專利名稱：：作為多核苷酸交聯(lián)劑的非核苷的香豆素衍生物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及光活性的核苷類似物，它可在自動DNA合成過程中合并入合成的寡核苷酸用于交聯(lián)靶核酸序列的互補鏈。
背景技術：
：K.Yabusaki等在美國專利4,825,967中已證明可在核酸雜交分析中使用可交聯(lián)探針連接靶序列；化合物是基于呋香豆素(或補骨脂素)連接于存在的多核苷酸(一般是通過加成產(chǎn)物形成)且在多種應用中是令人滿意的。但是，交聯(lián)基/核苷加成物很難合成，特別是大量合成。在美國專利5,082,934中Saba等描述了含有香豆素部分通過其苯環(huán)連接到無堿基的核糖或脫氧核糖部分的1-位的光活性核苷類似物。所得核苷類似物在雜交分析中作為光交聯(lián)基團插入多核苷酸中作為一個或多個互補核苷堿基的替代物存在于探針中。然而，人們?nèi)韵Ｍ玫叫碌木哂懈鄡?yōu)點，如在整個探針合成和使用過程中穩(wěn)定，且構象容易改變的化合物。發(fā)明的概述本發(fā)明提供了非核苷的，穩(wěn)定的，光活性的化合物，可在核酸雜交分析和治療應用中用作光交聯(lián)劑，還提供了可用于制備終產(chǎn)物的技術和中間體。本發(fā)明的化合物含有香豆素基衍生物，通過將香豆素分子或其衍生物的苯環(huán)連接到羥基或多羥基烴分子，如甘油分子的一個末端羥基上。所得化合物的(多)羥基烴部分等價于核苷中的糖，而香豆素部分占據(jù)了堿基的位置。因此，可使用多核苷酸合成的自動(或手動)技術將化合物插入生長的多核苷酸鏈。在香豆素環(huán)系中3和4位之間的雙鍵是光活性基團，當寡核苷酸含有此非核苷類似物(即“探針”)用于雜交分析和/或治療應用中時，它在互補鏈中共價連接到核苷上。通常，光活性化合物具有通式如下其中取代基和連接基團如下詳述。(多)羥基烴主鏈使得它們存在的寡糖結(jié)構具有最大的容易改變性和穩(wěn)定性，以及在含水和有機介質(zhì)中好的溶解性。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了可交聯(lián)化合物，它可在雜交分析和/或治療應用中在寡核苷酸探針中用作光活性非核苷交聯(lián)劑。在雜交分析中，本發(fā)明化合物一般用作合成的DNA或RNA寡核苷酸的一部分用于測定樣品中特定DNA和RNA堿基序列的存在與否。更具體地講，本發(fā)明提供了連接到穩(wěn)定的，柔韌的，(多)羥基烴主鏈單元上的香豆素衍生物，它可在雜交分析中用作光活性交聯(lián)化合物。本發(fā)明的化合物具有通式如下主鏈部分-連接部分-交聯(lián)部分在這里以及說明書其它部分的“部分”是指執(zhí)行所指功能的分子的一部分。所給部分一般從其它分子通過共價連接兩個或多個分子得到，具有原始分子可確認的剩余部分被稱作“部分”。例如，如果補骨脂素分子通過二價鍵，如亞甲基連接到甘油分子上，所得單個分子被認為是從甘油，亞甲基和補骨脂素部分形成的。如下所述，這三部分不一定，但是事實上從三個分開的分子衍生得到的。因此，“從…衍生”可指理論上的，以及事實上的前體。交聯(lián)部分將從具有稠合的苯并吡喃酮結(jié)構的分子衍生得到。這些分子如下(1)香豆素及其簡單衍生物；(2)補骨脂素及其衍生物，如8-甲氧補骨脂素或5-甲氧補骨脂素(文獻中描述過至少40種其它的天然補骨脂素，且它們可用于本發(fā)明)；(3)順-苯并二吡喃酮及其衍生物；(4)反-苯并二吡喃酮；和(5)含有稠合香豆素-噌啉環(huán)系的化合物。所有這些化合物在與靶鏈核苷酸交聯(lián)的合適的取向和合適的距離含有必須的交聯(lián)基團(活化的雙鍵)。所有這些分子都是香豆素衍生物，因為都含有堿性香豆素(苯并吡喃酮)環(huán)系，所以分子的剩余部分被堿化。連接部分一般從含有1-100，優(yōu)選1-25，更優(yōu)選1-10原子在兩個位置具有彼此連接到其它部分的功能基的前體形成。當前體反應形成連接部分之后，在香豆素環(huán)系的原子和主鏈部分(糖取代基)的原子之間的最短連接鏈的總原子數(shù)一般為1-15，優(yōu)選1-7，更優(yōu)選1-3。另外，此部分結(jié)構可有很大變化，因為它基本上只是從交聯(lián)部分到主鏈部分的一個柔韌的鍵。連接部分一般大多是穩(wěn)定的環(huán)或非環(huán)部分，通過具有合適的用于在一端連接交聯(lián)分子在另一端連接主鏈分子的功能基(一般在其末端)的分子反應得到。但是，如果在主鏈和交聯(lián)部分存在足夠的功能基，可以不使用連接部分的前體(即，主鏈和交聯(lián)部分可直接通過共價鍵連接)。應理解所描述的最終分子的屬于上述定義的特定部分的特定部分多少有些任意性且不一定是指由三個原始分子反應形成的最終產(chǎn)物。有一系列香豆素衍生物，例如，具有連接到香豆素環(huán)上的功能化甲基或甲氧基可與主鏈部分前體上的功能基反應形成只由兩個起始物質(zhì)形成的產(chǎn)物。但是，所得結(jié)構一般顯示出具有如上所述的三部分主鏈分子插入多核苷酸的糖主鏈，交聯(lián)部分占據(jù)正常核苷中堿基的位置，和連接兩個主要部分的原子(即，連接部分)。為了方便起見，連接部分被認為是由在交聯(lián)部分連接點的環(huán)原子和在清楚地形成替代糖分子的主鏈部分，一般是帶羥基的碳原子(或羥基的反應產(chǎn)物)，即與交聯(lián)部分最近的原子之間的原子組成。主鏈部分，如此稱呼是因為其最終的功能是代替多核苷酸主鏈中核糖或脫氧核糖部分，一般具有1-3個(有時更多)羥基(或如下討論的類似的功能基)連接在不同的sp3-雜化的碳原子上。主鏈部分一般無電荷，因此它可在最終修飾的核苷酸中作為核糖或脫氧核糖的替代物。主鏈部分包括但并不限于下面這些(1)直鏈烴部分如三碳丙烷單元或帶有合適的功能基的更長烴鏈，這些功能基一般選自-OH，-NH2，-SH，-COOH，?；u，和酸酐，和(2)環(huán)烴部分，一般具有5-7員碳環(huán)結(jié)構，具有1-3個羥基或如(1)所述的其它功能基。前面句子中所述的功能基是非反應形式的且許多實施方案中將以所述功能基的衍生物的形式存在。上述反應性功能基(不同于-OH和-SH)一般只存在為中間體；但是，與其它功能基反應后，它們形成穩(wěn)定的基團或形成共價鍵與分子的其它部分相連。除了上述堿性結(jié)構，一個或多個偶聯(lián)部分可連接到主鏈部分以促進已存在的或生長的多核苷酸鏈的鍵的形成。當正被討論的分子是用于制備探針分子的中間體時，偶聯(lián)部分一般含有羥基偶聯(lián)和/或保護基用于在溶液或固相核酸合成。典型的偶聯(lián)基包括氨基磷酸酯(phosphoramidite)，磷酸酯，H-膦酸酯，硫代磷酸酯，膦酸甲酯，三苯甲基，二甲氧三苯甲基，單甲氧三苯甲基，和pixyl基。非磷偶聯(lián)基團包括氨基甲酸酯，酰胺，和直鏈和環(huán)狀烴基，一般連接到具有雜原子取代基的分子的剩余部分，如-COCH3，-CH2OH，-CF3，-NHCH3，和PO2CH2CH3。為了回顧這類化學問題，請參見“寡核苷酸合成的實用方法”(“OligonucleotideSynthesis，APracticalApproach”)，M.J.Gait，ed.，IRLPressLtd.，牛津，英國，1984，這里引入作參考。優(yōu)選的本發(fā)明化合物具有如下式(I)結(jié)構其中B代表(1)直鏈，支鏈，或環(huán)烴基，含有2-15，優(yōu)選3-10，更優(yōu)選3-6個碳原子，且如果是環(huán)狀的，含5-或6-員環(huán)或(2)5-或6-員雜環(huán)芳香環(huán)系，B(1)和B(2)都可被1，2，或3個式OR1的基團取代；X代表(1)直鏈，支鏈或環(huán)狀含有1-15個，優(yōu)選2-10個，更優(yōu)選3-6個碳原子的烴基或(2)這類X基團中(1)1個至3個碳原子(優(yōu)選1個)或烴基中的原子被氧，硫或氮原子代替，且其中X中的原子與分子中其它與X相連部分的原子之間的最短連接鏈為1-10個原子，其中X任意被1-3個選自羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，羧基，羰基，硝基，硫代，全氟甲基，和氰基的功能基取代；n是0，1，2，或3；每個W分別代表羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，硝基，硫代，羧基，羰基，全氟甲基，或氰基功能基；具有10個或更少碳原子，優(yōu)選6個或更少碳原子，更優(yōu)選3個或更少碳原子的未取代的烴基；或這類烴基被1-3個功能基取代或其中一個碳原子被氧，硫，或氮原子取代；條件是(1)當X或W是取代的烴基時，在X或W中的取代基中的總原子數(shù)應少于X或W中的碳原子總數(shù)，且不多于一個取代基或雜原子與所給碳原子相連，除非所給碳原子上的取代基是鹵原子；(2)在所有W的取代基的碳原子總數(shù)應為15或更少，優(yōu)選10或更少，更優(yōu)選6或更少；且(3)兩個W與它們所連接原子的剩余部分可形成一個環(huán)(例如，補骨脂素中的情況)；Y和Z分別代表H，F(xiàn)或低級烷基(一般為5個或更少的碳原子，優(yōu)選3個或更少)；且每個R1分別代表H，F(xiàn)或在多核苷酸合成中可保護或偶聯(lián)羥基的羥基保護或羥基偶聯(lián)基團或一個或兩個(優(yōu)選兩個)R1代表連接到化合物上的核苷酸或多核苷酸。橋聯(lián)B-X鍵的功能基中(如醚或羧酸酯)的氧原子或其它非-C原子(如果存在)一般從B的前體中的羥基開始，但它可看作X的一部分(為了容易定義不同的取代基)，且下式，除非相反，從上下文的討論中是可清楚得知的。在上述式I中，特定的化合物是優(yōu)選的。分子中最重要的部分(至少從這些化合物與已知化合物不同的角度來看)是B或主鏈部分。優(yōu)選的B部分屬于第一亞結(jié)構第二亞結(jié)構或第三亞結(jié)構其中s是2或3；Rx，Ry和Rz分別代表H或OR1；m，n，p，q，和r分別代表0或1；亞結(jié)構式中的一個氫被共價鍵取代與X基團相連；且式中化合物中所有其它取代基和定義與前面的通式I的定義相同。亞結(jié)構中被共價鍵取代與X基團相連氫原子一般是羥基(即，至少一個OR1代表在這類前體分子中的羥基)的氫。但是，此優(yōu)選方案只為了便于合成，其結(jié)果是B-X鍵很容易從(多)羥基烴前體獲得，這些(多)羥基前體大多數(shù)是商業(yè)可得的。如果需要，也可用特定的共價鍵取代其它氫。實際用于合成的分子一般是從其中一個羥基被功能基取代的(多)羥基化合物衍生來的，一般經(jīng)過一系列反應。例如，羥基可被鹵原子或其它離去基團取代，且在X基團前體中存在給電子基時，離去基團可參與鍵的形成。盡管不飽和化合物(包括芳香環(huán))也可以，但優(yōu)選B是從飽和烴形成的化合物。在不飽和化合物(包括芳香族)中，優(yōu)選-OR1取代基不直接與sp2-雜化的碳原子相連，而與中間的sp3碳原子連接，如在-CZ2OR1中，其中Z代表H或烷基。通式I化合物中優(yōu)選其中B是三個亞結(jié)構式中第三個亞結(jié)構式的化合物，特別是那些m+n+p+q+r＝0，1，或2。更優(yōu)選那些第三個亞結(jié)構式的化合物代表非環(huán)的，飽和的，二或三羥基烴，特別是甘油和以離指定羥基最遠的末端位置與X基團相連的3-5個碳原子的1，2-或1，3-二羥基烷，如4，5-二羥基戊基，3，5-二羥基戊基，2，4-二羥基-2-甲基丁基，3-羥基-2-(羥甲基)丙基，和2，3-二羥基丙基。芳香環(huán)系也可在B部分存在，盡管如前所述，這些化合物是非優(yōu)選的。它們包括烴和雜環(huán)芳香環(huán)系。這些化合物中優(yōu)選其中B含苯環(huán)或萘環(huán)環(huán)系的，特別是1，2-二(羥甲基)取代的芳香化合物。當B含有雜環(huán)系，如呋喃，吡喃，吡咯，吡唑，咪唑，哌啶，吡啶，哌嗪，嘧啶，pyrazidine，噻吩，吖啶，吲哚，喹啉，異喹啉，喹唑啉，喹喔啉，氧雜蒽或1，2-苯并吡喃環(huán)系時，優(yōu)選相同的取代基。盡管非優(yōu)選但也在本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物是其中B含有橋烴環(huán)系，如雙環(huán)[3.1.0]己烷或[2.2.1]庚烷環(huán)系的化合物。這些分子具有弱可移動性的構型，所以不同的順和反取代可容易地制備并保持。參見例如，F(xiàn)erguson，“有機分子結(jié)構”，WillardGrant，Boston，1975，17-19章，為此化學和合成技術的綜述。同樣地，化合物的B中含有螺或二螺烴環(huán)系的化合物也在本發(fā)明范圍內(nèi)。如前所述，X連接基團并不限于結(jié)構，因為它并不存在于分子中既與主鏈結(jié)構的剩余部分作用或與多核苷酸互補鏈作用的部分。但是，優(yōu)選在此部分具有下列結(jié)構的分子，如下所列，它們可代表X，在兩個可能的取向-OCH2-，-SCH2-，-NHCH2-，和-CL2(CH2)n-，其中，L代表H，F(xiàn)，Cl，I或Br，且n＝0，1，或2。其它(但較少)優(yōu)選的化合物是那些其中X含有5-或6-員碳的環(huán)結(jié)構或雜環(huán)(后者含有一個O，S或N原子)，如環(huán)戊烷，環(huán)己烷，二氫呋喃，吡咯或吡啶。在交聯(lián)部分，Y和Z如果是烷基一般具有5或更少的碳，優(yōu)選3或更少，且最優(yōu)選甲基。優(yōu)選其中W、Y和Z都是氫的化合物，尤如其中W如是稠合于該式的苯環(huán)的吡喃酮或呋喃環(huán)時的化合物。在后面的化合物中優(yōu)選其中通式I的X右側(cè)的整個結(jié)構式代表香豆素，補骨脂素，順-苯并二吡喃酮，或反-苯并二吡喃酮或在通式范圍內(nèi)它們的衍生物。核苷酸或多核苷酸一般(但不總是)通過含磷的連接基團與通式I化合物相連。優(yōu)選的含磷連接基團，以及其它連接基團還將予以討論。這些化合物是本發(fā)明的優(yōu)選化合物，因為它們可直接用于分析和交聯(lián)過程，這是本發(fā)明最主要的最終應用。這些化合物具有分子式(Nm1Qm4Nm2)m3，其中m1和m2是整數(shù)(一般少于200，優(yōu)選少于100；m1和m2之一一般優(yōu)選最少是14，優(yōu)選最少是17，更優(yōu)選最少是20)；m3是1-10的整數(shù)，優(yōu)選1-5(m3一般少于(m1+m2)/10)；每個N分別代表所需多核苷酸序列的一個核苷；Q代表插入正常多核苷酸序列的本發(fā)明的核苷酸替代分子；且m4是1-5，優(yōu)選1-3。也可在多核苷酸序列中相隔幾個(一般是一或兩個)正常堿基存在一個或多個Q部分，只要存在連續(xù)的核苷序列以保證雜化物的穩(wěn)定。這類序列一般被認為等價于連續(xù)的Q序列。優(yōu)選的連續(xù)正常核苷酸序列的長度如上根據(jù)m1和m2測定。Q可既可存在于多核苷酸中間也可存在于其一個末端。當在中間位置時，必須至少存在兩個R1基團以使Q分子可與兩個分開的鏈的末端相連；如果Q插入末端位置，只需要一個R1，盡管在兩種情況下可存在其它的可能。應理解在m3大于1的多核苷酸序列中，每個Nm1Qm4Nm2可以彼此不同；即多個Q部分可沿著分子的長度任意存在，只要上述剩余參量照作。優(yōu)選的一組多核苷酸具有在分子一個或兩個末端帶有1-5個Q部分的連續(xù)正常堿基長序列(優(yōu)選1-3個Q部分)。如前所述，Q部分可連續(xù)也可被幾個正常核苷酸間隔開。兩個以上的Q部分(連續(xù)或不連續(xù))存在于探針中間并在交聯(lián)Q單元的兩邊具有相對長的連續(xù)序列也是優(yōu)選的實施方案。在所有優(yōu)選方案中，至少一個核苷連續(xù)序列與相應的靶核苷酸互補。此連續(xù)序列在雜交過程中要穩(wěn)定以保證對靶核苷酸的正確確認。在本發(fā)明方法中導致穩(wěn)定性和選擇性的因素與在其它雜交過程中相同。接有Q部分的互補核苷酸的連續(xù)序列與接有非互補正常堿基的靶核苷酸的連續(xù)序列在這方面沒有什么不同。因此，含有本發(fā)明交聯(lián)部分的多核苷酸的穩(wěn)定性可從核酸雜交的標準方法預測出。還優(yōu)選其中B部分中存在兩個R1基團，且它們都代表不同的羥基偶聯(lián)或羥基保護基的化合物，因為這類化合物易于合成可交聯(lián)的多核苷酸。這些保護基和活化基團在本說明書的其它部分有討論。本發(fā)明另一組優(yōu)選的化合物具有以下通式II結(jié)構，它們中大多數(shù)在通其中n1是0-10(優(yōu)選0-5，更優(yōu)選1-3)；n2是0-5(優(yōu)選0-2，更優(yōu)選0或1)；n3是0-5(優(yōu)選0-2，更優(yōu)選0或1)；每個W分別是小的穩(wěn)定的取代基含有不超過15個原子(特別是低級烴基；鹵素，硝基，硫代，氰基，羰基，羧基，羥基，氨基，酰氨基，或多氟烷基；或含有一個或多個雜原子的烴基取代基(即，非碳原子或氫原子可在25℃在水中與碳形成穩(wěn)定的共價鍵)；Y和Z分別代表H，F(xiàn)，或低級烷基；X是有機基團，含有(a)1-10個碳原子和(b)0-10個，優(yōu)選0-2個，選自O，S和N的雜原子，且X在與它相連的該式中的其它原子之間具有1-10個原子的最短連接鏈；R2是H或OR1；且R1是H或在多核苷酸自動合成過程中可與羥基偶聯(lián)或保護羥基(前者優(yōu)選只在主鏈部分末端的羥基上存在)的基團。另外，R1代表通過磷酸二酯鍵或其它典型地用于在多核苷酸中偶聯(lián)糖的連接基團連接到化合物上的核苷酸或多核苷酸。優(yōu)選的偶聯(lián)基團包括含磷基團如亞磷酸酯，氨基磷酸酯(phospohramidite)，磷酸酯，H-膦酸酯，硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，和膦酸甲酯。非含磷偶聯(lián)基團包括氨基甲酸酯和酰胺。低級烴基包括C1-C6鏈烯基和鏈烯基以及C3-C6環(huán)基，優(yōu)選包括C1-C4烷基和鏈烯基；特別是甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，和叔丁基。具有雜原子取代基的典型烴基包括-COCH3，-CH2OH，-CF3，-NHCH3，-CO2CH2CH3，和-CON(CH3)2。本發(fā)明的化合物既可作制備中間體也可用作用于例如在雜交分析中作為探針的光活性多核苷酸組分。由于本發(fā)明的目的是一個或多個這些分子最終成為多核苷酸的一部分，形成分子的主鏈部分一般可從甘油或不同的多羥基烴分子衍生得到。甘油基或其它多羥基烴分子可被插入核酸主鏈的任何位置，一般通過磷酸二酯型鍵與分子中鄰近的核苷的3′和/或5′羥基連接，一般在此插入之前交聯(lián)部分先連接到主鏈部分上。本發(fā)明化合物的交聯(lián)部分可從香豆素本身或一系列取代的香豆素衍生得到。在交聯(lián)部分前體中要與甘油或其它主鏈部分連接位置的有機功能基一般用于在終產(chǎn)物中連接交聯(lián)部分和主鏈部分。由于最終產(chǎn)物可使用不同的合成路線合成，任何所給產(chǎn)物都將有幾個可能的前體。連接部分可從分開的分子衍生得到，或從交聯(lián)部分前體的反應部分和主鏈部分前體的反應部分形成。除了連接位置的其它位置，香豆素(或其它)環(huán)系既可以是未取代的也可以是取代的。一般在苯環(huán)上的取代基是小的，穩(wěn)定的常在有機化合物的芳香環(huán)中出現(xiàn)的取代基?？筛鶕?jù)改變香豆素的刺激波長選擇所需的取代基。在3-和4-位的取代基一般是非極性的，且大多數(shù)為烴基取代基，甲基是最常見的。盡管香豆素的取代基位置可變化，取代通常在4-，5-，6-，7和8位。在香豆素部分前體的優(yōu)選方案中，在與主鏈部分前體反應之前，具有如下結(jié)構式其中，Y，Z，n2，M和W定義如前；且X1是全部或部分X連接部分的前體。X1將與連接部分前體上的有機功能基反應形成共價鍵。一般的反應性功能基包括羥基，胺，鹵素，硫代，羰基，羧酸酯，羧酰胺，甲硅烷基和乙烯基?？蓮南愣顾乇旧砘蛟S多商業(yè)可得的香豆素衍生物使用有機合成的標準方法合成這些前體。在某些優(yōu)選方案中，甘油主鏈部分前體具有如下通式其中R1，R2和n1，以及n3定義如前，且X2是全部或部分X連接基團的前體。X2將與香豆素部分上的有機功能基反應形成在最終連接部分X中的共價鍵。X2一般選自反應活性功能基以及能進行親核或親電取代或加成的親核和親電基團。具體的功能基的例子包括羥基，氨基，鹵素，硫代。羰基，羧酸酯，羧酰胺，乙烯基，和硅烷衍生物。這些前體可使用有機合成的標準方法從(多)羥基烴如甘油，商業(yè)可得的1，2-或1，3-二羥基烷衍生物，或在指定羥基上有羥基保護基的這些化合物合成。參見Misiura，K.，Durrant，I.，Evans，M.R.，和Gait，M.J.，核酸研究(NucleicAcidsRes.)(1990)18，4345-4354，此篇文章討論了類似于本發(fā)明主鏈部分結(jié)構的連接部分在多核苷酸合成中與堿基的連接，此文章在此引用作參考。本發(fā)明化合物可被有機化學的標準合成技術，并按照本說明書中列出的路線合成。例如，一般從商業(yè)可得的起始材料開始，按照下述反應流程進行。一般合成的反應過程如下(a)氫化鈉(NaH)/CH3-O-CH2CH2-O-CH3(b)7-溴甲基香豆素(c)HCl(aq.)，THF(四氫呋喃)(d)DMTrCl(4，4′-二甲氧三苯甲基氯)，吡啶(e)ClPN(ipr)2OCH2CH2CN，CH3CH2-N(ipr)2，CH2Cl2實施例17-香豆素基甲基溶膠酮縮醇(solketal)向120g乙二醇二甲醚中加入solketal(2.64g，19.0mmole)和氫化鈉(0.88g，22.0mmole，60％在礦物油中)。向所得懸浮液中用7分鐘分批加入7-溴代甲基香豆素(4.8g，19.0mmole)。10分鐘后，向其中加入1.5ml冰醋酸中止反應。離心過濾從懸浮液中分出固體。將溶液濃縮成固體。將固體用硅膠色譜純化，使用氯仿/乙酸乙酯97∶3作為洗脫劑。用TLC檢測并合并含有產(chǎn)物的部分，真空濃縮得到白色固體。產(chǎn)量630mg；熔點75-80℃，在CHCl3/乙酸乙酯9∶1中，Rf2＝0.55。實施例21-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基甲基)甘油將7-香豆素基甲基solketal(800mg，2.74mmol)溶于四氫呋喃(12ml)的溶液，并在鹽酸(6ml)中處理20分鐘。將此溶液與無水乙醇(2×5ml)共沸蒸發(fā)干燥得到油狀物。所得溶液用25ml飽和碳酸鈉溶液洗滌，然后用3×25ml乙醚萃取。所得溶液在真空濃縮成油狀物。將油狀物與吡啶(2×5ml)共沸蒸發(fā)干燥得到干燥產(chǎn)物。向液體中加入吡啶(30ml)，4-二甲基氨基吡啶(25mg)和三乙胺(200μl)。向所得溶液中加入4，4′-二甲氧三苯甲基氯(905mg，2.95mmole)。將反應混合物攪拌2小時。向其中加入37.5ml水中止反應，所得溶液用乙醚2×180ml萃取。合并乙醚萃取物在真空濃縮，然后溶于15ml二氯甲烷中，用硅膠色譜純化，使用丙酮/己烷4∶6為洗脫劑。收集Rf＝0.5的部分，并蒸發(fā)至干，得到產(chǎn)物(770mg，產(chǎn)率55％)。實施例31-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基甲基)-2-0-[(N，N-二異丙基)(2-氰基乙基)氨基磷酸酯)]甘油將1-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基甲基)甘油(1.20g，2.18mmol)與混合溶液(5ml吡啶和1.5二氯甲烷)2×6.5ml共沸蒸發(fā)兩次。向干燥的反應物中加入二氯甲烷(4.6ml)和二異丙基乙基胺(1.87ml，8.59mmol)。攪拌此懸浮液直至它澄清。然后，向溶液中加入2-氰基乙基N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯(0.62ml，3.24mmol)。所得溶液攪拌65分鐘。將反應混合物用45ml乙酸乙酯和2.2ml三乙胺稀釋，依次用10％碳酸鈉水溶液(2×30ml)，飽和碳酸鈉溶液(2×30ml)，和飽和氯化鈉溶液(2×30ml)萃取。在真空濃縮有機相。所得產(chǎn)物用硅膠色譜純化，使用溶劑系統(tǒng)為(二氯甲烷/乙醚/三乙胺90∶7.5∶1)。收集Rf＝0.73的部分，并將所得物在真空濃縮得到固體。產(chǎn)量1.06g(1.41mmole，64％)。實施例4含有非核苷的香豆素官能度的寡脫氧核苷酸的制備使用上述實施例3制備的試劑，用DNA合成的β-氰基乙基磷酰胺方法制備寡核苷酸，所制備的寡核苷酸等同于人乳頭瘤病毒16型的一個片斷，它含有E6基因的397-417核苷，其中第20個堿基(腺嘌呤)被3-(7-香豆素基甲基)甘油取代。裝配完畢后，用3ml30％NH4OH在室溫處理1.5小時將寡核苷酸從固體載體上切除。將氨溶液加熱至55℃保持1.5小時。冷卻后。真空除去NH4OH。使用反相高效液相色譜純化粗品寡核苷酸至均一物質(zhì)。將寡核苷酸與互補的5′-32P-標記的靶寡核苷酸在0.75MNaCl緩沖液(20μl)中，40℃雜交(探針/靶的摩爾比＝10∶1)1小時。此時，此溶液用302nm波長的光照射10分鐘。使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析照射的混合物表明，相對于放射性標記的靶所得光化學交聯(lián)水平是80％。使用類似的含有一個Saba等，在美國專利No.5,082,934中描述的核苷的香豆素衍生物的寡核苷酸平行地進行對比試驗。這些試劑所得的最佳的交聯(lián)效果是60％。因此，本發(fā)明化合物進行的光化學交聯(lián)具有高于20％的效率(大于對比效率1/3)。實施例5按照前面實施例1，2和3的類似方法，合成了具有下式結(jié)構的產(chǎn)物。此化合物用于制備含非核苷補骨脂素衍生物的寡脫氧核苷酸。實施例6使用上述實施例3制備的試劑，用DNA合成的β-氰基乙基氨基磷酸酯方法制備寡核苷酸，所制備的寡核苷酸等同于人乳頭瘤病毒16型的基因組的一個片斷。此寡核苷酸分別互補于E6基因的89-108和283-302核苷酸(此序列作為參考在此引入)。在每個分子中，正常序列中5′_末端的核苷酸(腺嘌呤)被3-(7-香豆素基甲基)甘油取代。3′_末端帶有生物素部分。平行地，合成另外兩個DNA分子。這些寡核苷酸既具有E6基因的89-108核苷也具有283-302核苷酸的互補序列；但是，在這些修飾的寡核苷酸中由Saba等，在美國專利No.5,082,934中描述的核苷的香豆素衍生物代替3-(7-香豆素基甲基)甘油，在2′_-脫氧核糖核苷酸的5′_位使用3′_-O-(N，N-二異丙基氨基磷酸酯)5′_-O-(4，4′_-二甲氧三苯甲基)衍生物，這里稱作“Saba化合物”。裝配完畢后，用1ml30％NH4OH在室溫處理1.5小時將4個寡核苷酸從固體載體上切除。將氨溶液加熱至55℃保持1.5小時。冷卻后，真空除去NH4OH。使用高效液相色譜純化粗品寡核苷酸至均一物質(zhì)。將寡核苷酸與互補的5′_-32P-標記的寡核苷酸在0.75MNaCl緩沖液(20μl)中，在40℃雜交(未標記的寡核苷酸與標記的寡核苷酸的摩爾比＝100∶1)1小時。此時，此溶液用UV-B波長的光(XL1500UV交聯(lián)劑，Spectronic，Inc.)照射15分鐘。使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后間斷頻帶(excisedbands)閃爍計數(shù)測定交聯(lián)的程度(相對于放射性標記的靶)。所得結(jié)果列于下表上述結(jié)果表明，本發(fā)明化合物進行的光化學交聯(lián)比美國專利5,082,934中的化合物更有效(比對比效率高＞10％)。實施例71-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)-2-0-(2-氰乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)甘油本發(fā)明的另一方案是使用7-羥基香豆素代替實施例1中的7-溴甲基香豆素合成。合成1-0-(4，4′_-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)-2-0-(2-氰乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)甘油的反應過程如下此反應路線與使用7-溴甲基香豆素的路線相比可使用較少的時間完成，且可比使用7-溴甲基香豆素的路線節(jié)省約50％的開支。7-羥基香豆素衍生物可被引入寡核苷酸，且與美國專利5,082,934中的化合物相比在寡核苷酸脫保護過程(在室溫暴露于濃NH3中)中特別穩(wěn)定。7-羥基香豆素衍生物(最大λ為325nm)與7-溴甲基香豆素衍生物(最大λ為310nm)相比顯示出不同的吸收光譜。7-羥基香豆素衍生物相對于7-溴甲基香豆素衍生物有紅移，這可減少終止劑(如核酸)的作用。譜移還使7-羥基香豆素衍生物的激發(fā)物有更多的選擇。7-縮水甘油基香豆素的合成反應中間體7-縮水甘油基香豆素是在裝備有回流冷凝器的反應燒瓶中制備的，反應瓶中含有16.2g7-羥基香豆素，15.8g表溴代醇(epibromohydrin)，13.8g碳酸鉀和270ml丙酮(“反應溶液”)。使反應溶液沸騰并回流過夜，冷卻，用100ml5％NaOH水溶液處理，用80ml二氯甲烷萃取三次。蒸發(fā)溶劑后得到粗品黃色固體。將粗品固體(1.5g)在50℃溶于30ml己烷和20ml丙酮的溶液。然后將己烷/丙酮溶液在0℃冷卻2-3小時。過濾收集形成的白色晶體，并干燥成白色粉末。得到290mg白色粉末。此新化合物(7-縮水甘油基香豆素)的熔點為110-112℃。使用8％(v/v)乙酸乙酯/CHCl3進行薄層色譜(TLC)；7-縮水甘油基香豆素的Rf值為0.6?？s水甘油基香豆素的水解將7-縮水甘油基香豆素(2.0g)溶于80ml丙酮和50ml1.8M含水H2SO4的溶液中。將此丙酮/酸溶液加熱至沸20分鐘。冷卻此溶液，并用1.6MNH4OH水溶液中和達到pH7-8。此中和的溶液用50ml乙酸乙酯萃取三次。蒸發(fā)溶劑后，得到產(chǎn)物7-(1-0-甘油基氧)香豆素，熔點為118-120℃。1-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)甘油的合成使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將香豆素基甘油(1.37g)和11ml純吡啶三次共蒸發(fā)。將共蒸發(fā)過的香豆素基甘油加入44mg4-二甲基氨基吡啶，330μl三乙胺，45ml吡啶和1.78g二甲氧三苯甲基氯。將溶液在室溫攪拌3小時。加入66ml去離子水終止反應。反應溶液用35ml二氯甲烷萃取3次。有機相用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到粗產(chǎn)物，使用硅膠柱色譜純化，用70％己烷，28％丙酮和2％三乙胺溶液洗脫。得到2.6g純的產(chǎn)物(1-0-(4，4′_-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)甘油)，得到單一TLC點，使用相同的溶劑系統(tǒng)Rf值為0.43。1-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)-2-0-(2-氰乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)甘油的合成將1-0-(4，4′_-二甲氧三苯甲基)-3-0-(7-香豆素基)甘油(2.5g)與12ml75％吡啶和25％二氯甲烷2次共蒸發(fā)。將5ml二氯甲烷溶液和5ml吡啶加入干燥粘稠液體(二氯甲烷/香豆素溶液)。將二氯甲烷/香豆素溶液在氬氣氛圍下加入含有3ml二異丙基乙基胺，10ml二氯甲烷和1.8g2-氰乙基N，N-二異丙基氯代氨基磷酸酯溶液的50ml燒瓶中。將此溶液攪拌90分鐘。將反應混合物用60ml乙酸乙酯和3ml三乙胺溶液稀釋。反應混合物用50ml飽和氯化鈉水溶液萃取2次。有機相用硫酸鈉干燥。粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化。得到2.6g純產(chǎn)物，TLC得到單一點，使用80％己烷和20％丙酮作洗脫劑，Rf值為0.2。實施例8使用上述實施例7制備的試劑，用DNA合成的β-氰基乙基氨基磷酸酯方法制備寡核苷酸，所制備的寡核苷酸等同于Chlamydiatrachomatis的隱性質(zhì)粒。此寡核苷酸互補于隱性質(zhì)粒876-900，6857-6878，7118-7140，和6725-6752核苷(此序列作為參考在此引入)。前兩個寡核苷酸在每個寡核苷酸中，含有一個交聯(lián)化合物，后兩個寡核苷酸在每個寡核苷酸中含有兩個交聯(lián)化合物。自動合成后，用3ml30％NH4OH在室溫處理2小時將寡核苷酸從固體載體上切除并脫保護。真空除去NH4OH，使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳純化粗品寡核苷酸至均一物質(zhì)。將寡核苷酸與互補的5′_-32P-標記的寡核苷酸在0.75MNaCl緩沖液(195μl)中，在40℃雜交(未標記的寡核苷酸與標記的寡核苷酸的摩爾比＝100∶1)20分鐘。此時，此溶液用UV-A波長的光(8W燈)照射20分鐘。使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后用間斷頻帶(excisedbands)閃爍計數(shù)鍵測定交聯(lián)的程度(相對于放射性標記的寡核苷酸)。所得結(jié)果列于下表</tables>上述結(jié)果表明，本發(fā)明化合物進行的光化學交聯(lián)比美國專利5,082,934中的化合物更有效。實施例9可合成含有不同側(cè)鏈的香豆素衍生物，包括，(1)短側(cè)鏈，如甘油，(2)長側(cè)鏈，如聚乙二醇，(3)芳香環(huán)，和(4)脂環(huán)環(huán)，如亞乙基二氧環(huán)(ethylene-dioxyring)。這些香豆素衍生物可從適當?shù)南愣顾仄鹗嘉?，如?-甲基香豆素，7-羥基香豆素，七葉亭(6，7-二羥基香豆素)或7-縮水甘油基香豆素合成得到。連接到每個香豆素起始物上的是所需含活性功能基的側(cè)鏈。制備含有脂肪族雜環(huán)的香豆素衍生物的反應過程1-0-[2-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯]-2，3-0-(6，7-二香豆素基)甘油此化合物雖本身不是上述通式化合物中的化合物，但它是可用于制備這樣的化合物的中間體，此化合物是通過X和/或B單元前體與被在反應過程最后步驟中形成氨基磷酸酯(phosphoramidite)活化的羥基反應形成的。試劑(a)碳酸鉀/丙酮(b)氫氧化鉀(c)2-氰基乙基N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯/二異丙基乙基胺/吡啶*以下二化合物的混和物反應在步驟(a)使用2，3-二溴-1，4-二羥基丁烷代替表溴代醇得到類似的化合物2，3-0-(6，7-香豆素基)-1，2，3，4-四羥基丁烷；它可轉(zhuǎn)化為如下式所示的1-0-0-(4，4′_-二甲氧三苯甲基)-4-O-(β-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)-2，3-0，0-(6，7-香豆素基)-1，2，3，4-四羥基丁烷。6，7-(羥甲基亞乙基二氧)香豆素的制備(步驟AI&amp;AII)將七葉亭(0.9g)與碳酸鉀(1.40g)和200ml無水丙酮的溶液在室溫攪拌1小時。向溶液中加入表溴醇(1.05g)。將黃色懸浮液回流過夜。然后加入氫氧化鉀(0.7g)并回流1小時。離心除去固體，將溶液通過水泵蒸發(fā)。所得產(chǎn)物溶于50ml水中。水溶液用35ml二氯甲烷萃取三次。有機溶液用50ml2M的氫氧化鈉萃取兩次。所得有機相用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，得到200mg白色固體。TLC在50％丙酮/己烷中顯示Rf為0.42。產(chǎn)率26％(重量)。脂肪族雜環(huán)衍生物的制備(步驟AIII)6，7-(羥甲基亞乙基二氧)香豆素(200mg)與1ml干燥吡啶兩次共蒸發(fā)。向干燥的反應劑中加入0.9ml二氯甲烷和0.9ml吡啶。將2-氰基乙基-N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯(phosphoramidit)(280mg)溶于0.2ml二異丙基乙基胺和0.9ml二氯甲烷的溶液中。將氨基磷酸酯溶液加入香豆素溶液。所得溶液在室溫攪拌2小時。將反應混和物用10ml乙酸乙酯和0.5ml三乙胺的溶液稀釋。溶液用6ml飽和氯化鈉溶液萃取三次。蒸發(fā)溶劑后，所得產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，使用丙酮/己烷/三乙胺＝36/60/4洗脫。得到純產(chǎn)物(100mg)，具有Rf＝0.57(在TLC中使用相同的洗脫劑)。制備連接到芳香側(cè)鏈的香豆素的反應過程3-0-(7-香豆素基甲氧)-1-0-[2-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯]-1，3-二羥基苯試劑(a)2-氰基乙基-N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯，二異丙基乙基胺/吡啶/二氯甲烷。7-溴甲基香豆素的制備(步驟BI)在1升燒瓶中，向140ml氯仿中加入7-甲基香豆素(28g)，70％過氧化苯甲酰(1.68g)，和N-溴代琥珀酰亞胺(30.8g)，并將懸浮液回流過夜。將溶液用100ml氯仿稀釋。所得粗產(chǎn)物從750ml丙酮中重結(jié)晶。得到白色固體(21g)，具有熔點172-176℃。3-0-(7-香豆素基甲基)-1，3-二羥基苯的制備(步驟BII)向間苯二酚(2.25g)，碳酸鉀(1.75g)和丙酮(200ml)的懸浮液中加入7-溴甲基香豆素(0.7g)。將溶液加熱并攪拌4小時。將溶液中的固體去除。蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物溶于40ml二氯甲烷。有機溶液用40ml水萃取三次。TLC使用20％(v/v)乙酸乙酯/氯仿，得到Rf＝0.32。蒸發(fā)溶劑后，產(chǎn)物從CH2Cl2/乙酸乙酯溶液中重結(jié)晶；得到300mg純產(chǎn)物。3-0-(7-香豆素基甲氧)-1-0-[2-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯]-1，3-二羥基苯的制備(步驟BIII)使2-氰基乙基N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯與步驟BII的產(chǎn)物按照步驟AIII基本相同的方式反應。制備含有長側(cè)鏈香豆素的反應過程3-0-(7-香豆素基)-2-0-(2-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)-1-0-(2-[2-(4，4′-二甲氧三苯甲基氧)乙氧]乙基)甘油試劑(a)碳酸鉀/丙酮(b)氫氧化鈉/乙二醇二甲醚(c)4，4′_-二甲氧三苯甲基氯/吡啶(d)2-氰基乙基N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯，二異丙基乙基胺/二氯甲烷7-縮水甘油基香豆素的制備(步驟CI)此化合物按照實施例6的描述制備。3-0-(7-香豆素基)-1-0-(2-[2-羥基乙氧]乙基)甘油的制備(步驟CII)將7-縮水甘油基香豆素(1g)溶于10mg氫氧化鈉，2.65g二甘醇和5ml乙二醇二甲醚的溶液中。將溶液加熱至回流6小時。反應混合物用10ml去離子水稀釋，并用10ml二氯甲烷萃取三次。有機相用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，用50％(v/v)丙酮/己烷洗脫。得到主要產(chǎn)物具有Rf0.09(260mg)，且少量產(chǎn)物具有Rf0.34(50mg)(TLC溶劑50％(v/v)己烷/丙酮)。3-0-(7-香豆素基)-1-0-(2-[4，4′-二甲氧三苯甲基氧)乙氧]乙基)甘油的制備(步驟CIII)將步驟CII得到的二羥基香豆素衍生物(230mg)與干燥吡啶共蒸發(fā)。向香豆素衍生物中加入二甲氧三苯甲基氯(320mg)，60ml三乙胺和10mg4-二甲基氨基吡啶。將溶液在室溫攪拌16小時。溶液用水稀釋，用二氯甲烷萃取，然后用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，以40％(v/v)丙酮/己烷作為洗脫劑。3-0-(7-香豆素基)-2-0-(2-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)-1-0-(2-[2-(4，4′-二甲氧三苯甲基氧)乙氧]乙基)甘油的制備(步驟CIV)使2-氰基乙基-N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯與步驟CIII的產(chǎn)物按照上述步驟AIII的方法反應。制備在步驟AIII，BIII和CIV中使用的氨基磷酸酯制備氨基磷酸酯的一般方法如下。在惰性氣體氛圍中，在加蓋隔膜的玻璃容器中，將1.2eq的2-氰基乙基-N，N-二異丙基氯氨基磷酸酯和2.4eq的N，N-二異丙基乙基胺溶于0.9ml二氯甲烷。將香豆素前體(1.0eq)(如步驟AII，BII或CIII的產(chǎn)物)溶于9.9ml吡啶和0.9ml二氯甲烷。在攪拌氯氨基磷酸酯溶液的條件下，加入香豆素溶液。再攪拌2小時。加入乙酸乙酯，有機溶液用NaCl(水溶液)洗滌三次并用Na2SO4干燥。除去溶劑，粗產(chǎn)物用柱色譜純化，使用丙酮/己烷/三乙胺(36∶60∶4)。收集適當?shù)牟糠植⒃谡婵諠饪s。本發(fā)明已被詳細描述，應理解本領域普通技術人員可根據(jù)其進行許多修改和變化而不脫離本發(fā)明的權利要求的精神和范圍。說明書中提到的所有公開出版物和專利申請在此引作參考，與每個公開出版物或?qū)＠暾埍痪唧w分別的指出被引作參考相同。權利要求1.具有下式結(jié)構的化合物其中B代表(1)直鏈，支鏈，或環(huán)烴基，含有2-10個碳原子，且如果是環(huán)狀的，含5-或6-員環(huán)或(2)5-或6-員雜環(huán)芳香環(huán)系，所述B(1)或B(2)都可被1，2，或3個式OR1的基團取代；其中R1分別代表H或在多核苷酸合成中可保護或偶聯(lián)羥基的羥基保護或羥基偶聯(lián)基團，或OR1代表連接所述結(jié)構式剩余部分的核苷酸或多核苷酸，且其中烴基中的1-3個碳原子可被氧，氮或硫原子代替；X代表(1)鍵，(2)直鏈，支鏈或環(huán)狀含有1-10個碳原子的烴基或(3)X(2)基團，其中烴基中的1-3個碳原子被氧，硫或氮原子代替，且其中X中的原子與所述結(jié)構式中其它與X相連部分的原子之間的最短連接鏈為1-10個原子，其中X任意被1-3個選自羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，羧基，羰基，全氟甲基，和氰基功能基的取代基取代；且其中X直接或通過W連接到所述結(jié)構式的苯環(huán)上；n是0，1，2，或3；每個W分別代表羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，硝基，硫代，羧基，羰基，全氟甲基，或氰基功能基；具有10個或更少碳原子的未取代的烴基；或所述烴基被1-3個所述功能基取代或其中一個碳原子被氧，硫，或氮原子取代；且其中兩個W可代表一個稠合于所述結(jié)構式的苯環(huán)的環(huán)；條件是(1)當X或W是取代的烴基時，在X或W中的取代基的總數(shù)應少于X或W中的碳原子總數(shù)，且不多于一個取代基或雜原子與一個所給碳原子相連，除非所給碳原子上的取代基是鹵原子，且(2)在所有W的取代基的碳原子總數(shù)應為15或更少；且Y和Z分別代表H或低級烷基或F；其中所述結(jié)構式含有一個光活性鍵，所述鍵在所述結(jié)構式中Y和Z連接的碳原子之間。2.權利要求1的化合物，其中X，在兩個可能的取向，是-OCH2-，-SCH2-，-NHCH2-，或-CL2(CH2)α-，其中L＝H，F(xiàn)，Cl，I或Br，且n＝0，1，或2。3.權利要求1的化合物，其中X是環(huán)結(jié)構，具有5-或6-員環(huán)或含有一個O，S或N原子的5-或6-員雜環(huán)。4.權利要求1的化合物，其中X右側(cè)所有所述結(jié)構式代表香豆素或其在所述結(jié)構式范圍內(nèi)的衍生物。5.權利要求1的化合物，其中X共價連接到香豆素部分的7位。6.權利要求1的化合物，其中B代表第一亞結(jié)構的基團第二亞結(jié)構的基團或第三亞結(jié)構的基團其中Rx，Ry和Rz分別代表H或OR1；m，n，p，q，和r分別代表0或1；所述亞結(jié)構中的一個氫被共價鍵取代與X基團相連；且所述化合物的所述通式中所有其它取代基和定義與前面的定義相同。7.權利要求6的化合物，其中B是飽和的。8.權利要求6的化合物，其中B是所述第三亞結(jié)構。9.權利要求6的化合物，其中m+n+p+q+r＝0，1，或2。10.權利要求6的化合物，其中所述第三亞結(jié)構代表環(huán)狀，飽和的，二，或三羥基烴。11.權利要求6的化合物，其中所述第三亞結(jié)構代表三-0-取代的甘油。12.權利要求1的化合物，其中所述核苷酸或多核苷酸通過含磷的連接基團連接到所述化合物上。13.權利要求12的化合物，其中所述含磷基團是磷酸酯基。14.權利要求1的化合物，其中B含有苯或萘環(huán)。15.權利要求1的化合物，其中B含有橋烴環(huán)。16.權利要求1的化合物，其中B含有雙環(huán)[3.1.0]或己烷或[2.2.1]庚烷環(huán)。17.權利要求1的化合物，其中B含有螺或二螺烴環(huán)。18.權利要求1的化合物，其中至少一個R1代表一個三苯甲基，pixyl，二甲氧三苯甲基，單甲氧三苯甲基，亞硫酸鹽，氨基磷酸酯，磷酸酯，H-膦酸酯，硫代磷酸酯，膦酸甲酯，二硫代磷酸酯或磷酸三酯基。19.權利要求1的化合物，其中B含有一個選自呋喃，吡喃，吡咯，吡唑，咪唑，哌啶，吡啶，哌嗪，嘧啶，噠嗪，噻吩，吖啶，吲哚，喹啉，異喹啉，喹唑啉，喹喔啉，氧雜蒽和1，2-苯并吡喃的雜環(huán)。20.權利要求1的化合物，其中所述化合物是具有通式(Nm1Qm4Nm2)m3的多核苷酸，其中每個N代表所需多核苷酸序列的一個核苷酸，Q代表權利要求1中通式的核苷酸替代分子，且m1，m2，和m3是整數(shù)，且m3為1-10。21.權利要求20的化合物，其中m1和m2小于100。22.權利要求21的化合物，其中至少一個Q在所述多核苷酸序列的末端且至少一個Q在所述多核苷酸序列的中間。23.權利要求21的化合物，其中至少一個Q在所述多核苷酸序列的中間。24.權利要求21的化合物，其中Q在所述多核苷酸序列的末端。25.權利要求1的化合物，其中B-X-是R1-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH(OR1)-CH2-O-。26.權利要求1的化合物，其中X是-CH2-O-且B是27.下式化合物其中B代表(1)支鏈或環(huán)烴基，含有3-10個碳原子，且如果是環(huán)狀的，含5-或6-員環(huán)或(2)5-或6-員雜環(huán)芳香環(huán)系，所述B(1)或B(2)都可被1，2，或3個式OR1的基團取代；其中R1代表H或在多核苷酸合成中可保護或偶聯(lián)羥基的羥基保護或羥基偶聯(lián)基團，或2基團當OR1代表連接所述結(jié)構式剩余部分的核苷酸或多核苷酸，且烴基中的1-3個碳原子可被氧，氮或硫原子代替；或B代表第三亞結(jié)構的基團其中Rx，Ry和Rz分別代表OR1；m，n，p，q，和r分別代表0或1；且所述亞結(jié)構中的一個氫被共價鍵取代與X基團相連；X代表(1)鍵，(2)直鏈，支鏈或環(huán)狀含有1-10個碳原子的烴基或(3)所述X(2)基團中烴基中的1-3個碳原子被氧，硫或氮原子代替，且其中X中的原子與結(jié)構式中其它與X相連部分的原子之間的最短連接鏈為1-10個原子，其中X任意被1-3個選自羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，羧基，羰基，全氟甲基，和氰基功能基的取代基取代；且其中X直接或通過W連接到所述結(jié)構式的苯環(huán)上；n是1，2，或3；每個W分別代表羥基，鹵素，氨基，酰氨基，疊氮基，硝基，硫代，羧基，羰基，全氟甲基，或氰基功能基；具有10個或更少碳原子的未取代的烴基；或所述烴基被1-3個所述功能基取代或其中一個碳原子被氧，硫或氮原子取代；且其中兩個W可代表一個稠合于所述結(jié)構式的苯環(huán)的環(huán)；條件是(1)當X或W是取代的烴基時，在X或W中的取代基總數(shù)應少于X或W中的碳原子總數(shù)，且不多于一個取代基或雜原子與所給碳原子相連，除非所給碳原子上的取代基是鹵原子，且(2)在所有W的取代基的碳原子總數(shù)應為15或更少；且Y和Z分別代表H或低級烷基。28.權利要求27的化合物，其中X，在兩個可能的取向，是-OCH2-，-SCH2-，-NHCH2-，或-CL2(CH2)n-，其中L＝H，F(xiàn)，Cl，I或Br，且n＝0，1，或2。29.權利要求27的化合物，其中X是環(huán)結(jié)構，具有5-或6-員環(huán)或含有一個O，S或N原子的5-或6-員雜環(huán)。30.權利要求27的化合物，W是吡喃酮或呋喃環(huán)稠合于所述結(jié)構式的苯環(huán)上。31.權利要求27的化合物，其中X右側(cè)所有所述結(jié)構式代表補骨脂素，順-苯并二吡喃酮，或反-苯并二吡喃酮或其在所述分子范圍內(nèi)的衍生物。32.權利要求27的化合物，其中X共價連接到補骨脂素部分呋喃環(huán)的4位。33.權利要求27的化合物，其中B代表第一亞結(jié)構的基團第二亞結(jié)構的基團所述化合物的所述通式中所有其它取代基和定義與前面的定義相同。34.權利要求27的化合物，其中B是飽和的。35.權利要求27的化合物，其中B是所述第三亞結(jié)構。36.權利要求35的化合物，其中m+n+p+q+r＝0，1，或2。37.權利要求36的化合物，其中B代表非環(huán)狀，飽和的，三羥基烴。38.權利要求36的化合物，其中B代表三-0-取代的甘油。39.權利要求27的化合物，其中至少一個R1代表一個三苯甲基，pixyl，二甲氧三苯甲基，單甲氧三苯甲基，亞硫酸鹽，氨基磷酸酯，磷酸酯，H-膦酸酯，硫代磷酸酯，膦酸甲酯，二硫代磷酸酯或磷酸三酯基。40.權利要求27的化合物，其中B含有一個選自呋喃，吡喃，吡咯，吡唑，咪唑，哌啶，吡啶，哌嗪，嘧啶，噠嗪，噻吩，吖啶，吲哚，喹啉，異喹啉，喹唑啉，喹喔啉，氧雜蒽或1，2-苯并吡喃的雜環(huán)。41.權利要求27的化合物，其中所述化合物是具有通式(Nm1Qm4Nm2)m3的多核苷酸，其中每個N代表所需多核苷酸序列的一個核苷酸，Q代表權利要求1中通式的核苷酸替代分子，且m1，m2，和m3是整數(shù)，且m3為1-10。42.化合物1-0-(4，4′-二甲氧三苯甲基)-4-0-(β-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯)-2，3-0，0-(6，7-香豆素基)-1，2，3，4-四羥基丁烷；2，3-0，0-(6，7-香豆素基)-1，2，3，4-四羥基丁烷；1-0-β-氰基乙基-N，N-二異丙基氨基磷酸酯]-2，3-0，0-(6，7-香豆素基)-甘油；或2，3-0-(6，7-香豆素基)-甘油。全文摘要本發(fā)明公開了新的香豆素衍生物,含有香豆素部分連接到非核苷的主鏈部分。所得分子一般用作光活性交聯(lián)基當插入多核苷酸時作為存在于探針的一個或多個互襯核苷堿基的替代物,參與核酸雜化反應。文檔編號C07D311/16GK1181078SQ96193174公開日1998年5月6日申請日期1996年3月8日優(yōu)先權日1995年3月9日發(fā)明者M·L·伍德,P·C·程,D·Y·斯恩,D·阿爾巴里申請人:納克斯科公司