專利名稱：用于外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治療藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治療藥物，特 別是涉及用于由脊髓損傷引起的外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治 療藥物。
背景技術(shù)：
據(jù)報道，淺利等人研究發(fā)現(xiàn)如下式所示的L4,硫酸角質(zhì)素二糖對白 細(xì)胞介素-12(IL-12)表達(dá)具有抑制作用(非專利文獻(xiàn)1)。
Gal(6S)j31-4GlcNAc(6S) (其中，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙酰基氨基葡萄糖殘基， 6S表示在6位的羥基是6-0-硫酸酯形式，iSl-4表示jSl-4糖香鍵。)
已知IL-12在MRL-lpr/lpr小鼠中以高水平表達(dá)，使T淋巴細(xì)胞 (CD4-CD8-)無限增殖化，以及使淋巴器官(淋巴結(jié)及脾臟)腫脹(非專利文 獻(xiàn)2)。另外，根據(jù)報道，在將L4給藥后，發(fā)現(xiàn)血中IL-12濃度降低，誘 導(dǎo)T淋巴細(xì)胞細(xì)胞死亡，并引起淋巴器官縮小(非專利文獻(xiàn)1)。
另一方面，據(jù)報道，脊髓損傷患者的精液含有高水平的IL-12(非專利 文獻(xiàn)3)。然而，IL-12在脊髓損傷中的作用尚不清楚。
參考文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)l:特開平2-57182號7>凈艮 專利文獻(xiàn)2:國際7>開第WO 96/16166號小冊子 專利文獻(xiàn)3:國際公開第WO 96/16973號小冊子 專利文獻(xiàn)l:特開2001-89493號7>才艮
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非專利文獻(xiàn)4: Kubota， M.， Yoshida， K., Tawada, A" and Ohashi, M. (2000) Eur. J, Mass Spectrom. 6, 193-203.
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非專利文獻(xiàn)6: Basso DM, Beattie MS, Bresnahan JC. Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection (在脊fU坐傷后，對^黃斷面4吏用 NYU自由落體打擊裝置的分級組織學(xué)結(jié)果和運(yùn)動結(jié)果).Exp. Neurol.， 1996 Jun, 139(2), p244-56.

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題
本發(fā)明的目的在于4是供用于外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治 療藥物，特別是用于由脊髓損傷？ 1起的外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障 礙的治療藥物。
解決問題的方法
根據(jù)本發(fā)明的第 一方面，提供了含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖或其 衍生物的用于外傷性神經(jīng)障礙的治療藥物。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提 供了含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖或其衍生物的用于運(yùn)動功能障礙的治
療藥物。
發(fā)明的有益效果
本申請的發(fā)明人采用大鼠脊髓損傷模型，研究了疏酸角質(zhì)素寡糖或 其衍生物對脊髓損傷的作用。結(jié)果出乎人們意料，下面將進(jìn)行詳細(xì)說明， 硫酸角質(zhì)素寡糖或其衍生物對由脊髓損傷引起的運(yùn)動功能障礙具有改善 作用，可用作用于外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治療藥物。
附圖的簡要說明


圖1表示在采用鉗夾傷法獲得的大鼠脊髓損傷模型中，L4對后肢運(yùn) 動功能的作用，該圖顯示了脊髓損傷處理及L4給藥后的天數(shù)與后肢運(yùn)動 功能(BBB評分)之間的關(guān)系。
圖2表示在采用鉗夾傷法獲得的大鼠脊髓損傷模型中，L4對后肢運(yùn) 動功能的作用，該圖顯示了在脊髓損傷處理及L4給藥后第7天的后肢運(yùn) 動功能(BBB評分)。
圖3表示在采用鉗夾傷法獲得的大鼠脊髓損傷模型中，L4對脊髓誘 發(fā)電位的作用，該圖顯示了在脊髓損傷處理及L4給藥后第7天的脊髓誘 發(fā)電位。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明
下面將闡述本發(fā)明的實施方案。然而，本發(fā)明不受以下說明的實施 方案的限制。
如上所述，根據(jù)本發(fā)明，提供了含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖或其 衍生物的用于外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙的治療藥物。
在本發(fā)明中，"硫酸角質(zhì)素寡糖"(下文也稱為KS寡糖)是指含有硫 酸角質(zhì)素的基本結(jié)構(gòu)(一般來說，但不限于，為半乳糖殘基或半乳糖-6-O-
硫酸酯殘基與N-乙酰基氨基葡萄糖殘基或N-乙?；被咸烟?6-0-硫 酸酯殘基交替地通過糖苷鍵連接的結(jié)構(gòu))的二糖或更多糖的寡糖。另外， KS寡糖也可含有唾液酸殘基(神經(jīng)氨酸的?；苌?和/或巖藻糖殘基。 通常，唾液酸殘基通過a-2，3-或a-2，6-糖苷鍵與半乳糖殘基連接，巖藻糖 殘基通過a-l，3糖苷鍵與N-乙?；被咸烟菤埢B接。
在本發(fā)明中，所述寡糖通常含有在多糖領(lǐng)域中被稱為寡糖的構(gòu)成糖 物質(zhì)。特別是，所述寡糖優(yōu)選為2-10個糖單元的糖聚合物，更優(yōu)選2~ 6個糖單元，再更優(yōu)選2-4個糖單元。其中，特別優(yōu)選2個糖單元的寡 糖。
KS寡糖可以是例如由酶降解或化學(xué)降解硫酸角質(zhì)素得到的產(chǎn)物，還 可以是例如通過將與1個或多個N-乙酰基氨基乳糖單元連接的寡糖硫酸 化得到的化合物。在這些疏酸角質(zhì)素寡糖中，通過降解硫酸角質(zhì)素得到 的寡糖(來源于硫酸角質(zhì)素的寡糖)是優(yōu)選的，通過用endo齊N-乙?；?基葡萄糖苷酶型硫酸角質(zhì)素水解酶將硫酸角質(zhì)素降解得到的降解產(chǎn)物是 更優(yōu)選的。
對于天然來源的疏酸角質(zhì)素，N-乙?；被咸烟菤埢?位羥基 基團(tuán)的大部分被硫酸化，半乳糖殘基的6位羥基基團(tuán)的一部分被硫酸化。 雖然KS寡糖可以是通過將上述的硫酸角質(zhì)素降解得到的硫酸角質(zhì)素寡 糖，但是本發(fā)明的KS寡糖中，N-乙?；被咸烟堑?位羥基可以被疏 酸化也可以不被疏酸化，優(yōu)選地，半乳糖殘基的6位羥基被硫酸化。
換言之，所述KS寡糖優(yōu)選為如下式所示的任一二糖，或者為含有該 如下式所示的任一二糖或兩者作為重復(fù)結(jié)構(gòu)單元的偶數(shù)糖的寡糖 Gal(6S)誦GlcNAc(6S)或 Gal(6S)-GlcNAc
(其中，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙?；被咸烟菤埢?， 6S表示6位的羥基是6-0-硫酸酯形式，-表示糖香鍵。)
所述KS寡糖更優(yōu)選為由下述式1 ~式3表示的任何一種寡糖 Gal(6S)j81 -4GlcNAc(6S)/51誦3Gal(6S)/ l -4GlcNAc(6S)式1 Gal(6S)/31-4GlcNAc(6S) 式2
Gal(6S)/31隱4GlcNAc 式3
(其中，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙?；鵡J^葡萄糖殘基， 6S表示6位的羥基是6-0-硫酸酯形式，/31-4表示jSl-4糖苷鍵，j31-3表 示/31-3糖香鍵。)
另外，式1所示的寡糖也稱為L4L4，式2所示的寡糖稱為L4，式3 所示的寡糖稱為L3。上文所述的式1 ~式3所示的寡糖可與諸如N-乙酰
神經(jīng)氨酸等唾液酸連接，作為含有這樣的唾液酸的碌u酸角質(zhì)素寡糖，列
舉如下實例
SA-Gal(6S)-GlcNAc(6S)和 SA-Gal(6S)-GlcNAc(6S)陽Gal(6S)畫GlcNAc(6S)
(其中，SA表示唾液酸殘基，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙酰 基氨基葡萄糖殘基,6S表示6位的羥基是6-0-疏酸酯形式，-表示糖苷鍵。) 在本說明書中，所述硫酸角質(zhì)素寡糖的"衍生物"(下文也稱為KS 寡糖衍生物)通常包括這樣的化合物，其中KS寡糖中的鞋基基團(tuán)的至少 一個氫原子(優(yōu)選全部羥基的10%或更多)被酰基取代(部分或完全的O-酰 化衍生物)。
另外，所述的KS寡糖及KS寡糖衍生物包括電離狀態(tài)的KS寡糖及 KS寡糖衍生物，也包括具有加入的質(zhì)子或陽離子的結(jié)構(gòu)的KS寡糖及KS 寡糖衍生物。因此，(陽離子加合物)KS寡糖及KS寡糖衍生物也包括它 們的藥物可接受的鹽。
所述藥物可接受的鹽包括但不限于，藥物可接受的堿金屬鹽，如鈉 鹽、鉀鹽和鋰鹽；堿土金屬鹽，如釣鹽；與無機(jī)堿形成的鹽，如銨鹽； 以及與有機(jī)堿形成的鹽，如二乙醇胺鹽、環(huán)己胺鹽和氨基酸鹽。
KS寡糖衍生物中，取代KS寡糖的羥基基團(tuán)的氫原子的酰基優(yōu)選為 1 ~ 10個石友原子的?；?，更優(yōu)選為1 ~ 10個碳原子的脂肪族?；蚍枷阕?酰基，即可以含有雜原子的烷?；蚍减；?。這些基團(tuán)的實例包括乙酰 基，氯乙?；?，二氯乙?；阴；?，曱氧基乙酰基，丙?；?，n-丁?；?E)-2-甲基丁烯?；?，異丁?；?，戊酰基，苯甲酰基，O-(二溴曱 基)苯甲?；琌-(曱氧基羰基)苯曱?；?，2,4,6-三曱基苯曱酰基，p-曱苯 酰基，p-曱氧苯曱?；?，p-氯苯曱酰基，p-硝基苯曱?；鹊取．?dāng)所述 KS寡糖衍生物具有多個?；鶗r，這些?；舜丝梢韵嗤?，也可以不同。當(dāng)所述KS寡糖的還原性末端糖的1位羥基的氫原子被?；〈鷷r，其 O-?；臉?gòu)型可以為a-糖苷構(gòu)型或i3-糖苷構(gòu)型，優(yōu)選a-糖苷構(gòu)型。
?；腒S寡糖是特別優(yōu)選的，因為其具有如下優(yōu)點，如在有機(jī)溶劑 和脂質(zhì)中的溶解性提高，生物膜滲透性增加，口服給藥后增加胃腸吸收。
在本發(fā)明中，所述KS寡糖或KS寡糖衍生物優(yōu)選為下述通式4表示 的化合物。為了方便起見，下述通式4顯示了加入M的結(jié)構(gòu)。然而，該 化合物可在溶液中發(fā)生電離，以及當(dāng)電離時，磺to團(tuán)變成陰離子狀態(tài)。
通式4
<formula>formula see original document page 9</formula>
(其中，^-XS各自獨立地表示氫原子或?；鶊F(tuán)，Y表示氫原子或 S03M， M表示氫原子或1價~ 3價的金屬陽離子或1價~ 3價的堿基， 由波浪線表示的鍵表示處于a-糖苷構(gòu)型或j3-糖苷構(gòu)型的單鍵。)
被?；鶊F(tuán)取代的KS寡糖優(yōu)選為上述通式4中的X1 ~ 乂5全部為乙 ?；腒S寡糖。特別優(yōu)選下述通式5所示的衍生物。
通式5
(其中，Ac表示乙酰基，Y表示氫原子或S03Na，由波浪線表示的鍵表示 處于a-糖苷構(gòu)型或/3-糖苷構(gòu)型的單鍵。)
本發(fā)明的治療藥物可包含單一種類的KS寡糖或其衍生物，也可包含 KS寡糖或其衍生物的混合物，例如，對于上述通式4中波浪線表示的部 分，包含為o;-糖苷構(gòu)型的物質(zhì)，也可包含為jS-糖苷構(gòu)型的物質(zhì)，還可包 含這些物質(zhì)的混合物。例如，所述KS寡糖可通過如下方法獲得通過釆用endo-j8-N-乙酰 基氨基葡萄糖苷酶型硫酸角質(zhì)素水解酶的處理，如來自桿菌屬細(xì)菌的角 質(zhì)素酶II(專利文獻(xiàn)1，特開平2-57182號公報)，或來自環(huán)狀芽孢桿菌 KsT202抹的硫酸角質(zhì)素水解酶(專利文獻(xiàn)2，國際公開第W096/16166號) 的處理，使得硫酸角質(zhì)素的緩沖溶液，優(yōu)選高度硫酸化的硫酸角質(zhì)素的 緩沖溶液降解，隨后將所得到的降解產(chǎn)物進(jìn)行分離來獲得KS寡糖。通過 對所獲得的寡糖實施常規(guī)的分離純化方法，例如，乙醇沉淀，凝膠過濾 及陰離子交換色i普法，可將所需要的寡糖分離純化出。
這類制備方法已在專利文獻(xiàn)3中(國際7〉開第W096/16973)^^開。用 作原料的硫酸角質(zhì)素可以由主要由半乳糖或半乳糖-6-0-硫酸酯和N-乙 酰基氨基葡萄糖或N-乙?；被咸烟?6-0-硫酸酯構(gòu)成的二糖重復(fù)單 元組成。雖然硫酸角質(zhì)素的硫酸化比率取決于動物種類、器官等因素而 變化，但是可通常使用由生物原材料產(chǎn)生的硫酸角質(zhì)素，該生物原材料 例如豊魚等軟骨魚類以及鯨、牛等哺乳動物的軟骨，骨和角膜。
用作原料的硫酸角質(zhì)素可以是任何容易獲得的硫酸角質(zhì)素，且沒有 特別的限制，但優(yōu)選使用高度硫酸化的疏酸角質(zhì)素，其中構(gòu)成糖的半乳 糖殘基被硫酸化(將對于每個組成二糖單元，含有1.5~2分子的硫酸酯基 團(tuán)的高度硫酸化的硫酸角質(zhì)素有時稱為多疏酸角質(zhì)素)。另外，硫酸酯基 團(tuán)在半乳糖殘基中的位置優(yōu)選為6位。這樣的高度硫酸化的硫酸角質(zhì)素 可例如從諸如篁魚等軟骨魚類的蛋白聚糖中獲得。另外，也可以使用市 售的產(chǎn)品。
可對這種方式獲得的KS寡糖實施已知的將糖鏈脫硫酸化或硫酸化 的方法來調(diào)節(jié)硫酸酯基團(tuán)的含量以用作本發(fā)明的KS寡糖。
制備所述KS寡糖衍生物時，可根據(jù)通常使用的?；椒▽⑹杷峤琴|(zhì) 素中的羥基基團(tuán)的氬原子用?；鶊F(tuán)取代以保護(hù)糖鏈上的羥基基團(tuán)。例 如，可通過使KS寡糖與待引入的?；鶊F(tuán)的反應(yīng)性衍生物(羧酸酸酐(如， 引入乙?；鶗r采用醋酸酐，引入丙?；鶗r采用丙酸酐)，羧酸卣化物等等， 每一種與?；鶊F(tuán)相對應(yīng))在適當(dāng)?shù)娜軇?吡啶、二噁烷、四氫呋喃、N,N-二曱基曱酰胺(DMF)、乙腈、氯仿、二氯曱烷、曱醇、乙醇、水、及其混 合物等等)中反應(yīng)，以常規(guī)方法引入?；鶊F(tuán)。必要時，還可在諸如吡啶
等堿性催化劑的存在下實施所述反應(yīng)。
另外，必要時，還可調(diào)控酰化程度，此調(diào)控可根據(jù)上述酰化方法進(jìn)
行部分?；蛘呖蓮孽；说腒S寡糖中部分去除?；鶃韺嵤ｕ；娜?除可通過使用曱醇氨、濃氨水、曱醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀 等進(jìn)行水解來實施。所得到的衍生物采用反相高效液相色譜等方法純化。 優(yōu)選地，本發(fā)明的治療藥物的有效成分KS寡糖或其衍生物被純化至 足以作為醫(yī)藥品使用的程度，并且作為醫(yī)藥品使用時不含有不允許混入 的物質(zhì)。
本發(fā)明的治療藥物可對人、狗、牛、馬、小鼠、大鼠等哺乳動物的 外傷性神經(jīng)障礙和/或運(yùn)動功能障礙進(jìn)4于有效的治療、抑制進(jìn)展或預(yù)防。 特別是，本發(fā)明的治療藥物適用于由神經(jīng)病引起的運(yùn)動功能障礙。另夕卜， 本發(fā)明的治療藥物同樣適用于由脊髓損傷51起的神經(jīng)病。脊髓損傷包括 外傷性脊髓損傷(錐體關(guān)節(jié)的脫臼或亞脫臼、錐體骨折(線狀骨折、壓迫骨 折、壓挫性骨折、完全4黃斷損傷、不完全橫斷損傷、Brown-Sequard(布朗 塞卡爾)型損傷、急性脊髓前半部損傷、急性脊髓中心部損傷、高位頸髓 損傷等)、脊推變性性疾病(脊推關(guān)節(jié)強(qiáng)直等)、脊推炎癥性疾病(脊稚炎， 慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等)、腫瘤(脊髓腫瘤、脊推腫瘤等)、血管性疾病(脊 髓出血，髓外血管病癥引起的脊髓麻痹等)、脊髓炎(蛛網(wǎng)膜炎、病毒性脊 髓炎、細(xì)菌性脊髓炎等)、多發(fā)性硬化癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥等。脊髓 損傷引起的神經(jīng)病包括下半身的運(yùn)動功能障礙、半身不遂、下半身麻 痹、知覺障礙、自律神經(jīng)功能障礙、反射消失、性功能低下等。由神經(jīng) 病引起的運(yùn)動功能障礙包括基于神經(jīng)病的休克、呼吸麻痹、知覺麻痹、 運(yùn)動麻痹、反射消失、自律神經(jīng)麻痹等。另夕卜，應(yīng)注意的是本發(fā)明的治 療藥物不僅可應(yīng)用于治愈性治療，還適用于疾病的預(yù)防、維持(防止惡化)、 減輕(改善癥狀)等。
本發(fā)明中，可根據(jù)目標(biāo)疾病的性質(zhì)及進(jìn)展?fàn)顩r、給藥方法等恰當(dāng)?shù)?選擇任何劑型。本發(fā)明的治療藥物可通過注射(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮 內(nèi)、腹膜內(nèi)等)、經(jīng)鼻、口服、或經(jīng)皮給藥、吸入等方式給藥，以及可根 據(jù)這些給藥方式進(jìn)行適宜地配制?？蓮V泛地選擇適用的劑型，例如但不 限于注射劑(溶液、懸濁液、乳液、使用時溶解的固形制劑等)、片劑、膠
嚢劑、顆粒劑、散劑、液劑、脂質(zhì)體制劑、軟膏劑、硬膏劑、洗劑、糊 劑、貼劑、凝膠制劑、栓劑、外用散劑、噴霧劑、吸入劑等。另外，當(dāng) 制備這些制劑時，可使用通常用于藥物中的添加劑，如常用的賦形劑、
穩(wěn)定劑、粘合劑、潤滑劑、乳化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、著色劑、
崩解劑等。
本發(fā)明的治療藥物中的有效成分KS寡糖或其衍生物在制劑中的含 量及劑量應(yīng)根據(jù)藥物制劑的給藥方法、劑型、使用目的、患者的具體狀 況、患者的體重、年齡和性別等因素來具體決定。KS寡糖的臨床應(yīng)用劑 量通常為成人每天一次50 ~ 5000mg， ^f旦不特別限于此劑量。
本發(fā)明的治療藥物的有效成分KS寡糖的安全性已在專利文獻(xiàn)3(國 際公開第WO 96/16973號)中公開，其衍生物的安全性可以從專利文獻(xiàn) 4(特開2001-89493號公報)記載的實施例中推斷出。
實施例
下面將參照附圖闡述本發(fā)明的實施例。然而，本發(fā)明并不限于下文 闡述的實施例。 [材料及方法] [L4的制備]
如下所述，采用Xu等人的方法，L4通過用角質(zhì)素酶II降解硫酸角
質(zhì)素，隨后采用陰離子交換色譜法進(jìn)行分離來制備。
KS寡糖(L4)是通過實施陰離子交換色鐠法及凝膠滲透色語法的一系 列步驟，從來自鯊魚鰭的石克酸角質(zhì)素(生化學(xué)工業(yè))的角質(zhì)素酶II的降解產(chǎn) 物中分離出。該寡糖采用毛細(xì)管電泳及質(zhì)i普法進(jìn)行鑒定(非專利文獻(xiàn)4)。
采用具有紫外線檢測器的Quanta 4000毛細(xì)管電泳系統(tǒng)(Waters)實施 毛細(xì)管電泳。毛細(xì)管電泳系統(tǒng)中，樣品裝載在陽極，使用普通的極性。 電泳緩沖液采用50mM的四硼酸鈉(pH 9.0)。該樣品采用得自Waters公 司的石英玻璃毛細(xì)管進(jìn)行分離并分析(除了該樣品通過上述檢測器的區(qū)域 外，將毛細(xì)管的外部區(qū)域覆蓋內(nèi)徑75nm，長度60cm)。加入樣品前， 將毛細(xì)管用0.5M的氬氧化鈉、蒸餾水及電泳緩沖液進(jìn)行手動沖洗。所述 樣品在10秒的注入時間內(nèi)在靜水壓下被負(fù)載。實驗在恒定電壓(12kV)下
進(jìn)行。溶出物在185nm處進(jìn)行監(jiān)測。數(shù)據(jù)分析采用Waters公司的軟件程 序Millenium 32(版本3.06.01)來進(jìn)行。
釆用Toxicolor Ls set(生化學(xué)工業(yè))，根據(jù)血細(xì)胞提取物試驗(Limulus amebocyte lysate(鱟變形細(xì)胞溶解物試驗))測定所得到的寡糖的內(nèi)毒素。 L4含有的內(nèi)毒素等于或小于0.03pg/mg。
按照以下操作，制備脊髓損傷模型(鉗夾傷模型)。實驗動物采用12 周齡的雄性Wistar大鼠。將動物用戊巴比妥(50mg/kg體重)進(jìn)行麻醉，用 電動剃刀除去從頸部到臀部的毛發(fā)，用70。/。乙醇及Isodine(聚乙烯吡咯酮 碘)(明治制藥抹式會社制)擦拭皮膚。切開背部皮膚后，暴露T5至T10胸 推，對第六胸推(T6胸推)實施半錐板切除術(shù)，在硬膜處引入小切口。用 利多卡因(阿斯利康制)進(jìn)行局部麻醉后，在T6位置處將鉗子刺入直到其 頂端達(dá)到推體(鉗子的頂端被加工至0.3mm),通過從兩側(cè)把脊髓夾在中間 10秒，對脊髓進(jìn)行夾傷。
損傷后，立即將管的頂端(OD: 0.3mm)留置在損傷部位頭部側(cè)的硬 膜下，采用微量調(diào)節(jié)注射器(25pL,(抹)伊藤制作所)將L4(6pL)在硬膜內(nèi) 給藥。為了使損傷部位與周圍組織分離，在損傷部位放置明膠海綿 (Gelform, Pharmacia Corp.的產(chǎn)品)，縫合傷口 ，將大鼠放回飼養(yǎng)籠中。
脊髓損傷后，7天內(nèi)每天對后肢的運(yùn)動功能進(jìn)行評估。按照Basso等 人的方法(參照非專利文獻(xiàn)5和6)，采用Basso-Beeattie-Bresnahan(BBB) 標(biāo)準(zhǔn)，由2名試驗者進(jìn)行獨立地評估，將其平均分作為最終評分。另外， BBB標(biāo)準(zhǔn)是采用21個等級細(xì)分化的衡量標(biāo)準(zhǔn)，并允許動物在曠場內(nèi)自由 步行來評估后肢運(yùn)動功能恢復(fù)的測量方法。當(dāng)完全觀察不到后肢的自發(fā) 運(yùn)動時，評分為0分，當(dāng)觀察到正常的后肢運(yùn)動時，評分為21分。
脊髓損傷后第7日，采用三氟乙烷進(jìn)行麻醉(開始時注入4.0%,維持
時注入1.0%)，對實驗動物進(jìn)行氣管內(nèi)插管。對實驗動物給與肌肉松弛劑
以防止其活動，以俯臥位固定頭部，隨后依靠呼吸器維持。將實驗動物
從第2/3頸推間及第13胸推/第1腰推間插入導(dǎo)管電極，在使用超最大刺 激(刺激頻率lHz，持續(xù)時間0.05ms)后，使用肌電圖儀(Counterpoint， Dantech)測定脊髓誘發(fā)電位(SCEP)。所得電位的評價以第1電位的振幅作 為指標(biāo)。脊髓誘發(fā)電位的上升代表損傷部位的恢復(fù)。
采用非參數(shù)Tukey的多重比較檢驗評價BBB評分。
在使用BBB標(biāo)準(zhǔn)的后肢運(yùn)動功能的測試中，與生理鹽水給藥組相比 較，在脊髓損傷后第7日時觀察到通過將L4以60pg/只動物的量給藥后， 可獲得明顯的后肢運(yùn)動功能的恢復(fù)(P〈0.001)(圖1和2)。脊髓i秀發(fā)電位 中，與鹽水-給藥組相比較，通過將L4以60pg/只動物的量給藥后，觀察 到SCEP振幅具有恢復(fù)趨勢(圖3)。
權(quán)利要求
1.用于外傷性神經(jīng)障礙的治療藥物，其含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖或硫酸角質(zhì)素寡糖的衍生物。
2. 用于運(yùn)動功能障礙的治療藥物，其含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖 或硫酸角質(zhì)素寡糖的衍生物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療藥物，其中所述運(yùn)動功能障礙是由神 經(jīng)病引起。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的治療藥物，其中所述神經(jīng)病是由脊髓 損傷引起。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的治療藥物，其中所述硫 酸角質(zhì)素寡糖為由下式表示的任一二糖，或含有由下式表示的任一二糖 或兩者作為重復(fù)結(jié)構(gòu)單元的偶數(shù)糖的寡糖Gal(6S)-GlcNAc(6S)或 Gal(6S)-GlcNAc，其中，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙?；被咸烟菤埢?，6S 表示6位的羥基是6-0-硫酸酯形式，以及-表示糖苷鍵。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療藥物，其中所述硫酸角質(zhì)素寡糖為由 下式表示的任何一種寡糖Gal(6S)j81 -4GlcNAc(6S)/31 -3Gal(6S)i81畫4GlcNAc(6S)，Gal(6S)/51陽4GlcNAc(6S)或Gal(6S)i31-4GlcNAc, 其中，Gal表示半乳糖殘基，GlcNAc表示N-乙?；被咸烟菤埢?，6S 表示6位的羥基是6-0-硫酸酯形式，(31-4表示/3-1，4-糖苷鍵，以及/31-3 表示/31,3-糖苷鍵。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述的治療藥物，其中所述硫 酸角質(zhì)素寡糖的衍生物為羥基基團(tuán)酰化的硫酸角質(zhì)素寡糖的衍生物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療藥物，其中所述硫酸角質(zhì)素寡糖的衍 生物由如下通式表示其中，X1 ~ X5各自獨立地表示氫原子或酰基基團(tuán)，Y表示氫原子或S03M， M表示氫原子或l價 3價的金屬陽離子或l價 3價的堿基，以及由波 浪線表示的鍵表示處于a-糖苷構(gòu)型或j3-糖苷構(gòu)型的單鍵。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療藥物，其中所有的X1 ~ X5均為具有1 ~ IO個碳原子的酰基基團(tuán)，以及M為堿金屬。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療藥物，其中所述硫酸角質(zhì)素寡糖的衍 生物由如下通式表示
全文摘要
本發(fā)明提供了用于外傷性神經(jīng)病和/或運(yùn)動功能障礙的治療劑，特別是用于由脊髓損傷引起的外傷性神經(jīng)病和/或運(yùn)動功能障礙的治療劑。[解決問題的方法]發(fā)現(xiàn)硫酸角質(zhì)素寡糖或其衍生物對由脊髓損傷引起的外傷性神經(jīng)病和/或運(yùn)動功能障礙具有改善作用，因此用作用于外傷性神經(jīng)病和/或運(yùn)動功能障礙的治療劑。因此，提供了用于外傷性神經(jīng)病和/或運(yùn)動功能障礙的治療劑，其中所述治療劑含有有效量的硫酸角質(zhì)素寡糖或其衍生物。
文檔編號C08B37/00GK101370507SQ20078000249
公開日2009年2月18日 申請日期2007年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月17日
發(fā)明者加藤忠彥, 淺利晃 申請人:株式會社糖質(zhì)科學(xué)研究所