其中

R¹/R²彼此獨(dú)立地是氫或鹵素；

L是鍵、-NH-、-C(O)NH-、-NHC(O)-或NHC(O)NH-；

R是氫、低級(jí)烷基、環(huán)烷基、芐基、苯基或者五元或六元雜芳基，其中苯基和所述雜芳基任選地被一個(gè)或兩個(gè)取代基取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、被鹵素取代的低級(jí)烷基、被鹵素取代的低級(jí)烷氧基、環(huán)烷基或二低級(jí)烷基氨基，或者如果L是鍵則R是鹵素，

或涉及其藥學(xué)上適用的酸加成鹽、涉及所有外消旋混合物、所有它們相應(yīng)的對(duì)映異構(gòu)體和/或光學(xué)異構(gòu)體。

現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)式I化合物對(duì)痕量胺相關(guān)受體(trace amine associated receptors，TAAR)，尤其是TAAR1具有良好的親和性。

所述化合物可以用于以下疾病的治療：抑郁癥(depression)、焦慮癥(anxiety disorders)、雙相型精神障礙(bipolar disorder)、注意缺陷多動(dòng)障礙(attention deficit hyperactivity disorder)(ADHD)、應(yīng)激相關(guān)障礙(stress-related disorders)、精神病性精神障礙(psychotic disorders)如精神分裂癥(schizophrenia)、神經(jīng)病(neurological diseases)如帕金森病(Parkinson’s disease)、神經(jīng)變性疾病(neurodegenerative disorders)如阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)、癲癇(epilepsy)、偏頭痛(migraine)、高血壓(hypertension)、精神藥物濫用(substance abuse)和代謝性疾病(metabolic disorders)如進(jìn)食障礙(eating disorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并發(fā)癥(diabetic complications)、肥胖癥(obesity)、異常脂肪血癥(dyslipidemia)、能量消耗和同化障礙(disorders of energy consumption and assimilation)、體溫穩(wěn)態(tài)紊亂和功能障礙(disorders and malfunction of body temperature homeostasis)、睡眠和晝夜節(jié)律障礙(disorders of sleep and circadian rhythm)、以及心血管疾病(cardiovascular disorders)。

對(duì)于可以結(jié)合至腎上腺素能受體的化合物報(bào)道的一些生理效應(yīng)(即心血管效應(yīng)、低血壓、鎮(zhèn)靜誘導(dǎo))(WO02/076950，WO97/12874或EP 0717 037)在旨在治療如上所述的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物的情況下可能被認(rèn)為是不適宜的副作用。因此，適宜的是獲得與腎上腺素能受體比較對(duì)于TAAR1受體具有選擇性的藥物。本發(fā)明的目標(biāo)物對(duì)TAAR1受體顯示超過(guò)腎上腺素能受體的選擇性，尤其是與人類和大鼠α1和α2腎上腺素能受體比較的良好選擇性。

經(jīng)典的生物胺(血清素，去甲腎上腺素，腎上腺素，多巴胺，組胺)在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中作為神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮重要的作用[1]。它們的合成和儲(chǔ)存，以及它們?cè)卺尫藕蟮慕到夂驮傥毡粐?yán)格調(diào)節(jié)。已知生物胺水平的不平衡在很多病理情況下是造成改變的腦功能的原因[2-5]。第二類的內(nèi)源胺化合物，即通常所說(shuō)的痕量胺(TA)與經(jīng)典的生物胺在結(jié)構(gòu)、新陳代謝和亞細(xì)胞定位方面顯著地重疊。TA包括對(duì)-酪胺、β-苯基乙胺、色胺和章魚胺，并且它們?cè)诓溉閯?dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中以通常比經(jīng)典的生物胺低的水平存在[6]。

它們的調(diào)節(jié)異常與多種精神病學(xué)疾病相關(guān)，如精神分裂癥和抑郁癥[7]，以及其他病情如注意缺陷多動(dòng)障礙、偏頭痛、帕金森病、精神藥物濫用和進(jìn)食障礙[8，9]。

長(zhǎng)期以來(lái)，TA特異性受體僅是基于人類和其他哺乳動(dòng)物的CNS中解剖學(xué)上離散的高親和性TA結(jié)合部位而猜測(cè)的[10，11]。因此，TA的藥理學(xué)作用被認(rèn)為是經(jīng)由眾所周知的經(jīng)典生物胺的機(jī)制通過(guò)如下而介導(dǎo)的：或者通過(guò)引起它們的釋放、抑制它們的再吸收或通過(guò)與它們的受體體系“交叉反應(yīng)”介導(dǎo)[9，12，13]。隨著近來(lái)GPCR新家族的數(shù)個(gè)成員，即痕量胺相關(guān)受體(TAAR)的識(shí)別，該觀點(diǎn)明顯地改變[7，14]。在人類中存在9種TAAR基因(包括3種假基因)并且在小鼠中存在16種基因(包括1種假基因)。TAAR基因不含有內(nèi)含子(有一個(gè)例外，TAAR2含有1個(gè)內(nèi)含子)并且在相同的染色體節(jié)段上位于彼此相臨的位置。受體基因的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，與深入的GPCR藥效團(tuán)相似性比較一致，和藥理學(xué)數(shù)據(jù)暗示這些受體形成三個(gè)不同的亞族[7，14]。TAAR1在人類與嚙齒類之間高度保守的四種基因(TAAR1-4)的第一亞類中。TA經(jīng)由Gα活化TAAR1。已顯示TA的調(diào)節(jié)異常有助于多種疾病的病因?qū)W，所述多種疾病如抑郁癥、精神病、注意缺陷多動(dòng)障礙、精神藥物濫用、帕金森病、偏頭痛、進(jìn)食障礙、代謝性疾病，并且因此TAAR1配體對(duì)于這些疾病的治療具有很高的潛在可能。

因此，對(duì)于增加關(guān)于痕量胺相關(guān)受體的知識(shí)存在廣泛的興趣。

使用的參考文獻(xiàn)：

1 Deutch，A.Y.和Roth，R.H.(1999)Neurotransmitters.于Fundamental Neuroscience(第2版)(Zigmond，M.J.，Bloom，F(xiàn).E，Landis，S.C.，Roberts，J.L和Squire，L.R.編輯)中，第193-234頁(yè)，Academic Press；

2 Wong，M.L.和Licinio，J.(2001)Research and treatment approaches to depression.Nat.Rev.Neurosci.2，343-351；

3 Carlsson，A.等(2001)Interactions between monoamines，glutamate，and GABA in schizophrenia：new evidence.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41，237-260；

4 Tuite，P.和Riss，J.(2003)Recent developments in the pharmacological treatment of Parkinson′s disease.Expert Opin.Investig.Drugs 12，1335-1352；

5 Castellanos，F(xiàn).X.和Tannock，R.(2002)Neuroscience of attention-deficit/hyperactivity disorder：the search for endophenotypes.Nat.Rev.Neurosci.3，617-628；

6 Usdin，Earl；Sandler，Merton；編輯，Psychopharmacology Series，第1卷：Trace Amines and the Brain.[Proceedings of a Study Group at the 14th Annual Meeting of the American College of Neuropsychoparmacology，San Juan，Puerto Rico](1976)；

7 Lindemann，L.和Hoener，M.(2005)A renaissance in trace amines inspired by a novel GPCR family.Trends in Pharmacol.Sci.26，274-281；

8 Branchek，T.A.和Blackburn，T.P.(2003)Trace amine receptors as targets for novel therapeutics：legend，myth and fact.Curr.Opin.Pharmacol.3，90-97；

9 Premont，R.T.等(2001)Following the trace of elusive amines.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98，9474-9475；

10 Mousseau，D.D.和Butterworth，R.F.(1995)A high-affinity[3H]tryptamine binding site in human brain.Prog.Brain Res.106，285-291：

11 McCormack，J.K.等(1986)Autoradiographic localization of tryptamine binding sites in the rat and dog central nervous system.J.Neurosci.6，94-101；

12 Dyck，L.E.(1989)Release of some endogenous trace amines from rat striatal slices in the presence and absence of a monoamine oxidase inhibitor.Life Sci.44，1149-1156；

13 Parker，E.M.和Cubeddu，L.X.(1988)Comparative effects of amphetamine，phenylethylamine and related drugs on dopamine efflux，dopamine uptake and mazindol binding.J.Pharmacol.Exp.Ther.245，199-210；

14 Lindemann，L.等(2005)Trace amine associated receptors form structurally and functionally distinct subfamilies of novel G protein-coupled receptors.Genomics 85，372-385。

本發(fā)明的目標(biāo)是式I的新化合物和它們的藥用鹽，它們用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療與痕量胺相關(guān)受體的生物學(xué)功能相關(guān)的病癥，它們的制備，以及基于根據(jù)本發(fā)明的化合物的用于病癥的控制或預(yù)防中的藥物，所述病癥如抑郁癥、焦慮癥、雙相型精神障礙、注意缺陷多動(dòng)障礙、應(yīng)激相關(guān)障礙、精神病性精神障礙如精神分裂癥、神經(jīng)病如帕金森病、神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、精神藥物濫用和代謝性疾病如進(jìn)食障礙、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩(wěn)態(tài)紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節(jié)律障礙、以及心血管疾病。

使用本發(fā)明的化合物的優(yōu)選適應(yīng)證是抑郁癥、精神病、帕金森病、焦慮癥、注意缺陷多動(dòng)障礙(ADHD)以及糖尿病。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”表示含有1-7個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈基團(tuán)，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、2-丁基、叔丁基等。優(yōu)選的烷基基團(tuán)是具有1-4個(gè)碳原子的基團(tuán)。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷氧基”表示其中烷基殘基如上面所定義并且其經(jīng)由氧原子連接的基團(tuán)。

術(shù)語(yǔ)“鹵素”表示氯、碘、氟和溴。優(yōu)選的鹵素基團(tuán)是氟或氯。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“鹵素取代的低級(jí)烷基”表示如對(duì)于術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”所限定的包含1至7個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈基團(tuán)，其中至少一個(gè)氫原子被鹵素原子代替。優(yōu)選的鹵素原子是氟。此種基團(tuán)的實(shí)例有CF₃、CHF₂、CH₂F、CH₂CF₃或CH₂CHF₂。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)″被鹵素取代的低級(jí)烷氧基”表示如上文限定的烷氧基，并且其中至少一個(gè)氫原子被鹵素替代。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”表示包含3至6個(gè)碳原子的飽和的碳環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。

術(shù)語(yǔ)“五元或六元雜芳基”表示環(huán)芳族5元或6元環(huán)，其中至少一個(gè)碳原子被氮原子替代，例如基團(tuán)吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基、二唑基或噻二唑基。

術(shù)語(yǔ)“藥用酸加成鹽”包括與無(wú)機(jī)和有機(jī)酸的鹽，所述無(wú)機(jī)和有機(jī)酸如鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、甲酸、富馬酸、馬來(lái)酸、乙酸、2，2，2-三氟乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸等。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是式I的化合物，其中L是鍵且R是氫、低級(jí)烷基、環(huán)烷基或鹵素，例如以下化合物

(1lbR)-9-溴-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

(11bR)-9-乙基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

(11bR)-9-甲基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

(11bR)-9-環(huán)丙基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

(11bR)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉。

本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案是式I的化合物，其中L是-NH-，例如以下化合物

(11bR)-N-[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bS)-N-[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bS)-N-[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(R)-N-(5-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-(5-環(huán)丙基嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-10-氟-N-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[6-甲氧基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

N4-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-N6，N6-二甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4，6-二胺

(11bR)-N-[6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-嘧啶-2-基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-(2，6-二甲基嘧啶-4-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a] 異喹啉-9-胺

(11bR)-N-(5-乙基嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(R)-N-(6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bS)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-(5-環(huán)丙基嘧啶-2-基)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

(11bR)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

N-[(11R)-2，3，4，6，7，11-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-3-環(huán)丙基-1，2，4-二唑-5-胺

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-甲基-1，2，4-噻二唑-5-胺或

(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺。

本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案是式I的化合物，其中L是-C(O)NH-，例如以下化合物

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-4-氯-苯甲酰胺

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-4-氯-苯甲酰胺

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺

N-[(11bR)-10-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

N-[(11bR)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-異丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺或

(R)-3-乙基-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺。

本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案是式I的化合物，其中L是-NHC(O)-，例如以下化合物

(11bR)-N-(6-氯-3-吡啶基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

(11bR)-N-[[3-(三氟甲基)苯基]甲基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

(11bR)-N-(4-氯苯基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

(11bR)-N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺或

(11bR)-N-(2-氯嘧啶-5-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺。

本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案是式I的化合物，其中L是-NHC(O)NH-，例如以下化合物

(R)-1-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲或

(R)-1-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-(4-甲氧基苯基)脲。

本發(fā)明的式I化合物的制備可以按順序或以會(huì)聚合成路線進(jìn)行。本發(fā)明的化合物的合成在下面的方案1-5和對(duì)47個(gè)具體實(shí)施例的描述中示出。用于進(jìn)行反應(yīng)和所得產(chǎn)物純化所需的技能是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。除非相反地指出，在以下方法描述中使用的取代基和符號(hào)具有之前在本文中給出的意義。

更詳細(xì)地，式I化合物可以通過(guò)下面給出的方法，通過(guò)實(shí)施例中給出的方法或通過(guò)類似的方法制備。用于單獨(dú)反應(yīng)步驟的適當(dāng)反應(yīng)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。反應(yīng)順序不限于方案1-5中給出的順序，而是根據(jù)原材料和它們相應(yīng)的反應(yīng)性，可以自由地改變反應(yīng)步驟的順序。原材料是可商購(gòu)的或可以通過(guò)與下面給出的方法相似的方法制備，通過(guò)說(shuō)明書中引用的參考文獻(xiàn)中或?qū)嵤├忻枋龅姆椒ㄖ苽洌蛲ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法制備。

本發(fā)明的式I化合物及其藥用鹽可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法制備，例如，通過(guò)下述方法，所述方法包括

a)將N-保護(hù)基(PG)從式II的化合物斷開(kāi)

得到式I的化合物

其中PG是選自-C(O)O-叔丁基的N-保護(hù)基，并且其他定義如上所述，并且，

如果需要，將獲得的化合物轉(zhuǎn)化為藥用酸加成鹽。

通用程序

方案1

其中取代基R¹和R²是如上所述的。

步聚A：在其中2-芳基乙胺2不可商購(gòu)獲得的情況下，其可以通過(guò)在溶劑如THF、1，4-二烷、乙醚或TBME中用還原劑如LiAlH₄或BH₃·THF處理相應(yīng)的腈1制備。

優(yōu)選的條件是BH₃·THF在THF中在0℃至室溫，隨后在MeOH/THF的1∶2混合物中回流。

步聚B：2-芳基乙胺2的?；梢酝ㄟ^(guò)以下方式完成：在無(wú)機(jī)堿如NaHCO₃、KHCO₃、Na₂HPO₄或NaH₂PO₄的存在下，在鹵化溶劑如二氯甲烷或1，2-二氯乙烷或醚溶劑如二乙醚、二烷、THF或TBME中，用氯乙?；萚CAS 79-04-9]處理。

優(yōu)選的條件是NaHCO₃在二氯甲烷中在0℃持續(xù)1h，隨后在室溫持續(xù)16小時(shí)。

步聚C：在親電試劑氯化物3與氨基乙醛二甲基縮醛[CAS 22483-09-6] 之間的親核取代可以在沒(méi)有堿存在下在非質(zhì)子有機(jī)溶劑如二乙醚、THF、甲苯、1，4-二烷或TBME中進(jìn)行，優(yōu)選在升高的溫度下。

優(yōu)選的條件是使用過(guò)量的氨基乙醛二甲基縮醛在甲苯中在回流下持續(xù)2小時(shí)。

步驟D：中間體胺4至吡嗪并異喹啉5的環(huán)化可以通過(guò)以下方式完成：使用濃H₂SO₄的酸介導(dǎo)的皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)反應(yīng)，任選地利用二氯甲烷作為共溶劑，根據(jù)由Kim和合作者此前報(bào)道的程序(Tetrahedron，1998，54，7395-7400)的改進(jìn)形式。

優(yōu)選的條件是使用H₂SO₄/CH₂Cl₂的1∶2混合物在5℃持續(xù)1小時(shí)，隨后到室溫持續(xù)4小時(shí)。

步聚E：三環(huán)化合物5中的仲胺的保護(hù)可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：在鹵化溶劑如二氯甲烷或1，2-二氯乙烷或醚溶劑如二乙醚、二烷、THF或TBME或質(zhì)子溶劑如MeOH或EtOH中，任選地在有機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，用碳酸二叔丁酯處理。

優(yōu)選的條件是二氯甲烷在三乙胺的存在下在室溫持續(xù)16小時(shí)。

如果需要，可以通過(guò)使用手性HPLC將手性N-Boc保護(hù)的吡嗪并異喹啉6的外消旋混合物分離成它的成分對(duì)映異構(gòu)體。

步聚F：酰胺6至所需三環(huán)衍生物7的還原可以通過(guò)以下方式完成：在溶劑如二氯甲烷、THF、1，4-二烷、乙醚或TBME中，用還原劑如DIBAL-H、LiAlH₄或BH₃·THF處理。

優(yōu)選的條件是BH₃·THF在THF中在室溫持續(xù)16小時(shí)。

方案2

其中取代基R¹和R²是氫，且8a和8b可以如方案1中對(duì)化合物5所描述的那樣進(jìn)一步反應(yīng)。

步聚A：可以使用手性HPLC分離5的對(duì)映異構(gòu)體(5a和5b)。優(yōu)選的條件是使用SFC(柱：Chiralpak AD-3，100×4.6mm I.D.，3μm)利用乙醇+0.05％DEA，在CO₂中，使用5％至40％梯度。

步聚B：5a和5b中的溴的移除可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：在常壓或升高的壓力下利用氫將C-Br鍵氫解，或使用甲酸銨或環(huán)己二烯作為氫源的轉(zhuǎn)移氫化，在鈀催化劑的存在下，在溶劑如MeOH、EtOH、H₂O、二烷、THF、HOAc、EtOAc、DMF或它們的混合物中。

優(yōu)選的條件是炭載鈀，在MeOH中在室溫和1atm H₂下持續(xù)4小時(shí)。

5a和5b的絕對(duì)構(gòu)型分配基于與相同文獻(xiàn)參考化合物(Cedillo-Cruz和合作者，Tetrahedron：Asymmetry，2014，25，133-140)的光譜數(shù)據(jù)和旋光度比較。

方案3

其中取代基R¹和R²如上所述，且R是芐基、苯基或者五元或六元雜芳基，其中苯基和所述雜芳基任選地被一個(gè)或兩個(gè)取代基取代，所述取代基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、被鹵素取代的低級(jí)烷基、被鹵素取代的低級(jí)烷氧基、環(huán)烷基或二低級(jí)烷基氨基；如上所述；X是鹵素。

步聚A：C-N鍵形成可以通過(guò)以下方式完成：在鈀或銅催化劑、配體和堿的存在下，在溶劑如1，4-二烷、DME、THF、甲苯、DMF和DMSO中，在升高的溫度下，例如使用鈀催化的Buchwald-Hartwig反應(yīng)，利用二苯甲酮亞胺[CAS 1013-88-3]處理7。

優(yōu)選的條件是催化用三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)，催化用外消旋-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘和叔丁醇鈉在甲苯中在100℃持續(xù)3小時(shí)。

步聚B：N-二苯基亞甲基的移除可以通過(guò)以下方式完成：在常壓或升高的壓力下利用氫的氫化，或使用甲酸銨或環(huán)己二烯作為氫源的轉(zhuǎn)移氫化，利用催化劑如PtO₂、Pd-C或阮內(nèi)鎳，在溶劑如MeOH、EtOH、H₂O、1，4-二烷、THF、EtOAc、二氯甲烷、氯仿、DMF或它們的混合物中。

所述轉(zhuǎn)化也可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：利用羥胺鹽酸鹽處理，連同堿如乙酸鈉、乙酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫，在溶劑如MeOH、EtOH、1，4-二烷、THF、DMF或它們的混合物中。

優(yōu)選的條件是羥胺鹽酸鹽連同乙酸鈉，在MeOH中在50℃持續(xù)16小時(shí)。

步聚C：酰胺形成可以通過(guò)以下方式完成：苯胺10和羧酸11a之間的偶聯(lián)反應(yīng)，利用偶聯(lián)劑如DCC、EDC、TBTU、HBTU或HATU，在有機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，在溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、DMF、DMSO或醚溶劑(包括二乙醚、1，4-二烷、THF、DME或TBME)中。

優(yōu)選的條件是HBTU與N-甲基嗎啉，在DMF中在室溫下持續(xù)16小時(shí)。

步聚D：脲形成可以通過(guò)以下方式完成：苯胺10和異氰酸酯11b之間的偶聯(lián)反應(yīng)，任選地在有機(jī)堿如三乙胺，N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，在鹵化溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯苯或質(zhì)子溶劑如DMF、NMP、DMA或醚溶劑如二乙醚、1，4-二烷、THF、DME或TBME中。

優(yōu)選的條件是不存在堿下在THF中在30-60℃下持續(xù)16-24小時(shí)。

步驟E：芳基鹵11c和苯胺10之間的偶聯(lián)反應(yīng)可以通過(guò)以下方式完成：使用鈀或銅催化劑、配體和堿，在溶劑如1，4-二烷、DMF、THF、甲苯、DMF和DMSO中，在升高的溫度，例如使用鈀催化的Buchwald-Hartwig 反應(yīng)。

優(yōu)選的條件是催化用三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)、催化用4，5-二(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos)、Cs₂CO₃在1，4-二烷中在95℃持續(xù)16小時(shí)。

備選地，在由于吸電子取代基的存在所致，芳基鹵11c被活化朝著經(jīng)歷芳族親核取代的情況下，偶聯(lián)反應(yīng)可以通過(guò)以下方式完成：加熱芳基鹵11c和苯胺10，在溶劑如DMF、DMSO、NMP、DMA中，在有機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下。

優(yōu)選的條件是N，N-二異丙基乙胺，在DMA中在100℃持續(xù)16小時(shí).

步聚F：N-Boc保護(hù)基的移除可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：利用無(wú)機(jī)酸如HCl、H2SO₄或H₃PO₄或者有機(jī)酸如CF₃COOH、CHCl₂COOH、HOAc或?qū)妆交撬幔谌軇┤鏑H₂Cl₂、CHCl₃、THF、MeOH、EtOH或H₂O中，在0-80℃。

優(yōu)選的條件是CF₃COOH在CH₂Cl₂中在室溫下持續(xù)2小時(shí)，或4.0M HCl在1，4-二烷中在60℃持續(xù)2小時(shí)，隨后使其冷卻至室溫持續(xù)16小時(shí)。

方案4

其中取代基R¹、R²和L如上所述，且R是低級(jí)烷基或環(huán)烷基。

步聚A：芳基溴7中的C-Br鍵的氫解可以通過(guò)以下方式完成：在常壓或升高的壓力下利用氫，或使用甲酸銨或環(huán)己二烯作為氫源的轉(zhuǎn)移氫化，在鈀催化劑的存在下，在溶劑如MeOH、EtOH、H₂O、二烷、THF、HOAc、EtOAc、DMF或它們的混合物中。

優(yōu)選的條件是炭載鈀在MeOH中在室溫和1atm H₂下持續(xù)4小時(shí)。

步聚B：芳基溴7與合適硼酸11d之間的Suzuki-Miyaura偶聯(lián)可以通過(guò)以下方式進(jìn)行：利用鈀催化劑、膦配體和堿如三乙胺、二異丙基乙胺、K₂CO₃、Na₂CO₃、Cs₂CO₃、K₂HPO₄、KO^tBu，在溶劑如DMF、乙腈、DMSO、THF、DME、甲苯、1，4-二烷、H₂O或它們的混合物中，在室溫至升高的溫度下。

優(yōu)選的條件是催化用Pd(OAc)₂，催化用三環(huán)己基膦，K₂HPO₄，在甲苯和H₂O的20∶1混合物中在100℃持續(xù)8小時(shí)。

步聚C：N-Boc保護(hù)基的移除可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：利用無(wú)機(jī)酸如HCl、H₂SO₄或H₃PO₄或者有機(jī)酸如CF₃COOH、CHCl₂COOH、HOAc或?qū)妆交撬幔谌軇┤鏑H₂Cl₂、CHCl₃、THF、MeOH、EtOH或H₂O中，在0-80℃。

優(yōu)選的條件是CF₃COOH在CH₂Cl₂中在室溫下持續(xù)2小時(shí)，或4.0M HCl在1，4-二烷中在60℃持續(xù)2小時(shí)，隨后使其冷卻至室溫持續(xù)16小時(shí)。

步聚D：甲基酯17可以通過(guò)以下方式獲得：芳基溴7和CO_(g)之間的鈀介導(dǎo)的羰基化反應(yīng)，在MeOH中，在有機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉和催化量的膦配體的存在下。

優(yōu)選的條件是催化用Pd(OAc)₂，催化用1，3-二(二苯基膦基)丙烷[CAS 6737-42-4]，三乙胺作為堿在MeOH/DMSO的1∶1混合物中在80℃持續(xù)16小時(shí)。

方案5

其中取代基R¹、R²和R如上所述。

步聚A：甲基酯17至羧酸18的水解最佳地在堿性條件下進(jìn)行，因?yàn)镹-Boc保護(hù)基的存在。典型的條件包括：利用無(wú)機(jī)堿如LiOH、NaOH、KOH、K₂CO₃處理，在有機(jī)溶劑如MeOH、EtOH、THF、CH₃CN、DMF、DMSO和水的混合物中，在室溫到升高的溫度下。

優(yōu)選的條件是LiOH在THF和水的1∶1混合物中在室溫下持續(xù)12小時(shí)。

步聚B：酰胺形成可以通過(guò)以下方式完成：羧酸18與胺11e之間的偶聯(lián)反應(yīng)，利用偶聯(lián)劑如DCC、EDC、TBTU、HBTU、HATU或T₃P，在有機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉或吡啶的存在下，在溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、DMF、DMSO、乙酸乙酯或醚溶劑(包括二乙醚、1，4-二烷、THF、DME或TBME)中。

優(yōu)選的條件是T₃P(正丙烷膦酸酐)與吡啶一起在乙酸乙酯中，在室溫下持續(xù)16小時(shí)。

步聚C：N-Boc保護(hù)基的移除可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)：利用無(wú)機(jī)酸如HCl、H₂SO₄或H₃PO₄或者有機(jī)酸如CF₃COOH、CHCl₂COOH、HOAc或?qū)妆交撬?，在溶劑如CH₂Cl₂、CHCl₃、THF、MeOH、EtOH或H₂O中，在0-80℃。

優(yōu)選的條件是CF₃COOH在CH₂Cl₂中在室溫下持續(xù)2小時(shí)，或4.0M HCl在1，4-二烷中在60℃持續(xù)2小時(shí)，隨后使其冷卻至室溫持續(xù)16小時(shí)。

化合物的分離和純化

如果需要，本文所描述的化合物和中間體的分離和純化可以通過(guò)任意合適的分離或純化程序完成，如例如，過(guò)濾，萃取，結(jié)晶，柱色譜，薄層色譜，厚層色譜，制備型低壓或高壓液相色譜或這些程序的組合。合適的分離和離析程序的具體說(shuō)明可以通過(guò)參考在下面在本文中的制備和實(shí)施例而得到。然而，當(dāng)然也可以使用其他等價(jià)的分離或離析程序。手性的式I化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分離。手性合成中間體的外消旋混合物也可以使用手性HPLC分離。

式I的化合物的鹽

式I化合物是堿性的并且可以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酸加成鹽。該轉(zhuǎn)化通過(guò)用至少化學(xué)計(jì)量的合適的酸處理完成，所述酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，以及有機(jī)酸如乙酸、2，2，2-三氟乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等。典型地，將游離堿溶解在惰性有機(jī)溶劑如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中，并且將酸加入相似的溶劑中。將溫度保持在0℃至50℃之間。所得到的鹽自發(fā)地沉淀或可以用極性較小的溶劑使其從溶液析出。

實(shí)施例1

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

a)N-(3-溴苯乙基)-2-氯乙酰胺

在0℃在30min期間，向2-(3-溴苯基)乙胺(10g，48.5mmol，CAS 58971-11-2)和NaHCO₃(4.28g，50.9mmol)在二氯甲烷(60mL)中的懸浮液中，逐滴加入氯乙?；?4.66mL，58.2mmol，CAS 79-04-9)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜，隨后在0℃通過(guò)緩慢添加水猝滅。將有機(jī)層分離，并相繼用10％HCl水溶液和鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮，得到作為粘性黃色油狀物的標(biāo)題化合物(9.38g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

b)N-(3-溴苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺

向N-(3-溴苯乙基)-2-氯乙酰胺(9.38g，33.9mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中，加入氨基乙醛二甲基縮醛(7.33mL，67.8mmol，CAS 22483-09-6)，并將混合物加熱至回流持續(xù)2小時(shí)。在冷卻至室溫后，將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物在EtOAc和水之間分配。分離各個(gè)相，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，得到作為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(11.1g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

c)(RS)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮

在0-5℃，向N-(3-溴苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺(2g，5.79mmol)在CH₂Cl₂(4mL)中的溶液中，逐滴加入硫酸(2.01mL，37.7mmol)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝爻掷m(xù)30min，隨后倒入冰水中。在冷卻的同時(shí)，通過(guò)添加NaOH水溶液(20重量％)將pH調(diào)節(jié)至12。將水相用CH₂Cl₂萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟色譜(硅膠，梯度5％至10％MeOH，在CH₂Cl₂中)純化，得到作為橙色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物(1.31g，80％收率)。MS(ISP)：283.4([{⁸¹Br}M+H]⁺)，281.4([{⁷⁹Br}M+H]⁺)。

d)(11bR)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮和(11bS)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮

使用SFC(柱：Chiralpak AD-H，250×20mm I.D.，洗脫劑：30％甲醇，具有0.5％Et₂NH，在70％CO₂中)，將(RS)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮的對(duì)映異構(gòu)體分離，得到：

(-)-(11bR)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮(163mg，淺橙色油狀物)，保留時(shí)間＝5.29min

(+)-(11bS)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮

(119mg，淺橙色油狀物)，保留時(shí)間＝8.64min

e)(11bR)-9-溴-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-溴-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮(1.27g，4.54mmol)和Et₃N(2.21mL，15.9mmol)在CH₂Cl₂(30mL)中的攪拌溶液中，加入Boc₂O(1.19g，5.45mmol)，并將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物在檸檬酸水溶液(10重量％)和CH₂Cl₂之間分配。分離各個(gè)層，并且將有機(jī)相用飽和的NaHCO₃水溶液洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色粉末的標(biāo)題化合物(1.41g，81％)。MS(ISP)：327.4([{⁸¹Br}M+H-C₄H₈]⁺)，325.4([{⁷⁹Br}M+H-C₄H₈]⁺)。

f)(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-溴-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(1.41g，3.7mmol)在THF(60mL)中的攪拌溶液中，加入在THF中的硼烷-四氫呋喃復(fù)合物1.0M(22.2mL，22.2mmol)，并且將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。隨后將反應(yīng)混合物倒入飽和的NaHCO₃水溶液中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至30％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色粉末的標(biāo)題化合物(1.1g，81％)。MS(ISP)：369.5([{⁸¹Br}M+H]⁺)，367.5([{⁷⁹Br}M+H]⁺)。

g)(11bR)-9-(二苯亞甲基氨基)-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在螺旋蓋小瓶中裝入(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(100mg，0.272mmol)、二苯甲酮亞胺(104mg，0.545mmol，CAS 1013-88-3)、(外消旋)-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘(17.0mg，0.027mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(7.48mg，8.17μmol)和叔丁醇鈉(41.9mg，0.436mmol)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入甲苯(1.5mL)，并將所得的混合物用氬氣流沖洗10min。將反應(yīng)混合物在油浴中加熱至90℃持續(xù)3小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土(dicalite)塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(112mg，88％)。MS(ISP)：468.8([M+H]⁺)。

h)(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-(二苯亞甲基氨基)-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(435mg，0.93mmol)在甲醇(6mL)中的攪拌溶液中，加入乙酸鈉(229mg，2.79mmol)和羥胺鹽酸鹽(142mg，2.05mmol)，并將反應(yīng)混合物在50℃攪拌過(guò)夜。隨后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在1.0M NaOH水溶液和EtOAc之間分配。分離各個(gè)層，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：20％至50％EtOAc+10％MeOH，在庚烷中)純化，得到作為橙色粉末的標(biāo)題化合物(252mg，89％)。MS(EI)：304.6([M+H]⁺)。

i)(11bR)-9-[[2-(三氟甲基)吡啶-4-羰基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20mg，0.066mmol)在DMF(1mL)中的攪拌溶液中，相繼地加入N-甲基嗎啉(27.1μl，0.198mmol)、HBTU(37.5mg，0.099mmol)和2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(16.4mg，0.086mmol，CAS 131747-41-6)。將所得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，隨后在EtOAc和飽和的NaHCO₃水溶液(10mL)之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(15mg，48％)。MS(ISP)：477.7([M+H]⁺)。

j)N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[2-(三氟甲基)吡啶-4-羰基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(15mg)在1，4-二烷(0.3mL)中的攪拌溶液中，加入4.0M HCl在二烷中的溶液(0.15mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌12小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(11.4mg，87％)。MS(ISP)：376.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例2

(11bR)-9-溴-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

向(-)-(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(88mg)在1，4-二烷(1mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在1，4-二烷中的4.0M溶液。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌12小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(31mg，42％)。MS(ISP)：270.5([{⁸¹Br}M+H]⁺)，268.5([{⁷⁹Br}M+H]⁺)。

實(shí)施例3

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-4-氯-苯甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用4-氯苯甲酸(CAS 74-11-3)代替2-(三氟甲基)異煙酸，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：344.6([{³⁷Cl}M+H]⁺)，342.6([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例4

N-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸(CAS 306960-74-7)代替2-(三氟甲基)異煙酸，獲得標(biāo)題化合物。灰白色固體。MS(ISP)：376.3([M+H]⁺)。

實(shí)施例5

(11bR)-N-[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bR)-9-[[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(25mg，0.082mmol)在DMA(0.5mL)和N，N-二異丙基乙胺(163μl，0.123mmol)中的攪拌溶液中，加入4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶(15mg，0.082mmol)，并將混合物在100℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入水中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至100％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(10mg，27％)。MS(ISP)：450.7([M+H]⁺)。

b)(11bR)-N-[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

向(11bR)-9-[[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(10mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在1，4-二烷中的4.0M溶液。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌12小時(shí)。將所有揮發(fā)物在真空下移除，并且將殘余物通過(guò)制備HPLC(流動(dòng)相A：H₂O，B：CH₃CN，具有0.05％Et₃N，C18柱)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(3.5mg，30％)。MS(ISP)：350.5([M+H]+)。

實(shí)施例6

(11bR)-N-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例5，在步驟(a)中使用2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(CAS 69034-12-4)代替4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：350.5([M+H]+)。

實(shí)施例7

(11bR)-N-[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bR)-9-[[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(25mg，0.082mmol)在1，4-二烷(1.0mL)中的攪拌溶液中，加入2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪(18mg，0.098mmol)、Pd₂(dba)₃(7.55mg，8.24μmol)、xantphos(9.54mg，16.5μmol，CAS 161265-03-8)和Cs₂CO₃(40.3mg，124μmol)。

將深褐色的懸浮液用氬氣流吹掃10min。將反應(yīng)混合物加熱至100℃并攪拌17h，隨后在硅藻土上過(guò)濾，并用EtOAc萃取兩次。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至80％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(10mg，27％)。MS(ISP)：450.5([M+H]+)。

b)(11bR)-N-[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(10mg)在1，4-二烷(1.0mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在1，4-二烷中的4.0M溶液。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌12小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，以得到作為橙色固體的標(biāo)題化合物(7mg，81％)。MS(ISP)：350.5([M+H]⁺)。

實(shí)施例8

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-4-氯-苯甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用(11bS)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯且使用4-氯苯甲酸(CAS 74-11-3)代替2-(三氟甲基)異煙酸，獲得標(biāo)題化合物。灰白色固體。MS(ISP)：342.5([M+H]⁺)。

實(shí)施例9

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用(11bS)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：377.1([M+H]+)。

實(shí)施例10

N-[(11bS)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用(11bS)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯且使用2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸(CAS 306960-74-7)代替2-(三氟甲基)異煙酸，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：378.1([M+H]+)。

實(shí)施例11

(11bS)-N-[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例5，在步驟(a)中使用(11bS)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯，獲得標(biāo)題化合物。灰白色固體。MS(ISP)：350.2([M+H]⁺).

實(shí)施例12

(11bS)-N-[5-(三氟甲基)吡嗪-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用(11bS)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯，獲得標(biāo)題化合物。橙色粉末。MS(ISP)：350.2([M+H]⁺).

實(shí)施例13

(R)-N-(5-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用2-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物。淺黃色固體。MS(ISP)：380.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例14

(11bR)-N-(5-環(huán)丙基嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用2-氯-5-環(huán)丙基嘧啶(CAS 166740-44-9)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物。橙色固體。MS(ISP)：MS(ISP)：322.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例15

(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

向(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(101mg，0.275mmol)在MeOH(4mL)中的攪拌溶液中，加入10重量％Pd/C(29.3mg，0.027mmol)，并將所得的黑色懸浮液通過(guò)抽真空隨后回填氫氣流(氣球)三次來(lái)吹掃。將混合物在室溫下在氫氣氛下攪拌16小時(shí)，并隨后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并在真空下濾液濃縮。將殘余物溶解在CH₂Cl₂(4.0mL)中，隨后加入TFA(2.0mL)。將所得的黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，隨后將所有揮發(fā)物在真空下移除，得到作為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物(31.9mg，38％)。

實(shí)施例16

N-[(11bR)-10-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

a)2-(3-溴-4-氟苯基)乙胺

向2-(3-溴-4-氟-苯基)乙腈(5.0g，22.9mmol，CAS 501420-63-9)在THF(50mL)中的攪拌溶液中，在0℃加入在THF中的硼烷-四氫呋喃復(fù)合物1.0M(45.8mL，45.8mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，隨后加熱至回流過(guò)夜。將反應(yīng)混合物隨后再冷卻到0℃，并加入MeOH(25mL)。將混合物加熱至回流持續(xù)90min。將溶劑在真空下移除，并將殘余物在EtOAc和1.0M HCl水溶液之間分配。用1.0M NaOH水溶液使水性相成為堿性，隨后用EtOAc萃取。將有機(jī)層用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮，得到作為粘性黃色油狀物的標(biāo)題化合物(2.79g，56％)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

b)N-(3-溴-4-氟苯乙基)-2-氯乙酰胺

在0℃在30min期間，向2-(3-溴-4-氟苯基)乙胺(2.79g，12.8mmol)和NaHCO₃(4.28g，50.9mmol)在二氯甲烷(15mL)中的懸浮液中，逐滴加入氯乙?；?1.23mL，15.4mmol)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜，隨后在0℃通過(guò)緩慢添加水猝滅。將有機(jī)層分離，并相繼用10％HCl水溶液和鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮，得到作為粘性黃色油狀物的標(biāo)題化合物(3.8g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

c)N-(3-溴-4-氟苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺

向N-(3-溴-4-氟苯乙基)-2-氯乙酰胺(3.8g，12.9mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中，加入氨基乙醛二甲基縮醛(2.79mL，25.8mmol，CAS 22483-09-6)，并將混合物加熱至回流持續(xù)2小時(shí)。在冷卻至室溫后，將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物在EtOAc和水之間分配。分離各個(gè)相，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，得到作為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(3.9g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

d)9-溴-10-氟-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮

在0-5℃，向N-(3-溴-4-氟苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺(3.9g，10.7mmol)在CH₂Cl₂(8mL)中的溶液中，逐滴加入硫酸(3.72mL，69.8mmol)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝爻掷m(xù)1小時(shí)，隨后倒入冰水中。在冷卻的同時(shí)，通過(guò)添加NaOH水溶液(20重量％)將pH調(diào)節(jié)至12。將水相用CH₂Cl₂萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟色譜(硅膠，梯度5％至10％MeOH，在CH₂Cl₂中)純化，得到作為橙色泡沫的標(biāo)題化合物(650mg，20％收率)。MS(ISP)：301.0([{⁸¹Br}M+H]⁺)，299.0([{⁷⁹Br}M+H]⁺)

e)9-溴-10-氟-4-氧代-3，4，6，7-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2(11bH)-甲酸叔丁酯

向9-溴-10-氟-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮(650mg，2.17mmol)和Et₃N(1.06mL，7.61mmol)在CH₂Cl₂(14mL)中的攪拌溶液中，加入Boc₂O(569mg，2.61mmol)，并將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物在檸檬酸水溶液(10重量％)和CH₂Cl₂之間分配。分離各個(gè)層，并且將有機(jī)相用飽和的NaHCO₃水溶液洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為粘性黃色油狀物的標(biāo)題化合物(840mg，94％)。

f)(11bR)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯和(11bS)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

使用手性HPLC(柱：Reprosil chiral-NR，250×50mm；洗脫劑：30％乙醇/庚烷；壓力：18巴；流量：35mL/分鐘)，將(RS)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，4，6，7-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2(11bH)-甲酸叔丁酯(840mg)的對(duì)映異構(gòu)體分離，得到：

(+)-(11bS)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(363mg，淺橙色固體)，保留時(shí)間＝33min

(-)-(11bR)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(329mg，淺橙色固體)，保留時(shí)間＝42min

g)(11bR)-9-溴-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(329mg，0.824mmol)在THF(13mL)中的攪拌溶液中，加入在THF中的硼烷-四氫呋喃復(fù)合物1.0M(4.94mL，4.94mmol)，并且將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。隨后將反應(yīng)混合物倒入飽和的NaHCO₃水溶液中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至30％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色粉末的標(biāo)題化合物(240mg，75％)。MS(ISP)：388.3([{⁸¹Br}M+H]⁺)，386.3([{⁷⁹Br}M+H]⁺)。

h)(11bR)-9-(二苯亞甲基氨基)-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在螺旋蓋小瓶中裝入(11bR)-9-溴-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(140mg，0.363mmol)、二苯甲酮亞胺(132mg，0.727mmol，CAS 1013-88-3)、(外消旋)-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘(22.6mg，0.036mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(10mg，0.010mmol)和叔丁醇鈉(56mg，0.581mmol)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入甲苯(2.5mL)，并將所得的混合物用氬氣流沖洗10min。將反應(yīng)混合物在油浴中加熱至90℃持續(xù)3小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至70％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為黃色蠟狀固體的標(biāo)題化合物(66mg，37％)。MS(ISP)：486.4([M+H]⁺)。

i)(11bR)-9-氨基-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-(二苯亞甲基氨基)-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(66mg，0.136mmol)在甲醇(2.0mL)中的攪拌溶液中，加入乙酸鈉(33.4mg，0.408mmol)、羥胺鹽酸鹽(21mg，0.300mmol)，并將反應(yīng)混合物在50℃攪拌過(guò)夜。隨后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在1.0M NaOH水溶液和EtOAc之間分配。分離各個(gè)層，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：20％至50％EtOAc+10％MeOH在庚烷中)純化，得到作為無(wú)色泡沫的標(biāo)題化合物(40 mg，91％)。MS(EI)：322.3([M+H]⁺)。

j)(11bR)-10-氟-9-[[2-(三氟甲基)吡啶-4-羰基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20mg，0.062mmol)在DMF(1mL)中的攪拌溶液中，相繼地加入N-甲基嗎啉(20.5μl，0.186mmol)、HBTU(35.4mg，0.093mmol)和2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(15.5mg，0.081mmol，CAS 131747-41-6)。將所得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，隨后在EtOAc和飽和的NaHCO₃水溶液(10mL)之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至70％EtOAc在庚烷中)純化，得到作為黃色油狀物的標(biāo)題化合物(18mg，58％)。MS(ISP)：495.3([M+H]⁺)。

k)N-「(11bR)-10-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺鹽酸鹽

向(11bR)-10-氟-9-[[2-(三氟甲基)吡啶-4-羰基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(18mg，0.036mmol)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入4.0M HCl在二烷中的溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌12小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(15mg，95％)。MS(ISP)：395.3([M+H]⁺)。

實(shí)施例17

(11bR)-10-氟-N-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bR)-10-氟-9-[[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-10-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20mg，0.062mmol)在DMA(0.5mL)和N，N-二異丙基乙胺(123μl，0.093mmol)中的攪拌溶液中，加入2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(11.4mg，0.062mmol)，并將混合物在100℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入水中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)制備HPLC(流動(dòng)相A：H₂O，B：CH₃CN，具有0.05％Et₃N，C18柱)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(10mg，34％)。MS(ISP)：468.3([M+H]⁺)。

b)(11bR)-10-氟-N-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺鹽酸鹽

向(11bR)-10-氟-9-[[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(10mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(3mg，37％)。MS(ISP)：368.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例18

(11bR)-N-[6-甲氧基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bR)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(95mg，0.313mmol)在DMA(1.0mL)和N，N-二異丙基乙胺(57μl，0.043mmol)中的攪拌溶液中，加入4，6-二氯-2-(三氟甲基)嘧啶(39.3mg，0.470 mmol)，并將混合物在80℃攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為黃色固體的標(biāo)題化合物(105mg，69％)。MS(ISP)：486.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，484.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

b)(11bR)-9-[[6-甲氧基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(30mg，0.062mmol)在甲醇(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入甲醇鈉在甲醇中的溶液(310ul，0.062mmol，25重量％)，并將反應(yīng)混合物在65℃攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾倒到水上，并用EtOAc萃取兩次。分離各個(gè)層，并將有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為無(wú)色粘性油狀物的標(biāo)題化合物(14.2mg，48％)。MS(ISP)：480.3([M+H]+)。

c)(11bR)-N-[6-甲氧基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[6-甲氧基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(14.2mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為灰白色固體的標(biāo)題化合物(10mg，82％)。MS(ISP)：378.3([M-H]^-)。

實(shí)施例19

N4-[(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-N6，N6-二甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4，6-二胺

a)(11bR)-9-[[6-(二甲基氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(30mg，0.062mmol)在DMA(0.25mL)中的攪拌溶液中，加入二甲胺(62μl，0.124mmol)，并將反應(yīng)混合物在100℃攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾倒到水上，并用EtOAc萃取兩次。分離各個(gè)層，并將有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至50％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為無(wú)色粘性油狀物的標(biāo)題化合物(17.4mg，57％)。MS(ISP)：493.4([M+H]⁺)。

b)N4-「(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-N6，N6-二甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4，6-二胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[6-(二甲基氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(17.4mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為橙色固體的標(biāo)題化合物(8mg，53％)。MS(ISP)：393.3([M+H]⁺)。

實(shí)施例20

(11bR)-N-[6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bR)-9-[[6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在螺旋蓋小瓶中裝入(11bR)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(30mg，0.062mmol)、Cs₂CO₃(80.8mg，0.248mmol)、三甲基環(huán)三硼氧烷(17.3μl，124μmol，CAS 823-96-1)和雙(三環(huán)己基膦)鈀(0)(4.14mg，6.2μmol，CAS 33309-88-5)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入1，4-二烷(2.0mL)，并將所得的混合物用氬氣流沖洗10min。將反應(yīng)混合物在油浴中加熱至80℃持續(xù)4小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至70％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(20.4mg，71％)。

b)(11bR)-N-[6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20.4mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入4.0M HCl在二烷中的溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(9mg，51％)。MS(ISP)：364.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例21

(11bR)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

向(11bR)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20mg，0.062mmol)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(5mg，30％)。MS(ISP)：386.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，384.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例22

(11bR)-N-嘧啶-2-基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用2-氯嘧啶(CAS 1722-12-9)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：282.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例23

(11bR)-N-(2，6-二甲基嘧啶-4-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用4-氯-2，6-二甲基嘧啶(CAS 32314-39-9)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：310.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例24

(11bR)-N-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用2-氯-4-(三氟甲基)嘧啶(CAS 33034-67-2)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：350.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例25

(11bR)-N-(5-乙基嘧啶-2-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用2-氯-5-乙基嘧啶(CAS 111196-81-7)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物。淺褐色固體。MS(ISP)：310.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例26

(R)-N-(6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-胺

在室溫下，向2-氯-6-甲基嘧啶-4-胺(718mg，5.00mmol，CAS 14394-60-6)在THF(10mL)中的攪拌溶液中，加入NaH(240mg，60％在礦物油狀物中，6.0mmol)。在30分鐘后，加入2，2，2-三氟乙醇(500mg，5.00mmol，CAS 75-89-8)，并將混合物加熱至75℃持續(xù)16小時(shí)，隨后將其在水和EtOAc之間分配。分離各個(gè)層，并將有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

b)(11bR)-9-[[6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在螺旋蓋小瓶中裝入(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(60mg，0.163mmol)、6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-胺(40.6mg，0.196mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(15mg，0.016mmol)、2-二-叔丁基膦基-2′，4′，6′-三異丙基聯(lián)苯(14mg，0.037mmol，CAS 564483-19-8)和叔丁醇鈉(17.3mg，0.180mmol)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入1，4-二烷(1.0mL)，并將所得的混合物用氬氣流沖洗10min。將反應(yīng)混合物在油浴中加熱至100℃持續(xù)16小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至80％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為橙色粘性油狀物的標(biāo)題化合物(20mg，25％)。MS(ISP)：492，4([M-H]^-)。

c)(R)-N-(6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

向(11bR)-9-[[6-甲基-2-(2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(20mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在1，4-二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所有揮發(fā)物在真空下移除，并且將殘余物通過(guò)制備HPLC(流動(dòng)相A：H₂O，B：CH₃CN帶有0.05％Et₃N，C18柱)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(6mg，37％)。MS(ISP)：392.3，([M-H]^-)。

實(shí)施例27

(11bR)-9-乙基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

a)(11bR)-9-乙基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在5mL微波反應(yīng)器中裝入(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(30mg，0.0817mmol)、乙基硼酸(7.83mg，0.106mmol，CAS 4433-63-0)、磷酸二鉀(35.6mg，0.204mmol)和Pd(OAc)₂(0，91mg，4.1μmol)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入甲苯(1.0mL)和水(1.0mL)，并且將所得的褐色懸浮液用氮?dú)鉀_洗10min。將反應(yīng)混合物加熱至100℃持續(xù)16小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)制備HPLC(流動(dòng)相A：H₂O，B：CH₃CN帶有0.05％Et₃N，C18柱)純化，得到作為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(10mg，26％)。

b)(11bR)-9-乙基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉鹽酸鹽

向(11bR)-9-乙基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(10mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(3.7mg，46％)。MS(ISP)：217.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例28

(11bR)-9-甲基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

類似于實(shí)施例27，在步驟(a)中使用甲基硼酸(CAS 13061-96-6)代替乙基硼酸，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：203.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例29

(11bR)-9-環(huán)丙基-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

類似于實(shí)施例27，在步驟(a)中使用環(huán)丙基硼酸(CAS 411235-57-9)代替乙基硼酸，獲得標(biāo)題化合物?；野咨腆w。MS(ISP)：229.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例30

(11bR)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉

a)2-(3-溴-2-氟苯基)乙胺

在0℃，向2-(3-溴-2-氟-苯基)乙腈(10g，44.4mmol，CAS 874285-03-7)在THF(100mL)中的攪拌溶液中，加入在THF中的硼烷-四氫呋喃復(fù)合物1.0M(88.8mL，88.8mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，隨后加熱至回流過(guò)夜。隨后將反應(yīng)混合物再冷卻到0℃，并加入MeOH(50mL)。將混合物加熱至回流持續(xù)90min。將溶劑在真空下移除，并且將殘余物在EtOAc和1.0M HCl水溶液之間分配。用1.0M NaOH水溶液使水性相成為堿性，隨后用EtOAc萃取。將有機(jī)層用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮，得到作為粘性無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(9.1g，94％)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

b)N-(3-溴-2-氟苯乙基)-2-氯乙酰胺

在0℃在30min期間，向2-(3-溴-2-氟苯基)乙胺(9.1g，41.7mmol)和NaHCO₃(3.68g，43.8mmol)在二氯甲烷(35mL)中的懸浮液中，逐滴加入氯乙酰基氯(4.01mL，50.1mmol)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜，隨后通過(guò)在0℃緩慢添加水猝滅。將有機(jī)層分離，并相繼用10％HCl水溶液和鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮，得到作為結(jié)晶淺黃色固體的標(biāo)題化合物(7.5g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

c)N-(3-溴-2-氟苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺

向N-(3-溴-2-氟苯乙基)-2-氯乙酰胺(7.53g，25.6mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中，加入氨基乙醛二甲基縮醛(5.64mL，51.1mmol，CAS 22483-09-6)，并將混合物加熱至回流持續(xù)2小時(shí)。在冷卻至室溫后，將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物在EtOAc和水之間分配。分離各個(gè)相，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮，得到作為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(9.0g)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟。

d)9-溴-8-氟-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮

在0-5℃，向N-(3-溴-2-氟苯乙基)-2-(2，2-二甲氧基乙基氨基)乙酰胺(8.0g，22mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中，逐滴加入硫酸(7.63mL，143mmol)。允許反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝爻掷m(xù)1小時(shí)，隨后倒入冰水中。在冷卻的同時(shí)，通過(guò)添加NaOH水溶液(20重量％)將pH調(diào)節(jié)至12。將水相用CH₂Cl₂萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)，過(guò)濾并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟色譜(硅膠，梯度5％至10％MeOH，在CH₂Cl₂中)純化，得到作為淺褐色固體的標(biāo)題化合物(2.68g，41％收率)。MS(ISP)：301.0([{⁸¹Br}M+H]⁺)，299.0([{⁷⁹Br}M+H]⁺)

e)9-溴-8-氟-4-氧代-3，4，6，7-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2(11bH)-甲酸叔丁酯

向9-溴-8-氟-1，2，3，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮(2.8g，9.36mmol)和Et₃N(4.57mL，32.8mmol)在CH₂Cl₂(60mL)中的攪拌溶液中，加入Boc₂O(2.45g，11.2mmol)，并將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物在檸檬酸水溶液(10重量％)和CH₂Cl₂之間分配。分離各個(gè)層，并且將有機(jī)相用飽和的NaHCO₃水溶液洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為粘性黃色油狀物的標(biāo)題化合物(3.51g，94％)。

f)(11bR)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯和(11bS)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

使用SFC(柱：Chiralpak AD-H，250×20mm；洗脫劑：40％甲醇+0.1％Et₂NH，在60％CO₂中)，將(RS)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，4，6，7-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2(11bH)-甲酸叔丁酯(3.64g)的對(duì)映異構(gòu)體分離，得到：

(+)-(11bS)-9-溴-10-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(1.14g，淺橙色固體)，保留時(shí)間＝5.20min

(-)-(11bR)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(0.790g，淺橙色固體)，保留時(shí)間＝6.15min

g)(11bR)-9-溴-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(790mg，1.98mmol)在THF(31mL)中的攪拌溶液中，加入在THF中的硼烷-四氫呋喃復(fù)合物1.0M(11.9mL，11.9mmol)，并且將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。隨后將反應(yīng)混合物倒入飽和的NaHCO₃水溶液中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)萃取物用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至30％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為淺黃色泡沫的標(biāo)題化合物(240mg，75％)。MS(ISP)：388.1([{⁸¹Br}M+H]⁺)，386.1([{⁷⁹Br}M+H]⁺)。

h)(11bR)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉2，2，2-三氟乙酸

向(11bR)-9-溴-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(50mg，0.130mmol)在甲醇(3mL)中的攪拌溶液中，加入10重量％Pd/C(13.8mg，0.0013mmol)。將所得的黑色懸浮液通過(guò)交替抽真空并回填氫氣流(氣球)三次來(lái)除氣。將混合物在室溫下在氫氣氛下攪拌17小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并在真空下將濾液濃縮。將殘余物溶解在CH₂Cl₂(4.0mL)中，并加入TFA(2.0mL)。將所得的黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，隨后將所有揮發(fā)物在高真空下移除，得到作為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物(24mg，58％)。

實(shí)施例31

(11bS)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

a)(11bS)-9-(二苯亞甲基氨基)-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

在螺旋蓋小瓶中裝入(11bS)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(250mg，0.649mmol)、二苯甲酮亞胺(0.218ml，1.3mmol)、(外消旋)-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘(40.4mg，0.065mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(17.8mg，19.5μmol)和叔丁醇鈉(99.8mg，1.04mmol)。隨后通過(guò)交替地抽真空和用氬氣回填來(lái)將小瓶除氣。加入甲苯(1.5mL)，并將所得的混合物用氬氣流沖洗10min。將反應(yīng)混合物在油浴中加熱至90℃持續(xù)3小時(shí)，隨后通過(guò)硅藻土塞直接過(guò)濾。將濾餅用EtOAc漂洗，并將濾液用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為黃色油狀物的標(biāo)題化合物(186mg，59％)。MS(ISP)：486.3([M+H]⁺)。

b)(11bS)-9-氨基-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bS)-9-(二苯亞甲基氨基)-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(186mg，0.383mmol)在甲醇(5mL)中的攪拌溶液中，加入乙酸鈉(94.3mg，1.15mmol)、羥胺鹽酸鹽(58.6mg，0.843mmol)，并將反應(yīng)混合物在50℃攪拌過(guò)夜。隨后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在1.0M NaOH水溶液和EtOAc之間分配。分離各個(gè)層，并將有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：5％至25％EtOAc+10％MeOH，在庚烷中)純化，得到作為白色泡沫的標(biāo)題化合物(101mg，82％)。MS(EI)：322.2([M+H]⁺)。

c)(11bS)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bS)-9-氨基-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁基酯(30mg，0.093mmol)在DMA(1.0mL)和N，N-二異丙基乙胺(24.5μl，140μmol)中的攪拌溶液中，加入4，6-二氯-2-(三氟甲基)嘧啶(26.3mg，0.093mmol，CAS 705-24-8)，并將混合物在100℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入水中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至100％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(10mg，24％)。MS(ISP)：504.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，502.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

b)(11bS)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺鹽酸鹽

向(11bS)-9-[[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氨基]-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(10mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(10mg，57％)。MS(ISP)：404.1([{³⁷Cl}M+H]⁺)，402.1([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例32

N-[(11bR)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用(11bR)-9-氨基-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯，獲得標(biāo)題化合物。淺黃色固體。MS(ISP)：395.1([M+H]⁺)。

實(shí)施例33

(11bR)-N-(5-環(huán)丙基嘧啶-2-基)-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例7，在步驟(a)中使用(11bR)-9-氨基-8-氟-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯并且使用2-氯-5-環(huán)丙基嘧啶(CAS 166740-44-9)代替2-氯-5-(三氟甲基)吡嗪，獲得標(biāo)題化合物。白色固體。MS(ISP)：340.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例34

(11bR)-N-[6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]-8-氟-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

類似于實(shí)施例31，在步驟(a)中使用(11bR)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯代替(11bS)-9-溴-8-氟-4-氧代-3，6，7，11b-四氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯，獲得標(biāo)題化合物。白色固體。MS(ISP)：504.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，502.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例35

(R)-1-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲

a)(11bR)-9-[[4-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；被鵠-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向攪拌的(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(30mg，98.9μmol)在THF(2ml)中的溶液中，加入異氰酸4-(三氟甲基)苯酯酯(22.3mg，0.119mmol，CAS 1548-13-6)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，隨后將所有揮發(fā)物蒸發(fā)。將粗制殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至50％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(27.2mg，56％)。MS(ISP)：491.2([M+H]⁺)。

b)(R)-1-(2，3，4，6，7，11b-六氧-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲鹽酸鹽

向(11bR)-9-[[4-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基氨基]-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(27.2mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在1，4-二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(13.7mg，40％)。MS(ISP)：391.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例36

(R)-1-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-(4-甲氧基苯基)脲

類似于實(shí)施例35，在步驟(a)中使用異氰酸4-(甲氧基)苯酯(CAS 5416-93-3)代替異氰酸4-(三氟甲基)苯酯，獲得標(biāo)題化合物。灰白色固體。MS(ISP)：353.2([M+H]⁺).

實(shí)施例37

N-[(11R)-2，3，4，6，7，11-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基]-3-環(huán)丙基-1，2，4-二唑-5-胺

類似于實(shí)施例5，在步驟(a)中使用5-氯-3-環(huán)丙基-1，2，4-二唑代替4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶，獲得標(biāo)題化合物。橙色固體。MS(ISP)：312.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例38

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸(CAS 945717-59-9)代替2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標(biāo)題化合物。黃色固體。MS(ISP)：392.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例39

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-異丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用5-異丙基-2-甲基-吡唑-3-甲酸(CAS 78208-73-8)代替2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標(biāo)題化合物。褐色油狀物。MS(ISP)：354.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例40

(R)-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-3-甲基-1，2，4-噻二唑-5-胺

類似于實(shí)施例5，在步驟(a)中使用5-溴-3-甲基-1，2，4-噻二唑(CAS 54681-68-4)代替4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶，獲得標(biāo)題化合物。橙色固體。MS(ISP)：302.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例41

(R)-3-乙基-N-(2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺

類似于實(shí)施例1，在步驟(i)中使用3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS 1094347-64-4)代替2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標(biāo)題化合物。白色固體。MS(ISP)：340.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例42

(11bR)-N-(6-氯-3-吡啶基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

a)(11bR)-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2，9-二甲酸O-叔丁基O-甲酯

向(11bR)-9-溴-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(218mg，0.594mmol，Eq：1.00)和三乙胺(601mg，827μl，5.94mmol，Eq：10)在DMSO與甲醇的1∶1混合物(4mL)中的攪拌溶液中，加入1，3-二(二苯基膦基)丙烷(49.0mg，119μmol，CAS 6737-42-4)和Pd(OAc)₂(26.7mg，119μmol)。將所得的黑色懸浮液通過(guò)抽真空隨后回填CO_(g)流(氣球)三次來(lái)吹掃，并隨后在CO氣氛下加熱至80℃持續(xù)16小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水中并用EtOAc萃取兩次。將合并的有機(jī)層用飽和的鹽水洗滌，干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)急驟柱色譜(硅膠；梯度：0％至40％EtOAc，在庚烷中)純化，得到作為淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物(121mg，59％)。MS(ISP)：347.2([M+H]⁺)。

b)(11bR)-2-叔丁氧基羰基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酸

向(11bR)-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2，9-二甲酸O-叔丁基O-甲基酯(196mg，0.566mmol)在THF與水的1∶1混合物(3.0mL)中的攪拌溶液中，加入LiOH(20.7mg，0.885mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。通過(guò)逐滴加入1.0M HCl水溶液，將pH調(diào)節(jié)至3-4。將水相用CH₂Cl₂萃取兩次，并將有機(jī)層干燥(Na₂SO₄)并在真空中濃縮，得到作為黃色油狀物的標(biāo)題化合物(169mg，90％)，其在未經(jīng)進(jìn)一步純化下用于下一步驟中。MS(ISP)：331.2，([M-H]^-)。

c)(11bR)-9-[(6-氯-3-吡啶基)氨基甲?；鵠-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯

向(11bR)-2-叔丁氧基羰基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酸(30mg，0.090mmol)和6-氯吡啶-3-胺(11.6mg，0.090mmol)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入1-丙基膦酸環(huán)酸酐在EtOAc中的50重量％溶液(114mg，107μl，0.180mmol，CAS 68957-94-8)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)粗制物通過(guò)制備HPLC(流動(dòng)相A：H₂O，B：CH₃CN，具有0.05％Et₃N，C18柱)直接純化，得到作為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(18mg，45％)。MS(ISP)：445.1([{³⁷Cl}M+H]⁺)，443.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

d)(11bR)-N-(6-氯-3-吡啶基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺鹽酸鹽

向(11bR)-9-[(6-氯-3-吡啶基)氨基甲?；鵠-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(18mg)在1，4-二烷(0.5mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(0.25mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌6小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(11.2mg，73％)。MS(ISP)：345.1([{³⁷Cl}M+H]⁺)，343.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例43

(11bR)-N-[[3-(三氟甲基)苯基]甲基]-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

類似于實(shí)施例42，在步驟(c)中使用3-(三氟甲基)芐基胺(CAS 2740-83-2)代替6-氯吡啶-3-胺，獲得標(biāo)題化合物。淺黃色固體。MS(ISP)：390.2([M+H]⁺)。

實(shí)施例44

(11bR)-N-(4-氯苯基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

類似于實(shí)施例42，在步驟(c)中使用4-氯苯胺(CAS 106-47-8)代替6-氯吡啶-3-胺，獲得標(biāo)題化合物。白色固體。MS(ISP)：344.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，342.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例45

(11bR)-N-(6-甲氧基-3-吡啶基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

類似于實(shí)施例42，在步驟(c)中使用6-甲氧基吡啶-3-胺(CAS 6628-77-9)代替6-氯吡啶-3-胺，獲得標(biāo)題化合物。粉色固體。MS(ISP)：337.3([M-H]-)。

實(shí)施例46

(11bR)-N-(2-氯嘧啶-5-基)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-甲酰胺

類似于實(shí)施例42，在步驟(c)中使用2-氯嘧啶-5-胺(CAS 56621-90-0) 代替6-氯吡啶-3-胺，獲得標(biāo)題化合物。淺黃色固體.344.2([{³⁷Cl}M+H]⁺)，346.2([{³⁵Cl}M+H]⁺)。

實(shí)施例47

(11bR)-2，3，4，6，7，11b-六氫-1H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-9-胺

向(11bR)-9-氨基-1，3，4，6，7，11b-六氫吡嗪并[2，1-a]異喹啉-2-甲酸叔丁酯(172mg，0.567mmol)在1，4-二烷(3.0mL)中的攪拌溶液中，加入HCl在二烷中的4.0M溶液(1.5mL)。將反應(yīng)混合物在60℃攪拌2小時(shí)，隨后冷卻至室溫并再攪拌16小時(shí)。將所得的懸浮液通過(guò)燒結(jié)漏斗過(guò)濾。將收集的二鹽酸鹽用另外的無(wú)水二乙醚洗滌，隨后在高真空下干燥，得到作為白色固體的標(biāo)題化合物(119mg，76％)。MS(ISP)：204.1([M+H]⁺)。

材料和方法

TAAR表達(dá)質(zhì)粒和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系的構(gòu)建

為了構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，基本上如Lindemann等[14]所述，從基因組DNA擴(kuò)增人類、大鼠和小鼠TAAR 1的編碼序列。以1.5mM Mg²⁺使用延伸高保真PCR體系(Expand High Fidelity PCR System)(Roche Diagnostics)，并按照制造商的使用說(shuō)明將純化的PCR產(chǎn)物克隆至pCR2.1-TOPO克隆載體(Invitrogen)中。將PCR產(chǎn)物亞克隆至pIRESneo2載體(BD Clontech，Palo Alto，California)中，并且在引入細(xì)胞系中之前對(duì)表達(dá)載體進(jìn)行序列證實(shí)。

基本上如Lindemann等(2005)所述，培養(yǎng)HEK293細(xì)胞(ATCC#CRL-1573)。為了產(chǎn)生穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，用含有TAAR編碼序列的pIRESneo2表達(dá)質(zhì)粒(上面描述)與Lipofectamine 2000(Invitrogen)根據(jù)制造商的使用說(shuō)明轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，并且轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，用1mg/ml G418(Sigma，Buchs，瑞士)補(bǔ)充培養(yǎng)基。在約10d的培養(yǎng)周期之后，將克隆分離、擴(kuò)增并用cAMP Biotrak酶免疫測(cè)定(EIA)系統(tǒng)(Amersham)，按照由制造商提供的非乙酰化EIA程序?qū)ζ錅y(cè)定對(duì)痕量胺(所有化合物購(gòu)自Sigma) 的反應(yīng)性。將對(duì)于15個(gè)傳代的培養(yǎng)周期顯示出穩(wěn)定的EC₅₀的單克隆細(xì)胞系用于所有隨后的研究。

針對(duì)大鼠TAAR1的放射性配體結(jié)合測(cè)定

膜制備和放射性配體結(jié)合

將穩(wěn)定表達(dá)大鼠TAAR1的HEK-293細(xì)胞在含有胎牛血清(10％，在56℃熱滅活30min)，青霉素/鏈霉素(1％)，和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基中在37℃和5％CO₂保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中釋放，收獲，用冰-冷的PBS(不含Ca²⁺和Mg²⁺)洗滌兩次，以1’000rpm在4℃沉淀5min，冰凍并保存在-80℃。將冰凍的沉淀懸浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中，并用Polytron(PT 6000，Kinematica)以14’000rpm勻質(zhì)化20s。勻漿以48’000x g在4℃離心30min。之后，去除并棄去上清液，并使用Polytron(以14’000rpm，20s)將沉淀重新懸浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中。重復(fù)此程序，并將最終的沉淀重新懸浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中，并使用Polytron勻質(zhì)化。典型地，將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對(duì)于每個(gè)新的膜批次，通過(guò)飽和曲線確定解離常數(shù)(K_d)。TAAR1放射性配體³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺(在WO 2008/098857中描述)以與計(jì)算的K_d值相等的濃度使用，其通常為大約2.3nM，產(chǎn)生約0.2％的該放射性配體的結(jié)合，和占總結(jié)合的約85％的特異性結(jié)合。非特異性結(jié)合定義為在10μM未標(biāo)記配體的存在下結(jié)合的³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進(jìn)行測(cè)試。將測(cè)試化合物(20μl/well)轉(zhuǎn)移至96深孔板(TreffLab)中，并加入180μl含有MgCl₂(10mM)和CaCl₂(2mM)的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)(結(jié)合緩沖液)，300μl以nM計(jì)濃度為3.3x K_d的放射性配體³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以50μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過(guò)經(jīng)由在聚乙烯亞胺(0.3％)中預(yù)浸1hr并用1ml冷的結(jié)合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin Elmer)迅速過(guò)濾終止溫育。在添加45μl Microscint 40(PerkinElmer)后，將Unifilter-96板密封，并在1hr后使用TopCount微板閃爍計(jì)數(shù)儀(Packard Instrument Company)計(jì)數(shù)放射活性。

針對(duì)小鼠TAAR1的放射性配體結(jié)合測(cè)定

膜制備和放射性配體結(jié)合

穩(wěn)定表達(dá)小鼠TAAR1的HEK-293細(xì)胞在含有胎牛血清(10％，在56℃熱滅活30min)，青霉素/鏈霉素(1％)，和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基中在37℃和5％CO₂保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中釋放，收獲，用冰-冷的PBS(不含Ca²⁺和Mg²⁺)洗滌兩次，以1’000rpm在4℃沉淀5min，冰凍并保存在-80℃。將冰凍的沉淀懸浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中，并用Polytron(PT 6000，Kinematica)以14’000rpm勻質(zhì)化20s。勻漿以48’000x g在4℃離心30min。之后，去除并棄去上清液，并使用Polytron(以14’000rpm，20s)將沉淀重新懸浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中。重復(fù)此程序，并將最終的沉淀重新懸浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中，并使用Polytron勻質(zhì)化。典型地，將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對(duì)于每個(gè)新的膜批次，通過(guò)飽和曲線確定解離常數(shù)(K_d)。TAAR1放射性配體³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺(在WO 2008/098857中描述)以與計(jì)算的K_d值相等的濃度使用，其通常為大約0.7nM，產(chǎn)生約0.5％的該放射性配體的結(jié)合，和占總結(jié)合的約70％的特異性結(jié)合。非特異性結(jié)合定義為在10μM未標(biāo)記配體的存在下結(jié)合的³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進(jìn)行測(cè)試。將測(cè)試化合物(20μl/孔)轉(zhuǎn)移至96深孔板(TreffLab)中，并加入180μl含有MgCl₂(10mM)和CaCl₂(2mM)的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)(結(jié)合緩沖液)，300μl以nM計(jì)濃度為3.3x K_d的放射性配體³[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以60μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過(guò)經(jīng)由在聚乙烯亞胺(0.3％)中預(yù)浸1hr并用1ml冷的結(jié)合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin Elmer)迅速過(guò)濾終止溫育。在添加45μl Microscint 40(PerkinElmer)后，將Unifilter-96板密封，并在1hr后使用TopCount微板閃爍計(jì)數(shù)儀(Packard Instrument Company)計(jì)數(shù)放射活性。

所述化合物在小鼠或大鼠中顯示如下表所示的對(duì)TAAR1(以μM計(jì))的K_i值。

可以將式I化合物和式I化合物的藥用鹽用作藥物，例如以藥物制劑的形式?？梢詫⑺幬镏苿┛诜o藥，例如以片劑、包衣片劑、糖錠劑、硬和軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑的形式。然而，給藥還可以直腸給藥，例如以栓劑形式，或者腸胃外給藥，例如以注射液形式。

可以用藥學(xué)上惰性的無(wú)機(jī)或有機(jī)載體加工式I化合物用于藥物制劑的制備。例如，可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等，作為用于片劑、包衣片劑、糖錠劑和硬明膠膠囊的那些載體。用于軟明膠膠囊的合適載體為，例如，植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。然而，取決于活性物質(zhì)的本性，在軟明膠膠囊的情況下通常不需要載體。用于制備溶液和糖漿的合適載體為，例如，水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓劑的合適載體為，例如，天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇等。

此外，藥物制劑可以含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或者抗氧化劑。它們還可以含有其它的治療上有價(jià)值的物質(zhì)。

含有式I化合物或其藥用鹽以及治療上惰性的載體的藥物也是本發(fā)明的目的，同樣的是用于它們的制備的方法，所述方法包括將一種或多種式I化合物和/或藥用酸加成鹽以及如果需要，一種或多種其他治療上有價(jià)值的物質(zhì)，與一種或多種治療上惰性的載體一起得到蓋倫制劑給藥形式。

根據(jù)本發(fā)明的最優(yōu)選的適應(yīng)證是包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病癥的那些，例如抑郁癥、精神病、帕金森病、焦慮癥、注意缺陷多動(dòng)障礙(ADHD)以及糖尿病的治療或預(yù)防。

劑量可以在寬限度內(nèi)變化并且當(dāng)然應(yīng)在每個(gè)特定的情況下調(diào)整以適應(yīng)個(gè)體的需求。在口服給藥的情況下，用于成人的劑量可以在以下范圍變化：每天約0.01mg至約1000mg的通式I化合物或相應(yīng)量的其藥用鹽。每日的劑量可以作為單次劑量給藥或以分開(kāi)的劑量給藥，并且此外，當(dāng)其被認(rèn)為需要時(shí)也可以超過(guò)上限。

片劑制劑(濕法制粒)

制備程序

1.將第1、2、3和4項(xiàng)混合，并用純化水制粒。

2.將顆粒在50℃干燥。

3.使顆粒通過(guò)合適的研磨設(shè)備。

4.加入第5項(xiàng)并混合三分鐘；在合適的壓機(jī)上壓制。

膠囊制劑

制備程序

1.將第1、2和3項(xiàng)在合適的混合器中混合30分鐘。

2.加入第4和5項(xiàng)并混合3分鐘。

3.填充至合適的膠囊中。