專利名稱：一種萍蓬草素a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種萍蓬草素A的制備方法。
背景技術(shù)：
萍蓬草素A (Nudaphantin),分子式為C41H3tlO26,分子量為938.67,是從睡蓮科植物日本萍蓬草M/pAar japonicum DC.根莖中分離得到的鞋質(zhì)類物質(zhì)，萍蓬草素A熔點(diǎn)為243-245°C，為白色粉末；藥理研究表明，萍蓬草素A對(duì)金黃色葡萄球菌和釀酒酵母Sarcchomyces cerevisiae有抗菌作用，對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶II型呈抑制活性，IC50為0.2 μ M。日本萍蓬草是一種在北半球溫帶廣泛分布的多年生根莖狀的草科植物，在亞洲地區(qū)一直被作醫(yī)藥品使用，含有多種生物堿和鞣質(zhì)。吳霞等發(fā)現(xiàn)日本萍蓬草根莖甲醇提取物對(duì)醋霉菌果蠅幼蟲有殺蟲活性，然而對(duì)鞣質(zhì)的研究較少，因此研究出一種制備日本萍蓬草鞣質(zhì)的方法是非常必要的，對(duì)擴(kuò)大藥源以及萍蓬草屬植物的綜合利用具有重要意義。目前對(duì)萍蓬草素A的研究較少，國(guó)內(nèi)尚無萍蓬草素A提取工藝方面的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解 決的技術(shù)問題是提供一種利用硅膠和高速逆流色譜結(jié)合提取分離萍蓬草素A的方法。本發(fā)明所述的一種萍蓬草素A的制備方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行:
一種萍蓬草素A的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)將日本萍蓬草根莖粉碎，用乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液；
(2)用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，乙酸乙酯萃取減壓濃縮，得到濃縮液；
(3)濃縮液與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液；
(4)洗脫液濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。步驟(I)中乙醇溶液為體積分?jǐn)?shù)60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液與日本萍蓬草根莖的質(zhì)量比為8-15:1。步驟(I)中超聲頻率為45-70ΚΗΖ。步驟(3)中二氯甲烷-甲醇體積比為17-2:1。步驟(4)中高速逆流色譜法溶劑系統(tǒng)為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(3-5):(2-3):(6-9): (2-5)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相。本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明先用硅膠柱層析對(duì)目標(biāo)成分進(jìn)行富集，降低了后續(xù)工序的處理量，高速逆流色譜法分離純化樣品損失小、產(chǎn)品純度高、制備量大。
具體實(shí)施方式
:
下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，下列實(shí)施例旨在舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1:
將日本萍蓬草根莖粉碎，取1kg，用12kg75%乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，超聲頻率為50KHz，提取3次，每次0.5h，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液，用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，過濾，濾液減壓濃縮，得到濃縮液，與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇按體積比15:1、7:1、2:1梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液，洗脫液濃縮注入高速逆流色譜儀，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:3:8:4為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，流動(dòng)相流速為3ml/min，根據(jù)檢測(cè)器譜圖收集萍蓬草素A流分，濃縮，冷凍干燥即得萍蓬草素A2.0g, HPLC檢測(cè)含量為98%。實(shí)施例2:
將日本萍蓬草根莖粉碎，取1kg，用10kg70%乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，超聲頻率為45KHz，提取2次，每次1.5h，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液，用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，過濾，濾液減壓濃縮，得到濃縮液，與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇按體積比17:1、9:1、2:1梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液，洗脫液濃縮注入高速逆流色譜儀，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水3:2:6:4為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，主機(jī)轉(zhuǎn)速為750rpm，流動(dòng)相流速為3.5ml/min，根據(jù)檢測(cè)器譜圖收集萍蓬草素A流分，濃縮，冷凍干燥即得萍蓬草素Al.9g，HPLC檢測(cè)含量為97%。實(shí)施例3:
將日本萍蓬草根莖粉碎，取lkg，用8kg60%乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，超聲頻率為70KHz，提取2次，每次1.5h，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液，用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，過濾，濾液減壓濃縮，得到濃縮液，與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇按體積比16:1、8:1、2:1梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液，洗脫液濃縮注入高速逆流色譜儀，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水3:2:6:2為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，主機(jī)轉(zhuǎn)速為750rpm，流動(dòng)相流速為4ml/min，根據(jù)檢測(cè)器譜圖收集萍蓬草素A流分，濃縮，冷凍干燥即得萍蓬草素A2.3g，HPLC檢測(cè)含量為95%。實(shí)施例4:
將日本萍蓬草根莖粉碎，取1kg，用15kg85%乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，超聲頻率為65KHz，提取2次，每次lh，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液，用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，過濾，濾液減壓濃縮，得到濃縮液，與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇按體積比17:1、9:1、2:1梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液，洗脫液濃縮注入高速逆流色譜儀，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水5:3:9:5為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為 流動(dòng)相，主機(jī)轉(zhuǎn)速為900rpm，流動(dòng)相流速為2.5ml/min，根據(jù)檢測(cè)器譜圖收集萍蓬草素A流分，濃縮，冷凍干燥即得萍蓬草素A2.5g，HPLC檢測(cè)含量為98%。
權(quán)利要求
1.一種萍蓬草素A的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將日本萍蓬草根莖粉碎，用乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，提取液濃縮，得到日本萍蓬草根莖乙醇粗提液； (2)用乙酸乙酯對(duì)粗提液進(jìn)行萃取，乙酸乙酯萃取減壓濃縮，得到濃縮液； (3)濃縮液與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，收集萍蓬草素A洗脫液； (4)洗脫液濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中乙醇溶液為體積分?jǐn)?shù)60-85%的乙醇水溶液，乙醇溶液與日本萍蓬草根莖的質(zhì)量比為8-15:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中超聲頻率為45-70KHZ。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中二氯甲烷-甲醇體積比為 17-2:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜法溶劑系統(tǒng)為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(3-5):(2-3):(6-9): (2-5)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種萍蓬草素A的制備方法。制備方法包括以下步驟將日本萍蓬草根莖粉碎，用乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，得到醇提液，用乙酸乙酯對(duì)醇提物進(jìn)行萃取，過濾，濾液減壓濃縮，與少量硅膠拌樣后，揮干溶劑，上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、能耗小、產(chǎn)品純度高。
文檔編號(hào)C07H1/08GK103242385SQ20131018871
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司