一種二肽Fmoc-Ser（tBu）-Cys-OH的合成方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種合成Fmoc-Ser（tBu）-Cys-OH二肽模塊的新方法，包括以下步驟：L-絲氨酸、甲醇和二氯亞砜為反應(yīng)物，反應(yīng)得L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽；進(jìn)一步反應(yīng)得（S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯對(duì)甲苯磺酸鹽；（S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯皂化得到（S)-O-叔丁基絲氨酸，然后同芴甲氧羰酰氯或者芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺反應(yīng)得到（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸；（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽做縮合劑同L-半胱氨酸反應(yīng)得到（S)-N-(（S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸；本發(fā)明步驟簡(jiǎn)單，處理方便，生產(chǎn)周期短，成本低廉。
【專利說(shuō)明】—種二肽 Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH 的合成方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物和醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】,涉及一種Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH的合成方法，獲得的Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH是非常重要的多肽合成的原料。

【背景技術(shù)】
[0002]多肽合成是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過(guò)程，固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。從1963年固相多肽合成以來(lái)，經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法無(wú)法比擬的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH就是固相合成中的一個(gè)基本的二肽模塊。
[0003]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]要解決的技術(shù)問(wèn)題:提供了 Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH 二肽模塊的合成方法，為固相合成多肽序列奠定了模炔基礎(chǔ)。
[0005]本發(fā)明技術(shù)方案為:一種Fmoc-Ser (tBu) -Cys-OH的合成方法,包括以下步驟:
(1)在0°C條件下，把二氯亞砜滴入無(wú)水甲醇中，然后加入絲氨酸，室溫反應(yīng)得到L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽；
(2)絲氨酸甲酯鹽酸鹽在二氯甲烷為溶劑直接在對(duì)價(jià)苯磺酸催化下通入異丁烯反應(yīng)48-96小時(shí)得到O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯對(duì)甲苯磺酸鹽；
(3)0-叔丁基-L-絲氨酸甲酯對(duì)甲苯磺酸鹽直接在10%的碳酸鈉溶液中皂化20-25小時(shí)，然后加入芴甲氧羰酰氯或者芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的I，4- 二氧六環(huán)溶液反應(yīng)20-25小時(shí)得到N-荷甲氧擬基-O-叔丁基-L-絲氨酸；
(4)N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-絲氨酸在N-羥基琥珀酰亞胺和縮合劑1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的四氫呋喃溶液中和L-半胱氨酸反應(yīng)得到
(5)-N-((S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸白色固體。
[0006] 所述的合成方法的反應(yīng)式如下:

【權(quán)利要求】
1.一種二肽Fmoc-Ser (tBu)-Cys-OH的合成方法,其特征在于所述的合成方法,包括以下步驟: 步驟I)絲氨酸在無(wú)水甲醇溶劑中加入二氯亞砜，反應(yīng)15-36小時(shí)后，旋蒸出溶劑，再用乙醚或甲基叔丁基醚打漿得到L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽白色固體； 步驟2) L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽在二氧六環(huán)或者二氯甲烷為溶劑直接在對(duì)價(jià)苯磺酸催化下通入異丁烯反應(yīng)48-96小時(shí)得到O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯白色固體； 步驟3)0-叔丁基-L-絲氨酸甲酯先在10%的碳酸鈉中皂化20-25小時(shí)，然后同芴甲氧羰酰氯或者芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺反應(yīng)20-25小時(shí)得到(S) -N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸白色固體； 步驟4) (S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸在N-羥基琥珀酰亞胺和縮合劑1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的四氫呋喃溶液中和L-半胱氨酸反應(yīng)得到(S)-N-( (S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基羰基)半胱氨酸白色固體； 所述的合成方法的反應(yīng)式如下: O
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特征在于所述的合成方法，包括以下步驟: 步驟I)在5升的圓底燒瓶中，加入4升無(wú)水甲醇，將溶液冷卻至-5°C后在I小時(shí)內(nèi)滴加310毫升氯化亞砜，滴完之后，(TC反應(yīng)I小時(shí)，然后加入L-絲氨酸，加完之后升溫至室溫反應(yīng)24h，TLC監(jiān)控，茚三酮溶液顯色，36h后反應(yīng)完成，旋蒸出溶劑，加入3升甲基叔丁基醚打漿，然后過(guò)濾，干燥后得到577克L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽白色固體；步驟2)在20升的高壓釜中加入500克L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽、1.23Kg對(duì)價(jià)苯磺酸和15升的二氯甲烷，密閉冷卻至_7°C后，通入過(guò)量的異丁烯，然后升至室溫反應(yīng)，TLC監(jiān)控反應(yīng)，茚三酮顯色，72小時(shí)后，反應(yīng)完成，旋蒸出大量的二氯甲烷，然后加入10升的甲基叔丁基醚打漿，然后過(guò)濾，干燥后得到800g (S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯白色固體； 步驟3)在50升的玻璃反應(yīng)釜中，加入800克(S)-O-叔丁基絲氨酸甲酯和16升的10%的碳酸鈉溶液，室溫皂化24小時(shí)，然后冷卻至_5°C，將813克9-芴甲基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯溶解在8升I，4- 二氧六環(huán)中，將溶液I小時(shí)內(nèi)滴入反應(yīng)釜中，升溫至室溫，TCL監(jiān)控，反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完成后，用5升甲基叔丁基醚萃取，然后分液，水相冷卻至0°C，濃鹽酸調(diào)PH至2-3，再用10升甲基叔丁基醚萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥后，脫溶得到900克(S)-N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸白色固體； 步驟4)在20升的玻璃反應(yīng)釜中，加入800克(S) -N-芴甲氧羰基-O-叔丁基絲氨酸、240克N-羥基琥珀酰亞胺和3.8升四氫呋喃，控制反應(yīng)液溫度為20 V，將520克1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽加入1.5升N，N- 二甲基甲酰胺和1.5升四氫呋喃的混合液中，攪拌均勻，然后I小時(shí)內(nèi)滴加至20升的玻璃反應(yīng)釜中，滴加完成后升溫至室溫反應(yīng)6小時(shí)，TLC監(jiān)控，原料反應(yīng)完成后，降溫至-5°C ;將176克一水氫氧化鋰、118克碳酸鋰和700克L-半胱氨酸溶解在4.75升的冰水中，I小時(shí)內(nèi)滴入20升的反應(yīng)釜中，滴加完成后，30min內(nèi)升溫至室溫，然后室溫反應(yīng)1.5小時(shí)，TLC監(jiān)控，反應(yīng)完成后，用20%的硫酸調(diào)節(jié)pH值為2，然后加入3 X 2L乙酸乙酯萃取，萃取液用無(wú)水硫酸鈉干燥，然后脫溶，重結(jié)晶提純得到830克(S)-N-( (S)-N-荷甲氧擬基-O-叔丁基擬基)半胱氨酸白色固體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特征在于所述的合成方法步驟I)中反應(yīng)時(shí)間為36小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所 述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特征在于所述的合成方法步驟2)中反應(yīng)時(shí)間為72小時(shí)，步驟3)的皂化時(shí)間為24h，反應(yīng)時(shí)間為24小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種二肽Fmoc-Ser(tBu)-Cys-OH的合成方法,其特征在于所述的合成方法步驟3)的皂化時(shí)間為24h，反應(yīng)時(shí)間為24小時(shí)。
【文檔編號(hào)】C07K5/062GK104163848SQ201410398112
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月14日
【發(fā)明者】張冬冬 申請(qǐng)人:蘇州維泰生物技術(shù)有限公司