專利名稱：甘油三酸酯的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘油三酸酯。
必需脂肪酸(EFA)包含下面表1所列的十二種化合物。盡管分別作為n-6和n-3必需脂肪酸系列的母體化合物的亞油酸和α-亞麻酸是人們從飲食中攝取的主要必需脂肪酸來(lái)源，但是這類物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)的活性相對(duì)較小。為了得到充分的利用，在機(jī)體內(nèi)母體化合物必需按表1所示的反應(yīng)順序進(jìn)行代謝反應(yīng)。以量化表示，n-6系列主要的必需指肪酸代謝物是二高γ-亞麻酸(DGLA，二十碳三烯酸)和花生四烯酸(AA)，而n-3系列的主要代謝物是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，這可通過(guò)它們?cè)诩?xì)胞膜和其它脂質(zhì)體的含量水平來(lái)判定。DGLA，AA，EPA和DHA是機(jī)體大多數(shù)體內(nèi)類脂物的重要組成成分。同時(shí)它們本身也很重要，可以衍生出一系列的氧化產(chǎn)物，即二十碳氧化物，其中包括前列線素、白三烯和其它化合物。
在表1中的鏈增長(zhǎng)反應(yīng)，即在鏈中加入二個(gè)碳原子的反應(yīng)是比較快的，而增加雙鍵的去飽和反應(yīng)就非常慢。這樣象γ-亞麻酸(GLA)就可快速地轉(zhuǎn)換成DGLA，而十八碳四烯酸也可很容易地轉(zhuǎn)換成20∶4n-3，因此各個(gè)化合物與其的對(duì)應(yīng)物在飲食營(yíng)養(yǎng)方面是等同的。然而，DGLA轉(zhuǎn)換成AA是很慢的。在人體中這種反應(yīng)一般是不可逆的，n-3和n-6系列酸之間也是不可相互轉(zhuǎn)換的。
表1n-6n-318:2δ:-9,1218:3δ-9,12,15((亞油酸)cid)(亞油酸)|(α-亞麻酸)δ-6去飽和.
18:3δ-6,9,12↓18:4δ6,9,12,15(1γ-亞麻酸)|(硬脂四烯酸)增長(zhǎng)20:3δ-8,11,14↓20:4δ-8,11,14,17(二高-γ-亞麻酸)|δ-5去飽和20:4δ5,8,11,14↓20:5δ5,8,11,14,17(花生四烯酸)|(二十碳五烯酸:1)增長(zhǎng)22:4-7,10,13,16↓22:5δ-7,10,13,16,19(腎上腺酸:1)|δ-4去飽和22:5δ-4,7,10,13,16↓22:6δ-4,7,10,13,16,19('二十二碳六烯酸各種脂肪酸在自然界均是以順式構(gòu)型存在的，它們均作為相應(yīng)的十八烷酸。二十烷酸或二十二烷酸的衍生物來(lái)作系統(tǒng)命名，如δ-9，12-十八碳二烯酸或δ-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸，但用數(shù)示符號(hào)表示更為方便，如相應(yīng)的18∶2n-6酸或22∶6n-3酸也可用第一個(gè)字母縮寫(xiě)，如EPA代表20∶5n-3酸(二十碳五烯酸)或DHA代表20∶6n-3酸(二十二碳六烯酸)，但是當(dāng)n-3和n-6脂肪酸具有相同的鏈長(zhǎng)度和不飽和度時(shí)就不可用第一個(gè)字母縮寫(xiě)，如20∶5脂肪酸。表中列出了n-6系列各種酸的或多或少通用的俗名，在n-3系列中只有18∶3n-3具有通用俗名，即α-亞麻酸，盡管人們逐漸開(kāi)始使用硬脂四烯酸代表18∶4n-3酸，其它仍用二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
越來(lái)越明顯，許多病癥是由于必需脂肪酸生化過(guò)程的失常而導(dǎo)致各種類脂體和各種組織中的必需脂肪酸水平的異常引起的。這些病包括心臟和循環(huán)方面的病病如高血壓、冠狀或末梢血管疾病、炎癥和免疫方面的疾病如特異性失調(diào)、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn氏癥和各種一般歸結(jié)為炎癥或自動(dòng)免疫方面的失調(diào)、神經(jīng)失調(diào)如Alzheimer氏癥，帕金森氏癥和多發(fā)性硬化、腎病、皮膚病、腸胃道病、鈣代謝和其它礦物元素代謝病、骨骼和結(jié)締組織疾病，生殖及內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，精神病包括精分裂癥，和衰老性疾病。
過(guò)去人們一直認(rèn)為無(wú)論從營(yíng)養(yǎng)角度還是從治病角度供應(yīng)亞油酸和α-亞麻酸就足夠了，身體自身的代謝將會(huì)完成其它方面的轉(zhuǎn)換。現(xiàn)在已以清楚地表明這不是真的。不同疾病其EFA的異常型式是不一樣的，因?yàn)榇x方面的問(wèn)題，它們不可能通過(guò)簡(jiǎn)單地供給亞油酸或α-亞麻酸就得到解決。許多文章及先前的發(fā)明專利中有許多這方面的實(shí)例，相關(guān)的文章包括HorrobinD.F的RevContemporaryPharmacotherapy1990∶1∶1-41,HorrobinD.F.的ProgressLipidRes1992∶31∶163-194和HorrobinD.F與MankuM.S.“Omega-6-EssentialFattyAcids”pp21-51,Horrobin,D.F編,NewYork:Wiley-Liss,1990。
因此在一些情況下需要同時(shí)供給兩種或更多種的EFA。為此，將EFA按以下分組ⅰ.GLA和DGLAⅱ.AA和它的代謝物腎上腺酸和22∶5n-6酸ⅲ.硬脂四烯酸(SA)和20∶4n-3酸ⅳ.EPA和它的代謝物22∶5n-3酸和DHA。
此外，由于EFA易于氧化，所以可一起加上可做為抗氧化劑的油酸(OA)。
EFA可以以各種形式以及混在各種混合物中來(lái)供給，在營(yíng)養(yǎng)及醫(yī)療處理上一般均可很方便地以預(yù)定的形式尤其是分子來(lái)供給脂肪酸。但真正對(duì)藥物而言，關(guān)于復(fù)合產(chǎn)品的條文和指令越來(lái)越具有約束和限制性。例如，為了得到一種含化合物A，B和C的復(fù)合藥物的政府許可，現(xiàn)在單單將三種化合物混合成制劑X，再將X與安慰劑P比較已不再夠?，F(xiàn)在許多政府都要求證明每種單個(gè)化學(xué)品的作用價(jià)值，是否新配方是各種物質(zhì)的協(xié)同作用或者是新近發(fā)現(xiàn)的除原功效外其它同時(shí)存在的功效。因此至少臨床上要拿P與X比較，與單獨(dú)的A比較，與單獨(dú)的C比較。一些政府還可能要求與A+B，A+C和B+C比較。因此將需要至少五組有時(shí)可能是八組進(jìn)行測(cè)定，使花費(fèi)大幅度上升。為了避免這種情況發(fā)生，最好用同時(shí)含A、B和C的單一分子Y代替A、B和C的混合物，只需兩組，即直接并簡(jiǎn)單地測(cè)定Y和P就行了。從這個(gè)目的出發(fā)，建議使用能含容三種脂肪酸的甘油三酸酯。
在同一分子的甘油三酸酯中可包含上述不同組的EFA和油酸，這些酸要在1，2和3位上隨意排列，也可具體發(fā)現(xiàn)具體的EFA在分子的某一個(gè)位置。每種甘油三酸酯上的一個(gè)或兩個(gè)位置被一種脂肪酸占據(jù)，而其它的一或二位位置則占據(jù)著一種或兩種其它的脂肪酸。在甘油中 1位和3位在外形上是一致的，但在其衍生物中則不一致。帶有三個(gè)不同脂肪酸X，Y和Z的甘油三酸酯其C2是手性的，理論上可畫(huà)出四種結(jié)構(gòu)
表2 在溶液中，作為Ⅰ的光學(xué)異構(gòu)體的Ⅱ等同于Ⅲ，我們可以看作YO-鍵的分子旋轉(zhuǎn)使得-CH2OX轉(zhuǎn)到頂端，對(duì)于Ⅰ和Ⅳ來(lái)說(shuō)也是一樣。但是在生物系統(tǒng)中，接受體一般要求將與其鍵合的基團(tuán)在一定的位置，最好是必須以一種或另一種異構(gòu)體的形式存在。
酯化反應(yīng)過(guò)程一般都要盡力使產(chǎn)物為所需的那種異構(gòu)體，如果不是這樣的話，那末由兩種酸組成的初始混合物制成的甘油三酸酯中每種酸殘基的位置將為下面幾種中的一種表3aAAA AAB*ABA ABB*BABBBB對(duì)于三種不同酸組成的初始混合物則為
表3bAAA AAB*AAC*ABA ABB*ABC*ACA ACB*ACC*BAB BAC*BBB BBC*BCB BCC*CACCBCCCC以手性的C2為中心可能形成兩種等同的異構(gòu)體，至少與酶合成相反的化學(xué)品中是這樣的。當(dāng)然兩種或三種酸具體是什么，取決于從可用酸中所進(jìn)行的選擇。對(duì)于定向合成，所制備的異構(gòu)體是可預(yù)測(cè)的。
根據(jù)上面所述，作為異構(gòu)物群體或單一形式的甘油三酸酯，這些甘油三酸酯包含a)選自油酸和表1各組所列的酸中的一種酸的兩個(gè)殘?bào)w(ⅰ)GLA和DLA(ⅱ)AA，腎上腺酸，和22∶5n-6酸(ⅲ)硬脂四烯酸和20∶4n-3酸(ⅳ)EPA，22∶5n-3酸，和DHA和選自一種不同的酸的殘?bào)w；或b)選自油酸和上面的ⅰ)和ⅳ)組中的酸中的一種酸的殘?bào)w，選自與之不同的一種酸的殘?bào)w，和選自另一種酸的殘?bào)w，前提是從一組中選出酸后，隨之的選擇必須在另一組進(jìn)行。
所定義的異構(gòu)體組包括位置和/或光學(xué)異構(gòu)體，它們可定向或非定向合成按比例產(chǎn)生，或者通過(guò)所合成的混合物的按比例處理來(lái)增加某種異構(gòu)體或某組異構(gòu)體的比例。此外，根據(jù)合成方法和增加程度的不同，也會(huì)存在不等量的其它不同于上述定義的甘油三酸酯。
所需異構(gòu)體組的選擇也可制成如下的表格，對(duì)于各種甘油三酸酯(TG)任意編上號(hào)碼，或者一定的號(hào)碼相應(yīng)于代表各種可能的甘油三酸酯異構(gòu)體組。例如TG1是由兩個(gè)(ⅰ)組基團(tuán)和一個(gè)(ⅳ)組基團(tuán)的甘油酯如二-γ-亞麻酸基-單二十碳五烯酸甘油酯組成的。
表41-2--12-21--312---4-2-1-5-1--26-12--721---8-1-2-9-11-11011--111-1-1112111--13-111-1411-1-15--1-2161---217---1218--2-1192---120---21211-1-122--111
231--11241-2--25--21-262-1--27--12-281-11-292--1-301--2-除上述的結(jié)構(gòu)造條件之外，本發(fā)明也可考慮按照酸的初始混合物，從油酸和上面ⅰ)至ⅳ)組酸中進(jìn)行選擇，以摩爾比表示(66%代表三分之二，33%代表三分之一)ⅰ)66%從油酸和ⅰ至ⅳ組中的酸選出來(lái)的一種酸，33%是從中選出的其它一種酸；或ⅱ)33%是從油酸和ⅰ至ⅳ組中的酸選出來(lái)的一種酸；33%是從中選出來(lái)的其它一種酸；33%是從中選出的另一種酸。
從表4中可將得到優(yōu)選的初始混合物，其中的各種甘油三酸酯均隨意地編上參考號(hào)碼，或者說(shuō)是可能代表的甘油三酸酯異構(gòu)體，標(biāo)出了殘基的數(shù)目，將66(摩爾)%(三分之二)標(biāo)成＇2＇，33(摩爾)%(三分之一)標(biāo)成＇1＇。
用于需要得出含兩種或三種酸的混合甘油三酸酯，合成的混合物中含有表3a和3b中的種類AAA和BBB之類的不想要的成份，但是因?yàn)樗璧幕旌戏N類占大多數(shù)，因此這樣合成的混合物是有價(jià)值的。當(dāng)需要得出含三種酸的混合甘油三酸酯時(shí)，所需的種類并不占多數(shù)但仍占有有效的比例。在上述任何一種情況下，可用層析法或工作人員所知的其它方法將所需的種類和其它物質(zhì)全部或部分地分離開(kāi)來(lái)。
具體的甘油三酸酯，無(wú)論是含有三種不同的脂肪酸或是含兩種比例為2∶1的脂肪酸的甘油三酸酯，均可用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的化學(xué)法或酶法來(lái)制備。如果合成或制備出來(lái)的所需甘油三酸酯的濃度不夠，那末將可用后面將述及的適合的方法來(lái)進(jìn)行濃縮和純化。
就我們所知，上面列出的全部各組甘油三酸酯異構(gòu)體包括了自然界不存在同時(shí)先前并無(wú)報(bào)導(dǎo)過(guò)的新的甘油三酸酯。它們主要通過(guò)下述方法制備a)來(lái)源于自然界動(dòng)物、植物或微生物或者是通過(guò)化學(xué)合成的單體脂肪酸通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法進(jìn)行純化。
b)然后也通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法將各單體脂肪酸用化學(xué)法或酶法與甘油進(jìn)行酯化反應(yīng)。例如，可將脂肪酸和甘油可選用大量適合酶中的一種進(jìn)行催化反應(yīng)，也可在對(duì)甲基苯磺酸存在下進(jìn)行反應(yīng)。
c)如果需要，具體的甘油三酸酯還可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的適當(dāng)方法進(jìn)行進(jìn)一步純化。特別是用高壓液相層析或其它適合的層析法；低溫結(jié)晶，使用可有區(qū)別地選擇含特種組分的甘油三酸酯的溶劑。
在產(chǎn)品中，所需的具體的一種或一組甘油三酸酯在混合物中的含量應(yīng)超過(guò)10%，最好是30%以上，70%以上則更好，理想狀況下要超過(guò)90%，從而該混合物可用于制備藥物、食品或護(hù)膚品。在藥品或食品中配入甘油三酸酯，其每天的劑量為1mg至100g，10mg至10g則更好，最好是500mg至4g。在食品或護(hù)膚品中甘油三酸酯的配制濃度為0.001至50%，0.05至20%則更好，0.1至5%最好。
特定的甘油三酸酯具有廣泛的用途。它們可用作藥物用來(lái)防治已證實(shí)是由于EFA異常所導(dǎo)致的疾病。它們可加到食品或加到營(yíng)養(yǎng)品中或本身作為營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)品來(lái)滿足需求特種EFA來(lái)防治疾病的人們。它們也可用在食品或獸藥中。它們也可用作護(hù)膚品。
本領(lǐng)域技術(shù)人員均熟知甘油三酸酯可以任何適當(dāng)?shù)姆绞絹?lái)配制，用于制備藥品、護(hù)膚品或食品。它們可經(jīng)口、經(jīng)腸、局部、非腸道(皮下、肌內(nèi)、靜脈或任何其它途徑)、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道給藥，或者通過(guò)任何其它適當(dāng)?shù)耐緩浇o藥。
合成實(shí)施例下面是甘油三酸酯合成的實(shí)施例。
在表4所列的一系列甘油三酸酯中選擇十四種進(jìn)行了制備，具體歸納在表5中代號(hào)甘油三酸酯TG號(hào)(表2中所列的)GGAGLA/GLA/AA1GGOGLA/GLA/OA3GGEGLA/GLA/EPA4GGDGLA/GLA/DHA4GAAGLA/AA/AA5GOOGLA/OA/OA7GEEGLA/EPA/EPA8GEDGLA/EPA/DHA8GOAGLA/OA/AA10GAEGLA/AA/EPA11GADGLA/AA/DHA11GODGLA/OA/DHA14
AEDAA/EPA/DHA20OEDOA/EPA/DHA30在有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中，合成甘油三酸酯可采用眾多的途徑，但我們將其歸納為兩種主要的方法。第一種用帶有4-甲氧芐基單一保護(hù)的甘油作為起點(diǎn)。在合成的后期用硼試劑將該基團(tuán)去除，但是當(dāng)它有效地去除保護(hù)基團(tuán)并使?；M少出現(xiàn)時(shí)它也引起脂肪酸雙鍵的正反異構(gòu)化。另外加上試劑的昂貴使得該途徑的應(yīng)用受到了極大的限制。第二種主要途徑的起始點(diǎn)是在堿催化下用一種脂肪酸去打開(kāi)縮水甘油的環(huán)氧衍生物環(huán)以生成單乙酰甘油。該途徑最后生成各種位置異構(gòu)體的混合物，然而它具有大規(guī)模合成的良好潛力。用一種兩個(gè)不同脂肪酸的混合物以DCC/DMAP或者對(duì)甲基苯磺酸為媒介直接將甘油和脂肪酸混合物進(jìn)行反應(yīng)也已得以完成。便設(shè)兩種脂肪酸反應(yīng)的速率是一樣的，簡(jiǎn)單的概率論就可用來(lái)預(yù)測(cè)甘油三酸酯產(chǎn)物的分布情況。例如當(dāng)?shù)攘康亩N不同的脂肪酸(A、B)在對(duì)甲基苯磺酸的催化下與甘油反應(yīng)，將形成四種甘油三酸酯AAA12.5%AAB，ABA，BAA37.5%ABB，BAB，BBA37.5%BBB12.5%如果脂肪酸的比率是A2B1，那么理論比例值為
AAA29.6%AAB，ABA，BAA44.4%ABB，BAB，BBA22.2%BBB3.7%在實(shí)際測(cè)定中可以注意到由于在210nm(6高壓液相色譜分析用的檢測(cè)波長(zhǎng))下不同的消光系數(shù)，用高壓液相色譜測(cè)得的百分比不同于理論值。
當(dāng)用三種不同的脂肪酸時(shí)，也可用同樣的方法來(lái)測(cè)定其分布，當(dāng)進(jìn)行上面的反應(yīng)時(shí)可形成十種甘油三酸酯AAA3.7%BBB3.7%CCC3.7%AAB，ABA，BAA11.1%AAC，ACA，CAA11.1%BBA，BAB，ABB11.1%BBC，BCB，CBC11.1%CCA，CAC，ACC11.1%CCB，CBC，BCC11.1%ABC，ACB，BAC，BCA，CAB，CBA22.2%由于甘油三酸酯產(chǎn)物的數(shù)目眾多并且最大產(chǎn)率為22.2%，定向合成是優(yōu)選的。
本發(fā)明將通過(guò)下面的制備實(shí)施例加以說(shuō)明，其中將會(huì)出現(xiàn)下列縮寫(xiě)詞DCC雙環(huán)已基碳化二亞胺DMAP4-N，N-二甲氨基吡啶OA油酸(順-9-十八碳烯酸)GLAγ-亞麻酸(順，順，順-6，9，12-十八碳三烯酸)AA花生器烯酸(順，順，順，順-5，8，11，14-二十碳四烯酸)EPA順，順，順，順，順-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸DHA順，順，順，順，順，順-4，7，10，13，16，19-二十碳六烯酸方法A-用于制備GGA，GGO，GGE，GGD，GAA，GOO和GEE具體實(shí)施例1GLA＇/GLA/EPA的制備。

(ⅰ)將溶膠狀酮縮醇(3.3g，25mmol)，四丁基硫酸氫銨(425mg，1.25mmol，5mol%)，氫氧化鈉(6.0g，150mmol)，4-甲氧基芐基氯(4.7g，30mmol)，水(6ml)和反-1，2-二氯乙烯(20ml)的混合物一邊回流一邊充分?jǐn)嚢瑁钡奖由V(10%丙酮/已烷)檢查表明反應(yīng)已完全(一般3-7小時(shí))。一旦反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物進(jìn)行冷卻并用水(20ml)和二氯甲烷(20ml)進(jìn)行稀釋。倒出有機(jī)相并用水洗至中性(4×30ml)，然后用MgSO4進(jìn)行干燥并濃縮至干。用閃層析(8%丙酮/已烷)純化制備出無(wú)色油狀的全被護(hù)甘油。
(ⅱ)將全被護(hù)甘油(見(jiàn)上文)(1.0g)、鹽酸(1M，10ml)和甲(15ml)的混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)。(在此薄層色譜分析(25%乙酸乙酯/已烷)表明初始反應(yīng)物完全消失，相應(yīng)于形成的產(chǎn)物有新斑點(diǎn)出現(xiàn))。除去大部分溶劑后加入鹽水(20ml)，產(chǎn)物用二氯甲烷提取出來(lái)(4×30ml)。用MgSO4將合并的提取物進(jìn)行干燥并濃縮至干。置于高真空中使產(chǎn)物結(jié)晶。盡管一般不必要，但有時(shí)也把產(chǎn)物通過(guò)閃層析(3%甲醇/二氯甲烷)進(jìn)行純化。這種單保護(hù)的甘油是用于接上脂肪酸的初始物。
(ⅲ)在室溫和氮環(huán)境下將DCC(2.8g,13.5mmol)和DMAP(1.5g,12.4mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液加到單保護(hù)的甘油(1.15g，5.4mmol)和GLA(95%，3.5g，12.4mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。隨著反應(yīng)的進(jìn)行，雙環(huán)已脲沉淀不斷產(chǎn)生。二小時(shí)后薄層色譜(25%乙酸乙酯/已烷)分析表明反應(yīng)已完全。再加入已烷(60ml)使之沉淀出更多的雙環(huán)已脲，然后進(jìn)行過(guò)濾并將反作用物濃縮至干。用閃層析(25%乙酸乙酯/已烷)純化產(chǎn)生無(wú)色油狀的單保護(hù)雙酰甘油。
(ⅳ)用注射器將溴二甲基甲硼烷(85μl，0.84mmol)在-78℃氮環(huán)境中加入到單保護(hù)的雙酰甘油(310mg,0.42mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。在-78℃三分鐘后，加入乙醚(100ml)使反應(yīng)驟停。薄層分析(4%丙酮/氯仿)表明反應(yīng)已基本完全。生成的混合物用水(5×100ml)和鹽水(100ml)洗滌，用MgSO4干燥后濃縮至干。產(chǎn)物可在下一步直接使用，無(wú)需進(jìn)一步純化。
(ⅴ)在室溫并在氮環(huán)境下將DCC(120mg,0.55mmol)和DMAP(60mg,0.48mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液加入到粗制的雙酰甘油(0.42mmol)和EPA(98%,145mg,0.48mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。隨著反應(yīng)的進(jìn)行，不斷形成雙環(huán)氧化已基脲沉淀。加入已烷(30ml)使之產(chǎn)生更多雙環(huán)氧已基脲沉淀，過(guò)濾后，將反作用物濃縮至干。用閃層析(5%乙酸乙酯/已烷)純化后得到無(wú)色油狀的純甘油三酸酯。
方法B-用于制備GOA和GOD。
具體實(shí)施例2-GLA/OA/AA的制備(ⅰ)同方法A(ⅱ)同方法A(ⅲ)將DCC(535mg,2.7mmol)和DMAP(335mg,2.7mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液滴加到單受護(hù)的甘油(550mg,2.4mmol)和GLA(95%,620mg,2.2mmol)的二氯甲烷(40ml)冷(0℃)溶液中，然后在0℃攪拌4小時(shí)。在反應(yīng)過(guò)程中形成了雙環(huán)已脲的細(xì)小顆粒沉淀。4小時(shí)后，薄層分析(25%乙酸乙酯/已烷)表明GLA已完全消失，同時(shí)出現(xiàn)了兩個(gè)新斑點(diǎn)，對(duì)應(yīng)于單乙酰代的單保護(hù)甘油的兩種位置異構(gòu)體。
加入已烷(50ml)以沉淀出更多的雙環(huán)已脲，然后將混合物過(guò)濾、濃縮至干，并用閃層析(25%乙酸乙酯/己烷)純化后形成無(wú)色油狀的產(chǎn)物。
(ⅳ)在室溫氮環(huán)境下，將DCC(230mg,1.11mmol)和DMAP(115mg,0.93mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液加入到單酰代甘油異構(gòu)物混合物(400mg,0.85mmol)和OA(99%,270mg,0.93mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。隨著反應(yīng)的進(jìn)行形成了雙環(huán)已脲沉淀。3.5小時(shí)后薄層分析(25%乙酸乙酯/己烷)表明反應(yīng)已經(jīng)完全。加入已烷(30ml)使之沉淀出更多的雙環(huán)已脲，將得到的混合物過(guò)濾，濃縮至干并用閃層析(8%乙酸乙酯/已烷)純化得到無(wú)色油狀的產(chǎn)物。
(ⅴ)在-78℃(用干冰/丙酮進(jìn)行外部致冷)的氮環(huán)境中用注射器將溴二甲基甲硼烷(85μl,0.84mmol)加到單受護(hù)的雙環(huán)甘油(300mg,0.41mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。在-78℃(用干冰/丙酮進(jìn)行外部致冷)的氮環(huán)境中用注射器將溴二甲基甲硼烷(85μl,0.84mmol)加到單受護(hù)的雙環(huán)甘油(300,0.41mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。在-78℃3分鐘后加入乙醚(100ml)使反應(yīng)驟停。薄層分析(4%丙酮/氯仿)表明反應(yīng)已基本完全。所得的混合物用水(5×100ml)清洗后用鹽水(100ml)清洗，用MgSO4干燥后濃縮至干。產(chǎn)物可在下一步直接使用，無(wú)需進(jìn)一步純化。
(ⅵ)在室溫和氮?dú)猸h(huán)境下將DCC(280mg,1.37mmol)和DMAP(150mg,1.21mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液加入到粗制雙環(huán)甘油(1.05mmol)和AA(95%,370mg,1.21mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中。隨著反應(yīng)的進(jìn)行逐漸形成雙環(huán)已脲沉淀。兩小時(shí)后薄層分析(8%乙酸乙酯/已烷)結(jié)果表明反應(yīng)已完全。加入已烷(30ml)以沉淀出更多的雙環(huán)已脲，將反應(yīng)物過(guò)濾并濃縮至干。用閃層析(5%乙酸乙酯/已烷)純化后得到無(wú)色油狀的純凈甘油三酸酯。
方法C-GED，GAE，GAD，AED和OED的制備具體實(shí)施例3-GED的制備 (ⅰ)在氮環(huán)境中將GLA(97%,1.0g,3.6mmol)，縮水甘油(280mg,3.73mmol)和三正丁基胺(20μl,0.08mmol)在85℃下加熱反應(yīng)5小時(shí)。待反應(yīng)產(chǎn)物冷卻后用閃層析(5%甲醇/二氯甲烷)進(jìn)行純化，得到無(wú)色油狀的單酰代甘油。
(ⅱ)在0℃和氮?dú)猸h(huán)境中將DCC(270mg,1.31mmol)和DMAP(160mg,1.31mmol)的二氮甲烷(5ml)溶液加入到單酰代甘油(400mg,1.14mmol)和DHA(98%,350mg,1.08mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中。五小時(shí)后薄層分析(3%甲醇/二氯甲烷)結(jié)果表明反應(yīng)已經(jīng)完全。加入已烷(30ml)沉淀出雙環(huán)已脲，混合物經(jīng)過(guò)濾、濃縮至干和急驟層析(20%甲醇/二氯甲烷)凈化得到無(wú)色油狀的雙環(huán)甘油位置異構(gòu)體的混合物。
(ⅲ)在室溫和氮?dú)猸h(huán)境中將DCC(80mg,0.39mmol和DMAP(40mg,0.35mmol)的二氯甲烷溶液加入到雙環(huán)甘油(200mg,0.3mmol)和EPA(98%,110mg,0.35mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。隨著反應(yīng)進(jìn)行不斷形成雙形已脲沉淀。兩小時(shí)后薄層分析(8%乙酸乙酯/已烷)結(jié)果表示反應(yīng)已經(jīng)完全。加入已烷(30ml)以沉淀出更多的雙環(huán)已脲。將反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾并濃縮至干。用閃層析(50%乙酸乙酯/已烷)純化后得到無(wú)色油狀的純凈甘油三酸酯。
方法D-由具體實(shí)施例-GGO和GOO混合物的制備來(lái)說(shuō)明(所用GLA和OA比為2∶1)在室溫和氮?dú)猸h(huán)境下將DCC(725mg,3.5mmol)和DMAP(430mg,3.5mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液加入到甘油(200ml,2.2mmol),GLA(95%,610mg,2.2mmol)和OA(99%,310mg,1.1mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。隨著反應(yīng)進(jìn)行，形成雙環(huán)已脲沉淀。五小時(shí)后，加入已烷(50ml)使之沉淀出更多的雙環(huán)已脲，將反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾并濃縮至干。用閃層析(50%乙酸乙酯/已烷)純化后得到無(wú)色油狀的純凈甘油三酸酯。
方法E-具體實(shí)施例，5，GGO和GOO混合物的制備(用1∶2比例的GLA和OA)在室溫和氮?dú)猸h(huán)境中將DCC(725mg,3.5mmol)和DMAP(430mg,3.5mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液加入到甘油(200mg,2.2mmol),GLA(98%,305mg,1.1mmol)和OA(99,620mg,2.2mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。隨著反應(yīng)進(jìn)行，雙環(huán)已脲沉淀不斷形成。五小時(shí)后加入已烷(50ml)以沉淀出更多的雙環(huán)已脲并且將反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾并濃縮至干。用閃層析(50%乙酸乙酯/已烷)純化后得到無(wú)色油狀的純甘油三酸酯。
方法F-具體實(shí)施例6，GGO和GOO混合物的制備(使用GLA和OA的比例為2∶1)在氮?dú)饬飨聦⒏视?200mg,2.2mmol),GLA(98%,610mg,2.2mmol),OA(99%,305mg,1.1mmol)和對(duì)甲基苯磺酸(20mg)的混合物在140℃下加熱反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物冷卻后用閃層析(50%乙酸乙酯/已烷)純化，得到無(wú)色油狀的純凈甘油三酸酯。
方法G-具體實(shí)施例7，GGO和GOO混合物的制備(使用1∶2的GLA和OA)在氮?dú)饬飨聦⒏视?200mg,2.2mmol),GLA(98%,305mg,1.1mmol),OA(99%,620mg,2.2mmol)和對(duì)甲基苯磺酸(20mg)在140℃下加熱反應(yīng)5小時(shí)。反應(yīng)產(chǎn)物冷卻后用閃層析(5%乙酸乙酯/已烷)純化，得到六色油狀的純甘油三酸酯。
上述實(shí)施例中的產(chǎn)物已用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了甘油三酸酯的高壓液相色譜分析(表6)和脂肪酸的氣相色譜分析(表7)。
在氣相色譜分析中，大家都熟知脂肪酸的甲酯化衍生物制備方法。三氟化硼甲醇溶液(12-14%W/V)被用作催化劑。
每種甘油三酸酯取100mg進(jìn)行酯基轉(zhuǎn)移處理后在裝有一根SupelcowaxTM10毛細(xì)管柱(30m×0.53mm×1.0μm)的Hewlett Packard 5890二型氣相色譜儀上進(jìn)行分析。進(jìn)樣口溫度為220℃，檢測(cè)器溫度為250℃，爐溫采用程序升溫，開(kāi)始在180℃維持5分鐘，然后以2℃/分的速率升到210℃，再于210℃溫度維持15分鐘。每種脂肪酸甲用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣1μl，自動(dòng)進(jìn)樣器型號(hào)為Hewlett Packard T673。通過(guò)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣來(lái)將每種脂肪酸甲酯進(jìn)行定性。
續(xù)表6實(shí)施例甘油三酸酯保留時(shí)間面積%(超過(guò)2.5%的峰)4GGO/GOO10.6731.838(GGG)13.099.14317.3044.518(GGO)21.753.66029.496.952(GOO)5GGO/GOO8.7119.270(GGG)13.42333.716(GGO)21.42335.741(GOO)21.94211.33835.6844.6516GGO/GOO8.94735.266(GGG)13.99642.886(GGO)22.73022.455(GOO)表7實(shí)施例甘油三酸酯保留時(shí)間面積%(超過(guò)2.5%的峰)1GGA7.8794.1081(LA)8.56858.6674(GLA)14.14035.2856(AA)GGO6.95433.7482(OA)7.8963.8946(LA)8.62960.6707(GLA)GGE8.58961.1291(GLA)9.1083.578016.01733.0809(EPA)
表6實(shí)施例甘油三酸酯保留時(shí)間面積%(超過(guò)2.5%的峰)1GGA11.2183.63213.7310.320GGO17.3282.98721.7611.013GGE9.0084.84410.693.45210.895.031GGD9.2986.47111.229.976GAA11.1591.52313.625.097GOO3.284.43426.8789.002GEE7.5989.5769.082.9822GOA16.319.24317.7782.81622.313.018GOD15.3591.69919.164.8123GED6.79890.5028.0306.201GAE7.97791.212GAD8.19892.1409.8024.202AED6.94992.234OED10.13298.334
表7續(xù)實(shí)施例甘油三酸酯保留時(shí)間面積%(超過(guò)2.5%的峰)GGD7.8303.4747(LA)8.57655.9686(GLA)9.0473.125123.25034.7093(DHA)GAA8.57730.6452(GLA)14.16865.1502(AA)GOO6.96965.1579(OA)8.57031.6086(GLA)GEE8.58331.4162(GLA)16.07263.7405(EPA)2GOA6.93630.8227(OA)8.57627.4197(GLA)14.15936.1341(AA)GOD6.94931.9633(OA)8.60229.8198(GLA)23.34334.8294(DHA)3GED8.59929.2576(GLA)16.05632.4455(EPA)23.35335.4802(DHA)GAE8.59131.3688(GLA)14.17332.2683(AA)16.04332.9175(EPA)GAD8.60029.8217(GLA)14.18731.2864(AA)23.35035.0575(DHA)AED14.17630.3248(AA)16.04831.5008(EPA)23.33335.1120(DHA)OED6.95631.4497(OA)16.06332.3986(EPA)23.35435.1133(DHA)
2314應(yīng)用實(shí)施例下面列出了甘油三酸酯應(yīng)用方面的實(shí)例1.將表2中所到的任一種甘油三酸酯或任幾種甘油三酸的混合物裝入100mg至1g之間任何大小容積的軟或硬的明膠膠囊中給藥，每日劑量在100mg至10g之間。
2.將任何一種甘油三酸酯或多種甘油三酸酯的混合物裝入明膠、瓊脂或其它適當(dāng)?shù)牟牧现瞥傻奈⑿湍z囊中，或者與任何適合的材料一起制成粉末狀，可以口服，可以加入食品中，可以做成片劑，膠囊劑，可以裝入香囊中或者以任何適合的方式使用。
3.將一種或多種甘油三酸酯制成甜漿、液劑、油膏或其它適合的形式用于口服。
4.將一種或多種甘油三酸酯制成油劑，藥膏或其它局部用制劑，濃度范圍為0.1至30%。
5.將任一種或多種甘油三酸酯制成適當(dāng)?shù)娜閯┕┓悄c道使用。
6.將一種或多種甘油三酸酯加到適合的食品中，例如涂沫食品、飲料、糖果、谷物、速食或面包制品中。
權(quán)利要求
1.作為成組的異構(gòu)體或單一的甘油三酸酯，包括(a)選自油酸和表1的下列各組酸中的一種酸的兩個(gè)殘基i)GLA和DGLAii)AA，腎上腺酸，和22∶5n-6酸iii)硬脂四烯酸和20∶4n-3酸iv)EPA，22∶5n-3酸，DHA和從中選出的不同的一種酸的殘基；或者(b)一個(gè)選自油酸和上面i到iv組中的酸的一種酸的殘基，從中選出的一個(gè)另一種酸的殘基，和再?gòu)闹羞x出的一個(gè)另一種酸的殘基；前提是其中一種酸選自一組而且后一的選擇在同一組進(jìn)行。
2.按照權(quán)利要求1的甘油三酸酯，其中包含按表4設(shè)計(jì)的那樣從參考號(hào)TG1到TG30的任一種中所選擇的酸殘基。
3.按照權(quán)利要求1或2的甘油三酸酯，與其它甘油三酸酯以混合物的形式通過(guò)酸和甘油的反應(yīng)制得，初始材料的種類和比例與所選的殘基相對(duì)應(yīng)。
4.按照權(quán)利要求3的甘油三酸酯，其中按照權(quán)利要求1或2的組分在混合物中的摩爾百分?jǐn)?shù)大于10，大于30更好，大于70最好，最理想則大于90。
5.按照上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的甘油三酸酯，其中產(chǎn)品形式為藥用組合物。
6.按照權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的甘油三酸酯，其中產(chǎn)品形式為營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)劑或食品組合物。
7.按照權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的甘油三酸酯，其中產(chǎn)品形式為局部藥劑、護(hù)膚品或化妝品組合物。
8.按照權(quán)利要求5、6和7的甘油三酸酯，其中以一種產(chǎn)品組合物的形式每天提供按權(quán)利要求1或2的甘油三酸酯劑量為1mg至100g，劑量為10mg至10g則更好，劑量在500mg至4g之間最好。
9.按照權(quán)利要求5、6或7的甘油三酸酯，其中組合物包含按權(quán)利要求1或2的甘油三酸酯的重量比例為0.001至50%，0.05到20%則更好，最好是0.1到5%。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含至少兩種不同的酸的甘油三酸酯以及它們作為營(yíng)養(yǎng)品和藥品方面的應(yīng)用，其中甘油三酸酯所包含的酯選自6種不飽和必需脂肪酸和油酸。
文檔編號(hào)C07C69/52GK1104497SQ9410169
公開(kāi)日1995年7月5日 申請(qǐng)日期1994年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月27日
發(fā)明者D·F·霍羅賓, A·麥克摩迪, M·S·曼庫(kù), P·諾爾斯 申請(qǐng)人:斯科舍集團(tuán)有限公司