專利名稱：一種戒心癮注射液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種戒毒注射液，特別是一種戒心癮注射液的制備方法，屬醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。
從蛇毒中分離出神經(jīng)生長因子(nerve growth factor NGF)然后制成戒毒注射液，從而達(dá)到戒毒的目的。神經(jīng)生長因子(NGF)是最早發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，也是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生理活性物質(zhì)之一，由于NGF具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，所以世界上各大制藥公司都投入大量人力對(duì)NGF進(jìn)行開發(fā)研究。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，已從多種生物材料中分離純化出NGF，其中包括蛇毒。將蛇毒用于戒毒，國內(nèi)也有相關(guān)報(bào)導(dǎo)。中國專利CN-1104096A“蛇毒替代戒毒及蛇毒抗老人癡呆藥及制備方法”及CN-1209998A“一種用于戒毒止痛的藥物制備方法”中都有以蛇毒的配伍藥制成戒毒藥物的報(bào)導(dǎo)。其從蛇毒中提NGF一般均是將蛇毒經(jīng)過不同的層析柱進(jìn)行層析分離。由于蛇毒成份復(fù)雜，分離純化要求高，因而難于獲得均一的，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的NGF。上述報(bào)導(dǎo)的蛇毒戒毒藥物，對(duì)戒毒有一定的效果，但卻難于戒患者的心癮。
本發(fā)明的目的是提供一種戒心癮注射液，即從蛇毒中分離純化出分辯率高、對(duì)酸、堿、溫度穩(wěn)定性好的NGF，將NGF與多糖配合，制備出戒心癮用注射藥物。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的由蛇毒中分離出NGF，及從菇類提取多糖(金針菇多糖、香菇多糖)，然后將神經(jīng)生長因子NGF和多糖按重量比1∶1混合，以無菌水配制，微孔濾膜過濾，除菌、沖氮、抽真空、封管制成針劑。
下面詳細(xì)說明之A、蛇毒神經(jīng)生長因子NGF的制備。
蛇毒NGF采用眼鏡蛇、銀環(huán)蛇和金環(huán)蛇等蛇毒提取，經(jīng)冷凍干燥制成干粉。在常溫下用連續(xù)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳制備NGF。
1)、在0．05～0．5％(重量濃度)SDS(十二烷基硫酸鈉)條件下進(jìn)行凝膠電泳，蛇毒蛋白質(zhì)在凝膠介質(zhì)中向陽極泳動(dòng)時(shí)依分子的大小不同而得到分離灌制聚內(nèi)烯酰胺凝膠時(shí)，先倒出分離膠，待分離膠聚合后再在其中灌制積層膠，然而固牢在電泳裝置中，蛇毒樣品在SDS存在下煮沸溶解，并加入2-巰基乙醇(2-ME)或2-硫蘇糖醇(DTT)以還原二硫鍵。
2)將蛇毒樣品與2×磷酸／SDS樣品緩沖液按1∶1混合，于100℃加熱2min，然后加樣入電泳孔。
3)通電電泳，對(duì)于0．75mm厚凝膠，先以1．5mA電泳，電泳至視蹤染料進(jìn)入凝膠，在30mA下電泳5h(10％凝膠)直至染料到達(dá)凝膠底部為止，保持凝膠溫度在15～20℃。
4)將相對(duì)應(yīng)的膠帶切下，用玻璃粉純化、除去雜質(zhì)，真空抽干得NGF樣品。
B、金針菇發(fā)酵后提取多糖。
將金針菇菌絲體在全自動(dòng)發(fā)酵罐中發(fā)酵后進(jìn)行多糖提取，金針菇菌絲體經(jīng)發(fā)酵后，樣品泡浸在冷的95％乙醇中，然后用80％乙醇連續(xù)提取三次，每次24小時(shí)，將提取過的材料用熱的酒精清洗，然后放在鉛制器皿中烘干，經(jīng)葡聚糖凝膠G200層析純化多糖備用。
本戒毒注射液是一種戒心癮藥物。由蛇毒神經(jīng)生長因子和菇類多糖復(fù)合配制而成，戒毒(尤其是戒心癮)效果顯著，且具有減低復(fù)吸率50％以上及修復(fù)免疫損傷機(jī)能(恢復(fù)常人的80％)的功能。戒心癮藥物經(jīng)廣東省汕頭、清遠(yuǎn)、湛江、順德、湖南懷化等地戒毒所臨床試用，效果很好。以一個(gè)療程(20支)為例，95％患者可脫癮，降低復(fù)吸率在80％以上，一般達(dá)50～60％。本藥物經(jīng)廣東省科委和廣東省衛(wèi)生廳檢驗(yàn)，認(rèn)為該藥物安全、有效、創(chuàng)新。是用生物工程藥物戒毒的一大突破。
實(shí)施例蛇毒+20％SDS+0．1mal磷酸緩沖液，在3500～4000轉(zhuǎn)／分轉(zhuǎn)速條件下離心5分鐘，得到的樣品依次用100％，95％和75％的酒精洗去雜質(zhì)，然后用G200層析過柱。再經(jīng)過甲基化，用聚丙烯酰胺(SDS)凝膠電泳，可得到不同的電泳帶，從中選取相應(yīng)分子量的電泳帶進(jìn)行切割，將切割后的電泳帶用DPS進(jìn)行純化，得NGF(蛇毒神經(jīng)生長因子)待用。
權(quán)利要求
1.一種戒心癮注射液，以從蛇毒中分離的神經(jīng)生長因子為主要成份，其特征是該注射液由蛇毒神經(jīng)生長因子(NGF)和菇類多糖組成，其制備方法是A)、蛇毒神經(jīng)生長因子(NGF)的制備蛇毒經(jīng)酒精洗去雜質(zhì)，經(jīng)G200柱層析后，再經(jīng)甲基化，用聚丙烯酰胺(SDS)進(jìn)行凝膠電泳，得不同電泳帶，從中選取相應(yīng)分子量的電泳帶進(jìn)行切割，將切割后的電泳帶用玻璃粉(DPS)純化，制得NGF；B)、菌類多糖的制備金針菌菇絲體經(jīng)發(fā)酵后，樣品浸泡在冷的95％乙醇中，然后用80％乙醇提取，再用熱的酒精清洗，樣品烘干，經(jīng)葡聚糖凝膠G200層析純化備用；C)注射液針劑的制備將蛇毒NGF和多糖按重量1∶1的比例混合，以無菌水配制，經(jīng)過濾除菌、沖氮、抽真空，封管后成針劑。
全文摘要
一種戒心癮注射液,由蛇毒分離的神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor NGF)和菇類多糖組成,NGF和多糖按比例混合后,以無菌水配制、微孔濾膜過濾除菌、沖氮、抽真空、封管成針劑。本藥物具有減低復(fù)吸率50%以上和修復(fù)免疫損傷機(jī)能(恢復(fù)達(dá)常人的80%)的功能。是生物工程藥物戒毒的重大突破。
文檔編號(hào)C07K14/435GK1294016SQ99117149
公開日2001年5月9日 申請(qǐng)日期1999年10月20日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月20日
發(fā)明者林德球 申請(qǐng)人:林德球, 帥果琦