酸性氨基酸的鹽等。作為與無(wú)機(jī)堿的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽；鈣鹽、鎂鹽等堿土金屬鹽；以及鋁鹽、銨鹽等鹽。作為與有機(jī)堿的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如與三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己胺、N，N’-二芐基乙二胺等的鹽。作為與無(wú)機(jī)酸的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如與鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等的鹽。作為與有機(jī)酸的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如與甲酸、醋酸、三氟醋酸、富馬、草酸、酒石酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲基苯磺酸等的鹽。作為與堿性氨基酸的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如與精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸等的鹽，作為與酸性氨基酸的鹽的優(yōu)選的例子，可列舉出例如與天冬氨酸、谷氨酸等的鹽。在以上鹽中，優(yōu)選與無(wú)機(jī)堿的鹽，最優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽。以ANP和BNP作為目標(biāo)肽的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，基于介由ANP和BNP的受體即NPRA(GCA)的生理作用而對(duì)于急性心功能不全和慢性心功能不全的急性加重的治療有效，另外近年來(lái)確認(rèn)到其對(duì)于心肌梗塞后的預(yù)后的改善具有非常高的效果。其可以用作包括上述疾病在內(nèi)的閉塞性動(dòng)脈硬化癥、局部缺血性心臟病、高血壓癥、水腫病、心肌病、腎炎、糖尿病腎病、腎硬化和心肌梗塞等的治療劑的有效成分。以CNP作為目標(biāo)肽的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，基于介由CNP的受體即NPRB(GCB)的生理作用，在假性軟骨發(fā)育不全、冠狀動(dòng)脈狹窄后的PTCA后等的再狹窄、肺動(dòng)脈高壓癥、末梢動(dòng)脈閉塞性疾病、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化、心肌梗塞和心肌炎等中的應(yīng)用是有效的，可以用作這些治療劑的有效成分。以促胃動(dòng)素作為目標(biāo)肽的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，基于介由促胃動(dòng)素的受體即促胃動(dòng)素-R(Hiotilin-R)的生理作用，在功能性消化不良、反流性食管炎、糖尿病性胃運(yùn)動(dòng)麻痹、便秘型腸易激綜合癥、慢性假性腸梗阻、術(shù)后腸梗阻、慢性胃炎和萎縮性胃炎等中的應(yīng)用是有效的，可以用作這些治療劑的有效成分。以GLP-I作為目標(biāo)肽的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽在糖尿病等中的應(yīng)用有效，可以用作這些治療劑的有效成分。另外，以PTH作為目標(biāo)肽的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽在甲狀旁腺功能降低等中的應(yīng)用是有效的，可以用作這些治療劑的有效成分。(3)ff合肽的制造方法本發(fā)明也包含將上述說明的本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽結(jié)合于目標(biāo)肽的N末端側(cè)、C末端側(cè)、或兩末端側(cè)來(lái)制造血漿半衰期延長(zhǎng)且具有目標(biāo)肽的生理活性的復(fù)合肽的方法。本發(fā)明的復(fù)合肽能夠通過常規(guī)方法獲得(例如，參照J(rèn).Med.Chem.，43，pp.4370-4376，2000)。例如，能夠通過重組DNA技術(shù)和/或化學(xué)合成而制造。例如在使用重組DNA技術(shù)的制法中，通過具有編碼本發(fā)明的復(fù)合肽的DNA的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，再對(duì)該宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過由該培養(yǎng)物采集目標(biāo)肽，而能夠獲得本發(fā)明的復(fù)合肽。作為重組基因的載體，可列舉出例如大腸桿菌載體(pBR322、pUC18、pUC19等)、枯草桿菌載體(PUB110、pTP5、pC194等)、酵母載體(Y印型、YRp型、Yip型)、或動(dòng)物細(xì)胞載體(逆轉(zhuǎn)錄病毒、痘苗病毒等)等，即便是其他載體，只要能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定地保持目標(biāo)基因，則能夠使用任意的載體。該載體被導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞。作為將目標(biāo)基因重組入質(zhì)粒中的方法或?qū)胨拗骷?xì)胞中的方法，例如，能夠利用分子克隆(MolecularCloning)(Sambrooketal.，1989)中記載的方法。為了使上述質(zhì)粒表達(dá)復(fù)合肽基因，在該基因的上游連接啟動(dòng)子，以發(fā)揮其功能。作為本發(fā)明中使用的啟動(dòng)子，只要是對(duì)應(yīng)于目標(biāo)基因的表達(dá)中所使用的宿主細(xì)胞的合適的啟動(dòng)子，則可以是任意啟動(dòng)子。例如，在轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞為埃希氏菌(Escherichia)屬的情況下，可以使用Iac啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子、Ipp啟動(dòng)子、λPL啟動(dòng)子、recA啟動(dòng)子等，在芽孢桿菌(Bacillus)屬的情況下，可以使用SPOl啟動(dòng)子、SP02啟動(dòng)子等，在酵母的情況下，可以使用GAP啟動(dòng)子、PH05啟動(dòng)子、ADH啟動(dòng)子等，在動(dòng)物細(xì)胞的情況下，可以使用SV40來(lái)源的啟動(dòng)子、逆轉(zhuǎn)錄病毒來(lái)源的啟動(dòng)子等。使用如上述那樣獲得的含有目標(biāo)基因的載體，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。作為宿主細(xì)胞，可以使用細(xì)菌(例如，Escherichia屬、Bacillus屬等)、酵母(Saccharomyces屬、Pichia屬、Candida屬等)、動(dòng)物細(xì)胞(CH0細(xì)胞、COS細(xì)胞等)等。作為培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基是適合的，尤其優(yōu)選該培養(yǎng)基中含有對(duì)于所培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長(zhǎng)所必需的碳源、氮源等。根據(jù)要求可以在培養(yǎng)基中添加維生素類、生長(zhǎng)促進(jìn)因子、血清等。培養(yǎng)后，通過常規(guī)方法由培養(yǎng)物分離純化本發(fā)明的復(fù)合肽。例如，為了由培養(yǎng)菌體或細(xì)胞提取目標(biāo)物質(zhì)，可以如下進(jìn)行培養(yǎng)后，收集菌體或細(xì)胞，將其懸浮在含有蛋白質(zhì)變性劑(鹽酸胍等)的緩沖液中，通過超聲波等破碎菌體或細(xì)胞后，進(jìn)行離心分離。接著為了由上清純化目標(biāo)物質(zhì)，可以如下進(jìn)行考慮目標(biāo)物質(zhì)的分子量、溶解度、荷電(等電點(diǎn))、親和性等，適宜組合凝膠過濾、超濾、透析、SDS-PAGE、各種層析等分離純化方法而進(jìn)行。另外，本發(fā)明的復(fù)合肽能夠通過常規(guī)方法而化學(xué)合成。例如，通過如下方式獲得將附帶保護(hù)基的氨基酸利用液相法和/或固相法縮合，延長(zhǎng)肽鏈，用酸除去全部保護(hù)基，純化所得的粗產(chǎn)物。以往已知各種能夠用于復(fù)合肽的制造中的方法，作為本發(fā)明的物質(zhì)的復(fù)合肽的制造，也能夠依據(jù)公知的方法而容易地制造，例如可以依據(jù)經(jīng)典的肽合成法，也可以依據(jù)固相法而容易地制造。此外，可以使用并用了重組DNA技術(shù)和化學(xué)合成的制法，在將半衰期延長(zhǎng)肽附加于目標(biāo)肽的氨基酸中的側(cè)鏈例如賴氨酸殘基的氨基、谷氨酸或天冬氨酸的羧基等的情況下，通過化學(xué)合成制造，對(duì)于除此以外的部分使用重組DNA技術(shù)制造，然后將各自的片段融合，能夠以該方法制造。該方法也可以理解為以下方法將上述說明的本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽結(jié)合于目標(biāo)肽的N末端側(cè)、C末端側(cè)、或兩末端側(cè)，延長(zhǎng)目標(biāo)肽的血漿半衰期。⑷制劑本發(fā)明的復(fù)合肽可以用作包含人在內(nèi)的動(dòng)物(個(gè)體)的藥物。本發(fā)明的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體一起配合，能夠制成藥物組合物(藥物制劑)。齊IJ形沒有特別限定，例如作為用于經(jīng)口投與的內(nèi)服用固態(tài)劑、內(nèi)服用液劑，或用于非經(jīng)口投與的注射劑等來(lái)使用。作為用于經(jīng)口投與的內(nèi)服用固態(tài)劑，可列舉出例如片劑、丸劑、膠囊劑、散劑或顆粒劑等，作為內(nèi)服用液劑，可列舉出糖漿劑等。作為藥學(xué)上可接受的載體，使用慣用的各種有機(jī)或者無(wú)機(jī)載體物質(zhì)作為制劑素材，可列舉出固態(tài)制劑中的賦形劑、潤(rùn)滑劑、結(jié)合劑、崩解劑；液狀制劑中的溶劑、溶解輔助齊U、懸浮化劑、等滲劑、緩沖劑，無(wú)痛劑等。另外根據(jù)需要，也可以使用防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等制劑添加物。作為賦形劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)無(wú)水硅酸等。作為潤(rùn)滑劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、云母、膠態(tài)二氧化硅等。作為結(jié)合劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如結(jié)晶纖維素、白糖、D-甘露醇、糊精、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮等。作為崩解劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如淀粉、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉等。作為溶劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如注射用水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(Macrogol)、芝麻油、玉米油等。作為溶解輔助劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、安息香酸芐基酯、乙醇、三羥甲基氨基甲烷、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。作為懸浮化劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如硬脂酰三乙醇胺、十二烷基硫酸鈉、月桂氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯銨、芐索氯銨、單硬脂酸甘油酯等表面活性劑；例如聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子等。作為等滲劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如氯化鈉、甘油、D-甘露醇等。作為緩沖劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如蘋果酸鹽、醋酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液等。作為無(wú)痛劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如芐醇等。作為防腐劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如對(duì)羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、芐醇、苯乙醇、脫氫醋酸、山梨酸等。作為抗氧化劑的優(yōu)選的例子，可列舉出例如亞硫酸鹽、抗壞血酸等。作為本發(fā)明的藥物的制劑形態(tài)，優(yōu)選適于非經(jīng)口投與的制劑形態(tài)，作為適于非經(jīng)口投與的制劑形態(tài)，可列舉出例如靜脈內(nèi)投與、皮內(nèi)投與、皮下投與、或肌肉內(nèi)投與用等的注射劑，點(diǎn)滴劑，栓劑、經(jīng)皮吸收劑、經(jīng)粘膜吸收劑或吸入劑等，優(yōu)選上述注射劑的制劑形態(tài)，尤其當(dāng)個(gè)體為成人、且在家治療時(shí)還優(yōu)選經(jīng)粘膜吸收劑、吸入劑、栓劑等制劑形態(tài)。這些各種制劑形態(tài)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適宜選擇適于所期望的投與途徑的制劑形態(tài)，根據(jù)需要可以使用本領(lǐng)域中能夠利用的1種或2種以上的制劑用添加物來(lái)制造藥物用組合物的形態(tài)的制劑。例如，注射劑或點(diǎn)滴劑的形態(tài)的藥物可以通過如下方式調(diào)制并提供與作為有效成分的賦予了長(zhǎng)半衰期的復(fù)合肽一起，將合適的緩沖液、糖溶液、等滲劑、PH調(diào)節(jié)劑、無(wú)痛齊U、防腐劑等中的ι種或2種以上的制劑用添加物溶解于注射用蒸餾水中，滅菌(過濾器)過濾后裝入安瓿或玻璃瓶(vial)中，或者將滅菌過濾后的溶液凍結(jié)干燥，制成凍結(jié)干燥制齊U。作為添加劑，可以使用例如葡萄糖、甘露醇、木糖醇、乳糖等糖類，聚乙二醇等親水性聚合物類，甘油等醇類，甘氨酸等氨基酸類，血清白蛋白等蛋白質(zhì)類，NaCl、檸檬酸鈉等鹽類，醋酸、酒石酸、抗壞血酸、透明質(zhì)酸等酸類，吐溫80等表面活性劑，亞硫酸鈉等還原劑等。這種制劑可以在使用時(shí)添加到注射用蒸餾水或生理食鹽水等中進(jìn)行溶解，從而作為注射劑或點(diǎn)滴劑使用。另外，經(jīng)粘膜投與中還優(yōu)選點(diǎn)鼻劑或鼻腔內(nèi)噴霧劑等鼻腔內(nèi)投與劑(經(jīng)鼻投與劑)等，經(jīng)肺投與中還優(yōu)選吸入劑等。制劑中的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽的含量根據(jù)劑形而異，但例如為0.001IOOOmg左右即可，優(yōu)選為0.01IOOmg左右，更優(yōu)選為0.1IOOmg左右，尤其優(yōu)選為1IOOmg左右。優(yōu)選將上述投與量以1天13次、或1周17次投與，投與期間根據(jù)目標(biāo)肽的種類而異，沒有特別限定。本發(fā)明的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽的使用量可以根據(jù)目標(biāo)肽的種類、復(fù)合肽的半衰期而適宜確定。這樣，本發(fā)明包含包括將上述說明的本發(fā)明的藥物組合物投與個(gè)體的步驟、通過該藥物組合物中所含的目標(biāo)肽而能夠治療的疾病的治療方法。實(shí)施例以下，示出實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明。實(shí)施例1(天然型ANP、和復(fù)合ANP的血漿中免疫活性濃度變化)將天然型ANP、和對(duì)天然型ANP附加了半衰期延長(zhǎng)肽的復(fù)合肽(復(fù)合ANP)投與大鼠的靜脈內(nèi)，對(duì)此時(shí)的血漿中ANP免疫活性濃度的變化進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，‘？VA.7^^公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉(Nembutal)麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本f~一X·'JK一公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將天然型ANP(a-hANP:序列號(hào)100)或復(fù)合ANP(A、B和C)分別以0.lmg/kg的用量投與至大鼠的靜脈內(nèi)或背部皮下，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管經(jīng)時(shí)采集從投與前至投與后90分鐘或180分鐘的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(aprotinin)(^>株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿，通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中濃度(圖1)。此時(shí)，作為抗體，使用識(shí)別ANP的環(huán)部分的兔多克隆抗體(#8)，標(biāo)記化合物使用125I_[Tyr28]α-hANP。另外，復(fù)合ANP(A、B和C)的各氨基酸序列如下所示，均保持了人型鳥苷酸環(huán)化酶受體A(GC_A受體)激動(dòng)活性(agonistactivity)。復(fù)合ANP(A):CFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRYVQQRKESKKPPAKLQPR(下劃線部分為S-S鍵)(序列號(hào)106)復(fù)合ANP(B):VQQRKESKKPPAKLQPRCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY(下劃線部分為S-S鍵)(序列號(hào)107)復(fù)合ANP(C)RPQLKAPPKKSEKRQQVCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY(下劃線部分為S-S鍵)(序列號(hào)108)由得到的血漿中免疫活性濃度的變化算出藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。此時(shí)，分析軟件使用WinNonlinProfessionalVer4.0.1(PharsightCorporation公司制，USA)。以下記載了各參數(shù)的算出方法。時(shí)間O處的濃度(CO；外推值，ng/mL)、血漿中濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC；ng.min/mL)和消除半衰期(T1/2；分鐘)如下算出。通過由各采血時(shí)間點(diǎn)的血漿中免疫活性濃度的變化外推時(shí)間O時(shí)的值而算出CO。AUC使用所有測(cè)定時(shí)間點(diǎn)(t)的血漿中免疫活性濃度由梯形法來(lái)算出，求得至無(wú)限大時(shí)間的外推值。T1/2為通過最小二乘法由將血漿中免疫活性濃度的消失相中的數(shù)點(diǎn)連結(jié)而成的直線的斜率來(lái)算出。皮下投與時(shí)，不求出C0，而求得最高血漿中濃度(Cmax;ng/mL)、最高血漿中濃度到達(dá)時(shí)間(Tmax;min)。Cmax為各采血時(shí)間點(diǎn)下血漿中免疫活性濃度當(dāng)中最高的值，Tmax采用顯示出Cmax的血漿的采血時(shí)間。結(jié)果示于以下的表8和表9。表8對(duì)雄性大鼠單次靜脈內(nèi)投與天然型ANP及其復(fù)合ANP(A、B和C)(0.lmg/kg)時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*=T檢驗(yàn)中與天然型ANP的消失半衰期之間差異有顯著性(ρ<0.05)表9對(duì)雄性大鼠皮下投與天然型ANP及其復(fù)合ANP(A、B和C)(0.lmg/kg)時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>*=T檢驗(yàn)中與天然型ANP的消失半衰期之間差異有顯著性(ρ<0.05)靜脈內(nèi)投與復(fù)合ANP(Α、Β和C)時(shí)，所有衍生物與天然型ANP相比均為血漿中濃度上升，并顯示出持續(xù)性。另外，皮下投與復(fù)合ANP(A、B和C)時(shí)，所有衍生物與天然型ANP相比均為血漿中濃度上升，并顯示出持續(xù)性。_仿丨丨2(i腳CNP-22、肺&CNP馳靴禾口制編牛)對(duì)使天然型CNP-22和CNP附加了半衰期延長(zhǎng)肽的復(fù)合肽(復(fù)合CNP)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)與實(shí)施例1同樣地，使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施，將周齡的雄性SD系大鼠(日本f~一>義·-JK一公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將天然型CNP-22(序列號(hào)101)或復(fù)合CNP的A和B分別以0.lmg/kg的用量投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)或背部皮下，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管采集投與前和投與后90分鐘或180分鐘的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(〃<-&株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)RIA法測(cè)定血漿中濃度。此時(shí)，作為抗體，使用識(shí)別天然型CNP-22的環(huán)部分的兔多克隆抗體(#2)，標(biāo)記化合物使用125I-[Tyr°]CNP。藥代動(dòng)力學(xué)分析通過與實(shí)施例1同樣的方法實(shí)施。另外，復(fù)合CNP的A和B的各氨基酸序列如下所示，均保持了人型鳥苷酸環(huán)化酶受體B(GC-B受體)激動(dòng)活性。復(fù)合CNP(A):RPQLKAPPKKSEKRQQVCFGLKLDRIGSMSGLGC(下劃線部分為S-S鍵)(序列號(hào)109)復(fù)合CNP(B):CFGLKLDRIGSMSGLGCVQQRKESKKPPAKLQPR(下劃線部分為S-S鍵)(序列號(hào)110)結(jié)果示于圖2、以及以下的表10和表11。表10對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(A、B)(0.lmg/kg)時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*=T檢驗(yàn)中與天然型CNP-22的消除半衰期之間差異有顯著性(ρ<0.05)表11對(duì)雄性大鼠皮下投與天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(A、B)(0.lmg/kg)時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*:T檢驗(yàn)中與天然型CNP-22的消除半衰期之間差異有顯著性(p<0.05)靜脈內(nèi)投與后，天然型CNP-22以短半衰期迅速?gòu)难獫{中減少，但復(fù)合CNP即使在投與后90分鐘也維持了天然型CNP-22的約100倍高的血漿中濃度。另一方面，皮下投與天然型CNP-22和復(fù)合CNP時(shí)，與天然型CNP-22相比，復(fù)合CNP投與時(shí)的最高血漿中濃度約為1/2，從血漿中的消失較緩慢。由以上可知，在大鼠中，復(fù)合CNP無(wú)論在靜脈內(nèi)投與或皮下投與時(shí)均與天然型CNP-22相比顯示了長(zhǎng)半衰期。另外，皮下投與天然型CNP-22和復(fù)合CNP(B)(結(jié)構(gòu)如前所述)，通過競(jìng)爭(zhēng)RIA法測(cè)定了反映CNP的生物活性的血漿中cGMP濃度(文獻(xiàn))。藥物的投與和采血與血漿中CNP免疫活性濃度測(cè)定時(shí)相同。血漿中cGMP濃度的測(cè)定中使用YAMASAcGMPAssayKit(^寸醬油株式會(huì)社制)作為測(cè)定試劑盒。結(jié)果示于圖3。皮下投與天然型CNP-22后，血漿中CNP免疫活性濃度迅速上升，然后急速減少，在投與后60分鐘幾乎消失。血漿中cGMP濃度與血漿中CNP免疫活性濃度相比略晚一些上升，在投與后1530分鐘到達(dá)峰值后，迅速減少。另一方面，皮下投與復(fù)合CNP時(shí)，血漿中CNP免疫活性濃度的最高值與天然型CNP-22相比更低，血漿中cGMP濃度也為天然型CNP-22投與時(shí)的約6成，在投與后3090分鐘以一定水平持續(xù)。實(shí)施例3(天然型CNP-22和復(fù)合CNP的flt分解_耐件)研究了天然型CNP-22和復(fù)合CNP的肽分解酶的耐性。實(shí)驗(yàn)以各樣品N=2實(shí)施。調(diào)制天然型CNP-22以及復(fù)合CNP(A、B)(結(jié)構(gòu)如前所述，最終濃度0.5iig/mL)人型重組中性肽鏈內(nèi)切酶(hNEP,R&DsystemsInc.制，USA)的100uL反應(yīng)溶液(介質(zhì)20mMMESpH6.5)。初始值試樣在調(diào)制后立即煮沸5分鐘。穩(wěn)定性評(píng)價(jià)試樣在設(shè)定為37°C的恒溫槽中實(shí)施1小時(shí)酶反應(yīng)后，煮沸5分鐘。在煮沸后的樣品中添加蒸餾水100uL，充分混和后，將50uL用高效液相色譜系統(tǒng)LC-10A(株式會(huì)社島津制作所制)在水/乙腈體系下進(jìn)行分析。用CHR0MAT0PACK(CRA-10A，株式會(huì)社島津制作所制)對(duì)分析數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，算出未變化體的峰區(qū)域面積。將在37°C下反應(yīng)時(shí)的未變化體的平均區(qū)域面積除以煮沸樣品的平均區(qū)域面積，由此算出1小時(shí)后的未變化體殘存率。結(jié)果示于以下的表12。表12天然型CNP-22及其復(fù)合CNP(A、B)相對(duì)于hNEP的穩(wěn)定性(N=2的平均值)<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>在天然型CNP-22溶液中加入hNEP，在設(shè)定為37°C的恒溫槽中反應(yīng)1小時(shí)后，試樣中的天然型CNP-22未變化體的殘存率降低至初始值的16.7%，與此相對(duì)，復(fù)合CNP(A、B)的殘存率分別為84.3%和83.8%，確認(rèn)到與天然型CNP-22相比均顯示出對(duì)于hNEP的代謝耐性。此外，將并用NEP抑制劑而對(duì)靜脈內(nèi)投與后的血漿中CNP免疫活性濃度的變化帶來(lái)的效果為指標(biāo)，評(píng)價(jià)天然型CNP-22和復(fù)合CNP(B)的體內(nèi)的NEP耐性。另外，本試驗(yàn)還使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了采血用的聚乙烯管(PE-50，々X7夕'^^公司制，USA)、對(duì)大腿靜脈插入了NEP抑制劑投與用的聚乙烯管(PE-10，夕X7夕公司制，USA)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本f~一>^-'JA—公司制，體重約250g)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。由大腿靜脈定速靜脈內(nèi)投與介質(zhì)(5%甘露醇，100uL/min/個(gè)體)或NEP抑制劑(30ug/100uL/min/個(gè)體)。投與時(shí)間為從天然型CNP-22或復(fù)合CNP(B)的投與10分鐘前至投與后60分鐘的采血結(jié)束為止。天然型CNP-22和復(fù)合CNP(B)以20i!g/kg的用量進(jìn)行尾靜脈內(nèi)投與，由大腿動(dòng)脈插管采集NEP抑制劑投與開始前(-10分鐘)和CNP投與前(0分鐘)至投與60分鐘后為止的血液。采集的血液在加入穩(wěn)定化劑和抗凝固劑后，離心分離，然后制成血漿，通過前述的競(jìng)爭(zhēng)RIA法測(cè)定血漿中免疫活性濃度。藥代動(dòng)力學(xué)的分析用與實(shí)施例1同樣的方法實(shí)施。結(jié)果示于圖4和以下的表13。表13NEP抑制劑對(duì)于對(duì)雄性大鼠靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22及復(fù)合CNP(B)(約0.02mg/kg)時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響(N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>通過并用NEP抑制劑，靜脈內(nèi)投與天然型CNP-22時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度顯著增加。并用NEP抑制劑時(shí)的AUC為非并用時(shí)的約3.7倍，半衰期為約5倍。另一方面，投與復(fù)合CNP時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化即便并用NEP抑制劑也沒有改變，確認(rèn)到在大鼠體內(nèi)復(fù)合CNP(B)與天然型CNP-22相比不易被NEP分解(表13)。實(shí)施例4(天然型CNP-22和復(fù)合CNP的伸長(zhǎng)促進(jìn)作用)(1)使用小鼠研究天然型CNP-22和復(fù)合CNP的伸長(zhǎng)促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)使用3周齡的雌性S/VAFCrlj:CD1(ICR)小鼠(日本手Y—X’·1J八一公司制)，以1組10只共計(jì)30只供于實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物為一起購(gòu)入3只均2周齡的母小鼠，對(duì)1只母小鼠分配10只子小鼠，群飼1周后使其斷乳，在投與期間中，各組均以5只X2籠在透明籠中群飼。水為自由攝取自來(lái)水，飼料為自由攝取固型飼料(CRF-1，才'J工酵母工業(yè)株式會(huì)社制)。分別以10mL/kg、0.25mg/kg和0.25mg/kg的用量以1天2次、共29天對(duì)背部皮下反復(fù)投與介質(zhì)、天然型CNP-22或復(fù)合CNP(B)(結(jié)構(gòu)如前所述)，測(cè)定投與期間中的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重。結(jié)果示于圖5。如圖5所示，反復(fù)皮下投與了對(duì)CNP結(jié)合有半衰期延長(zhǎng)肽的復(fù)合CNP(B)的小鼠的身長(zhǎng)，與介質(zhì)投與組相比顯著增加，但天然型CNP-22投與組的身長(zhǎng)與介質(zhì)投與組并無(wú)差異。另一方面，關(guān)于體重，所有投與組之間并無(wú)差異。實(shí)施例5(天然型CNP-22和復(fù)合CNP的杭原件)在實(shí)施例4中，使用由4周反復(fù)投與結(jié)束后的小鼠而采集的血清，為了研究是否產(chǎn)生了針對(duì)天然型〔呢-22或復(fù)合0呢)的抗體，通過間接ELISA(indirectELISA)法評(píng)價(jià)各自的抗原性。向MaxiSorp處理后的96孑L板(NalgeNuncInternational公司制，Denmark)添加用50mMNaHC03、pH8.5調(diào)整至1.Ong/μL的肽溶液100μL，在4°C通宵進(jìn)行包被操作。使用2.0%BlockAce(雪印乳業(yè)株式會(huì)社制)溶液，在室溫下進(jìn)行1小時(shí)封閉。封閉后，添加稀釋至IO2IO5倍的血清樣品，在室溫下實(shí)施1小時(shí)抗原抗體反應(yīng)。洗滌孔后，添加Anti-mouseIgGHRPAb(ZymedLaboratories公司制，USA)。在室溫下進(jìn)行1小時(shí)的抗原抗體反應(yīng)，洗滌孔后，添加基質(zhì)ABTS(KPL公司制，USA)。在室溫下反應(yīng)1小時(shí)后，用SPECTRAMAX190(Moleculardevices公司制，USA)測(cè)定405nm的吸光度，分析顯色的程度作為抗體效價(jià)。其結(jié)果，即便分別以0.25mg/kg的用量以1天2次、共29天對(duì)背部皮下反復(fù)投與天然型CNP-22或復(fù)合CNP的B，也沒有確認(rèn)到針對(duì)天然型CNP-22和復(fù)合CNP(B)的抗體效價(jià)的上升。實(shí)施例6(天然型促胃云力素禾Pg合促胃云力素的血漿半衰期)(1)靜脈內(nèi)投與天然型促胃動(dòng)素(序列號(hào)102)、和對(duì)天然型促胃動(dòng)素的活性中心即序列號(hào)102的氨基酸號(hào)112的氨基酸序列結(jié)合了由522個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的各種長(zhǎng)度的半衰期延長(zhǎng)肽而成的13種復(fù)合促胃動(dòng)素AM(序列號(hào)111123)，研究此時(shí)的血漿中促胃動(dòng)素免疫活性濃度變化。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，々X·τ·夕'A7公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本★~一X·'JK一公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將人型促胃動(dòng)素或衍生物分別以lOnmol/kg的用量投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管采集投與前和至投與后60分鐘為止的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(〃<-&株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中促胃動(dòng)素免疫活性濃度(圖6)。此時(shí)，作為抗體，使用特異性識(shí)別序列號(hào)102所示的天然型促胃動(dòng)素的氨基酸號(hào)112的兔多克隆抗體(#870623)，標(biāo)記化合物使用125I_[Tyr7]人型促胃動(dòng)素。天然型促胃動(dòng)素和復(fù)合促胃動(dòng)素(AM)的氨基酸序列、分子量以及從血漿中的消除半衰期示于以下的表14。表14復(fù)合促胃動(dòng)素的氨基酸序列、分子量以及對(duì)大鼠靜脈內(nèi)投與時(shí)的從血漿中的消除半衰期一覽表(平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，N=3)肽氨基酸序列I分子璗T1/2蘋均值碌準(zhǔn)？值偏差關(guān)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>輯私素FVPIFTYGELQRVOQRKESKKPPAK2975.455.760.660.018置答促J爾氛素FVPIFTYGELQRVOQRKESKKPP2776.206.340.480.008復(fù)備促±胃S素FVFIFTYGELQRVQQRKESKK2S81.S76.142.370.032(K)_____*__復(fù)合促士胃δ素FVPIFTYGELQRVQQRKES2325.624.894.260.296(L)‘___JS_____________復(fù)合促土胃§素FVP丨FTYGELQRVG_2109.432.392.370.272...(H)J______1Iwj*=T檢驗(yàn)中與天然型促胃動(dòng)素的消除半衰期之間差異有顯著性(ρ<0.05)NS=T檢驗(yàn)中與天然型促胃動(dòng)素的消除半衰期之間無(wú)差異顯著性(ρ>0.05)結(jié)果還示于圖6。所評(píng)價(jià)的全部13種復(fù)合促胃動(dòng)素均保持了人促胃動(dòng)素受體激動(dòng)活性。關(guān)于復(fù)合促胃動(dòng)素(G、L和M)，與天然型促胃動(dòng)素相比看不到來(lái)自體內(nèi)的顯著的消除半衰期延長(zhǎng)作用，確認(rèn)到若失去氨基酸序列ESKK的結(jié)構(gòu)則作用消失。關(guān)于其他基序，確認(rèn)到與天然型促胃動(dòng)素相比均具有延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期的作用，其中是否保持了RKESKK的結(jié)構(gòu)對(duì)于半衰期延長(zhǎng)作用的影響最大。實(shí)施例7(天然型CNP-22和復(fù)合CNP的血漿半衰期)(1)靜脈內(nèi)投與序列號(hào)101所示的天然型CNP-22、和對(duì)天然型CNP-22的活性中心即由序列號(hào)101中的n末端起6位22位的氨基酸序列構(gòu)成的肽的n末端、c末端或兩端結(jié)合了由17氨基酸殘基構(gòu)成的半衰期延長(zhǎng)肽而成的7種復(fù)合CNP(CI)(序列號(hào)124130)，研究此時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，^^4-7^a；^公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本m文‘)A—公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將天然型CNP-22或復(fù)合CNP分別以lOnmol/kg的用量投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管采集投與前和至投與后60分鐘為止的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(〃<-&株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中CNP免疫活性濃度。此時(shí)，作為抗體，使用特異性識(shí)別天然型CNP-22的環(huán)部分結(jié)構(gòu)的兔多克隆抗體(#2)，標(biāo)記化合物使用125I-[Tyr°]CNP。復(fù)合CNP的氨基酸序列、分子量和從血漿中的消除半衰期示于表15。表15天然型CNP-22和復(fù)合CNP(CI)的氨基酸序列、分子量以及對(duì)大鼠以lOnmol/kg的用量進(jìn)行靜脈內(nèi)投與時(shí)的從血漿中的消除半衰期一覽表(平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>均形成以帶下劃線、斜體的半胱氨酸殘基生成S-S鍵的環(huán)狀結(jié)構(gòu)*:T檢驗(yàn)中與天然型CNP-22的消除半衰期之間差異有顯著性(p<0.05)結(jié)果還示于圖7。所評(píng)價(jià)的復(fù)合CNP(CI)均保持了人CNP受體激動(dòng)活性。本次評(píng)價(jià)的復(fù)合CNP與天然型CNP-22相比，消除半衰期均更長(zhǎng)。由此，可知本次評(píng)價(jià)的半衰期延長(zhǎng)肽無(wú)論結(jié)合在目標(biāo)肽的N末端側(cè)或C末端側(cè)的任一側(cè)或者結(jié)合在兩側(cè)，均具有半衰期延長(zhǎng)作用，另外，即便將氨基酸序列顛倒過來(lái)該性質(zhì)也不會(huì)受損。此外，顯示出即便C末端結(jié)構(gòu)酰胺化也具有半衰期延長(zhǎng)作用，可以根據(jù)目標(biāo)肽的結(jié)構(gòu)而選擇結(jié)合方式。棚列8(魏雜胃糖肺姊胃云力麵血僻衰其月)(2)靜脈內(nèi)投與天然型促胃動(dòng)素(序列號(hào)102)、和對(duì)天然型促胃動(dòng)素的活性中心即序列號(hào)102的氨基酸號(hào)112的氨基酸序列結(jié)合了由1422個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的各種長(zhǎng)度的半衰期延長(zhǎng)肽而成的26種復(fù)合促胃動(dòng)素(NZ、和IXIII)(序列號(hào)131156)，研究此時(shí)的血漿中促胃動(dòng)素免疫活性濃度變化。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，‘？VA.7^^公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本^一>義-jK一公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將人型促胃動(dòng)素或衍生物分別以lOnmol/kg的用量投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管經(jīng)時(shí)采集投與前和至投與后60分鐘為止的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(〃<-&株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中促胃動(dòng)素免疫活性濃度(圖8)。此時(shí)，作為抗體，使用特異性識(shí)別序列號(hào)102所示的天然型促胃動(dòng)素的氨基酸號(hào)112的兔多克隆抗體(#870623)，標(biāo)記化合物使用125I_[Tyr7]人型促胃動(dòng)素。天然型促胃動(dòng)素和復(fù)合促胃動(dòng)素(NZ、和IXIII)的氨基酸序列、分子量和從血漿中的消除半衰期示于以下的表16和圖8。表16-1復(fù)合促胃動(dòng)素的氨基酸序列、分子量以及對(duì)大鼠以lOnmol/kg的用量進(jìn)行靜脈內(nèi)投與時(shí)的從血漿中的消除半衰期一覽表(平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表16-2<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>*:T檢驗(yàn)中與天然型促胃動(dòng)素的消除半衰期之間差異有顯著性(p<0.05)NS:T檢驗(yàn)中與天然型促胃動(dòng)素的消除半衰期之間無(wú)差異顯著性(p^0.05)復(fù)合促胃動(dòng)素(XI)(MG-dl2/14)的結(jié)果、以及實(shí)施例6的復(fù)合促胃動(dòng)素(AM)的結(jié)果表明，本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式中，A可以不存在或者可以存在任意氨基酸數(shù)的序列。且表明該序列存在時(shí)的長(zhǎng)度優(yōu)選為19氨基酸左右的長(zhǎng)度，優(yōu)選為39氨基酸，更優(yōu)選為3氨基酸，最優(yōu)選為Val-Gln-Gln。復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-17E/N)、(U)(MG-17E/Q)、(ff)(MG-Des)的結(jié)果表明，對(duì)本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)作用而言是必需的結(jié)構(gòu)(核心序列RKESKK序列部分)中的RKESKK中的E(Glu)對(duì)于半衰期延長(zhǎng)作用而言是必需的氨基酸，復(fù)合促胃動(dòng)素(V)(MG-ES/DS)和(X)(MG-17E/D)的結(jié)果表明，該氨基酸能夠置換為D(Asp)。S卩，表明上述E(Glu)的位置的氨基酸為酸性氨基酸即可。復(fù)合促胃動(dòng)素(0)(MG-18S/F)、(P)(MG-18S/T)、(Q)(MG-18S/P)、(R)(MG-18S/L)、和(S)(MG-18S/A)的結(jié)果表明，關(guān)于RKESKK中的S(Ser)，能夠置換為T(Thr)、P(Pro)、1^(1^11)、？(116)或4仏13)。S卩，表明上述S(Ser)的位置的氨基酸能夠用芳香族氨基酸、疏水性氨基酸、和極性無(wú)電荷氨基酸等任一種具有側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的氨基酸置換。另外，復(fù)合促胃動(dòng)素(N)(MG-dS)的結(jié)果表明，上述S(Ser)的位置的氨基酸可以不存在。復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-17E/D)的結(jié)果表明，關(guān)于RKESKK中的R(Arg)和K(Lys)，只要各自為堿性氨基酸則能夠置換。RKESKK序列部分的特征在于，其包含堿性氨基酸簇(2個(gè)堿性氨基酸的連續(xù)序列)和酸性氨基酸；復(fù)合促胃動(dòng)素⑵(MG-il7G)、(I)(MG-il9G)、(II)(MG_il7G2)、和(III)(MG-il7G2-il9G)的結(jié)果表明，該簇間的距離能夠通過任意氨基酸的插入而擴(kuò)大。表16中記載的各復(fù)合肽的結(jié)果表明，堿性氨基酸簇間的距離為15氨基酸。復(fù)合促胃動(dòng)素⑴(MG-BR)的結(jié)果表明，RKESKK的排列方法可以為反向(KKSEKR)。另外，復(fù)合促胃動(dòng)素(XII)(MGP1)、(XIII)(MGP2)的結(jié)果表明，在串聯(lián)配置2個(gè)相當(dāng)于核心序列的序列的情況下半衰期延長(zhǎng)作用被增強(qiáng)，表明分子內(nèi)具有多個(gè)核心序列是用于實(shí)現(xiàn)更長(zhǎng)的血中半衰期延長(zhǎng)的有效手段。復(fù)合促胃動(dòng)素(VI)(MG-H1)、(VII)(MG-H3)、(VIII)(MG-H4)為如下所述的肽本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式中C的部分中，接著2個(gè)Pro(Pro-Pro序列)，配置了通過公知的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)法(Chou-Fasman法biochemistry.1974Jan15；13(2)222-45Predictionofproteinconformation.ChouPY,FasmanGD,或Garnier法JMolBiol.1978Mar25；120(1)97-120.Analysisoftheaccuracyandimplicationsofsimplemethodsforpredictingthesecondarystructureofglobularproteins.GarnierJ，0sguthorpeDJ，RobsonB.)而能夠預(yù)測(cè)形成a螺旋結(jié)構(gòu)的序列。這些復(fù)合肽的結(jié)果表明，關(guān)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式中的C，優(yōu)選配置能夠形成a螺旋結(jié)構(gòu)的任意的氨基酸序列。此外，如復(fù)合促胃動(dòng)素(IV)(MG-dPP)與復(fù)合促胃動(dòng)素D的比較、復(fù)合促胃動(dòng)素(V)(MG-dPPHl)與復(fù)合促胃動(dòng)素(VI)(MG-H1)的比較、復(fù)合促胃動(dòng)素(IX)(MG-dPPS)與復(fù)合促胃動(dòng)素(X)(MG-S)的比較所示，在相當(dāng)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的式C的氨基酸序列的N末端不存在P(Pro)的情況下，優(yōu)選在該部位配置P(Pro)序列(使C的氨基酸數(shù)在214的范圍的Pro數(shù)，優(yōu)選為Pro-Pro)。實(shí)施例9(天然型CNP-22和復(fù)合CNP的血漿半衰期)(2)靜脈內(nèi)投與序列號(hào)101所示的天然型CNP-22、和對(duì)天然型CNP-22的活性中心即由序列號(hào)101中的N末端起6位22位的氨基酸序列構(gòu)成的肽的C末端結(jié)合了由17或20氨基酸殘基構(gòu)成的半衰期延長(zhǎng)肽而成的復(fù)合CNP(D、J、K)(復(fù)合CNP的J為序列號(hào)157，復(fù)合CNP的K為序列號(hào)158)，研究此時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，>7V^.r^A7公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本m文‘)A—公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。將天然型CNP-22或復(fù)合CNP分別以20nmol/kg的用量投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管采集投與前和至投與后90分鐘為止的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(〃^株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中濃度。此時(shí)，作為抗體，使用特異性識(shí)別天然型CNP-22的環(huán)部分結(jié)構(gòu)的兔多克隆抗體(#2)，標(biāo)記化合物使用125I-[Tyr°]CNP。復(fù)合CNP的氨基酸序列、分子量和從血漿中的消除半衰期示于表17和圖9。表17天然型CNP-22和復(fù)合CNP(D、J、K)的氨基酸序列、分子量以及對(duì)大鼠以20nmol/kg的用量進(jìn)行靜脈內(nèi)投與時(shí)的從血漿中的消除半衰期一覽表(平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，N=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>*:T檢驗(yàn)中與天然型CNP-22的消除半衰期之間差異有顯著性(p<0.05)本次評(píng)價(jià)的復(fù)合CNP與天然型CNP-22相比，消除半衰期均顯著變長(zhǎng)。復(fù)合CNP(J)的結(jié)果表明，關(guān)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式B(核心序列)的RKESKK中的E(Glu)，可以用D(Asp)代替E。另外，復(fù)合CNP(K)的結(jié)果表明，在本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式B(核心序列)的RKESKK中的堿性氨基酸簇(RK、KK)與E之間，可以存在任意的氨基酸(例如，Val(可以是多個(gè))、H或P)。此外，表明關(guān)于本申請(qǐng)發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽的通式A的部分，并不特別需要為特定的氨基酸序列，可以為任意的氨基酸。例如，A的部分的氨基酸數(shù)只要在10以內(nèi)即可。實(shí)施例10(復(fù)合CNP的伸長(zhǎng)促講作用)(2)關(guān)于復(fù)合CNP(D、J)的伸長(zhǎng)促進(jìn)作用的用量依賴性，使用小鼠進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)使用3周齡的雌性S/VAFCrlj:CD1(ICR)小鼠(日本手\一X’U八一公司制)，以1組10只共計(jì)30只供于實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物為一起購(gòu)入3只均2周齡的母小鼠，對(duì)1只母小鼠分配10只子小鼠，群飼1周后使其斷乳，在投與期間中，各組均以5只X2籠在透明籠中群飼。水為自由攝取自來(lái)水，飼料為自由攝取固型飼料(CRF-1，才'J工酵母工業(yè)株式會(huì)社制)。分別以5mL/kg、50nmOl/kg和200nmol/kg的用量以1天1次、共56天對(duì)背部皮下反復(fù)投與介質(zhì)或復(fù)合CNP(D、J)(結(jié)構(gòu)如前所述)，測(cè)定投與期間中的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重。結(jié)果示于圖10，復(fù)合CNPJ投與結(jié)束第二天的小鼠的全身照片示于圖11。如圖10所示，通過反復(fù)皮下投與對(duì)天然型CNP-22結(jié)合了半衰期延長(zhǎng)肽的復(fù)合CNP(D、J)，從而小鼠的身長(zhǎng)和尾長(zhǎng)依賴于用量而顯著增加。實(shí)施例11(復(fù)合CNP的伸長(zhǎng)促講作用)(3)使用大鼠研究了復(fù)合CNP的伸長(zhǎng)促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)使用3周齡的雌性SD(IGS)系大鼠(日本f~一X'J八一公司制)，以1組5只、共計(jì)20只供于實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物以17天大小購(gòu)入，對(duì)1只母大鼠分配10只子大鼠，預(yù)備飼育后使其斷乳。投與期間中各組均用鋁懸掛籠飼育。水為自由攝取自來(lái)水，飼料為自由攝取固型飼料(CRF-1，才ij->夕>酵母工業(yè)株式會(huì)社制)。分別以5mL/kg、50nmOl/kg和200nmol/kg的用量以1天1次、共56天對(duì)背部皮下反復(fù)投與介質(zhì)或復(fù)合CNP(D)(結(jié)構(gòu)如前所述)，測(cè)定投與期間中的身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和體重。結(jié)果示于圖12。如圖12所示，以12.5、50和200nmOl/lmL/kg的用量反復(fù)皮下投與對(duì)天然型CNP-22結(jié)合了半衰期延長(zhǎng)肽的復(fù)合CNP(D)的大鼠的身長(zhǎng)，相對(duì)于介質(zhì)投與組顯著增加。實(shí)施例12(天然型CNP-22和天然型CNP-53以及復(fù)合CNP的血漿半衰期比較)測(cè)定單獨(dú)投與序列號(hào)101所示的天然型CNP-22、或與中性肽鏈內(nèi)切酶(NEP)抑制劑并用投與時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化，與靜脈內(nèi)投與天然型CNP-53(序列號(hào)159)和復(fù)合CNP(D)(結(jié)構(gòu)如前所述)時(shí)的血漿中CNP免疫活性濃度的變化進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)使用預(yù)先對(duì)大腿動(dòng)脈插入了聚乙烯管(PE-50，‘？VA.7^^公司制)的大鼠，在戊巴比妥鈉麻醉?xiàng)l件下實(shí)施。在單獨(dú)投與天然型CNP-22或與NEP抑制劑并用投與的組中，大腿靜脈也插入了聚乙烯管(PE-10，夕H*了夕-A7公司制)。作為試驗(yàn)體系，將7周齡的雄性SD系大鼠(日本f~一X^一公司制)以1組3只供于實(shí)驗(yàn)。作為NEP抑制劑使用DL-Thiorphan(Sigma公司制)，從天然型CNP-22的投藥開始前10分鐘至投與開始后60分鐘的采血結(jié)束為止，使用輸液泵(CFV2100，日本光電株式會(huì)社制)以70分鐘定速靜脈內(nèi)投與5%甘露醇(100uL/min/個(gè)體)或NEP抑制劑(30ug/100uL/min/個(gè)體)。分別以lOnmol/kg的用量將天然型CNP-22、天然型CNP-53或復(fù)合CNP(D)投與至大鼠的尾靜脈內(nèi)，通過插入到大腿動(dòng)脈的聚乙烯管采集投與前和投與后60分鐘為止的血液。向采集的血液中添加作為穩(wěn)定化劑和抗凝固劑的EDTA(同仁化學(xué)研究所制)和抑肽酶(株式會(huì)社制)，通過離心分離而分離血漿。通過競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫測(cè)定法(RIA法)測(cè)定血漿中CNP免疫活性濃度。此時(shí)，作為抗體，使用特異性識(shí)別天然型CNP-22和天然型CNP-53的共通結(jié)構(gòu)即環(huán)部分結(jié)構(gòu)的兔多克隆抗體(#2)，標(biāo)記化合物使用125I-[Tyr°]CNP-22。天然型CNP-22、天然型CNP-53和復(fù)合CNP(D)的氨基酸序列、分子量和從血漿中的消除半衰期示于表18和圖13。表18天然型CNP-22、天然型CNP-53和復(fù)合CNP⑶的氨基酸序列以及對(duì)大鼠以lOnmol/kg的用量進(jìn)行靜脈內(nèi)投與時(shí)的從血漿中的消除半衰期一覽表(平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，N=3)肽氨基酸序列分子量NEP抑制劑的并用T1/2(分鐘)平均值士P值天然型CNP-22GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC2198無(wú)1.11土0.16-有16.25±2.22*0.000天然型CNP-53OLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC~5802無(wú)15.72±1.49*0.000復(fù)合CNP(D)GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCVQQRKESKKPPAKLQPR_4198無(wú)20.30±3.09*0.000均形成以帶下劃線、斜體的半胱氨酸殘基生成S-S鍵的環(huán)狀結(jié)構(gòu)*:T檢驗(yàn)中與天然型CNP(無(wú)NEP抑制劑并用)的消除半衰期之間差異有顯著性(p<0.05)表18和圖13表明，復(fù)合CNP(D)與天然型CNP-22、天然型CNP-22+NEP抑制劑和天然型CNP-53中任一者相比，半衰期均更長(zhǎng)。天然型CNP-53具有NEP耐性，因此與天然型CNP-22相比半衰期更長(zhǎng)；關(guān)于對(duì)天然型CNP-22并用NEP抑制劑的情況下的藥代動(dòng)力學(xué)模式，兩者大致相同，因而認(rèn)為在天然型CNP-53的1-21位內(nèi)存在導(dǎo)致NEP耐性的氨基酸序列。另外在天然型CNP-53的1-21位內(nèi)存在與本申請(qǐng)發(fā)明的通式B(相當(dāng)于核心序列部分)類似的序列(RKYKGANKK)。復(fù)合CNP(D)與天然型CNP-53相比，顯示出更良好的藥代動(dòng)力學(xué)模式，由此表明在通式B所表示的堿性氨基酸簇間配置酸性氨基酸對(duì)于具有更長(zhǎng)的半衰期的特性而言是必要的。產(chǎn)業(yè)上的可利用性通過將本發(fā)明的半衰期延長(zhǎng)肽附加于短半衰期的目標(biāo)肽，從而能夠改善體內(nèi)動(dòng)態(tài)，成為具有作為藥物可實(shí)際應(yīng)用的半衰期的肽。權(quán)利要求以下的(I)或(II)的肽，(I)該肽由式B、A-B、B-C、或A-B-C表示，式中，A、B和C分別為以下的(1)、(2)、和(3)所表示的物質(zhì)，該肽在與其他目標(biāo)肽結(jié)合時(shí)，能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，同時(shí)與該目標(biāo)肽相比能夠延長(zhǎng)血漿中的半衰期；(II)該肽由如下序列構(gòu)成與(I)的肽反向的序列，在(I)中由A-B表示且A或B反向的序列，在(I)中由B-C表示且B或C反向的序列，或在(I)中由A-B-C表示且A、B、C、A和B、B和C、或A和C反向的序列；(1)A為由1～14個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽，(2)B為由式1(Wk-Xl-Y-Zm-Wn)-(Wo-Xp-Y-Zq-Wr)s所表示的肽，式1中，W為堿性氨基酸，X和Z為任意的氨基酸，Y為酸性氨基酸，k＝1或2，1為整數(shù)且4≥l≥0，m為整數(shù)且2≥m≥0，4≥l+m≥0，n＝1或2，o＝1或2，p為整數(shù)且4≥p≥0，q為整數(shù)且2≥q≥0，4≥p+q≥0，r＝1或2，s＝0或1，(3)C為由2～14個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，B為式1中s=1的肽。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肽，其中，在上述式1中，ο=0，ρ=0，q=0，r=2。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，C包含能夠取得α螺旋結(jié)構(gòu)的49個(gè)氨基酸序列。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肽，其中，C在其末端與能夠取得α螺旋結(jié)構(gòu)的氨基酸序列之間具有Pro序列。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，上述的A、B、和C為以下的⑴或(2)，(1)A為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)14的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)34中的氨基酸號(hào)59的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)34中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1017的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列；(2)A為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)18的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，B為序列號(hào)67中的氨基酸號(hào)913的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列，C為序列號(hào)67中與B連續(xù)的氨基酸號(hào)1417的1個(gè)以上的氨基酸序列，或該氨基酸序列中缺失、置換、和/或附加1個(gè)或多個(gè)氨基酸而成的氨基酸序列。7.一種復(fù)合肽，其由選自權(quán)利要求16中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端、或兩末端結(jié)合而成。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合肽，其中，目標(biāo)肽為心房鈉尿肽、C型鈉尿肽或促胃動(dòng)素、或者它們的衍生物。9.一種藥物組合物，其以權(quán)利要求7所述的復(fù)合肽或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。10.一種復(fù)合肽的制造方法，該復(fù)合肽與目標(biāo)肽相比血漿中的半衰期延長(zhǎng)，且具有該目標(biāo)肽的生理活性，其特征在于，將選自由權(quán)利要求16中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端結(jié)合。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，目標(biāo)肽為鈉尿肽或促胃動(dòng)素、或者它們的衍生物。12.一種延長(zhǎng)目標(biāo)肽的血漿中的半衰期的方法，其特征在于，將選自由權(quán)利要求16中任一項(xiàng)所述的肽所組成的組中的肽與目標(biāo)肽的N末端、C末端或兩末端結(jié)合。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，目標(biāo)肽為心房鈉尿肽、C型鈉尿肽或促胃動(dòng)素、或者它們的衍生物。14.一種能夠利用藥物組合物中所含的目標(biāo)肽而進(jìn)行治療的疾病的治療方法，其包括向個(gè)體投與權(quán)利要求9所述的藥物組合物。全文摘要以下的(I)或(II)的肽，(I)該肽由式B、A-B、B-C、或A-B-C表示，式中，A、B和C分別為以下的(1)、(2)、和(3)所表示的物質(zhì)，該肽在與其他目標(biāo)肽結(jié)合時(shí)，能夠保持該目標(biāo)肽的生理活性，同時(shí)與該目標(biāo)肽相比能夠延長(zhǎng)血漿中的半衰期；(II)該肽由如下序列構(gòu)成與(I)的肽反向的序列，在(I)中由A-B表示且A或B反向的序列，在(I)中由B-C表示且B或C反向的序列，或在(I)中由A-B-C表示且A、B、C、A和B、B和C、或A和C反向的序列；(1)A為由1～14個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽，(2)B為由式1(Wk-Xl-Y-Zm-Wn)-(Wo-Xp-Y-Zq-Wr)s所表示的肽，式1中，W為堿性氨基酸，X和Z為任意的氨基酸，Y為酸性氨基酸，k＝1或2，l為整數(shù)且4≥l≥0，m為整數(shù)且2≥m≥0，4≥l+m≥0，n＝1或2，o＝1或2，p為整數(shù)且4≥p≥0，q為整數(shù)且2≥q≥0，4≥p+q≥0，r＝1或2，s＝0或1，(3)C為由2～14個(gè)任意的氨基酸構(gòu)成的肽。文檔編號(hào)C07K7/08GK101809029SQ200980100291公開日2010年8月18日申請(qǐng)日期2009年5月22日優(yōu)先權(quán)日2008年5月23日發(fā)明者佐藤圣兒,若林直美申請(qǐng)人:阿斯比奧制藥株式會(huì)社