植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，它是由自外至內(nèi)依次疊套在一起的大離心管、中離心管和小離心管組成，在大離心管管口部位的外側(cè)壁上開設(shè)有外螺紋，其上旋擰有密封壓蓋；中離心管和小離心管的弧形底面上均布有通孔，在小離心管的底部鋪設(shè)有濾膜，在中離心管的底部鋪設(shè)有超濾膜。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，組裝、操作簡(jiǎn)便，方便實(shí)用。疊套在一起的三個(gè)離心管與離心機(jī)配合使用，集植物胞間液蛋白制備和濃縮于一體，簡(jiǎn)化了操作步驟，可在短時(shí)間內(nèi)獲得較高純度和濃度的植物胞間液蛋白，降低了胞內(nèi)蛋白的污染，最大程度的減少了胞間液蛋白的降解，提高了植物胞間液蛋白收集和濃縮的工作效率和精度，降低了對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的擾動(dòng)。
【專利說明】植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及植物胞間液蛋白解析研究用裝置，尤其是涉及一種植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管。
【背景技術(shù)】
[0002]在植物科學(xué)研究中，植物胞間液中蛋白的成分、功能等逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。胞間液又稱細(xì)胞間液，是指細(xì)胞之間的液體物質(zhì)，其組分及其行使的功能有別于胞內(nèi)液，亦稱之為分泌液(secretion)。植物胞間液中的蛋白成分在植物生長(zhǎng)發(fā)育和抗病抗逆反應(yīng)及其信號(hào)傳導(dǎo)過程中發(fā)揮著重要作用。目前，國內(nèi)外眾多實(shí)驗(yàn)室，利用超濾、高效液相、(雙向)電泳及生物質(zhì)普等蛋白質(zhì)組學(xué)工具，對(duì)各種植物胞間液蛋白成分進(jìn)行分離、純化、同源序列解析，以期探索植物胞間液各種蛋白成分的生物學(xué)功能。
[0003]由于植物胞間液中蛋白含量較低，植物胞間液的制備和其中蛋白成分的濃縮是上述領(lǐng)域工作的關(guān)鍵步驟。早前的研究中，人們一般采用傷流等較粗糙的手段進(jìn)行收集和制備。該方法用時(shí)較長(zhǎng)，且容易因組織中細(xì)胞損傷受到胞內(nèi)成分的污染。近年來，對(duì)植株的葉片及莖段胞間液的提取通常使用注射器與離心管的結(jié)合，通過離心利用注射器底部的小孔將胞間液收集在注射器外套的離心管中，完成植物胞間液的制備，再通過冷凍、沉淀或超濾等方法進(jìn)行蛋白濃縮。這種方法通過對(duì)離心機(jī)轉(zhuǎn)速的控制，可以最大程度的避免胞內(nèi)液對(duì)胞間液的污染。但是，此種方法仍存在著以下不足:1、該收集方法操作相對(duì)繁雜，而且操作不簡(jiǎn)便。2、操作時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。由于該方法是在植物胞間液收集以后再進(jìn)行超濾，時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)造成胞間液量或質(zhì)的改變，特別是胞間液中的蛋白很容易降解，對(duì)蛋白的相關(guān)分析帶來了擾動(dòng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型的目的在于提供一種操作簡(jiǎn)單、集制備與濃縮于一體的植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型可采取下述技術(shù)方案:
[0006]本實(shí)用新型所述的植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，它是由自外至內(nèi)依次疊套在一起的大離心管、中離心管和小離心管組成，在所述大離心管管口部位的外側(cè)壁上開設(shè)有外螺紋，其上旋擰有密封壓蓋；所述中離心管和小離心管的弧形底面上均布有通孔，在所述小離心管的底部鋪設(shè)有濾膜，在所述中離心管的底部鋪設(shè)有超濾膜。
[0007]均布在所述中離心管和小離心管弧形底面上的通孔直徑為1_。
[0008]所述濾膜的孔徑小于高等植物細(xì)胞的最小直徑，所述超濾膜的孔徑與待截留的蛋白分子量大小相適應(yīng)。
[0009]本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，組裝、操作簡(jiǎn)便，方便實(shí)用。疊套在一起的三個(gè)離心管與離心機(jī)配合使用，集植物胞間液蛋白制備和濃縮于一體，簡(jiǎn)化了操作步驟，可在短時(shí)間內(nèi)獲得較高純度和濃度的植物胞間液蛋白，不但降低了胞內(nèi)蛋白的污染，而且最大程度的減少了胞間液蛋白的降解，提高了植物胞間液蛋白收集和濃縮的工作效率和精度，大大降低了對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的擾動(dòng)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011]如圖1所示，本實(shí)用新型所述的植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，它是由自外至內(nèi)依次疊套在一起的大離心管1、中離心管2和小離心管3組成，在大離心管I管口部位的外側(cè)壁上開設(shè)有外螺紋，其上旋擰有密封壓蓋4 ;中離心管2和小離心管3的弧形底面上均勻開設(shè)有直徑1_的通孔，在小離心管3的底部鋪設(shè)有濾膜5，在中離心管2的底部鋪設(shè)有超濾膜6。實(shí)際制造時(shí)，濾膜5的孔徑小于高等植物細(xì)胞的最小直徑(一般選擇孔徑< ΙΟμπι即可)，超濾膜6的孔徑與待截留的蛋白分子量大小相適應(yīng)，如可以選擇lOkDa。
[0012]使用時(shí)，首先在小離心管3底部鋪設(shè)濾膜5，在中離心管2底部鋪設(shè)超濾膜6，然后將中離心管套裝在大離心管I內(nèi)，將小離心管3套裝在中離心管2內(nèi)。
[0013]將植物的莖(或葉片、根)用一定濃度的磷酸緩沖液清洗，再用常規(guī)的真空負(fù)壓儀進(jìn)行負(fù)壓處理20分鐘后放入小離心管3中，蓋上密封壓蓋4，放入離心機(jī)中進(jìn)行分離。
[0014]在離心力的作用下，含有蛋白的胞間液從小離心管3流入中離心管2中，組織殘?jiān)图?xì)胞碎片在濾膜5的阻隔下，留在小離心管3內(nèi)；同樣，在離心力的作用下，胞間液通過中離心管2流入大離心管I中，其中的蛋白被鋪設(shè)在中離心管2底部的超濾膜6截留，即為濃縮的較高純度、較高含量的蛋白樣品。
【權(quán)利要求】
1.一種植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，其特征在于:它是由自外至內(nèi)依次疊套在一起的大離心管(I)、中離心管(2)和小離心管(3)組成，在所述大離心管(I)管口部位的外側(cè)壁上開設(shè)有外螺紋，其上旋擰有密封壓蓋(4);所述中離心管(2)和小離心管(3)的弧形底面上均布有通孔，在所述小離心管(3)的底部鋪設(shè)有濾膜(5)，在所述中離心管(2)的底部鋪設(shè)有超濾膜(6)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，其特征在于:均布在所述中離心管(2)和小離心管(3)弧形底面上的通孔直徑為1mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物胞間液蛋白制備與濃縮復(fù)合管，其特征在于:所述濾膜(5)的孔徑小于高等植物細(xì)胞的最小直徑，所述超濾膜(6)的孔徑與待截留的蛋白分子量大小相適應(yīng)。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK203768278SQ201420142551
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月27日
【發(fā)明者】徐靜, 張綿綿, 臧新, 楊冬之, 李寧, 李娜, 鄒春陽 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)