哺乳動(dòng)物細(xì)胞中最重要的細(xì)胞傳輸系統(tǒng)之一是環(huán)單磷酸鳥苷(cGMP)。其與從內(nèi)皮中釋放并傳遞激素和機(jī)械信號(hào)的一氧化氮(NO)一起形成NO/cGMP系統(tǒng)。鳥苷酸環(huán)化酶催化三磷酸鳥苷(GTP)而生物合成cGMP。迄今已知的這一家族的代表可以根據(jù)結(jié)構(gòu)特征或根據(jù)配體類型分成兩類：可被鈉尿肽刺激的顆粒狀鳥苷酸環(huán)化酶和可被NO刺激的可溶性鳥苷酸環(huán)化酶?？扇苄曾B苷酸環(huán)化酶由兩個(gè)亞單元組成且很有可能每個(gè)異二聚體含有一個(gè)血紅素，其是調(diào)節(jié)中心的一部分。這對(duì)于活化機(jī)理是非常重要的。NO能夠結(jié)合至血紅素的鐵原子并因此顯著增加酶的活性。相比之下，不含血紅素的制劑不能由NO激發(fā)。一氧化碳(CO)也能結(jié)合到血紅素的中心鐵原子，但由CO帶來(lái)的激發(fā)作用遠(yuǎn)小于NO。
通過形成cGMP以及由此產(chǎn)生磷酸二酯酶、離子通道和蛋白激酶的調(diào)節(jié)，鳥苷酸環(huán)化酶在多種生理學(xué)過程中起重要作用，特別是在平滑肌細(xì)胞的舒張和增殖、血小板聚集和血小板粘附、神經(jīng)元的信號(hào)傳送中以及在基于上述過程的中斷而引起的疾病中起重要作用。在病理生理學(xué)狀況下，NO/cGMP系統(tǒng)可被抑制，這可導(dǎo)致例如高血壓、血小板活化、增加的細(xì)胞增殖、內(nèi)皮功能紊亂、動(dòng)脈粥樣硬化、心絞痛、心力衰竭、心肌梗死、形成血栓、中風(fēng)和性功能障礙。
由于預(yù)期的高效率和低水平的副作用，因此通過以生物體內(nèi)cGMP信號(hào)通路的影響為靶標(biāo)的用于這些疾病的可能的NO非依賴性治療是一種有前景的方法。
迄今，為了治療性刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，僅使用其作用基于NO的化合物如有機(jī)硝酸鹽。NO由生物轉(zhuǎn)化形成并通過攻擊血紅素的中心鐵原子而活化可溶性鳥苷酸環(huán)化酶。除副作用之外，耐受性的發(fā)展也是該治療方法的關(guān)鍵缺點(diǎn)之一。
近年來(lái)，已經(jīng)描述了直接(即，無(wú)需NO的預(yù)先釋放)刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的一些物質(zhì)，例如3-(5'-羥基甲基-2'-呋喃基)-1-芐基吲唑[YC-1；Wu等人，Blood 84(1994)，4226；Mülsch等人，Brit.J.Pharmacol.120(1997)，681]、脂肪酸[Goldberg等人，J.Biol.Chem.252(1977)，1279]、六氟磷酸二苯基碘鎓[Pettibone等人，Eur.J.Pharmacol.116(1985)，307]、異甘草素[Yu等人，Brit.J.Pharmacol.114(1995)，1587]以及各種取代的吡唑衍生物(WO 98/16223)。
尤其在EP 0 266 890-A1、WO 89/03833-A1、JP 01258674-A[參見Chem.Abstr.112：178986]、WO 96/34866-A1、EP 1 277 754-A1、WO 2006/015737-A1、WO 2008/008539-A2、WO 2008/082490-A2、WO 2008/134553-A1、WO 2010/030538-A2、WO 2011/113606-A1和WO 2012/165399-A1中描述了可用于治療疾病的各種咪唑并[1,2-a]吡啶衍生物。
本發(fā)明的目的是提供用作可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的刺激物并適用于治療和/或預(yù)防疾病的新的物質(zhì)。
本發(fā)明提供通式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，
其中
R1代表(C3-C7)環(huán)烷基、吡啶基或苯基，
其中(C3-C7)環(huán)烷基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、三氟甲基和(C1-C4)烷基的取代基取代，
且
其中苯基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自鹵素、氰基、單氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)烷基、(C3-C5)環(huán)烷基、(C1-C4)烷氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基的取代基取代，
其中吡啶基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、單氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和(C1-C4)烷基的取代基取代，
R2代表氫、氯、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
其中環(huán)丙基和環(huán)丁基可最多被氟二取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫、氟或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R8代表氫、氟、甲基或乙基，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
其中(C1-C6)烷基可被三甲基甲硅烷基取代，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫或(C1-C3)烷基，
R12代表氫或(C1-C3)烷基，
R16代表氫、(C1-C6)烷基或5元雜芳基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
其中5元雜芳基被甲基、二氟甲基或三氟甲基取代，
R17代表氫或甲基，
R18代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R19代表氫或(C1-C4)烷基，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、(C1-C4)烷基、(C2-C4)炔基、(C3-C5)環(huán)烷基、二氟甲氧基、三氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R6代表氫。
本發(fā)明提供通式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，
其中
A代表CH2、CD2或CH(CH3)，
R1為(C3-C7)環(huán)烷基、吡啶基或苯基，
其中(C3-C7)環(huán)烷基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、三氟甲基和(C1-C4)烷基的取代基取代，
且
其中苯基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自鹵素、氰基、單氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)烷基、(C3-C5)環(huán)烷基、(C1-C4)烷氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基的取代基取代，
其中吡啶基可以被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、單氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和(C1-C4)烷基的取代基取代，
R2代表氫、(C1-C4)烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫、氟或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R8代表氫、氟、甲基或乙基，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫或(C1-C3)烷基，
R12代表氫或(C1-C3)烷基，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、(C1-C4)烷基、(C2-C4)炔基、(C3-C5)環(huán)烷基、二氟
甲氧基、三氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R6代表氫。
本發(fā)明的化合物是式(I)化合物以及它們的鹽、溶劑合物和所述鹽的溶劑合物，被式(I)所包括且具有在下文中提及的式的化合物及它們的鹽、溶劑合物和所述鹽的溶劑合物，以及被式(I)所包括且在下文中被提及作為工作實(shí)施例的化合物以及它們的鹽、溶劑合物和所述鹽的溶劑合物，只要被式(I)所包括且在下文中被提及的化合物不是已經(jīng)為鹽、溶劑合物和所述鹽的溶劑合物。
本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的鹽是本發(fā)明的化合物的生理學(xué)上可接受的鹽。還包括其本身不適于制藥應(yīng)用但可用于例如本發(fā)明化合物的分離或純化的鹽。
本發(fā)明化合物的生理學(xué)上可接受的鹽包括無(wú)機(jī)酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來(lái)酸和苯甲酸的鹽。
本發(fā)明化合物的生理學(xué)上可接受的鹽還包括常規(guī)堿的鹽，例如且優(yōu)選堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽和鎂鹽)和銨鹽，該銨鹽衍生自氨或具有1-16個(gè)碳原子的有機(jī)胺，例如且優(yōu)選乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己胺、二甲基氨基乙醇、普魯卡因、二芐胺、N-甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
在本發(fā)明的上下文中，溶劑合物被描述為本發(fā)明化合物的這樣的形式：其以固態(tài)或液態(tài)通過與溶劑分子配位形成配合物。水合物是溶劑合物的一種具體形式，其中所述配位作用是與水進(jìn)行的。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的溶劑合物為水合物。
本發(fā)明的化合物——根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)——可以不同的立體異構(gòu)形式存在，即，以構(gòu)型異構(gòu)體的形式或者，如果合適，作為構(gòu)象異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體，包括在阻轉(zhuǎn)異構(gòu)情況下的那些)存在。因此，本發(fā)明包括對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體以及它們各自的混合物?？蓪⒘Ⅲw異構(gòu)均一成分以已知的方式從所述對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的混合物中分離；優(yōu)選色譜方法用于此目的，尤其是在非手性或手性相上的HPLC色譜法。
如果本發(fā)明的化合物可以互變異構(gòu)的形式存在，則本發(fā)明包括所有的互變異構(gòu)形式。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的所有合適的同位素變體。本發(fā)明化合物的同位素變體在本文中應(yīng)理解為是指這樣的化合物：其中本發(fā)明的化合物中至少一個(gè)原子已被替換為相同原子序數(shù)、但具有與自然界中通?；蛑饕嬖诘脑淤|(zhì)量不同的原子質(zhì)量的另一個(gè)原子?？梢砸氡景l(fā)明化合物中的同位素的實(shí)例是：氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，例如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本發(fā)明化合物的特定同位素變體(尤其是其中已經(jīng)引入一種或多種放射性同位素的那些)可能是有用的，例如，用于檢查體內(nèi)的作用機(jī)理或活性化合物分布；由于相對(duì)容易的可制備性和可檢測(cè)性，尤其是用3H或14C同位素標(biāo)記的化合物適用于該目的。此外，由于化合物的更大代謝穩(wěn)定性，同位素(例如氘)的引入可以產(chǎn)生特定的治療益處，例如體內(nèi)半衰期的延長(zhǎng)或所需的活性劑量的降低；因此，本發(fā)明化合物的這種改性在某些情況下還可以構(gòu)成本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。本發(fā)明化合物的同位素變體可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如通過以下進(jìn)一步描述的方法和在工作實(shí)施例中描述的步驟，通過使用各自的試劑和/或起始材料的相應(yīng)的同位素改性來(lái)制備。
此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前藥。術(shù)語(yǔ)“前藥”在本上下文中是指這樣的化合物：其本身可在生物學(xué)上有活性或無(wú)活性，但是它們?cè)隗w內(nèi)的保留時(shí)間期間反應(yīng)(例如代謝或水解)以得到本發(fā)明的化合物。
在本發(fā)明的上下文中，除非另外說(shuō)明，所述取代基定義如下：
烷基在本發(fā)明上下文中為具有給出的特定碳原子數(shù)的直鏈或支鏈烷基。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、1-甲基丙基、叔丁基、正戊基、異戊基、1-乙基丙基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基。
碳環(huán)或環(huán)烷基在本發(fā)明上下文中為具有各自給出的環(huán)碳原子數(shù)和最高達(dá)3個(gè)雙鍵的單環(huán)或雙環(huán)的飽和和部分不飽和的碳環(huán)。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)庚二烯基、二氫化茚基、四氫化萘基。
烯基在本發(fā)明上下文中為具有2至6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈烯基。優(yōu)選的是具有2至4個(gè)碳原子和1個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈烯基。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：乙烯基、烯丙基、異丙烯基和正丁-2-烯-1-基。
炔基在本發(fā)明上下文中為具有2至6個(gè)碳原子和1個(gè)三鍵的直鏈或支鏈炔基。例如且優(yōu)選地可以提及下列基團(tuán)：乙炔基、正丙-1-炔-1-基、正丙-2-炔-1-基、正丁-2-炔-1-基和正丁-3-炔-1-基。
鏈烷二基在本發(fā)明上下文中為具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈二價(jià)烷基。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：亞甲基、1,2-亞乙基、乙烷-1,1-二基、1,3-亞丙基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-2,2-二基、1,4-亞丁基、丁烷-1,2-二基、丁烷-1,3-二基和丁烷-2,3-二基。
烷氧基在本發(fā)明上下文中為具有1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、1-甲基丙氧基、正丁氧基、異丁氧基和叔丁氧基。
烷氧基羰基在本發(fā)明上下文中為具有1至4個(gè)碳原子和與氧原子連接的羰基的直鏈或支鏈烷氧基。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基和叔丁氧基羰基。
烷基磺?；?/u>在本發(fā)明上下文中為具有1至4個(gè)碳原子且通過磺酰基鍵合的直鏈或支鏈烷基。優(yōu)選的實(shí)例包括：甲基磺?；?、乙基磺?；?、正丙基磺?；?、異丙基磺?；?、正丁基磺酰基和叔丁基磺酰基。
4至7元雜環(huán)在本發(fā)明上下文中為具有總共4至7個(gè)環(huán)原子的單環(huán)飽和雜環(huán)，其含有一個(gè)或兩個(gè)選自N、O、S、SO和SO2的環(huán)雜原子并通過環(huán)碳原子或任何環(huán)氮原子連接。例如可提及下列基團(tuán)：氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氫呋喃基、硫雜環(huán)戊烷基(thiolanyl)、哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、嗎啉基、硫代嗎啉基、六氫氮雜卓基和六氫-1,4-二氮雜環(huán)卓基(diazepinyl)。優(yōu)選的是氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基和嗎啉基。
雜芳基在本發(fā)明上下文中為總共具有5或6個(gè)環(huán)原子的單環(huán)芳族雜環(huán)(雜芳族)，其含有最多三個(gè)相同或不同的選自N、O和S的環(huán)雜原子并通過環(huán)碳原子或通過任何環(huán)氮原子連接。例如且優(yōu)選地可提及下列基團(tuán)：呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、異噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基和三嗪基。
鹵素在本發(fā)明上下文中包括氟、氯、溴和碘。優(yōu)選的是氯或氟。
在R3或R1可代表的基團(tuán)的式中，用符號(hào)*或#標(biāo)記的線的端點(diǎn)不代表碳原子或CH2基團(tuán)，而是與連接R3或R1的各原子鍵合的一部分。
當(dāng)本發(fā)明化合物中的基團(tuán)被取代時(shí)，除非另外說(shuō)明，否則該基團(tuán)可被單取代或多取代。在本發(fā)明的上下文中，出現(xiàn)超過一次的所有基團(tuán)彼此獨(dú)立地定義。優(yōu)選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)相同或不同的取代基取代。
在本發(fā)明上下文中，術(shù)語(yǔ)“治療”包括抑制(inhibition)、阻滯、檢查、緩解、減弱、限制、降低、遏制(suppressing)、抵制或治愈疾病、病癥、紊亂、損傷和健康問題，或者所述狀態(tài)的發(fā)生、過程或進(jìn)展和/或所述狀態(tài)的癥狀。術(shù)語(yǔ)“療法”在本文中應(yīng)理解為與術(shù)語(yǔ)“治療”同義。
在本發(fā)明上下文中，術(shù)語(yǔ)“防止(prevention)”、“預(yù)防(prophylaxis)”或“阻止(preclusion)”同義地使用并且是指避免或降低感染、經(jīng)歷、患有或具有疾病、病癥、紊亂、損傷或健康問題，或者所述狀態(tài)的發(fā)生或推進(jìn)和/或所述狀態(tài)的癥狀的風(fēng)險(xiǎn)。
可部分或完全治療或預(yù)防疾病、病癥、紊亂、損傷或健康問題。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表吡啶基，
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、二氟甲基、三氟甲基和甲基的取代基取代，
R2代表氫、(C1-C4)烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫、氟或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R8代表氫、氟、甲基或乙基，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、三氟甲氧基或5元或6元雜芳基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的吡啶基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或甲烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的吡啶基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵，
R7代表氫，
R8代表氫，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基或環(huán)丙基，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1為環(huán)己基、吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
且
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
R2代表氯、(C1-C4)烷基、甲氧基或環(huán)丁基，
其中(C1-C4)烷基被(C1-C4)烷氧基取代，
其中環(huán)丁基被氟二取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基或5元或6元雜芳基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基或氯，
其中甲基被甲氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或甲烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基或氯，
其中甲基被甲氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵，
R7代表氫，
R8代表氫，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基或環(huán)丙基，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1為環(huán)己基、吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
且
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
R2代表(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
其中甲基被甲氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或甲烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
其中甲基被甲氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵，
R7代表氫，
R8代表氫，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基或環(huán)丙基，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表環(huán)己基、吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
R2代表氫、氯、(C1-C4)烷基、甲氧基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
其中(C1-C6)烷基可被三甲基甲硅烷基取代，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R16代表氫、(C1-C6)烷基或5元雜芳基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
其中5元雜芳基被甲基、二氟甲基或三氟甲基取代，
R17代表氫或甲基，
R18代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R19代表氫或(C1-C4)烷基，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基或甲氧基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基或乙烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R16代表丁基，
其中丁基可被氟取代最高達(dá)五次，
R17代表氫，
R18代表氫或甲基，
R19代表氫或甲基，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表環(huán)己基、吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
R2代表氫、(C1-C4)烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基或乙烷二基,
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基或乙烷二基,
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基或環(huán)丙基，
其中甲基可被甲氧基取代基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表環(huán)己基、吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
且
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
R2代表氫、(C1-C4)烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、單氟甲基、二氟甲基或三氟甲基，
其中(C1-C4)烷基可被(C1-C4)烷氧基取代，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫、氟或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R8代表氫、氟、甲基或乙基，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氫、氯、甲基、乙炔基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基被甲氧基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或甲烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表氯、甲基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基被甲氧基取代，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟，
R2代表甲基，
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵，
R7代表氫，
R8代表氫，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R4代表氫，
R5代表環(huán)丙基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
R6代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
A代表CH2，
R1代表吡啶基或苯基，
其中苯基可被1至4個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代，
且
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R1代表吡啶基，
其中吡啶基可被1至3個(gè)彼此獨(dú)立地選自氟、二氟甲基、三氟甲基和甲基的取代基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R1代表下式的吡啶基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫或氟，
R14和R15代表氟。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R1代表下式的苯基
其中
#代表與A的連接點(diǎn)，
且
R13代表氫，
R14和R15代表氟。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R2代表(C1-C4)烷基
其中(C1-C4)烷基被(C1-C4)烷氧基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R2代表甲基，
其中甲基被甲氧基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R2代表甲基。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R2代表氯。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R2代表甲氧基。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基或乙烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C4)烷基，
其中(C1-C4)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫，
R16代表丁基，
其中丁基可被氟取代最高達(dá)五次，
R17代表氫，
R18代表氫或甲基，
R19代表氫或甲基。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
R16代表丁基，
其中丁基可被氟取代最高達(dá)五次，
R17代表氫，
R18代表氫或甲基，
R19代表氫或甲基。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵或(C1-C4)鏈烷二基，
R7代表氫或氟，
R8代表氫或氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或(C1-C4)烷基，
R11代表氫，
R12代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表鍵，
R7代表氫，
R8代表氫，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽和N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基或乙烷二基,
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫或(C1-C6)烷基，
其中(C1-C6)烷基可被氟取代最高達(dá)五次，
R10代表氫或甲基，
R11代表氫，
R12代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R3代表下式的基團(tuán)
其中
*代表與羰基的連接點(diǎn)，
L1代表甲烷二基，
R7代表氟，
R8代表氟，
R9代表氫，
R10代表氫，
R11代表氫，
R12代表氫。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R5代表氯、甲基、乙基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、三氟甲氧基或者5元或6元雜芳基，
其中甲基被甲氧基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選的是式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R5代表氯、甲基、環(huán)丙基、二氟甲氧基、吡啶基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基，
其中甲基被甲氧基取代。
在本發(fā)明的上下文中，還優(yōu)選式(I)的化合物以及它們的N-氧化物、鹽、溶劑合物、N-氧化物的鹽及N-氧化物和鹽的溶劑合物，其中
R5代表環(huán)丙基、1H-吡唑-1-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1,3-噁唑-5-基。
本發(fā)明還提供制備本發(fā)明式(I)的化合物的方法，其特征在于，
[A]在惰性溶劑中、在合適的堿或酸的存在下，將式(II)的化合物反應(yīng)以得到式(III)的羧酸
其中A、R1、R2、R4和R6各自如以上所定義的，
R5A具有對(duì)R5所給出的含義或代表溴，
且
T1代表(C1-C4)烷基或芐基，
其中A、R1、R2、R4和R6各自如以上所定義的，
且
R5A具有對(duì)R5所給出的含義或代表溴，
且隨后在惰性溶劑中、在酰胺偶聯(lián)條件下，式(III)的羧酸與式(IV)的胺反應(yīng)
其中L1、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自具有以上所給出的含義，
且，如果
R5A代表溴，
則在惰性溶劑中、在合適的過渡金屬催化劑的存在下、任選地在合適的堿的存在下，將這些化合物與式(IV-A)的化合物反應(yīng)
其中
R5具有以上所給出的含義
且
T2代表氫或(C1-C4)烷基，或者兩個(gè)T2基團(tuán)一起形成-C(CH3)2-C(CH3)2-橋，
或者
[B]在惰性溶劑中、在酰胺偶聯(lián)條件下，將式(III-A)的化合物用式(IV)的胺轉(zhuǎn)化成式(I-A)的化合物，
其中R2、R4、R5和R6各自具有以上所給出的含義，
其中L1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自具有以上所給出的含義，
且隨后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將芐基從中分離出，并且在惰性溶劑中、在合適的堿的存在下，將得到的式(V)的化合物與式(VI)的化合物反應(yīng)，
其中L1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自具有以上所給出的含義，
其中A和R1具有以上所給出的含義，且
X1代表合適的離去基團(tuán)，特別是氯、溴、碘、甲磺酸根、三氟甲磺酸根或甲苯磺酸根，
然后，分離出存在的任何保護(hù)基團(tuán)，并將得到的式(I)的化合物任選地用適當(dāng)?shù)?i)溶劑和/或(ii)酸或堿轉(zhuǎn)化成它們的溶劑合物、鹽和/或鹽的溶劑合物。
式(I-A)化合物構(gòu)成本發(fā)明的式(I)的化合物的一個(gè)子集。
可以通過下列合成方案(方案1)以示例性的方式說(shuō)明所述的制備方法：
方案1：
[a)：氫氧化鋰，THF/甲醇/H2O，RT；b)：HATU，4-甲基嗎啉或N,N-二異丙基乙胺，DMF；c)：HCl，Et2O或TFA，CH2Cl2]。
式(IV)和(VI)的化合物是市售可得的、文獻(xiàn)中已知的或者可以以類似于文獻(xiàn)的方法制備。
例如使用酸(例如鹽酸和三氟乙酸)在合適的溶劑(例如二乙醚、二氯甲烷、1,4-二噁烷、水、甲醇、乙醇及其混合物)中，可將(IV)的游離堿分別從任選地具有氨基保護(hù)基團(tuán)的化合物(IV)中釋放。
用于方法步驟(III)+(IV)→(I)和(III-A)+(IV)→(I-A)的惰性溶劑為，例如醚，如二乙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚；烴，如苯、甲苯、二甲苯、己烷、環(huán)己烷或礦物油餾分；鹵代烴，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯；或其他溶劑，如丙酮、乙酸乙酯、乙腈、吡啶、二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N'-二甲基丙撐脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用所述溶劑的混合物。優(yōu)選的是二氯甲烷、四氫呋喃、二甲基甲酰胺或這些溶劑的混合物。
適用于在方法步驟(III)+(IV)→(I)和(III-A)+(IV)→(I-A)中用作酰胺形成的縮合劑為，例如碳二亞胺，如N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二異丙基-、N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)；光氣衍生物，如N,N'-羰基二咪唑(CDI)；1,2-噁唑鎓化合物，如2-乙基-5-苯基-1,2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽；酰氨基化合物，如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氫喹啉；或氯甲酸異丁酯、丙烷膦酸酐(T3P)、1-氯-N,N,2-三甲基丙-1-烯-1-胺、氰基膦酸二乙酯、雙-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)膦六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)膦六氟磷酸鹽(PyBOP)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TCTU)，任選地與其他助劑組合，如1-羥基苯并三唑(HOBt)或N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)，以及作為堿的堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或有機(jī)堿，如三烷基胺，例如三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶或N,N-二異丙基乙胺。優(yōu)選的是使用與N-甲基嗎啉組合的TBTU、與N,N-二異丙基乙胺或1-氯-N,N,2-三甲基丙-1-烯-1-胺組合的HATU。
縮合(III)+(IV)→(I)和(III-A)+(IV-A)→(I-A)通常在-20℃至+100℃、優(yōu)選在0℃至+60℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。所述轉(zhuǎn)化可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5至5巴)下進(jìn)行。通常，所述反應(yīng)在常壓下進(jìn)行。
或者，也可以將式(III)的羧酸首先轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的碳酰氯，且隨后可將所述碳酰氯直接或以與式(IV)的胺單獨(dú)反應(yīng)的方式轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物。由羧酸形成碳酰氯是通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法而實(shí)現(xiàn)的，例如在合適堿的存在下(例如在吡啶存在下)，且任選地加入二甲基甲酰胺，任選地在合適的惰性溶劑中，通過用亞硫酰氯、硫酰氯或乙二酰氯進(jìn)行處理。
式(II)化合物中酯基T1的水解是通過常規(guī)方法、通過在惰性溶劑中用酸或堿處理該酯而實(shí)現(xiàn)的，其中在后一種情況下，所形成的鹽首先通過用酸處理而轉(zhuǎn)化為游離羧酸。在叔丁酯的情況下，所述酯水解優(yōu)選用酸來(lái)實(shí)現(xiàn)。在芐酯的情況下，所述酯水解優(yōu)選通過用負(fù)載在活性炭上的鈀或雷尼鎳氫解來(lái)實(shí)現(xiàn)。適用于此反應(yīng)的惰性溶劑是水或常用于酯水解的有機(jī)溶劑。這些優(yōu)選包括醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或叔丁醇；或醚，如二乙醚、四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、二噁烷或乙二醇二甲醚；或其他溶劑，如丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺或二甲基亞砜。還可以使用所述溶劑的混合物。在堿性酯水解的情況下，優(yōu)選的是使用水與二噁烷、四氫呋喃、甲醇和/或乙醇的混合物。
適用于酯水解的堿是常規(guī)的無(wú)機(jī)堿。這些優(yōu)選包括堿金屬或堿土金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化鉀或氫氧化鋇；或者堿金屬或堿土金屬碳酸鹽，如碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸鈣。特別優(yōu)選的是氫氧化鈉或氫氧化鋰。
適用于酯裂解的酸通常是硫酸、氯化氫/鹽酸、溴化氫/氫溴酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、甲苯磺酸、甲磺酸或三氟甲磺酸，或者其混合物，任選地加入水。在叔丁酯的情況下，優(yōu)選的是氯化氫或三氟乙酸，且在甲酯的情況下，優(yōu)選的是鹽酸。
酯水解通常在0℃至+100℃、優(yōu)選在+0℃至+50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
這些轉(zhuǎn)化可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5至5巴)下進(jìn)行。通常，所述反應(yīng)在各自情況下在常壓下進(jìn)行。
與(IV-A)的偶聯(lián)在溶劑中進(jìn)行，所述溶劑在反應(yīng)條件下呈惰性。合適的溶劑為，例如醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，例如二乙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚；或其他溶劑，例如1,2-二甲氧基乙烷(DME)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、N,N'-二甲基丙撐脲(DMPU)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、吡啶、乙腈、甲苯或水。還可以使用所述溶劑的混合物。優(yōu)選的是乙醇、二甲氧基乙烷、二噁烷、乙腈、甲苯和水以及這些溶劑的混合物。
與(IV-A)的轉(zhuǎn)化可任選在合適的鈀和/或銅催化劑的存在下進(jìn)行。合適的鈀催化劑為，例如，乙酸鈀(II)、四(三苯基膦)鈀(0)、雙(三-叔丁基膦)鈀(0)、雙(三苯基膦)氯化鈀(II)、雙(乙腈)氯化鈀(II)和[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)，以及任選地與其他磷烷(phosphane)配體結(jié)合的相應(yīng)的二氯甲烷絡(luò)合物，所述磷烷配體例如(2-聯(lián)苯)二-叔丁基膦、2-二環(huán)己基膦基-2’,6’-二甲氧基聯(lián)苯(SPHOS)、二環(huán)己基[2',4',6'-三(1-甲基乙基)聯(lián)苯-2-基]磷烷(XPHOS)、2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯(lián)苯(RuPhos)、雙(2-苯基膦基苯基)醚(DPEphos)或4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽(Xantphos)[參見，例如，Hassan J.等人，Chem.Rev.102，1359-1469(2002)]。
與(IV-A)的轉(zhuǎn)化任選地在合適的堿的存在下進(jìn)行。用于此轉(zhuǎn)化的合適的堿為常規(guī)的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿。這些堿優(yōu)選包括堿金屬氫氧化物，如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀；堿金屬或堿土金屬碳酸鹽，如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣或碳酸銫；堿金屬醇鹽，如甲醇鈉或甲醇鉀、乙醇鈉或乙醇鉀或叔丁醇鈉或叔丁醇鉀；堿金屬氫化物，如氫化鈉或氫化鉀；氨基化合物，如氨基鈉、雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰、雙(三甲基甲硅烷基)氨基鈉或雙(三甲基甲硅烷基)氨基鉀或二異丙基氨基鋰；或有機(jī)胺，如三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、吡啶、1,5-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或1,4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷或磷酸鉀。優(yōu)選的是使用磷酸鉀。
與(IV-A)的反應(yīng)通常在0℃至+200℃、優(yōu)選在+80℃至+150℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。該轉(zhuǎn)化可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5至5巴)下進(jìn)行。通常，該反應(yīng)在常壓下進(jìn)行。
用于方法步驟(V)+(VI)→(I)的惰性溶劑是，例如，鹵代烴，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯或氯苯；醚，如二乙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚；烴，如苯、甲苯、二甲苯、己烷、環(huán)己烷或礦物油餾分；或其他溶劑，如丙酮、甲基乙基酮、乙酸乙酯、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亞砜、N,N'-二甲基丙撐脲(DMPU)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或吡啶。還可以使用所述溶劑的混合物。優(yōu)選的是使用二甲基甲酰胺或二甲基亞砜。
適用于方法步驟(V)+(VI)→(I)的堿是常規(guī)的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿。這些優(yōu)選包括堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀，堿金屬或堿土金屬碳酸鹽，如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣或碳酸銫，任選地加入堿金屬碘化物，例如碘化鈉或碘化鉀；堿金屬醇鹽，如甲醇鈉或甲醇鉀、乙醇鈉或乙醇鉀或者叔丁醇鈉或叔丁醇鉀；堿金屬氫化物，如氫化鈉或氫化鉀；氨基化物，如氨基鈉、雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰或雙(三甲基甲硅烷基)氨基鉀或二異丙基氨基鋰；或有機(jī)胺，如三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)、1,5-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或1,4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷優(yōu)選的是使用碳酸鉀、碳酸銫或甲醇鈉。
所述反應(yīng)通常在0℃至+120℃、優(yōu)選在+20℃至+80℃的溫度范圍內(nèi)，任選地在微波中進(jìn)行。所述反應(yīng)可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5至5巴)下進(jìn)行。
所用的氨基保護(hù)基團(tuán)優(yōu)選為叔丁氧基羰基(Boc)或芐氧基羰基(Z)。用于羥基或羧基官能的保護(hù)基團(tuán)優(yōu)選為叔丁基或芐基。通過常規(guī)方法、優(yōu)選通過在惰性溶劑(例如，二噁烷、二乙醚、二氯甲烷或乙酸)中與強(qiáng)酸(例如，鹽酸、氫溴酸或三氟乙酸)反應(yīng)而分離出保護(hù)基團(tuán)；任選地，還可以在沒有額外的惰性溶劑的情況下實(shí)現(xiàn)該分離。在芐基和芐氧基羰基作為保護(hù)基團(tuán)的情況下，這些保護(hù)基團(tuán)也可以通過在鈀催化劑存在下的氫解來(lái)移除。所述保護(hù)基團(tuán)的分離可任選地同時(shí)在一勺燴反應(yīng)中進(jìn)行或在單獨(dú)的反應(yīng)步驟中進(jìn)行。
在本文中，反應(yīng)步驟(I-A)→(V)中芐基的移除是通過保護(hù)基化學(xué)中已知的常規(guī)方法，優(yōu)選通過在惰性溶劑(例如，乙醇或乙酸乙酯)中、在鈀催化劑(例如，負(fù)載在活性炭上的鈀)的存在下的氫解來(lái)進(jìn)行的[還可參見，例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1999]。
式(II)的化合物是文獻(xiàn)中已知的或可通過以下制得：將式(VII)的化合物
其中R4、R5和R6具有以上所給出的含義，
在惰性溶劑中、在合適的堿的存在下，與式(VI)的化合物反應(yīng)，以得到式(VIII)的化合物，
其中R1、R4、R5和R6各自具有以上所給出的含義，
然后在惰性溶劑中，將式(VIII)的化合物與式(IX)的化合物反應(yīng)
其中R2和T1各自為如以上所定義的。
通過下列方案(方案2)以示例性的方式說(shuō)明所述方法：
方案2：
[a)：i)NaOMe，MeOH，RT；ii)DMSO，RT；b)：EtOH，分子篩，回流]。
可以修改所示的合成順序，從而使各反應(yīng)步驟以不同的順序進(jìn)行。這種修改的合成順序的實(shí)例示于方案3中。
方案3：
[a)：EtOH，分子篩，回流；b)：b)Cs2CO3，DMF，50℃]。
用于閉環(huán)以得到咪唑并[1,2-a]吡啶基礎(chǔ)骨架(VIII)+(IX)→(II)或(VII)+(IX)→(X)的惰性溶劑是常規(guī)的有機(jī)溶劑。這些有機(jī)溶劑優(yōu)選包括，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、正戊醇或叔丁醇；或醚，如二乙醚、四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、二噁烷或乙二醇二甲醚；或其他溶劑，如丙酮、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亞砜。還可以使用所述溶劑的混合物。優(yōu)選的是使用乙醇。
所述閉環(huán)通常在+50℃至+150℃、優(yōu)選在+50℃至+100℃的溫度范圍內(nèi)，任選在微波中進(jìn)行。
所述閉環(huán)(VIII)+(IX)→(II)或(VII)+(IX)→(X)任選地在脫水反應(yīng)添加劑的存在下(例如，在分子篩(孔徑為)的存在下)，或使用水分離器來(lái)進(jìn)行。反應(yīng)(VIII)+(IX)→(II)或(VII)+(IX)→(X)使用過量的式(IX)的試劑(例如，用1至20當(dāng)量的試劑(IX))、任選地加入堿(例如碳酸氫鈉)——在此情況下所述加入可一次性全部或以幾個(gè)部分的方式進(jìn)行——來(lái)進(jìn)行。
作為通過化合物(V)、(VII)或(X)與式(VI)化合物的反應(yīng)而引入R1(如方案1至3中所示)的替代方案，同樣可以——如方案4中所示——在Mitsunobu反應(yīng)的條件下將這些中間體與式(XI)的醇反應(yīng)。
方案4：
酚與醇的此類Mitsunobu縮合的典型反應(yīng)條件可在相關(guān)文獻(xiàn)中找到，例如Hughes，D.L.Org.React.1992，42，335；Dembinski，R.Eur.J.Org.Chem.2004，2763。通常，所述反應(yīng)在惰性溶劑(例如THF、二氯甲烷、甲苯或DMF)中、在0℃至所用溶劑的沸點(diǎn)之間的溫度下，使用活化試劑(例如，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD))和膦試劑(例如，三苯基膦或三丁基膦)來(lái)進(jìn)行。
本發(fā)明的其他化合物還可任選地通過以下制備：由上述方法所獲得的式(I)的化合物開始，將各個(gè)取代基的官能團(tuán)——尤其是對(duì)R3所列的那些——進(jìn)行轉(zhuǎn)化。這些轉(zhuǎn)化是通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法進(jìn)行的，并且包括，例如，親核取代反應(yīng)和親電取代反應(yīng)、氧化反應(yīng)、還原反應(yīng)、氫化反應(yīng)、過渡金屬催化的偶聯(lián)反應(yīng)、消除反應(yīng)、烷基化反應(yīng)、胺化反應(yīng)、酯化反應(yīng)、酯水解反應(yīng)、醚化反應(yīng)、醚水解反應(yīng)、形成碳酰胺的反應(yīng)以及引入和移除臨時(shí)保護(hù)基團(tuán)的反應(yīng)。
本發(fā)明的化合物具有有價(jià)值的藥理學(xué)特性并且可用于預(yù)防和治療人類和動(dòng)物的疾病。本發(fā)明的化合物提供了另一種治療選擇，并因此擴(kuò)大了藥學(xué)的領(lǐng)域。
本發(fā)明的化合物引起血管舒張并抑制血小板聚集，且導(dǎo)致血壓降低和冠脈血流量升高。這些作用由可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的直接刺激和細(xì)胞內(nèi)cGMP的升高介導(dǎo)。此外，本發(fā)明的化合物增強(qiáng)提高cGMP水平的物質(zhì)——例如EDRF(內(nèi)皮衍生舒張因子)、NO供體、原卟啉IX、花生四烯酸或苯基肼衍生物——的作用。
本發(fā)明的化合物適用于治療和/或預(yù)防心血管疾病、肺病、血栓栓塞疾病和纖維化疾病。
因此，本發(fā)明的化合物可在用于以下的藥物中使用：用于治療和/或預(yù)防心血管疾病，例如高血壓(高血壓)、急性和慢性心力衰竭、冠心病、穩(wěn)定型和不穩(wěn)定型心絞痛、外周和心臟血管疾病、心律失常、房性和室性心律失常，以及傳導(dǎo)紊亂，例如I-III度房室傳導(dǎo)阻滯(AB阻滯I-III)、室上性快速心律失常、心房顫動(dòng)、心房撲動(dòng)、心室顫動(dòng)、心室撲動(dòng)、室性快速心律失常、尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過速、房性和室性早搏、房室交界期外收縮(AV-junction Extrasystolen)、病竇綜合征、暈厥、房室結(jié)性心動(dòng)過速、Wolff-Parkinson-White綜合征、急性冠脈綜合征(ACS)、自身免疫性心臟病(心包炎、心內(nèi)膜炎、心瓣炎、主動(dòng)脈炎、心肌病)、休克(如心源性休克、敗血性休克和過敏性休克)、動(dòng)脈瘤、拳師犬心肌病(室性期前收縮(PVC))；用于治療和/或預(yù)防血栓栓塞疾病和缺血，如心肌缺血、心肌梗死、中風(fēng)、心肌肥厚、短暫性缺血發(fā)作、先兆子癇、炎性心血管疾病、冠狀動(dòng)脈和外周動(dòng)脈的痙攣、水腫形成(例如肺水腫、腦水腫、腎水腫或因心力衰竭而造成的水腫)、外周循環(huán)障礙、再灌注損傷、動(dòng)脈和靜脈血栓形成、微量白蛋白尿、心肌機(jī)能不全、內(nèi)皮功能障礙；預(yù)防再狹窄，如在溶栓治療、經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)(PTA)、冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)、心臟移植和搭橋手術(shù)，以及微血管和大血管損傷(血管炎)后，纖維蛋白原和低密度脂蛋白(LDL)的水平升高及纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)的濃度升高；以及用于治療和/或預(yù)防勃起功能障礙和女性性功能障礙。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“心力衰竭”包括心力衰竭的急性和慢性兩種形式，以及更具體或相關(guān)類型的疾病，如急性代償失調(diào)的心力衰竭、右心衰竭、左心衰竭、全心衰竭、缺血性心肌病、擴(kuò)張型心肌病、肥厚型心肌病、特發(fā)性心肌病、先天性心臟病、與心瓣膜缺損相關(guān)的的心力衰竭、二尖瓣狹窄、二尖瓣閉鎖不全、主動(dòng)脈瓣狹窄、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、三尖瓣狹窄、三尖瓣關(guān)閉不全、肺動(dòng)脈瓣狹窄、肺動(dòng)脈瓣閉鎖不全、組合性心臟瓣膜缺損、心肌炎癥(心肌炎)、慢性心肌炎、急性心肌炎、病毒性心肌炎、糖尿病性心力衰竭、酒精性心肌病、心臟貯積(storage)病、舒張性心力衰竭和收縮性心力衰竭，以及現(xiàn)有慢性心力衰竭的惡化急性期(惡化的心力衰竭)。
此外，本發(fā)明的化合物還可用于治療和/或預(yù)防動(dòng)脈硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、低脂蛋白血癥(hypolipoproteinaemias)、血脂異常、高甘油三酯血癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、血內(nèi)β-脂蛋白血癥(abetelipoproteinaemia)、谷固醇血癥、黃瘤病、丹吉爾病、肥胖癥、肥胖以及混合型高脂血癥和代謝綜合征。
本發(fā)明的化合物還可用于治療和/或預(yù)防原發(fā)性和繼發(fā)性雷諾現(xiàn)象、微循環(huán)障礙、跛行、外周和自主神經(jīng)病、糖尿病性微血管病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、四肢上的糖尿病性潰瘍、壞疽、CREST綜合征、紅斑狼瘡、甲癬、風(fēng)濕病，以及用于促進(jìn)傷口愈合。
本發(fā)明的化合物還適用于治療泌尿疾病，例如良性前列腺綜合征(BPS)、良性前列腺增生(BPH)、良性前列腺增大(BPE)、膀胱出口梗阻(BOO)、下尿路綜合征(LUTS，包括貓泌尿綜合征(FUS))、包括神經(jīng)性膀胱過度活動(dòng)(OAB)和(IC)、失禁(UI)的泌尿生殖系統(tǒng)疾病，例如混合性尿失禁、急迫性尿失禁、壓力性尿失禁或充溢性尿失禁(MUI、UUI、SUI、OUI)、骨盆痛、男性和女性泌尿生殖系統(tǒng)的器官的良性和惡性疾病。
本發(fā)明的化合物還適用于治療和/或預(yù)防腎臟疾病，特別是急性和慢性腎機(jī)能不全以及急性和慢性腎衰竭。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“腎機(jī)能不全”包括腎機(jī)能不全的急性和慢性表現(xiàn)，以及潛在的或相關(guān)的腎病，如腎灌注不足、透析中低血壓、梗阻性尿路病、腎小球病、腎小球腎炎、急性腎小球腎炎、腎小球硬化癥、腎小管間質(zhì)性疾病、腎病，如原發(fā)性和先天性腎臟疾病、腎炎、免疫性腎臟疾病，如腎移植排斥、免疫復(fù)合物誘發(fā)的腎臟疾病、有毒物質(zhì)誘發(fā)的腎病、造影劑誘發(fā)的腎病、糖尿病性和非糖尿病性腎病、腎盂腎炎、腎囊腫、腎硬化、高血壓性腎硬化以及可通過以下進(jìn)行診斷性表征的腎病綜合征：例如肌酸酐和/或水排泄的異常減少，尿素、氮、鉀和/或肌酸酐的血濃度的異常升高、腎臟酶(例如谷氨酰合成酶)的活性改變，尿液滲透壓或尿量的改變，微量白蛋白尿的增加、大量白蛋白尿(macroalbuminuria)，腎小球和小動(dòng)脈的病變，腎小管擴(kuò)張(tubular dilatation)，高磷血癥和/或需要透析。本發(fā)明還包括本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防腎機(jī)能不全后遺癥——例如肺水腫、心力衰竭、尿毒癥、貧血癥、電解質(zhì)紊亂(例如高鉀血癥、低鈉血癥)以及骨和碳水化合物代謝紊亂——的用途。
此外，本發(fā)明的化合物還適用于治療和/或預(yù)防哮喘病、肺動(dòng)脈性高壓(PAH)和其他形式的肺動(dòng)脈高血壓(PH)(包括與左心室病、HIV、鐮狀細(xì)胞貧血、血栓栓塞(CTEPH)、結(jié)節(jié)病、COPD或肺纖維化相關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓)、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、急性肺損傷(ALI)、α-1-抗胰蛋白酶缺乏癥(AATD)、肺纖維化、肺氣腫(例如，由吸煙誘發(fā)的肺氣腫)和囊性纖維化(CF)。
本發(fā)明中所述的化合物也是用于控制以NO/cGMP系統(tǒng)的紊亂為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的活性成分。它們特別適用于在如特別與境遇/疾病/綜合征伴隨出現(xiàn)的那些認(rèn)知障礙之后，改善感知、注意力、學(xué)習(xí)或記憶，所述認(rèn)知障礙例如，輕度認(rèn)知障礙、與年齡相關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶障礙、與年齡相關(guān)的記憶喪失、血管性癡呆、顱腦創(chuàng)傷、中風(fēng)、中風(fēng)后出現(xiàn)的癡呆(中風(fēng)后癡呆)、創(chuàng)傷后顱腦損傷、一般性注意力集中障礙、有學(xué)習(xí)和記憶問題的兒童的注意力集中障礙、阿爾茨海默氏病、路易體癡呆、伴隨著額葉退化的癡呆，包括Pick綜合征、帕金森氏病、漸進(jìn)性核性麻痹，伴隨著皮質(zhì)基底節(jié)變性的癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(amyolateral sclerosis)(ALS)、亨廷頓氏病、脫髓鞘、多發(fā)性硬化癥、丘腦退化、Creutzfeldt-Jakob癡呆、HIV癡呆、伴隨著癡呆的的精神分裂癥或Korsakoff精神病。它們還適用于治療和/或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如焦慮狀態(tài)、緊張狀態(tài)和抑郁狀態(tài)、CNS相關(guān)的性功能障礙和睡眠障礙，以及用于控制攝入食物、刺激物和成癮物質(zhì)的病理性紊亂。
此外，本發(fā)明的化合物還適用于控制腦血流量并且是用于控制偏頭痛的有效藥劑。它們還適用于預(yù)防和控制腦梗死(腦中風(fēng))——如中風(fēng)、腦缺血和腦外傷——的后遺癥。本發(fā)明的化合物同樣可用于控制疼痛和耳鳴的狀態(tài)。
此外，本發(fā)明的化合物具有抗炎作用并因此可被用作用于治療和/或預(yù)防敗血癥(SIRS)、多器官功能衰竭(MODS、MOF)、腎臟的炎癥疾病、慢性腸炎(IBD、克羅恩氏病、UC)、胰腺炎、腹膜炎、類風(fēng)濕性疾病、炎癥性皮膚病和炎癥性眼病的抗炎劑。
此外，本發(fā)明的化合物也可用于治療和/或預(yù)防自身免疫疾病。
本發(fā)明的化合物還適用于治療和/或預(yù)防內(nèi)臟器官——例如肺、心臟、腎臟、骨髓且特別是肝臟——的纖維化疾病，以及皮膚纖維化和纖維化眼病。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)纖維化疾病特別包括下列術(shù)語(yǔ)：肝纖維化、肝硬化、肺纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、腎病、腎小球腎炎、腎間質(zhì)纖維化、由糖尿病引起的纖維化損傷、骨髓纖維化及類似的纖維化疾病、硬皮病、硬斑病、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕(還在外科手術(shù)后)、痣、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變及結(jié)締組織疾病(例如結(jié)節(jié)病)。
本發(fā)明的化合物還適用于控制術(shù)后瘢痕形成，例如由青光眼手術(shù)導(dǎo)致的瘢痕。
本發(fā)明的化合物還可在美容上用于老化和角質(zhì)化的皮膚。
此外，本發(fā)明的化合物適用于治療和/或預(yù)防肝炎、腫瘤、骨質(zhì)疏松癥、青光眼和胃輕癱。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防疾病、特別是上述疾病的用途。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防心力衰竭、心絞痛、高血壓、肺動(dòng)脈高壓、局部缺血、血管疾病、腎機(jī)能不全、血栓栓塞疾病、纖維化疾病和動(dòng)脈硬化的用途。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防心力衰竭、心絞痛、高血壓、肺動(dòng)脈高壓、局部缺血、血管疾病、腎機(jī)能不全、血栓栓塞疾病、纖維化疾病和動(dòng)脈硬化的方法中。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物用于制備治療和/或預(yù)防疾病、尤其是上述疾病的藥物的用途。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物用于制備治療和/或預(yù)防心力衰竭、心絞痛、高血壓、肺動(dòng)脈高壓、局部缺血、血管疾病、腎機(jī)能不全、血栓栓塞疾病、纖維化疾病和動(dòng)脈硬化的藥物的用途。
本發(fā)明還提供一種治療和/或預(yù)防疾病、特別是上述疾病的方法，所述方法使用有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還提供一種治療和/或預(yù)防心力衰竭、心絞痛、高血壓、肺動(dòng)脈高壓、局部缺血、血管疾病、腎機(jī)能不全、血栓栓塞疾病、纖維化疾病和動(dòng)脈硬化的方法，所述方法使用有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或者——如果需要——可與其他活性化合物組合使用。本發(fā)明還提供藥物，其包含至少一種本發(fā)明的化合物和一種或多種其他活性化合物，尤其用于治療和/或預(yù)防上述疾病。適于組合的活性成分的優(yōu)選實(shí)例包括：
●有機(jī)硝酸酯和NO供體，例如硝普鈉、硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、二硝酸異山梨酯、嗎多明或SIN-1，以及吸入性NO；
●抑制環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)降解的化合物，例如磷酸二酯酶(PDE)1、2和/或5的抑制劑，尤其是PDE 5抑制劑，如西地那非(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)和他達(dá)拉非(tadalafil)；
●抗血栓形成劑，例如且優(yōu)選選自血小板聚集抑制劑、抗凝血?jiǎng)┗虼倮w維蛋白溶解的物質(zhì)(profibrinolytic substance)；
●降血壓的活性化合物，例如且優(yōu)選選自鈣拮抗劑、血管緊張素AII拮抗劑、ACE抑制劑、內(nèi)皮素拮抗劑、腎素抑制劑、α-受體阻斷劑、β-受體阻斷劑、鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑，以及利尿劑；和/或
●改變脂類代謝的活性化合物，例如且優(yōu)選選自甲狀腺受體激動(dòng)劑、膽固醇合成抑制劑，例如且優(yōu)選，HMG-CoA-還原酶抑制劑或角鯊烯合成抑制劑、ACAT抑制劑、CETP抑制劑、MTP抑制劑、PPAR-α、PPAR-γ和/或PPAR-δ激動(dòng)劑、膽固醇吸收抑制劑、脂肪酶抑制劑、聚合膽汁酸吸附劑、膽汁酸再吸收抑制劑及脂蛋白(a)拮抗劑。
抗血栓形成劑優(yōu)選應(yīng)理解為意指選自血小板聚集抑制劑、抗凝血?jiǎng)┗虼倮w維蛋白溶解的物質(zhì)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與血小板聚集抑制劑——例如且優(yōu)選阿司匹林、氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidin)或雙嘧達(dá)莫(dipyridamole)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與凝血酶抑制劑——例如且優(yōu)選希美加群(ximelagatran)、達(dá)比加群(dabigatran)、美拉加群(melagatran)、比伐盧定(bivalirudin)或克賽(clexane)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與GPIIb/IIIa拮抗劑——例如且優(yōu)選替羅非班(tirofiban)或阿昔單抗(abciximab)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與因子Xa抑制劑——例如且優(yōu)選利伐沙班(rivaroxaban)(BAY 59-7939)、DU-176b、阿哌沙班(apixaban)、奧米沙班(otamixaban)、非地沙班(fidexaban)、雷扎沙班(razaxaban)、磺達(dá)肝素(fondaparinux)、艾卓肝素(idraparinux)、PMD-3112、YM-150、KFA-1982、EMD-503982、MCM-17、MLN-1021、DX 9065a、DPC 906、JTV803、SSR-126512或SSR-128428——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與維生素K拮抗劑——例如且優(yōu)選香豆素——組合給藥。
降血壓劑優(yōu)選應(yīng)理解為意指選自以下的化合物：鈣拮抗劑、血管緊張素AII拮抗劑、ACE抑制劑、內(nèi)皮素拮抗劑、腎素抑制劑、α-受體阻斷劑、β-受體阻斷劑、鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑和利尿劑。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與鈣拮抗劑——例如且優(yōu)選硝苯地平(nifedipine)、氨氯地平(amlodipine)、維拉帕米(verapamil)或地爾硫卓(diltiazem)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與α-1-受體阻斷劑——例如且優(yōu)選哌唑嗪(prazosin)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與β-受體阻斷劑——例如且優(yōu)選普萘洛爾(propranolol)、阿替洛爾(atenolol)、噻嗎洛爾(timolol)、吲哚洛爾(pindolol)、阿普洛爾(alprenolol)、氧烯洛爾(oxprenolol)、噴布洛爾(penbutolol)、布拉洛爾(bupranolol)、美替洛爾(metipranolol)、納多洛爾(nadolol)、甲吲洛爾(mepindolol)、卡拉洛爾(carazalol)、索他洛爾(sotalol)、美托洛爾(metoprolol)、倍他洛爾(betaxolol)、塞利洛爾(celiprolol)、比索洛爾(bisoprolol)、卡替洛爾(carteolol)、艾司洛爾(esmolol)、拉貝洛爾(labetalol)、卡維地洛(carvedilol)、阿達(dá)洛爾(adaprolol)、蘭地洛爾(landiolol)、奈必洛爾(nebivolol)、依泮洛爾(epanolol)或布新洛爾(bucindolol)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與血管緊張素AII拮抗劑——例如且優(yōu)選氯沙坦(losartan)、坎地沙坦(candesartan)、纈沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)或恩布沙坦(embusartan)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與ACE抑制劑——例如且優(yōu)選依那普利(enalapril)、卡托普利(captopril)、賴諾普利(lisinopril)、雷米普利(ramipril)、地拉普利(delapril)、福辛普利(fosinopril)、奎諾普利(quinapril)、培哚普利(perindopril)或群多普利(trandopril)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與內(nèi)皮素拮抗劑——例如且優(yōu)選波生坦(bosentan)、達(dá)盧生坦(darusentan)、安倍生坦(ambrisentan)或西他生坦(sitaxsentan)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與腎素抑制劑——例如且優(yōu)選阿利克侖(aliskiren)、SPP-600或SPP-800——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑——例如且優(yōu)選安體舒通(spironolactone)或依普利酮(eplerenone)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與袢利尿劑、保鉀利尿劑、醛固酮拮抗劑以及噻嗪類利尿劑組合給藥，所述袢利尿劑例如速尿靈(furosemide)、托拉塞米(torasemide)、布美他尼(bumetanide)和吡咯他尼(piretanide)，所述保鉀利尿劑例如阿米洛利(amiloride)和氨苯蝶啶(triamterene)，所述醛固酮拮抗劑例如安體舒通(spironolactone)、坎利酸鉀(potassium canrenoate)和依普利酮(eplerenone)，所述噻嗪類利尿劑例如氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、希帕胺(xipamide)和吲達(dá)帕胺(indapamide)。
脂類代謝調(diào)節(jié)劑優(yōu)選應(yīng)理解為意指選自以下的化合物：CETP抑制劑、甲狀腺受體激動(dòng)劑、膽固醇合成抑制劑(如HMG-CoA還原酶抑制劑或角鯊烯合成抑制劑)、ACAT抑制劑、MTP抑制劑、PPAR-α激動(dòng)劑、PPAR-γ激動(dòng)劑和/或PPAR-δ激動(dòng)劑、膽固醇吸收抑制劑、聚合膽汁酸吸附劑、膽汁酸再吸收抑制劑、脂肪酶抑制劑和脂蛋白(a)拮抗劑。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與CETP抑制劑——例如且優(yōu)選達(dá)塞曲匹、BAY60-5521、安塞曲匹(anacetrapib)或CETP疫苗(CETi-1)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與甲狀腺受體激動(dòng)劑——例如且優(yōu)選D-甲狀腺素、3,5,3'-三碘甲狀腺原氨酸(T3)、CGS 23425或阿昔替羅(axitirome)(CGS 26214)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與選自他汀類的HMG-CoA還原酶抑制劑——例如且優(yōu)選洛伐他汀((lovastatin))、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)或匹伐他汀(pitavastatin)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與角鯊烯合成抑制劑——例如且優(yōu)選BMS-188494或TAK-475——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與ACAT抑制劑——例如且優(yōu)選阿伐麥布(avasimibe)、甲亞油酰胺(melinamide)、帕替麥布(pactimibe)、依魯麥布(eflucimibe)或SMP-797——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與MTP抑制劑——例如且優(yōu)選英普他派(implitapide)、BMS-201038、R-103757或JTT-130——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與PPAR-γ激動(dòng)劑——例如且優(yōu)選吡格列酮(pioglitazone)或羅格列酮(pioglitazone)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與PPAR-δ激動(dòng)劑——例如且優(yōu)選GW 501516或BAY 68-5042——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與膽固醇吸收抑制劑——例如且優(yōu)選依澤替米貝(ezetimibe)、替奎安(tiqueside)或帕馬苷(pamaqueside)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與脂肪酶抑制劑——例如且優(yōu)選奧利司他(orlistat)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與聚合膽汁酸吸附劑——例如且優(yōu)選消膽胺(cholestyramine)、考來(lái)替泊(colestipol)、colesolvam、考來(lái)膠(CholestaGel)或考來(lái)替蘭(colestimide)——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與膽汁酸再吸收抑制劑——例如且優(yōu)選ASBT(＝IBAT)抑制劑，例如AZD-7806、S-8921、AK-105、BARI-1741、SC-435或SC-635——組合給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與脂蛋白(a)拮抗劑——例如且優(yōu)選吉卡賓鈣(gemcabene calcium)(CI-1027)或煙酸——組合給藥。
本發(fā)明還提供包含至少一種本發(fā)明的化合物、通常連同一種或多種惰性、非毒性、藥學(xué)上合適的賦形劑的藥物，并提供所述藥物用于上述目的的用途。
本發(fā)明的化合物可全身和/或局部地作用。為此，它們可以合適的方式給藥，例如通過口服、腸胃外、肺、鼻、舌下、舌、頰、直腸、真皮、透皮、結(jié)膜或耳的途徑給藥，或作為植入物或支架。
本發(fā)明的化合物可以適合于這些給藥途徑的給藥形式進(jìn)行給藥。
用于口服給藥的合適給藥形式為這樣的給藥形式，即所述給藥形式根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)發(fā)揮功能、快速和/或以經(jīng)修飾的方式釋放本發(fā)明化合物，并且含有呈結(jié)晶和/或無(wú)定形和/或溶解形式的本發(fā)明化合物，例如片劑(未包衣或包衣片劑，例如具有耐胃液包衣或延緩溶解的包衣或不溶性包衣的片劑，所述包衣控制本發(fā)明化合物的釋放)、在口腔中快速崩解的片劑或膜劑/扁片劑(oblate)、膜劑/凍干劑、膠囊(例如，硬明膠或軟明膠膠囊)、糖衣片劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、乳劑、懸液劑、氣霧劑或溶液劑。
腸胃外給藥可在避免吸收步驟(例如，靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心臟內(nèi)、脊柱內(nèi)或腰內(nèi)途經(jīng))的情況下完成，或在包括吸收(例如，肌肉、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮或腹膜內(nèi)途經(jīng))的情況下完成。適用于腸胃外給藥的給藥形式包括溶液劑、懸液劑、乳劑、凍干劑或無(wú)菌粉劑形式的注射劑和輸注劑。
對(duì)于其他的給藥途徑，合適的實(shí)例為可吸入的藥劑形式(包括粉末吸入劑、噴霧劑)、滴鼻劑、溶液劑或噴霧，用于經(jīng)舌、舌下或頰給藥的片劑、膜劑/扁片劑或膠囊劑，栓劑、耳部或眼部制劑、陰道膠囊劑、水性懸液劑(洗劑、振蕩合劑(shaking mixture))、親脂性懸液劑、軟膏劑、霜?jiǎng)⑼钙ぶ委熛到y(tǒng)(例如貼劑)、乳劑、糊劑、泡沫劑、灑粉劑(dusting powder)、植入物或支架。
優(yōu)選的是口服或腸胃外給藥，尤其是口服給藥。
本發(fā)明的化合物可轉(zhuǎn)化為所述的給藥形式。這可用本身已知的方式，通過與惰性的、非毒性的、藥學(xué)上合適的賦形劑混合來(lái)完成。這些賦形劑包括載體(例如，微晶纖維素、乳糖、甘露醇)、溶劑(例如，液體聚乙二醇)、乳化劑和分散劑或潤(rùn)濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉、聚氧脫水山梨糖醇油酸酯)、粘合劑(例如，聚乙烯基吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如，白蛋白)、穩(wěn)定劑(例如，抗氧化劑，如抗壞血酸)、著色劑(例如，無(wú)機(jī)顏料，如氧化鐵)，以及風(fēng)味和/或氣味的矯正劑。
通常，已發(fā)現(xiàn)有利的是，在腸胃外給藥的情況下，給予量為約0.001至1mg/kg、優(yōu)選約0.01至0.5mg/kg體重，以實(shí)現(xiàn)有效的結(jié)果。在口服給藥的情況下，所述劑量為約0.001至2mg/kg、優(yōu)選約0.001至1mg/kg體重。
然而，在某些情況下，可能有必要偏離所述用量，特別是根據(jù)體重、給藥途徑、個(gè)體對(duì)活性化合物的響應(yīng)、制劑的性質(zhì)及進(jìn)行給藥的時(shí)間或間隔。因此，在某些情況下，用低于上述最低量處理可能是足夠的，而在其他情況下，必須超過所述的上限。當(dāng)給予較大的量時(shí)，建議可將其分成一天內(nèi)幾個(gè)單獨(dú)的劑量。
下列工作實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明。本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。
除非另有說(shuō)明，在下列試驗(yàn)和實(shí)施例中的百分比為重量百分比；份為重量份。液體/液體溶液的溶劑比、稀釋比和濃度數(shù)據(jù)在各自情況下基于體積計(jì)。
A.實(shí)施例
縮寫和首字母縮略詞：
aq. 水溶液
calc. 計(jì)算的
br. 寬信號(hào)(NMR耦合模式)
CAS No. 化學(xué)文摘服務(wù)編號(hào)
δ NMR譜中的位移(表示為)
d 雙重峰(NMR耦合模式)
TLC 薄層色譜法
DCI 直接化學(xué)電離(在MS中)
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亞砜
EDCI N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N’-乙基碳二亞胺
eq. 當(dāng)量
ESI 電噴霧電離(在MS中)
Et 乙基
ent 對(duì)映純的
h 小時(shí)
HATU N-[(二甲基氨基)(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亞
甲基]-N-甲基甲銨六氟磷酸鹽
HOBT 1H-苯并三唑-1-醇
HPLC 高壓、高效液相色譜法
HRMS 高分辨質(zhì)譜法
conc. 濃
LC-MS 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用
LiHMDS 六甲基二硅基氨基鋰
m 多重峰
Me 甲基
min 分鐘
MS 質(zhì)譜法
NMR 核磁共振譜法
Pd2dba3 三(二亞芐基丙酮)二鈀
Ph 苯基
q 四重峰(NMR耦合模式)
quint. 五重峰(NMR耦合模式)
rac 外消旋的
RF 保留因子(在薄層色譜中)
RuPhos 2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯(lián)苯
RT 室溫
Rt 保留時(shí)間(在HPLC中)
s 單峰(NMR耦合模式)
t 三重峰(NMR耦合模式)
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
TBTU (苯并三唑-1-基氧基)雙二甲基氨基甲基鎓氟硼酸鹽
UV 紫外光譜法
v/v (溶液的)體積比
Xantphos 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽
XPHOS 二環(huán)己基-(2',4',6'-三異丙基聯(lián)苯-2-基)膦
LC-MS和HPLC方法：
LC-MS方法(分析型)：
方法A：
MS儀器類型：Waters ZMD；HPLC儀器類型：Waters 1525；柱：Phenomenex Luna 3μC18(2)30mm x 4.6mm；流動(dòng)相A：水0.1％甲酸，流動(dòng)相B：乙腈0.1％甲酸；梯度：0.0min 95％A->0.5min 95％A->4.5min 5％A->5.5min 5％A；流速：2ml/min；UV檢測(cè)：DAD。
方法B：
MS儀器類型：Waters Micromass ZQ2000；HPLC儀器類型：Waters Acquity UPLC系統(tǒng)；柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7Mikron100mm x 2.1mm；流動(dòng)相A：水0.1％甲酸，流動(dòng)相B：乙腈0.1％甲酸；梯度：0.0min 95％A->0.4min 95％A->6.0min 5％A->6.8min 5％A；流速：0.4ml/min；UV檢測(cè)：PDA。
方法C：
MS儀器類型：Waters ZQ；HPLC儀器類型：HP1100系列；柱：Phenomenex Luna 3μC18(2)30mm x 4.6mm；流動(dòng)相A：水0.1％甲酸，流動(dòng)相B：乙腈0.1％甲酸；梯度：0.0min 95％A->0.5min 95％A->4.5min 5％A->5.5min 5％A；流速：2ml/min；UV檢測(cè)：PDA。
方法D：
儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統(tǒng)；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ50x 1mm；流動(dòng)相A：1L水+0.25ml 99％濃度甲酸；流動(dòng)相B：1L乙腈+0.25ml 99％濃度甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A柱溫箱：50℃；流速：0.40ml/min；UV檢測(cè)：210–400nm。
方法E：
儀器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ50x 1mm；流動(dòng)相A：1L水+0.5ml50％濃度甲酸；流動(dòng)相B：1L乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；柱溫箱：50℃；流速：0.33ml/min；UV檢測(cè)：210nm。
LC-MS方法(制備型)：
方法F：
MS儀器類型：Agilent 1260Infinity純化系統(tǒng)。Agilent 6100系列單四極桿LC/MS；柱：XSEELECT CSH Prep C18 5μm OBD，30x 150mm；流動(dòng)相A：0.1％濃度甲酸水溶液，流動(dòng)相B：0.1％甲酸在乙腈中；梯度：10％-95％，22min，以一個(gè)特定集中的梯度為中心；流速：60ml/min。樣品：注射20-60mg/ml的于DMSO(+任選的甲酸和水)中的溶液。
方法G
MS儀器類型：Agilent 1260Infinity純化系統(tǒng)。Agilent 6100系列單四極桿LC/MS；柱：XBridge Prep C18 5μm OBD，30x 150mm；流動(dòng)相A：0.1％氨水，流動(dòng)相B：0.1％氨水于乙腈中；梯度：10％-95％，22min，以一個(gè)特定集中的梯度為中心；流速：60ml/min。樣品：注射20-60mg/ml的于DMSO(+任選的甲酸和水)溶液。
方法H(GC-MS)
儀器：Thermo Scientific DSQII，Thermo Scientific Trace GC Ultra；柱：Restek RTX-35MS，15m x 200μm x 0.33μm；氦氣恒定流速：1.20ml/min；柱溫箱：60℃；入口：220℃；梯度：60℃，30℃/min→300℃(保持3.33min)。
方法I(LC-MS)：
儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC體系；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ30x 2mm；流動(dòng)相A：1L水+0.25ml 99％甲酸，流動(dòng)相B：1L乙腈+0.25ml 99％濃度甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A柱溫箱：50℃；流速：0.60ml/min；UV檢測(cè)：208–400nm。
方法J：
儀器：Thermo Fisher-Scientific DSQ；化學(xué)電離；反應(yīng)氣體NH3；源溫度：200℃；電離能70eV。
方法K(LC-MS)：
MS儀器：Waters(Micromass)QM；HPLC儀器：Agilent 1100系列；柱：Agilent ZORBAX Extend-C18 3.0x 50mm 3.5微米；流動(dòng)相A：1L水+0.01mol碳酸銨，流動(dòng)相B：1L乙腈；梯度：0.0min 98％A→0.2min 98％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；柱溫箱：40℃；流速：1.75ml/min；UV檢測(cè)：210nm。
方法L(LC-MS)：
儀器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ50x 1mm；流動(dòng)相A：1L水+0.5ml50％甲酸，流動(dòng)相B：1L乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度：0.0min97％A→0.5min 97％A→3.2min 5％A→4.0min 5％A；柱溫箱：50℃；流速：0.3ml/min；UV檢測(cè)：210nm。
方法M(LC-MS，分析型)：
MS儀器：Waters(Micromass)Quattro Micro；儀器Waters UPLC Acquity；柱：Waters BEH C18 1.7μ50x 2.1mm；流動(dòng)相A：1L水+0.01mol甲酸銨，流動(dòng)相B：1L乙腈；梯度：0.0min 95％A→0.1min95％A→2.0min 15％A→2.5min 15％A→2.51min 10％A→3.0min10％A；柱溫箱：40℃；流速：0.5ml/min；UV檢測(cè)：210nm。
方法N(LC-MS，分析型)：
儀器：Agilent MS Quad 6150；HPLC：Agilent 1290；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ50x 2.1mm；流動(dòng)相A：1L水+0.25ml 99％甲酸，流動(dòng)相B：1L乙腈+0.25ml 99％濃度甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.3min 90％A→1.7min 5％A→3.0min 5％A；柱溫箱：50℃；流速：1.20ml/min；UV檢測(cè)：205-305nm。
方法O(LC/MS，分析型)：
MS儀器類型：Thermo Scientific FT-MS；UHPLC+儀器類型：Thermo Scientific UltiMate 3000；柱：Waters，HSST3，2.1x 75mm，C18 1.8μm；流動(dòng)相A：1L水+0.01％甲酸；流動(dòng)相B：1L乙腈+0.01％甲酸；梯度：0.0min 10％B→2.5min 95％B→3.5min 95％B；柱溫箱：50℃；流速：0.90ml/min；UV檢測(cè)：210nm/最佳積分路徑210-300nm。
方法P(LC/MS，分析型)：
MS儀器類型：HP 6130MSD；HPLC儀器類型：Agilent 1290系列；UV DAD；柱：Waters Acquity HSS T3 1.8μm 2.1mm x 75mm；流動(dòng)相A：乙酸銨(10mM)+水/甲醇/乙腈(9.0:0.6:0.4)，流動(dòng)相B：乙酸銨(10mM)+水/甲醇/乙腈(1.0:5.4:3.6)，梯度：A/B：80/20(0.0min)→(1.5min)→0/100(1.5min)；流速：0.6ml/min；柱溫箱：35℃；UV檢測(cè)：215和238nm。
下列段落中所報(bào)道的1H NMR譜中質(zhì)子信號(hào)的多重性表示在各自情況下所觀察到的信號(hào)形式，且不考慮任何更高階的信號(hào)現(xiàn)象。在所有的1H NMR譜數(shù)據(jù)中，化學(xué)位移δ以ppm表示。
此外，起始材料、中間體和工作實(shí)例可作為水合物的形式存在。沒有定量測(cè)定水含量。在某些情況下，水合物可能會(huì)影響1H NMR譜并且可能改變和/或顯著加寬1H NMR中的水信號(hào)。
除非另有說(shuō)明，否則在下列試驗(yàn)和實(shí)施例中的百分比為重量百分比；份為重量份。液體/液體溶液的溶劑比例、稀釋比和濃度數(shù)據(jù)在各自情況下基于體積計(jì)。
下列段落中所報(bào)道的1H NMR譜中質(zhì)子信號(hào)的多重性表示在各自情況下所觀察到的信號(hào)形式，且不考慮任何更高階的信號(hào)現(xiàn)象。在所有的1H NMR譜數(shù)據(jù)中，化學(xué)位移δ以ppm表示。
當(dāng)本發(fā)明的化合物通過上述方法——其中流動(dòng)相含有添加劑(例如，三氟乙酸、甲酸或氨)——用制備型HPLC純化時(shí)，若本發(fā)明的化合物含有足夠的堿性或酸性官能團(tuán)，則本發(fā)明的化合物可以鹽——例如三氟乙酸鹽、甲酸鹽或銨鹽——的形式獲得。這些鹽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿或酸。
在下文所述的本發(fā)明的合成中間體和工作實(shí)施例的情況中，指定為相應(yīng)堿或酸的鹽的形式的任何化合物通常為具有未知確切化學(xué)計(jì)量組成的鹽，如通過各自的制備方法和/或純化方法所獲得的。除非更詳細(xì)地說(shuō)明，對(duì)諸如“鹽酸鹽”、“三氟乙酸鹽”、“鈉鹽”或“x HCl”、“x CF3COOH”、“x Na+”的名稱和結(jié)構(gòu)式的補(bǔ)充，因此不應(yīng)理解為在這些鹽的情況下的化學(xué)計(jì)量意義，而僅具有關(guān)于其中所存在的成鹽組分的描述性特征。
這相應(yīng)地適用：如果合成中間體或工作實(shí)施例或其鹽通過所述的制備和/或純化方法以具有未知化學(xué)計(jì)量組成(如果他們?yōu)樗x的烈性)的溶劑合物(例如水合物)的形式獲得。
起始材料和中間體：
實(shí)施例1A
3-[(2,6-二氟芐基)氧基]吡啶-2-胺
在室溫下，將51g(953mmol，1.05當(dāng)量)甲醇鈉溶解于1000ml甲醇中，加入100g(908mmol，1當(dāng)量)的2-氨基-3-羥基吡啶，并將混合物在室溫下再攪拌15min。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，將殘余物溶于2500ml二甲基亞砜，并加入197g環(huán)己基甲基溴(953mmol，1.05當(dāng)量)2,6-二氟芐基溴。在室溫下4h后，向反應(yīng)混合物中倒入20L水并攪拌15min，并濾出固體。將固體用1L水、100ml異丙醇和500ml石油醚洗滌，并在高真空下干燥。這得到171g標(biāo)題化合物(理論值的78％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.10(s，2H)；5.52(br，s，2H)，6.52(dd，1H)；7.16–7.21(m，3H)；7.49–7.56(m，2H)。
實(shí)施例2A
5-溴-3-[(2,6-二氟芐基)氧基]吡啶-2-胺
將32.6g(138mmol，1當(dāng)量)3-[(2,6-二氟芐基)氧基]吡啶-2-胺(實(shí)施例1A)懸浮于552ml 10％濃度硫酸水溶液中，并將混合物冷卻至0℃。將8.5ml(165mmol，1.2當(dāng)量)溴溶解于85ml乙酸中，然后在90min的時(shí)間內(nèi)，逐滴加入冰冷卻的反應(yīng)溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃下再攪拌90min，然后將內(nèi)容物用600ml乙酸乙酯稀釋，并分離出水相。將水相用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相合并，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥并濃縮。將殘余物溶解于二氯甲烷中并在硅膠上色譜分離(石油醚/乙酸乙酯梯度作為流動(dòng)相)。這得到24g(理論值的55％)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0,96min
MS(ESpos)：m/z＝315.1/317.1(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.14(s，2H)；5.83(br.s，2H)；7.20(t，2H)；7.42(d，1H)；7.54(q，1H)；7.62(d，1H)。
實(shí)施例3A
6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
將16g粉末狀分子篩和52.7ml(380.8mmol；5當(dāng)量)2-氯乙酰乙酸乙酯加入到24g(76.2mmol；1當(dāng)量)在400ml乙醇中的5-溴-3-[(2,6-二氟芐基)氧基]吡啶-2-胺(實(shí)施例2A)中，并將混合物在回流下加熱過夜。再加入8g的分子篩，并將混合物在回流下再加熱24h。將反應(yīng)混合物冷卻并在減壓下濃縮，將殘余物溶于二氯甲烷并在硅膠上色譜分離(二氯甲烷/甲醇20:1作為流動(dòng)相)。將含產(chǎn)物的級(jí)分濃縮并將殘余物在100ml二乙醚中攪拌30min。將產(chǎn)物濾出，用少量的二乙醚洗滌并干燥。這得到15g(理論值的45％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法E)：Rt＝1.43min
MS(ESpos)：m/z＝414.9/416.8(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.36(t，3H)；2.54(s，3H；被二甲基亞砜信號(hào)掩蓋)；4.37(q，2H)；5.36(s，2H)；7.25(t，2H)；7.42(d，1H)；7.61(q，1H)；9.00(d，1H)。
實(shí)施例4A
6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將12.0ml(12.0mmol)1M氫氧化鈉水溶液加入5.0g(11.8mmol)在30ml乙醇和70ml四氫呋喃中的6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯(實(shí)施例3A)溶液中。將混合物在回流下加熱并攪拌18h。然后將混合物在減壓下濃縮，并將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將水相分離出，并加入1M鹽酸水溶液直到pH達(dá)到3。將得到的水性混合物過濾，并將沉淀物用乙酸乙酯洗滌并在高真空下干燥。這得到4.7g目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的100％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝2.94和3.02min；m/z＝397.399(M+H)+
實(shí)施例5A
外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將870mg(6.4mmol)1-羥基-7-氮雜苯并三唑和1.22g(6.4mmol)的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺加入2.1g(5.3mmol)6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸(實(shí)施例4A)、2.7ml(15.7mmol)二異丙基乙胺和1.28g(6.4mmol)的外消旋-(1-氨基-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例18A)于30ml四氫呋喃的溶液中。將混合物在室溫下攪拌18h，然后在減壓下濃縮。將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相移除并用水和飽和的氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(120g硅膠柱，流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至100％)。這得到2.9g目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的94％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝4.14min；m/z＝581.583(M+H)+
實(shí)施例6A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、42mg(0.21mmol)3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶、14mg(0.017mmol)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)/二氯甲烷絡(luò)合物和166mg(0.51mmol)碳酸銫于0.5ml水和2ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在100℃下在封閉的管中攪拌2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至50％)。這得到90mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的90％)。
LC-MS(方法C)：Rt＝3.11min；m/z＝580(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.95(t，3H)，1.24(s，3H)，1.42(s，9H)，1.61(dd，1H)，1.69(s，1H)，1.83(dd，1H)，2.77(s，3H)，3.76(ddd，2H)，4.58(s，1H)，5.44(s，2H)，6.95(t，2H)，7.04(d，1H)，7.31–7.40(m，2H)，7.92(ddd，1H)，8.63(dd，1H)，8.87(dd，1H)，9.33(d，1H)。
實(shí)施例7A
外消旋-{1-[({6-環(huán)丙基-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、38μl(0.21mmol)2-環(huán)丙基-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷、14mg(0.017mmol)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)/二氯甲烷絡(luò)合物和166mg(0.51mmol)碳酸銫于0.5ml水和2ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在100℃下在封閉的管中攪拌2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并且將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至50％)。這得到56mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的60％)。
LC-MS(方法C)：Rt＝3.22min，m/z＝543(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.70–0.74(m，2H)，0.92–0.97(m，5H)，1.24(s，3H)，1.42(s，9H)，1.56–1.65(m，1H)，1.81(td，1H)，1.89–1.95(m，1H)，2.70(s，3H)，3.71(dd，1H)，3.78(dd，1H)，4.57(s，1H)，5.32(s，2H)，6.56(d，1H)，6.89–6.96(m，2H)，7.08(s，1H)，7.29-7.37(m，1H)，8.87(s，1H)。
實(shí)施例8A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、18mg(0.26mmol)1H-吡唑、1.3mg(0.009mmol)氧化亞銅(I)、4.7mg(0.034mmol)2-羥基苯甲醛肟和112mg(0.34mmol)碳酸銫于1ml乙腈中的混合物用氬氣脫氣5min，并在82℃下在封閉的管中攪拌18h。將反應(yīng)混合物濃縮，并且將殘余物在二氯甲烷和水之間分配。將有機(jī)相移除并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至100％)。這得到15mg目標(biāo)產(chǎn)物實(shí)施例8A(理論值的13％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝3.76min，m/z＝569(M+H)+
實(shí)施例9A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(甲氧基甲基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、29mg(0.19mmol)(甲氧基甲基)三氟硼酸鉀、1.9mg(0.008mmol)乙酸鈀(II)、8.0mg(0.017mmol)RuPhos和168mg(0.52mmol)碳酸銫于0.1ml水和1ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在100℃下在封閉的管中攪拌18h。將反應(yīng)混合物濃縮，并將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至50％)。這得到60mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的64％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝3,08min；m/z＝547,1(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.95(t，3H)，1.42(s，9H)，1.43(s，3H)，1.60(dd，1H)，1.66(s，1H)，1.81(dd，1H)，2.73(s，3H)，3.38(s，3H)，3.75(ddd，2H)，4.45(s，2H)，4.57(s，1H)，5.33(s，2H)，6.86(d，1H)，6.93(dd，2H)，7.29–7.38(m，1H)，9.03(d，1H)。
實(shí)施例10A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將434mg(0.75mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、228mg(0.90mmol)雙(頻哪醇)二硼、30mg(0.037mmol)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)/二氯甲烷絡(luò)合物和220mg(2.2mmol)乙酸鉀于4ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在80℃下在封閉的管中攪拌18h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)相移除，并用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到563mg粗目標(biāo)產(chǎn)物。
LC-MS(方法A)：Rt＝2.72min；m/z＝547.1(M+H)+
實(shí)施例11A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-羥基-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.16mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例10A)、0.16ml的30％濃度過氧化氫水溶液和1ml 1M氫氧化鈉水溶液于2ml四氫呋喃中的混合物在0℃下攪拌30min。將所得的混合物在乙酸乙酯和1％濃度檸檬酸水溶液之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(12g硅膠柱，流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至100％)。這得到50mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的60％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝2.79min；m/z＝519(M+H)+
實(shí)施例12A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(二氟甲氧基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將50mg(0.10mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-羥基-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例11A)、71mg(0.47mmol)氯二氟乙酸鈉和226mg(0.69mmol)碳酸銫于1ml二甲基甲酰胺中在80℃下攪拌2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(12g硅膠柱，流動(dòng)相：乙酸乙酯/環(huán)己烷，梯度0％至50％)。這得到13mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的24％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝3.86min；m/z＝569(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.95(t，3H)，1.24(s，3H)，1.42(s，9H)，1.60(dd，1H)，1.63(s，1H)，1.82(dd，1H)，2.73(s，3H)，3.73(ddd，2H)，4.56(s，1H)，5.33(s，2H)，6.52(t，1H)，6.75(d，1H)，6.94(dd，1H)，7.30–7.46(m，2H)，9.10(d，1H)。
實(shí)施例13A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1,3-噁唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、40mg(0.21mmol)5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)噁唑、14mg(0.017mmol)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)/二氯甲烷絡(luò)合物和166mg(0.51mmol)碳酸銫于0.5ml水和2ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在100℃下在封閉的管中攪拌2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至50％)。這得到43mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的44％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝3,54min；m/z＝570(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.95(t，3H)，1.25(s，3H)，1.42(s，9H)，1.55–1.67(m，2H)，1.78–1.88(m，1H)，2.75(s，3H)，3.76(ddd，2H)，4.58(s，1H)，5.43(s，2H)，6.95(t，2H)，7.04(d，1H)，7.30–7.40(m，2H)，7.92(s，1H)，9.46(d，1H)。
實(shí)施例14A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸甲酯
將0.5ml(2.87mmol)二異丙基乙胺加入390mg(2.17mmol)2-氯-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯和450mg(1.80mmol)3-[(2,6-二氟芐基)氧基]-5-甲基吡啶-2-胺于5ml 1,2-二甲氧基乙烷中的溶液中，并將混合物在回流下攪拌18h。將反應(yīng)混合物濃縮，并將殘余物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。將有機(jī)相移除，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(40g硅膠柱，流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至100％)。這得到280mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的41％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝2,46min；m/z＝377(M+H)+
實(shí)施例15A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將0.75ml(0.75mmol)1M氫氧化鈉水溶液加入270mg(0.745mmol)8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸甲酯(實(shí)施例14A)于10ml甲醇的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18h。將0.75ml(0.75mmol)1M氫氧化鈉水溶液加入該混合物中，并在室溫下再繼續(xù)攪拌5h。將所得的混合物冷卻至5℃，并通過加入1.5ml1M鹽酸水溶液進(jìn)行中和。將所得的混合物濃縮至干燥，并將殘余物用甲苯共沸蒸餾，得到350mg目標(biāo)化合物(理論值的100％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝2.30min；m/z＝363(M+H)+
實(shí)施例16A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將118mg(0.87mmol)1-羥基-7-氮雜苯并三唑和166mg(0.87mmol)1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺加入261mg(0.72mmol)8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸(實(shí)施例15A)、372μl(2.14mmol)二異丙基乙胺和174mg(0.86mmol)外消旋-(1-氨基-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例18A)于10ml四氫呋喃中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌2天并在減壓下濃縮。將殘余物在二氯甲烷和水之間分配。將有機(jī)相移除，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法純化(40g硅膠柱，流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至100％)。這得到258mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的66％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝2.76min；m/z＝547(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.78(dd，3H)，1.11(s，3H)，1.28(s，9H)，1.59–1.48(m，1H)，1.72–1.63(m，1H)，2.33(d，3H)，3.26(dd，1H)，3.48(dd，1H)，3.73(s，2H)，3.97(s，3H)，4.70(s，1H)，5.29(s，2H)，6.46(d，1H)，6.94(dd，2H)，7.40–7.33(m，2H)，7.46(s，1H)。
實(shí)施例17A
外消旋-(2-氰基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在室溫(最高溫度30℃)下，將30g(305.7mmol)外消旋-2-氨基-2-甲基丁腈緩慢地加入73.38g(336.2mmol)二甲酸二叔丁基酯中。將混合物在室溫下攪拌過夜。加入二氯甲烷并將該混合物用1N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次。將有機(jī)相分離出，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮(最高溫度30℃)。這得到44.2g目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的73％)。
GC-MS(方法H)：Rt：4.04min，m/z：98(M-Boc)+
實(shí)施例18A
外消旋-(1-氨基-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
將44.2g(222.93mmol)外消旋-(2-氰基丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例17A)溶解于500ml 7M氨于甲醇中的溶液，并加入45g雷尼鎳(50％在水中的懸浮液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在室溫下和在30bar的氫氣壓力下保持18小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過一層硅藻土過濾，用甲醇洗滌，并將合并的濾液在減壓(最高溫度：40℃)下濃縮。這得到45g目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的100％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.18min
MS(ESpos)：m/z＝203(M+H)+
實(shí)施例19A
3-(芐氧基)-5-溴吡啶-2-胺
首先將200g(1mol)2-氨基-3-芐氧基吡啶加入4L二氯甲烷中，并在0℃下，在30min內(nèi)加入62ml(1.2mol)溴于620ml二氯甲烷中的溶液。在加入結(jié)束后，將反應(yīng)溶液在0℃下攪拌60min。然后，將約4L飽和碳酸氫鈉水溶液加入該混合物中。將有機(jī)相移除并濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜法(石油醚/乙酸乙酯6:4)純化，并將產(chǎn)物級(jí)分濃縮。這得到214g(理論值的77％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.92min
MS(ESpos)：m/z＝279(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.16(s，2H)，5.94-6.00(m，2H)，7.26-7.29(m，1H)，7.31-7.36(m，1H)，7.37-7.43(m，2H)，7.47-7.52(m，2H)，7.57-7.59(m，1H)。
實(shí)施例20A
8-(芐氧基)-6-溴-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
在氬氣下，將200g(0.72mol)來(lái)自實(shí)施例19A的3-(芐氧基)-5-溴吡啶-2-胺、590g(3.58mol)2-氯代乙酰乙酸乙酯和436g的3A分子篩懸浮于6L乙醇中，并將該懸浮液在回流下攪拌72h。將反應(yīng)混合物通過硅膠過濾并濃縮。將殘余物通過硅膠色譜法(石油醚:乙酸乙酯9:1，然后6:4)純化，并將產(chǎn)物級(jí)分濃縮。這得到221g(理論值的79％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法I)：Rt＝1.31min
MS(ESpos)：m/z＝389(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.36(t，3H)，2.58(s，3H)，4.32-4.41(m，2H)，5.33(s，2H)，7.28-7.32(m，1H)，7.36-7.47(m，3H)，7.49-7.54(m，2H)，8.98(d，1H)。
實(shí)施例21A
8-(芐氧基)-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
在氬氣下，將105g(270mmol)來(lái)自實(shí)施例20A的8-(芐氧基)-6-溴-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯懸浮于4.2L 1,4-二噁烷中，并依次加入135.4g(539mmol，純度50％)三甲基環(huán)硼氧烷、31.2g(27mmol)四(三苯基膦)鈀(0)和78.3g(566mmol)碳酸鉀，并將該混合物在回流下攪拌8h。將反應(yīng)混合物的沉淀物冷卻至室溫，并通過硅膠過濾移除，并將濾液濃縮。將殘余物溶解于二氯甲烷中，并通過硅膠色譜法(二氯甲烷:乙酸乙酯＝9:1)純化。這得到74g(理論值的84.6％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法I)：Rt＝1.06min
MS(ESpos)：m/z＝325(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.35(t，3H)，2.34(br.s，3H)，2.56(s，3H)，4.31-4.38(m，2H)，5.28(br.s，2H)，6.99-7.01(m，1H)，7.35-7.47(m，3H)，7.49-7.54(m，2H)，8.68-8.70(m，1H)。
實(shí)施例22A
8-羥基-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
首先將74g(228mmol)來(lái)自實(shí)施例21A的8-(芐氧基)-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯加入1254ml二氯甲烷和251ml乙醇中，并在氬氣下加入20.1g 10％負(fù)載在活性碳上的鈀(用水潤(rùn)濕，50％)。將反應(yīng)混合物在室溫下和在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化過夜。將反應(yīng)混合物通過硅膠過濾并濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法(二氯甲烷:甲醇＝95:5)純化。這得到50.4g(理論值的94％)目標(biāo)化合物。
DCI-MS：(方法J)(ESpos)：m/z＝235.2(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.35(t，3H)，2.27(s，3H)，2.58(s，3H)，4.30-4.38(m，2H)，6.65(d，1H)，8.59(s，1H)，10.57(br.s，1H)。
實(shí)施例23A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
首先將20.00g(85.38mmol)來(lái)自實(shí)施例22A的8-羥基-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯、19.44g(93.91mmol)2,6-二氟芐基溴和61.20g(187.83mmol)碳酸銫于1.18L DMF中在60℃下攪拌5h。然后將反應(yīng)混合物倒入6.4L 10％濃度的氯化鈉水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)相用854ml 10％濃度氯化鈉水溶液洗滌、干燥、濃縮，并在室溫下、在高真空下干燥過夜。這得到28.2g(理論值的92％；純度約90％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.05min
MS(ESpos)：m/z＝361.1(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.38(t，3H)；2.36(s，3H)；4.35(q，2H)；5.30(s，2H)；7.10(s，1H)；7.23(t，2H)；7.59(q，1H)；8.70(s，1H)。
實(shí)施例24A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將220mg 8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯(實(shí)施例23A；0.524mmol，1當(dāng)量)溶解于7ml THF/甲醇(1:1)中，加入2.6ml 1N氫氧化鋰水溶液(2.6mmol，5當(dāng)量)，并將混合物在室溫下攪拌16h。將混合物在減壓下濃縮，并將殘余物用1N鹽酸水溶液酸化并攪拌15min。將固體濾出，并用水洗滌，并在減壓下干燥。這得到120mg標(biāo)題化合物(理論值的60％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.68min
MS(ESpos)：m/z＝333.1(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝2.34(s，3H)；5.28(s，2H)；7.09(s，1H)；7.23(t，2H)；7.58(q，1H)；8.76(s，1H)；13.1(br.s，1H)，[其他信號(hào)隱藏在DMSO信號(hào)下]。
實(shí)施例25A
8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
將15.78g(86.7mmol)2-(氯甲基)-3-氟吡啶鹽酸鹽(市售可得，還記載于US5593993A1，1997；WO2007/2181A2，2007中)和94.06g(288.9mmol)碳酸銫加入16.92g(72.2mmol)來(lái)自實(shí)施例22A的8-羥基-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯于956ml DMF中。將反應(yīng)混合物在60℃下攪拌過夜。將冷卻至室溫的反應(yīng)混合物過濾，將濾餅用乙酸乙酯洗滌，并且將濾液濃縮。將約500ml水加入殘余物中，并且將沉淀的固體濾出并在高真空下干燥。這得到24.1g(理論值的93％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.84min
MS(ESpos)：m/z＝344(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.35(t，3H)，2.35(s，3H)，2.54(s，3H，hidden by the DMSO signal)，4.35(q，2H)，5.40(s，2H)，7.08(s，1H)，7.55-7.62(m，1H)，7.82-7.89(m，1H)，8.48-8.52(m，1H)，8.70(s，1H)。
實(shí)施例26A
8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸鹽酸鹽
首先將24.06g(70.1mmol)來(lái)自實(shí)施例25A的8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯加入1.5L THF/甲醇(5:1)中，并加入350.4ml(350.4mmol)1N氫氧化鋰水溶液，并且將反應(yīng)混合物在40℃下攪拌2.5h。冷卻后，使用1N鹽酸水溶液將pH調(diào)節(jié)至約4，并且在減壓下除去溶液中的THF/甲醇。將殘余物冷卻，將沉淀的固體濾出并在減壓下干燥。這得到22.27g(理論值的100％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.55min
MS(ESpos)：m/z＝316(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝2.34(s，3H)，2.53(s，3H，hidden by the DMSO signal)，5.38-5.42(m，2H)，7.06(s，1H)，7.56-7.62(m，1H)，7.82-7.89(m，1H)，8.48-8.52(m，1H)，8.74(s，1H)，13.02(br.s，1H)。
實(shí)施例27A
5-氯-2-硝基吡啶-3-醇
在冰冷卻下，將30g 5-氯吡啶-3-醇(232mmol，1當(dāng)量)溶解于228ml濃硫酸中，并在0℃下緩慢加入24ml濃硝酸。將反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。將該混合物攪拌至冰/水混合物中并攪拌30min。將固體濾出，用冷水洗滌并用空氣干燥。這得到33g(理論值的82％)無(wú)需進(jìn)一步純化用于下一反應(yīng)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.60min
MS(ESneg)：m/z＝172.9/174.9(M-H)-
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝7.71(d，1H)；8.10(d，1H)；12.14(br.1H)。
實(shí)施例28A
5-氯-3-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-硝基吡啶
首先將20.0g(114.6mmol)來(lái)自實(shí)施例27A的5-氯-2-硝基吡啶-3-醇和56.0g(171.9mmol)碳酸銫加入319ml DMF中。加入17.51g(120.3mmol)2-(氯甲基)-3-氟吡啶(市售可得；另外記載于：K.Weidmann等人，Journal of Medicinal Chemistry 1992，35，438-450；US5593993，1997；WO2007/2181A2，2007)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入6.0g(41.2mmol)2-(氯甲基)-3-氟吡啶，并將混合物在室溫下攪拌24h。隨后，再加入6.0g(41.2mmol)2-(氯甲基)-3-氟吡啶和5.0g(15.3mmol)碳酸銫，并將該混合物在60℃下攪拌12h。將反應(yīng)混合物小心地加入2.3L 0.5M鹽酸水溶液中。將該混合物萃取三次，每次用500ml乙酸乙酯。將合并的有機(jī)相用500ml飽和氯化鈉水溶液洗滌，干燥并在減壓下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度：9/1至7/3)純化。這得到29.8g(理論值的92％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.94min.
MS(ESIpos)：m/z＝284(M+H)+.
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.59(d，2H)，7.53-7.60(m，1H)，7.80-7.87(m，1H)，8.26(d，1H)，8.40-8.47(m，2H)。
實(shí)施例29A
5-氯-3-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]吡啶-2-胺
在氬氣下，首先將29.8g(105.1mmol)來(lái)自實(shí)施例28A的5-氯-3-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-硝基吡啶加入317ml乙醇中。加入18.2g(325.7mmol)鐵粉，并將反應(yīng)混合物加熱至回流。緩慢逐滴加入80.4ml濃鹽酸，并將混合物在回流下再加熱6h。使用33％濃度氨水溶液而使反應(yīng)混合物為堿性，然后在減壓下濃縮。通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇，梯度95/5至90/10)純化，得到25.0g(理論值的94％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.70min
MS(ESIpos)：m/z＝254(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.27(d，2H)，5.87(br.s，2H)，7.32-7.35(m，1H)，7.51–7.58(m，2H)，7.77-7.85(m，1H)，7.45-7.50(m，1H)。
實(shí)施例30A
6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
將3.00g(11.83mmol)來(lái)自實(shí)施例29A的5-氯-3-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]吡啶-2-胺和9.73g(59.13mmol)2-氯-3-氧代丁酸乙酯溶解于72ml乙醇中，并且與4.5g分子篩一起在回流下攪拌6天。將混合物冷卻并過濾，將濾液在減壓下濃縮。將獲得的殘余物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度＝4/1至2/1)純化。這得到2.0g(理論值的46％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.07min
MS(ESIpos)：m/z＝364(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝1.36(t，3H)，2.56(s，3H；與溶劑峰重疊)，4.37(q，2H)，5.48(d，2H)，7.36(d，1H)，7.57-7.63(m，1H)，7.83-7.90(m，1H)，8.50(d，1H)，8.92(d，1H)。
實(shí)施例31A
6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將28.1ml(28.1mmol)1M氫氧化鋰水溶液加入2.0g(5.62mmol)來(lái)自實(shí)施例30A的6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯于110ml THF/甲醇(5:1)中，并將該混合物在40℃下攪拌2.5h。使用6N鹽酸水溶液，將已冷卻至室溫的反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)至約pH 4，將溶劑濃縮至其原體積的一半，將沉淀的固體抽濾，并在減壓下干燥。這得到1.97g(理論值的102％)目標(biāo)化合物(其中的一些可能為鹽酸鹽的形式)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.65min
MS(ESIpos)：m/z＝336(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝5.43-5.51(m，2H)，7.32(d，1H)，7.57-7.63(m，1H)，7.83-7.91(m，1H)，8.48-8.54(m，1H)，8.96-9.00(m，1H)，13.36(br.s，1H)，[其他的信號(hào)在溶劑峰下]。
實(shí)施例32A
外消旋-2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊腈
首先將8.0g(57.1mmol)5,5,5-三氟戊-2-酮[CAS登記號(hào)：1341078-97-4；市售可得，或甲基酮可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的文獻(xiàn)方法制得，例如通過a)根據(jù)Y.Bai等人，Angewandte Chemie 2012，51，4112-4116；K.Hiroi等人，Synlett 2001，263-265；K.Mikami等人，1982Chemistry Letters，1349-1352，由4,4,4-三氟丁醛的兩步法；b)或根據(jù)A.A.Wube等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry 2011，19，567-579；G.M.Rubottom等人，Journal of Organic Chemistry 1983，48，1550-1552；T.Chen等人，Journal of Organic Chemistry 1996，61，4716-4719，由4,4,4-三氟丁酸制得。產(chǎn)物可以通過蒸餾或色譜分離]加入47.8ml 2N在甲醇中的氨中，在室溫下加入3.69g(75.4mmol)氰化鈉和4.03g(75.4mmol)氯化銨，并將該混合物在回流下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，加入二乙醚，將存在的固體濾出。在標(biāo)準(zhǔn)壓力下將溶劑從濾液中蒸餾出。得到作為殘余物的8.7g標(biāo)題化合物(理論值的92％)，其無(wú)需進(jìn)一步純化用于隨后的階段。
GC-MS(方法H)：Rt＝1.90min
MS(ESpos)：m/z＝151(M-CH3)+
實(shí)施例33A
外消旋-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯
向?qū)嵤├?2A的8.7g(52.36mmol)外消旋-2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊腈于128ml四氫呋喃/水＝9/1中的初始進(jìn)料中加入22.43g(162.3mmol)碳酸鉀。在0℃下，緩慢地逐滴加入8.93g(52.36mmol)氯甲酸芐酯。然后，將混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝夭⒃谑覝叵聰嚢柽^夜。潷析出上層溶劑，將殘余物攪拌兩次，每次用100ml四氫呋喃，然后每次都潷析出上層溶液。將合并的有機(jī)相濃縮，并將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度9/1至4/1)純化。得到11.14g標(biāo)題化合物(理論值的68％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.01min
MS(ESpos)：m/z＝301(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.58(s，3H)，2.08-2.21(m，2H)，2.24-2.52(m，2H)，5.09(s，2H)，7.29-7.41(m，5H)，8.17(br.s，1H)。
實(shí)施例34A
對(duì)映異構(gòu)-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將11.14g來(lái)自實(shí)施例33A的外消旋-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak AZ-H，5μm，SFC，250x 50mm，流動(dòng)相：94％二氧化碳，6％甲醇，流速：200ml/min，溫度：38℃，壓力：135bar；檢測(cè)：210nm]。
對(duì)映異構(gòu)體A：4.12g(約79％ee)
Rt＝1.60min[SFC，Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：90％二氧化碳，10％甲醇，流速：3ml/min，溫度：30℃，檢測(cè)：220nm]。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.01min
MS(ESpos)：m/z＝301(M+H)+
實(shí)施例35A
對(duì)映異構(gòu)-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將11.14g來(lái)自實(shí)施例33A的外消旋-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak AZ-H，5μm，SFC，250x 50mm，流動(dòng)相：94％二氧化碳，6％甲醇，流速：200ml/min，溫度：38℃，壓力：135bar；檢測(cè)：210nm]。
對(duì)映異構(gòu)體B：4.54g(約70％ee，純度約89％)
Rt＝1.91min[SFC，Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：90％二氧化碳，10％甲醇，流速：3ml/min，溫度：30℃，檢測(cè)：220nm]。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.01min
MS(ESpos)：m/z＝301(M+H)+
實(shí)施例36A
對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將4.12g(13.17mmol)來(lái)自實(shí)施例34A的對(duì)映異構(gòu)-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)溶解于39ml 7N氨的甲醇溶液，并且在氬氣下加入4g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化過夜。再加入1g雷尼鎳(50％含水漿液)，并將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化5h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇沖洗并濃縮。得到3.35g(理論值的56％；純度約67％)標(biāo)題化合物，其無(wú)需進(jìn)一步純化用于隨后的階段。
LC-MS(方法I)：Rt＝1.68min
MS(ESpos)：m/z＝305(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.13(s，3H)，1.40(br.s，2H)，1.70-1.80(m，1H)，1.83-1.95(m，1H)，2.08-2.2(m，2H)，4.98(s，2H)，6.85(br.s，1H)，7.28-7.41(m，5H)。
實(shí)施例37A
對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將4.54g(13.45mmol；純度約89％)來(lái)自實(shí)施例35A的對(duì)映異構(gòu)-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于39ml 7N氨的甲醇溶液，并且在氬氣下加入5g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇沖洗并濃縮。得到4.20g(理論值的97％；純度約95％)目標(biāo)化合物，其無(wú)需進(jìn)一步純化用于隨后的階段。
LC-MS(方法K)：Rt＝2.19min
MS(ESpos)：m/z＝305(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.13(s，3H)，1.40(br.s，2H)，1.69-1.80(m，1H)，1.83-1.96(m，1H)，2.07-2.22(m，2H)，4.98(s，2H)，6.85(br.s，1H)，7.27-7.40(m，5H)。
實(shí)施例38A
對(duì)映異構(gòu)-{5,5,5-三氟-1-[({8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將70mg(0.20mmol)來(lái)自實(shí)施例26A的8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸鹽酸鹽、93mg(0.24mmol)HATU和129mg(1.00mmol)N,N-二異丙基乙胺加入1.4ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。隨后，加入100mg(0.31mmol；純度約95％)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)溶液與水混合并在室溫下攪拌45min。將存在的固體濾出，用水很好地洗滌并在高真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。這得到98mg(理論值的68％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.93min
MS(ESpos)：m/z＝602(M-TFA+H)+
實(shí)施例39A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將70mg(0.21mmol)來(lái)自實(shí)施例31A的6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸、87mg(0.23mmol)HATU和80mg(0.63mmol)N,N-二異丙基乙胺加入1.3ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。隨后，加入94mg(0.29mmol；純度約95％)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。這得到103mg(理論值的66％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.13min
MS(ESpos)：m/z＝622(M-TFA+H)+
實(shí)施例40A
{3-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2,2-二氟芐基}氨基甲酸叔丁酯三氟乙酸鹽
首先將100mg(0.30mmol)來(lái)自實(shí)施例24A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸、149mg(0.39mmol)HATU和117mg(0.90mmol)N,N-二異丙基乙胺加入1.0ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。然后加入82mg(0.39mmol)(3-氨基-2,2-二氟丙基)氨基甲酸叔丁酯，并將該混合物在室溫下攪拌0.5h。加入乙腈、水和TFA，并且將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。這得到93mg(理論值的79％；純度93％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.98min
MS(ESpos)：m/z＝525(M-TFA+H)+
實(shí)施例41A
外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯
將100mg(0.17mmol)外消旋-{1-[({6-溴-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例5A)、43mg(0.21mmol)1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑、14mg(0.017mmol)1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)/二氯甲烷絡(luò)合物和166mg(0.51mmol)碳酸銫于0.5ml水和2ml二噁烷中的混合物用氬氣脫氣5min，并在封閉的管中在100℃下攪拌18h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)相分離出，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度0％至50％)純化。這得到50mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的50％)。
LC-MS(方法A)：Rt＝3.11min；m/z＝583(M+H)+
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ[ppm]＝0.95(t，3H)，1.24(s，3H)，1.42(s，9H)，1.57–1.66(m，2H)，1.77–1.86(m，1H)，2.74(s，3H)，3.69–3.82(m，2H)，3.95(s，3H)，4.58(s，1H)，5.30(s，1H)，5.41(s，2H)，6.94(dd，3H)，7.20–7.24(m，1H)，7.34(ddd，1H)，7.67(s，1H)，7.77(s，1H)，9.21(d，1H)。
實(shí)施例42A
外消旋-2-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁腈
首先將13.0g(90.10mmol)4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-酮[市售可得或根據(jù)R.Acerete等人，Journal of Organic Chemistry 2011，76，10129-10139合成可得]加入25ml 7N氨的甲醇溶液中，在室溫下加入5.83g(118.93mmol)氰化鈉和6.36g(118.93mmol)氯化銨，并將該混合物在回流下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，并且將存在的固體濾除。濾液無(wú)需進(jìn)一步純化用于下一步驟。
實(shí)施例43A
外消旋-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯
將來(lái)自實(shí)施例42A的外消旋-2-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁腈粗品溶液加入16ml水中，加入37.36g(270.35mmol)碳酸鉀。在0℃下緩慢地滴加23.06g(135.18mmol)氯甲酸芐酯。然后，將混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝夭⒃谑覝叵聰嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物過濾，并用四氫呋喃重復(fù)洗滌殘余物。將濾液濃縮，并將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯＝9/1)純化。這得到11.60g標(biāo)題化合物(經(jīng)過兩個(gè)步驟為理論值的42％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.23min
MS(ESpos)：m/z＝305(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝-0.01(s，9H)，0.45-0.67(m，2H)，1.52(s，3H)，1.73-1.90(m，2H)，2.24-2.52(m，2H)，5.08(s，2H)，7.29-7.44(m，5H)，7.94(br.s，1H)。
實(shí)施例44A
對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將10.0g來(lái)自實(shí)施例43A的外消旋-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak AY-H，5μm，250x 20mm，流動(dòng)相：15％乙醇，85％異己烷，流速：20ml/min，溫度：30℃，檢測(cè)：220nm]。
對(duì)映異構(gòu)體A：4.19g(>99％ee)
Rt＝5.24min[Daicel Chiralpak AY-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：10％乙醇，90％異己烷，流速：1ml/min，溫度：45℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例45A
對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將10.0g來(lái)自實(shí)施例43A的外消旋-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak AY-H，5μm，250x 20mm，流動(dòng)相：15％乙醇，85％異己烷，流速：20ml/min，溫度：30℃，檢測(cè)：220nm]。
對(duì)映異構(gòu)體B：4.24g(>99％ee)
Rt＝6.89min[Daicel Chiralpak AY-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：10％乙醇，90％異己烷，流速：1ml/min，溫度：45℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例46A
對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將2.0g(6.57mmol)來(lái)自實(shí)施例44A的對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)溶解于31ml 7N氨的甲醇溶液，并在氬氣下加入2.44g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇沖洗并濃縮。這得到1.80g(理論值的87％；純度98％)目標(biāo)化合物，其無(wú)需進(jìn)一步純化用于下一步。
LC-MS(方法M)：Rt＝1.66min
MS(ESpos)：m/z＝309(M+H)+
實(shí)施例47A
對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將2.0g(6.57mmol)來(lái)自實(shí)施例45A的對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于31ml 7N氨的甲醇溶液，并在氬氣下加入2.44g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇沖洗并濃縮。這得到1.72g(理論值的83％；純度98％)目標(biāo)化合物，其無(wú)需進(jìn)一步純化用于下一步。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.78min
MS(ESpos)：m/z＝309(M+H)+
實(shí)施例48A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體A)
將100mg(0.30mmol)8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同149mg(0.39mmol)HATU和157μl(0.90mmol)N,N-二異丙基乙胺于0.99ml DMF中的初始進(jìn)料在室溫下攪拌20min。然后加入123mg(0.39mmol，純度98％)來(lái)自實(shí)施例46A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)，并將反應(yīng)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。然后加入19mg(0.06mmol)來(lái)自實(shí)施例46A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)，并將該混合物在室溫下再攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)溶液溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并、濃縮并在高真空下干燥。這得到151mg目標(biāo)化合物(理論值的66％，純度97％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.30min
MS(ESpos)：m/z＝623(M-TFA+H)+
實(shí)施例49A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
將100mg(0.30mmol)8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同149mg(0.39mmol)HATU和157μl(0.90mmol)N,N-二異丙基乙胺于0.99ml DMF中的初始進(jìn)料在室溫下攪拌20min。然后加入123mg(0.39mmol，純度98％)來(lái)自實(shí)施例47A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)，并將反應(yīng)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。然后加入19mg(0.06mmol)來(lái)自實(shí)施例47A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)，并將該混合物在室溫下再攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)溶液溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并、濃縮并在高真空下干燥。這得到168mg目標(biāo)化合物(理論值的75％，純度99％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.28min
MS(ESpos)：m/z＝623(M-TFA+H)+
實(shí)施例50A
外消旋-2-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊腈
首先將24.8g(156.6mmol)5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-酮加入45ml 7N氨的甲醇溶液中，在室溫下加入10.1g(206.8mmol)氰化鈉和10.9g(203.6mmol)氯化銨，并將該混合物在回流下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻，加入100ml THF，將固體濾出，并用THF洗滌兩次。濾液無(wú)需進(jìn)一步純化用于下一步。
實(shí)施例51A
外消旋-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯
首先將來(lái)自實(shí)施例50A的外消旋-2-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊腈的粗品溶液加入50ml水中，并加入64.95g(469.95mmol)碳酸鉀。在0℃下，緩慢逐滴加入33.55ml(234.98mmol)氯甲酸芐酯。然后將混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝兀⒃谑覝叵聰嚢柽^夜。濾出反應(yīng)混合物，用THF重復(fù)洗滌殘余物。將濾液濃縮，并將殘余物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯＝20/1)純化。這得到29.0g標(biāo)題化合物(理論值的58％)。
LC-MS(方法H)：Rt＝7.16min
MS(ESpos)：m/z＝183(M-C6H5CH2CO2[Cbz])
實(shí)施例52A
對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將8.49g來(lái)自實(shí)施例51A的外消旋-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Chiralcel OD-H 5μm 250x 50mm；流動(dòng)相：94％二氧化碳，6％異丙醇，流速：175ml/min，溫度：38℃，檢測(cè)：210nm]。
對(duì)映異構(gòu)體A：3.53g(>99％ee)
Rt＝1.21min[Chiralcel OD-3，100x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：90％二氧化碳，10％異丙醇，流速：3ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：210nm]。
實(shí)施例53A
對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將8.49g來(lái)自實(shí)施例51A的外消旋-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Chiralcel OD-H 5μm 250x 50mm；流動(dòng)相：94％二氧化碳，6％異丙醇，流速：175ml/min，溫度：38℃，檢測(cè)：210nm]。
對(duì)映異構(gòu)體B：3.53g(>98％ee)
Rt＝1.35min[Chiralcel OD-3，100x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：90％二氧化碳，10％異丙醇，流速：3ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：210nm]。
實(shí)施例54A
對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)
將2.50g(7.61mmol，純度97％)來(lái)自實(shí)施例52A的對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)溶解于36ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氬氣下加入2.83g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在25bar下氫化3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇洗滌并濃縮。這得到1.14g(理論值的45％，純度98％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法O)：Rt＝1.42min
MS(ESpos)：m/z＝323(M+H)+
實(shí)施例55A
對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)
將2.50g(7.61mmol，純度97％)來(lái)自實(shí)施例53A的對(duì)映異構(gòu)-[2-氰基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于36ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氬氣下加入2.83g雷尼鎳(50％含水漿液)。將反應(yīng)混合物在高壓釜中、在20-30bar下氫化3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用甲醇洗滌并濃縮。這得到2.34g(理論值的84％；純度88％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法O)：Rt＝1.41min
MS(ESpos)：m/z＝323(M+H)+
實(shí)施例56A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)-氨基]-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體A)
首先將100mg(0.30mmol)來(lái)自實(shí)施例24A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同120mg(0.32mmol)HATU和262μl(1.51mmol)N,N-二異丙基乙胺加入1.0ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。然后加入107mg(0.33mmol)來(lái)自實(shí)施例54A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體A)，將反應(yīng)溶液在室溫下攪拌過夜。然后將混合物用乙腈和水稀釋，加入TFA，并將該混合物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。這得到149mg目標(biāo)化合物(理論值的65％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.29min
MS(ESpos)：m/z＝637(M-TFA+H)+
實(shí)施例57A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)-氨基]-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將100mg(0.30mmol)來(lái)自實(shí)施例24A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同120mg(0.32mmol)HATU和262μl(1.51mmol)N,N-二異丙基乙胺加入1.0ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。然后加入121mg(0.33mmol，純度88％)來(lái)自實(shí)施例55A的對(duì)映異構(gòu)-[1-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基]氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)，并將反應(yīng)溶液在室溫下攪拌過夜。然后將混合物用乙腈和水稀釋，加入TFA，并將該混合物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。這得到189mg目標(biāo)化合物(理論值的83％)。
LC-MS(方法O)：Rt＝2.58min
MS(ESpos)：m/z＝637(M-TFA+H)+
實(shí)施例58A
3-氧代環(huán)丁腈
首先將25.0g(268.4mmol)3-亞甲基環(huán)丁腈和1.23g(5.91mmol)氯化釕(III)加入500ml二氯甲烷、500ml乙腈和800ml水中。然后在冰冷卻下，以每次少量的方式將235.4g(1100.6mmol)高碘酸鈉加入，且將該混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物過濾并用二氯甲烷萃取水相。將合并的有機(jī)相通過用少量二氯甲烷/甲醇(20/1)洗滌的短硅膠玻璃料進(jìn)行洗脫，并將濾液濃縮。將殘余物用200ml二氯甲烷稀釋，并且先用飽和硫酸鈉水溶液洗滌，然后再用飽和氯化鈉水溶液洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將油性殘余物用100ml冷的二乙醚攪拌，并且將沉淀的固體濾除并用少量冷的二乙醚洗滌。這得到13.61g(理論值的53％)標(biāo)題化合物。將母液濃縮并冷卻，并且將沉淀的固體抽濾出并使用少量的二乙醚洗滌。這再得到0.96g(理論值的4％)標(biāo)題化合物。
GC-MS(方法H)：Rt＝2.76min
MS(ESpos)：m/z＝95(M)+
實(shí)施例59A
3,3-二氟環(huán)丁腈
在氬氣下，首先將14.57g(153.2mmol)來(lái)自實(shí)施例58A的3-氧代環(huán)丁腈加入200ml無(wú)水二氯甲烷中，在0℃下，加入40.48ml(306.4mmol)溶解于50ml二氯甲烷的二乙基氨基三氟化硫，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后以每次少量的方式，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，冷卻至0℃，并攪拌30分鐘。將有機(jī)相分離出，水相用200ml二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)相用水洗滌兩次，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到15.2g(理論值的85％)的標(biāo)題化合物。
GC-MS(方法H)：Rt＝1.43min
MS(ESpos)：m/z＝98(M-F)+
實(shí)施例60A
3-(3,3-二氟環(huán)丁基)-3-氧代丙酸乙酯
在氬氣下，首先將0.208ml(3.20mmol)甲磺酸加入80ml無(wú)水THF中，加入20.93g(320.2mmol)鋅，并將該混合物在回流下攪拌10min。加入15.0g(128.1mmol)來(lái)自實(shí)施例59A的3,3-二氟環(huán)丁腈，并將該混合物在回流下再攪拌10min。將加熱浴關(guān)掉，在2.5小時(shí)內(nèi)逐滴加入28.41ml(256.2mmol)溴代乙酸乙酯于30ml無(wú)水THF中的溶液。將混合物在回流下攪拌15min，然后使其在室溫下靜置過夜。在冰冷卻下，逐滴加入100ml 10％濃度鹽酸水溶液，并且將該混合物攪拌過夜并使其溫?zé)嶂潦覝?。加?00ml水，并將混合物萃取三次，每次用150ml乙酸乙酯。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。在高真空下干燥后，將殘余物通過硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯＝9/1)純化。這得到4.37g(理論值的12％，純度約76％)標(biāo)題化合物。
GC-MS(方法H)：Rt＝3.43min
MS(ESpos)：m/z＝206(M)+
實(shí)施例61A
2-氯-3-(3,3-二氟環(huán)丁基)-3-氧代丙酸乙酯
在氬氣下，將4.37g(16.1mmol，純度約76％)來(lái)自實(shí)施例60A的3-(3,3-二氟環(huán)丁基)-3-氧代丙酸乙酯溶解于30.2ml無(wú)水二氯甲烷中，并加入1.94ml(24.2mmol)磺酰氯。然后將該混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)溶液用100ml乙酸乙酯稀釋，并且先用50ml水洗滌，然后再用50ml飽和氯化鈉水溶液洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾，并將濾液濃縮。在高真空下短暫干燥后，將殘余物通過硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯＝10/1)純化。這得到3.25g(理論值的68％，純度81％)標(biāo)題化合物。
GC-MS(方法H)：Rt＝3.75min
MS(ESpos)：m/z＝240(M)+
實(shí)施例62A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3甲酸乙酯
將400mg(1.60mmol)3-[(2,6-二氟芐基)氧基]-5-甲基吡啶-2-胺溶解于15ml乙醇中，并加入950mg(3.12mmol，純度81％)來(lái)自實(shí)施例61A的2-氯-3-(3,3-二氟環(huán)丁基)-3-氧代丙酸乙酯和636mg 3A分子篩。然后將反應(yīng)混合物在微波中、150℃下攪拌4小時(shí)。加入475mg(1.60mmol，純度81％)來(lái)自實(shí)施例61A的2-氯-3-(3,3-二氟環(huán)丁基)-3-氧代丙酸乙酯，并將該混合物在微波中、150℃下再攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)懸浮液用50ml環(huán)己烷稀釋并過濾。將濾液濃縮、在高真空下干燥，并且通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度：50/1至5/1)純化。這得到127mg目標(biāo)化合物(理論值的18％，純度99％)。將過濾殘余物用乙酸乙酯萃取兩次并濾除，并且將濾液濃縮且在高真空下干燥。這再得到206mg目標(biāo)化合物(理論值的29％，純度99％)。
LC-MS(方法N)：Rt＝1.67min
MS(ESpos)：m/z＝437(M+H)+
實(shí)施例63A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將330mg(0.75mmol)來(lái)自實(shí)施例62A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯溶解于4ml THF中，加入54mg(2.25mmol)在2.2ml水中的氫氧化鋰，將混合物在室溫下攪拌過夜。再加入54mg(2.25mmol)在2.2ml水中的氫氧化鋰，并將該混合物在50℃下攪拌一小時(shí)。加入1.87ml 2N氫氧化鈉水溶液和4ml二噁烷/甲醇(1:1)，并將該混合物在50℃下攪拌2.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物稍微濃縮，并用1N鹽酸水溶液酸化。將形成的固體濾出，用少量的水和二乙醚洗滌，并在高真空下干燥。這得到219mg(理論值的69％，純度97％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法N)：Rt＝1.31min
MS(ESpos)：m/z＝409(M+H)+
實(shí)施例64A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將30mg(0.071mmol，純度97％)來(lái)自實(shí)施例63A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同30mg(0.078mmol)HATU和62μl(0.36mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.3ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。將30mg(0.086mmol；純度88％)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌2h。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的甲醇/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并并濃縮。這得到55mg目標(biāo)化合物(理論值的89％，純度93％)。
LC-MS(方法N)：Rt＝1.64min
MS(ESpos)：m/z＝695(M-TFA+H)+
實(shí)施例65A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
在氬氣下，首先將1.50g(5.99mmol)3-[(2,6-二氟芐基)氧基]-5-甲基吡啶-2-胺加入30ml乙醇中，加入9.24g(47.95mmol)2-氯-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯[已知于文獻(xiàn)，例如WO2006/91506，實(shí)施例N，步驟1]和0.30g分子篩3A，并將該混合物在回流下攪拌5天。將反應(yīng)溶液濃縮，并加入100ml水和100ml乙酸乙酯。將水相用乙酸乙酯再萃取，并且將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘余物通過硅膠色譜法(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯，梯度＝95/5至9/1至8/2)純化。這得到0.60g(理論值的26％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法L)：Rt＝2.64min
MS(ESpos)：m/z＝389(M+H)+
實(shí)施例66A
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將0.60g(1.54mmol)來(lái)自實(shí)施例65A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯溶解于28.2ml THF、5.64ml甲醇和7.56ml水中，加入0.324g(7.72mmol)氫氧化鋰一水合物，并將該混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物在40℃下攪拌4小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去有機(jī)溶劑，并使用半濃縮的鹽酸水溶液將水溶液調(diào)節(jié)至pH 2。然后用二氯甲烷/甲醇萃取混合物，將合并的有機(jī)相干燥、過濾，并將濾液濃縮。這得到170mg(理論值的31％)標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.86min
MS(ESpos)：m/z＝361(M+H)+
實(shí)施例67A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將50mg(0.139mmol)來(lái)自實(shí)施例66A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同58mg(0.153mmol)HATU和73μl(0.416mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.41ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。將51mg(0.166mmol)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)加入反應(yīng)溶液中，并將混合物在室溫下攪拌過夜。加入TFA和甲醇，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并、濃縮和凍干。這得到37mg目標(biāo)化合物(理論值的35％)。
LC-MS(方法N)：Rt＝1.47min
MS(ESpos)：m/z＝647(M-TFA+H)+
實(shí)施例68A
8-((2,6-二氟芐基)氧基)-2-羥基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙基
將2.7g(32.0mmol)碳酸氫鈉加入4.0g(16.0mmol)3-[(2,6-二氟芐基)氧基]-5-甲基吡啶-2-胺[記載于WO2014/068099，實(shí)施例編號(hào)323A]和13.6ml(9.0mmol)2-溴丙二酸二乙酯于30ml乙腈中的混合物中，并將反應(yīng)混合物在80℃下攪拌4小時(shí)。冷卻至室溫后，除去溶劑，并加入水和二乙醚。將該混合物過濾，將所得固體用水和二乙醚洗滌并在減壓下干燥。這得到4.33g目標(biāo)化合物(理論值的75％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝8.79(s，1H)，7.62-7.52(m，1H)，7.24-7.18(m，3H)，5.30(s，2H)，4.23(q，2H)，2.35(s，3H)，1.27(t，3H)。
實(shí)施例69A
2-氯-8-((2,6-二氟芐基)氧基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
將7.7ml(82.8mmol)磷酰氯加入3g(8.3mmol)來(lái)自實(shí)施例68A的8-[(2,6-二氟苯基)甲氧基]-2-羥基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯中，并將反應(yīng)混合物在110℃下、在壓力管中加熱6天。冷卻至室溫后，在減壓下蒸發(fā)磷酰氯，并向殘余物中緩慢地加入水，反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻。將有機(jī)組分用乙酸乙酯萃取，并將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法(流動(dòng)相：二氯甲烷)純化。這得到840mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的24％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝8.71(s，1H)，7.61-7.55(m，1H)，7.25-7.19(m，3H)，5.31(s，2H)，4.36(q，2H)，2.38(s，3H)，1.34(t，3H)。
實(shí)施例70A
8-((2,6-二氟芐基)氧基)-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯
將3.62g(13.1mmol)碳酸銀和0.90ml(14.4mmol)碘甲烷加入4.76g(13.1mmol)來(lái)自實(shí)施例68A的8-[(2,6-二氟苯基)甲氧基]-2-羥基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯于95ml DMF中的懸浮液中，并將反應(yīng)混合物在室溫下、在黑暗中攪拌16小時(shí)。加入水，并將有機(jī)組分用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物在硅膠上通過色譜法(流動(dòng)相：二氯甲烷)純化。這得到2.6g目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的52％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝8.73(s，1H)，7.60-7.55(m，1H)，7.26-7.15(m，3H)，5.29(s，2H)，4.27(q，2H)，3.95(s，3H)，2.35(s，3H)，1.27(t，3H)。
實(shí)施例71A
2-氯-8-((2,6-二氟芐基)氧基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將8.6ml(8.6mmol)1M氫氧化鈉水溶液逐滴加入820mg(2.2mmol)來(lái)自實(shí)施例69A的2-氯-8-[(2,6-二氟苯基)甲氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯于8ml甲醇和8ml THF混合物中的懸浮液中，并將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，然后加入水。通過加入1M鹽酸溶液將水相酸化至pH 2，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到480mg目標(biāo)化合物(理論值的63％)。
LC-MS(方法P)：Rt＝1.31min；m/z＝353(M+H)+
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝8.76(s，1H)，7.63-7.53(m，1H)，7.26-7.20(m，3H)，5.30(s，2H)，2.37(s，3H)。
實(shí)施例72A
8-((2,6-二氟芐基)氧基)-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸
將10.6ml(10.63mmol)1M氫氧化鈉水溶液加入2.0g(5.31mmol)來(lái)自實(shí)施例70A的8-[(2,6-二氟苯基)甲氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯于25ml DMSO中的懸浮液中，并將反應(yīng)混合物在60℃下攪拌10小時(shí)。冷卻至室溫后，緩慢地加入1M鹽酸溶液以將混合物的pH調(diào)節(jié)至1-2。將形成的固體濾除，用水洗滌并干燥。這得到1.72g目標(biāo)化合物(理論值的93％)。
LC-MS(方法P)：Rt＝1.32min；m/z＝349(M+H)+
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝12.44(br.s，1H)，8.75(s，1H)，7.60-7.52(m，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.11(s，1H)，5.29(s，2H)，3.93(s，3H)，2.34(s，3H)。
實(shí)施例73A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將50mg(0.142mmol)來(lái)自實(shí)施例71A的2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同70mg(0.184mmol)HATU和123μl(0.709mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.47ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。將59mg(0.184mmol；純度95％)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌45分鐘。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。這得到72mg目標(biāo)化合物(理論值的67％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.30min
MS(ESpos)：m/z＝639(M-TFA+H)+
實(shí)施例74A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將60mg(0.064mmol，純度37％)來(lái)自實(shí)施例72A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同29mg(0.076mmol)HATU和33μl(0.191mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.40ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。將38mg(0.159mmol)對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)[記載于WO2014/068099，實(shí)施例編號(hào)275A]加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在60℃下攪拌30分鐘。將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。這得到34mg目標(biāo)化合物(理論值的78％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.33min
MS(ESpos)：m/z＝567(M-TFA+H)+
實(shí)施例75A
對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)
首先將50mg(0.144mmol)來(lái)自實(shí)施例72A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同71mg(0.187mmol)HATU和125μl(0.718mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.48ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。將60mg(0.187mmol；純度95％)來(lái)自實(shí)施例37A的對(duì)映異構(gòu)-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸芐酯(對(duì)映異構(gòu)體B)加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌45分鐘。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。這得到50mg目標(biāo)化合物(理論值的46％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.31min
MS(ESpos)：m/z＝635(M-TFA+H)+
工作實(shí)施例：
實(shí)施例1
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
將1ml三氟乙酸加入90mg(0.15mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例6A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h，然后在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)純化。這得到51mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的69％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.47min；m/z＝480.2(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.82(t，3H)，0.94(s，3H)，1.26–1.37(m，2H)，1.48(s，2H)，2.53(s，3H)，3.12(d，1H)，3.19(d，1H)，5.41(s，2H)，7.21(t，2H)，7.37(d，1H)，7.49(ddd，1H)，7.55(ddd，1H)，7.70(s，1H)，8.10(ddd，1H)，8.58(dd，1H)，8.90–8.93(m，2H)。
實(shí)施例2
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-6-環(huán)丙基-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺鹽酸鹽
將1ml三氟乙酸加入56mg(0.10mmol)外消旋-{1-[({6-環(huán)丙基-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例7A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h并在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)純化。這得到目標(biāo)產(chǎn)物的游離堿。將其溶于乙腈(0.5ml)和0.1N鹽酸水溶液(2ml)中并凍干，得到20mg(理論值的40％)目標(biāo)產(chǎn)物。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.71min；m/z＝443.2(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.81–0.85(m，2H)，0.90(t，3H)，0.98–1.03(m，2H)，1.22(s，3H)，1.58-1.68(m，2H)，2.05–2.12(m，1H)，2.58(s，3H)，3.36–3.50(m，2H)，5.43(s，2H)，7.17–7.25(m，3H)，7.52–7.60(m，1H)，8.08(s，3H)，8.52(s，1H)，8.87(s，1H)。
實(shí)施例3
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺鹽酸鹽
將將1ml三氟乙酸加入15mg(0.10mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例8A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h，然后在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)并通過制備型LC-MS(方法G)純化。這得到目標(biāo)產(chǎn)物的游離堿。將其溶于乙腈(0.5ml)和0.1N鹽酸水溶液(2ml)并凍干，得到3mg(理論值的23％)目標(biāo)產(chǎn)物。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.92min；m/z＝469.2(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.91(t，3H)，1.22(s，3H)，1.58–1.70(m，2H)，2.59(s，3H)，3.39–3.60(m，2H)，5.47(s，2H)，6.60(t，1H)，7.23(t，2H)，7.58(ddd，1H)，7.79(d，1H)，7.82(s，1H)，7.97(s，3H)，8.39(s，1H)，8.61(d，1H)。
實(shí)施例4
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(甲氧基甲基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺鹽酸鹽
將1ml三氟乙酸加入60mg(0.11mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(甲氧基甲基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例9A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h并在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)并通過制備型LC-MS(方法G)純化。將殘余物溶于乙腈(0.5ml)和0.1N鹽酸水溶液(2ml)并凍干，得到28mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的53％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.50min；m/z＝447.2(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.91(t，3H)，1.21(s，3H)，1.63(dd，2H)，2.60(s，3H)，3.32(s，3H)，3.42–3.55(m，2H)，4.49(s，2H)，5.37(s，2H)，7.21(t，2H)，7.38(s，1H)，7.56(ddd，1H)，8.08(s，3H)，8.59(s，1H)，8.65(s，1H)。
實(shí)施例5
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(二氟甲氧基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
將1ml三氟乙酸加入13mg(0.02mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-(二氟甲氧基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例12A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h并在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)并通過制備型LC-MS(方法G)純化。這得到7mg標(biāo)題化合物(理論值的65％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝3.05min；m/z＝469(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.82(t，3H)，0.92(s，3H)，1.24–1.40(m，4H)，2.51(s，3H)，3.16(dd，2H)，5.29(s，2H)，7.06(d，1H)，7.19(t，1H)，7.20(t，2H)，7.51–7.69(m，2H)，8.66(d，1H)。
實(shí)施例6
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
將1ml三氟乙酸加入57mg(0.10mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例41A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h并在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)純化。這得到20mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的40％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.51min；m/z＝483(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.83(t，3H)，0.95(s，3H)，1.29–1.37(m，2H)，1.63-1.64(m，2H)，2.50(s，3H)，3.11–3.21(m，2H)，3.84(s，3H)，5.35(s，2H)，7.17–7.22(m，3H)，7.55(ddd，1H)，7.63(s，1H)，7.83(s，1H)，8.16(s，1H)，8.80(d，1H)。
實(shí)施例7
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1,3-噁唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
將1ml三氟乙酸加入43mg(0.08mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲基-6-(1,3-噁唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例13A)于4ml二氯甲烷中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h，然后在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)并通過制備型LC-MS(方法G)純化。這得到11mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的31％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.73min；m/z＝470(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.83(t，3H)，0.94(s，3H)，1.28–1.40(m，4H)，2.52(s，3H)，3.18(dd，2H)，5.37(s，2H)，7.21(dd，2H)，7.37(d，1H)，7.51–7.61(m，1H)，7.67(s，1H)，7.74(s，1H)，8.45(s，1H)，9.00(d，1H)。
實(shí)施例8
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺鹽酸鹽
將258mg(0.47mmol)外消旋-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(甲氧基甲基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例16A)于2ml三氟乙酸和8ml二氯甲烷中的溶液在室溫下攪拌18h，然后在減壓下濃縮。將殘余物通過在SCX-2硅膠上的色譜法(流動(dòng)相：甲醇，然后20％(2M氨的甲醇溶液)的二氯甲烷溶液)并通過制備型LC-MS(方法G)純化，并轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的鹽酸鹽。這得到150mg目標(biāo)產(chǎn)物(理論值的70％)。
LC-MS(方法B)：Rt＝2.43min；m/z＝447(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]＝0.82(t，3H)，1.13(s，3H)，1.55(tdd，2H)，2.37(s，3H)，3.19-3.28(m，2H)，3.73(s，2H)，4.02(s，3H)，5.35(s，2H)，7.22(t，2H)，7.58(ddd，1H)，8.06(s，4H)，8.53(s，1H)。
實(shí)施例9
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將98mg(0.14mmol)來(lái)自實(shí)施例38A的對(duì)映異構(gòu)-{5,5,5-三氟-1-[({8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)和4.4mg10％負(fù)載于活性碳上的鈀于3.5ml乙醇中的混合物在室溫和標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化45min。再加入15mg 10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在室溫和標(biāo)準(zhǔn)壓力下再氫化1h。隨后，將混合物通過微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將粗產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分溶于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到18mg標(biāo)題化合物(理論值的28％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.58min
MS(ESpos)：m/z＝468(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.03(s，3H)，1.49-1.59(m，2H)，1.78(br.s，2H)，2.26-2.48(m，5H)，2.50(s，3H；overlapped by solvent peak)，3.18-3.32(m，2H)，5.39(s，2H)，6.89(s，1H)，7.57-7.61(m，1H)，7.74-7.88(m，2H)，8.40(s，1H)，8.50(d，1H)。
實(shí)施例10
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將103mg(0.14mmol)來(lái)自實(shí)施例39A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)和4.4mg 10％負(fù)載在活性碳上的鈀于3.5ml乙醇中的混合物在室溫和標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化45min。隨后，將混合物通過微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將粗產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分溶于二氯甲烷和少量的甲醇中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并通過蒸發(fā)濃縮。這得到16mg標(biāo)題化合物(理論值的23％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.65min
MS(ESpos)：m/z＝488(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.02(s，3H)，1.48-1.57(m，2H)，1.63(br.s，2H)，2.27-2.47(m，2H)，2.50(s，3H；被溶劑峰重疊)，3.18-3.31(m，2H)，5.48(s，2H)，7.18(s，1H)，7.57-7.62(m，1H)，7.83-7.92(m，2H)，8.51(d，1H)，8.69(s，1H)。
實(shí)施例11
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將103mg(0.14mmol)來(lái)自實(shí)施例39A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({6-氯-8-[(3-氟吡啶-2-基)甲氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)和4.4mg 10％負(fù)載在活性碳上的鈀于3.5ml乙醇中的混合物在室溫和標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化45min。隨后，將混合物通過微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將粗產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP-C18，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并通過蒸發(fā)濃縮。這得到11mg標(biāo)題化合物(理論值的17％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.50min
MS(ESpos)：m/z＝454(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.02(s，3H)，1.48-1.57(m，2H)，1.63(br.s，2H)，2.26-2.47(m，2H)，2.56(s，3H；與溶劑峰部分地重疊)，3.19-3.31(m，2H)，5.42(s，2H)，6.90(t，1H)，6.99(d，1H)，7.56-7.62(m，1H)，7.77-7.87(m，2H)，8.48(d，1H)，8.58(d，1H)。
實(shí)施例12
N-(3-氨基-2,2-二氟丙基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
將163mg(0.24mmol，純度93％)來(lái)自實(shí)施例40A的{3-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2,2-二氟丙基}氨基甲酸叔丁酯三氟乙酸鹽溶解于1.0ml二乙醚中，并加入1.2ml 2N氯化氫的二乙醚溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物濃縮、溶解于乙腈/水中，加入TFA，并將產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將濃縮的產(chǎn)物級(jí)分溶解于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到96mg目標(biāo)化合物(理論值的94％)。
LC-MS(方法L)：Rt＝1.49min
MS(ESpos)：m/z＝425(M+H)+
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：d[ppm]＝1.78(br.s，2H)，2.31(s，3H)，2.50(s，3H；與溶劑峰重疊)，2.91(t，2H)，3.79-3.86(m，2H)，5.29(s，2H)，6.94(s，1H)，7.20-7.25(m，2H)，7.56-7.62(m，1H)，8.19(t，1H)，8.40(s，1H)。
實(shí)施例13
對(duì)映異構(gòu)-N-[2-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁基]-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體A)
將151mg(0.20mmol，純度97％)來(lái)自實(shí)施例48A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體A)溶解于5.2ml乙醇中，在氬氣下加入77μl(0.99mmol)TFA和6.3mg(0.006mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液用微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并且將濾液濃縮。將殘余物溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。隨后，將殘余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將水相用二氯甲烷重復(fù)萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到83mg目標(biāo)化合物(理論值的84％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.78min
MS(ESpos)：m/z＝489(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝-0.04(s，9H)，0.45-0.56(m，2H)，0.97(s，3H)，1.26-1.34(m，2H)，1.42(br.s，2H)，2.30(s，3H)，3.15-3.30(m，2H)，5.29(s，2H)，6.91(s，1H)，7.18-7.28(m，2H)，7.54-7.64(m，2H)，8.47(s，1H)，[其他信號(hào)隱藏在溶劑信號(hào)下]。
實(shí)施例14
對(duì)映異構(gòu)-N-[2-氨基-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁基]-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將168mg(0.23mmol，純度99％)來(lái)自實(shí)施例49A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于5.9ml乙醇中，并且在氬氣下加入87μl(1.13mmol)TFA和7.2mg(0.007mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液用微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將反應(yīng)溶液溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。隨后，將殘余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到88mg目標(biāo)化合物(理論值的78％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.75min
MS(ESpos)：m/z＝489(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝-0.04(s，9H)，0.45-0.58(m，2H)，0.98(s，3H)，1.25-1.39(m，2H)，1.90(br.s，2H)，2.30(s，3H)，3.17-3.30(m，2H)，5.29(s，2H)，6.91(s，1H)，7.19-7.27(m，2H)，7.54-7.64(m，2H)，8.47(m，1H)，[其他信號(hào)隱藏在溶劑信號(hào)下]。
實(shí)施例15
對(duì)映異構(gòu)-N-[2-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊基]-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體A)
將149mg(0.20mmol)來(lái)自實(shí)施例56A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體A)溶解于6.7ml乙醇中，并且在氬氣下加入76μl(0.98mmol)TFA和2mg(0.002mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液用微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將反應(yīng)溶液溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。隨后，將殘余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到69mg目標(biāo)化合物(理論值的69％)。
LC-MS(方法O)：Rt＝1.41min
MS(ESpos)：m/z＝503(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d＝-0.03(s，9H)，0.41-0.48(m，2H)，0.99(s，3H)，1.29-1.42(m，4H)，1.53(br.s，2H)，2.30(s，3H)，3.16-3.24(m，2H)，5.29(s，2H)，6.91(s，1H)，7.19-7.27(m，2H)，7.53-7.63(m，2H)，8.48(s，1H)，[其他信號(hào)隱藏在溶劑信號(hào)下]。
實(shí)施例16
對(duì)映異構(gòu)-N-[2-氨基-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊基]-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將189mg(0.25mmol)來(lái)自實(shí)施例57A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2,6-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于8.5ml乙醇中，并且在氬氣下加入96μl(1.25mmol)TFA和2.7mg(0.002mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液用微孔濾器過濾并用乙醇洗滌，并將濾液濃縮。將反應(yīng)溶液溶于乙腈、水和TFA中，并通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。隨后，將殘余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到93mg目標(biāo)化合物(理論值的74％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.84min
MS(ESpos)：m/z＝503(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d＝-0.03(s，9H)，0.41-0.48(m，2H)，0.99(s，3H)，1.29-1.42(m，4H)，1.48(br.s，2H)，2.31(s，3H)，3.16-3.23(m，2H)，5.29(s，2H)，6.91(s，1H)，7.19-7.27(m，2H)，7.54-7.63(m，2H)，8.48(s，1H)，[其他信號(hào)隱藏在溶劑信號(hào)下]。
實(shí)施例17
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將48mg(0.059mmol)來(lái)自實(shí)施例64A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-(3,3-二氟環(huán)丁基)-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于7ml乙醇中，并且在氬氣下加入14μl(0.178mmol)TFA和2mg(0.002mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液通過硅藻土過濾，并將濾液濃縮。將殘余物溶解于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾、濃縮和凍干。這得到29mg目標(biāo)化合物(理論值的87％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.83min
MS(ESpos)：m/z＝561(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝1.06(s，3H)，1.53-1.62(m，2H)，2.31(s，3H)，2.32-2.46(m，2H)，2.87-3.01(m，5H)，3.76-3.87(m，1H)，5.34(s，2H)，6.97(s，1H)，7.20-7.28(m，2H)，7.54-7.64(m，1H)，7.99(t，1H)，8.30(s，1H)，[其他信號(hào)隱藏在溶劑信號(hào)下]。
實(shí)施例18
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將37mg(0.048mmol)來(lái)自實(shí)施例67A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-異丙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于5ml乙醇中，并且在氬氣下加入13μl(0.172mmol)TFA和2mg(0.002mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)溶液通過硅藻土過濾，并將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。將殘余物溶解于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾、濃縮和凍干。將殘余物溶解于二氯甲烷中，并與碳酸氫鈉水溶液攪拌過夜。然后將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾、濃縮和凍干。將殘余物通過制備型HPLC(柱：XBridge C18 5μm 75x 30mm，流動(dòng)相：水、乙腈、乙腈/水80/20+1％氨溶液)純化。這得到8mg(理論值的33％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法K)：Rt＝2.63min
MS(ESpos)：m/z＝513(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝1.03(s，3H)，1.20-1.27(m，6H)，1.48-1.57(m，2H)，1.68(s br.，2H)，2.29(s，3H)，2.32-2.47(m，2H)，3.18-3.29(m，2H)，3.39-3.48(m，1H)，5.30(s，2H)，6.89(s，1H)，7.20-7.28(m，2H)，7.54-7.64(m，1H)，7.92(t，1H)，8.22(s，1H).
實(shí)施例19
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將67mg(0.089mmol)來(lái)自實(shí)施例73A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于5ml TFA中，并將該混合物在室溫下攪拌4天。將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到39mg(理論值的86％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.76min
MS(ESpos)：m/z＝505(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝1.03(s，3H)，1.51-1.60(m，2H)，1.82(br.s，2H)，2.23-2.47(m，5H)，3.18-3.29(m，2H)，5.31(s，2H)，7.11(s，1H)，7.19-7.28(m，2H)，7.54-7.64(m，1H)，7.95(t，1H)，8.60(s，1H)。
實(shí)施例20
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
首先將40mg(0.11mmol)來(lái)自實(shí)施例71A的2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同47mg(0.13mmol)HATU和59μl(0.34mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.4ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。然后將13mg(0.13mmol)外消旋-2-甲基丁烷-1,2-二胺加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌4.5h。然后將混合物用乙腈和水稀釋，加入TFA，并且將該混合物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到31mg目標(biāo)化合物(理論值的61％)。
LC-MS(方法O)：Rt＝1.27min
MS(ESpos)：m/z＝437(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d＝0.86(t，3H)，0.98(s，3H)，1.31-1.42(m，2H)，1.49(br.s，2H)，2.35(s，3H)，3.15-3.27(m，2H)，5.32(s，2H)，7.12(s，1H)，7.19-7.28(m，2H)，7.55-7.64(m，1H)，7.80(br.s，1H)，8.72(s，1H)。
實(shí)施例21
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體A)
將25mg來(lái)自實(shí)施例20的外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak IF，5μm，250x20mm，流動(dòng)相：35％異己烷，65％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。將產(chǎn)物收集于干冰上，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。
對(duì)映異構(gòu)體A：9mg(>99％ee)
Rt＝6.10min[Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：30％異己烷，70％乙醇+0.2％二乙胺，流速：1ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例22
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將25mg來(lái)自實(shí)施例20的外消旋-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak IF，5μm，250x20mm，流動(dòng)相：35％異己烷，65％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。將產(chǎn)物收集于干冰上，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。
對(duì)映異構(gòu)體B：11mg(94％ee)
Rt＝7.33min[Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：30％異己烷，70％乙醇+0.2％二乙胺，流速：1ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例23
外消旋-N-(2-氨基-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
首先將75mg(0.21mmol)來(lái)自實(shí)施例71A的2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同89mg(0.23mmol)HATU和111μl(0.64mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.7ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。然后將27mg(0.23mmol)外消旋-2-甲基戊烷-1,2-二胺加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌4.5h。然后將混合物用乙腈和水稀釋，加入TFA，并且將混合物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到36mg目標(biāo)化合物(理論值的37％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.76min
MS(ESpos)：m/z＝451(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d＝0.82-0.90(m，3H)，1.00(s，3H)，1.26-1.39(m，4H)，1.55(br.s，2H)，2.35(s，3H)，3.14-3.26(m，2H)，5.32(s，2H)，7.11(s，1H)，7.20-7.27(m，2H)，7.55-7.64(m，1H)，7.81(br.s，1H)，8.71(s，1H)。
實(shí)施例24
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體A)
將32mg來(lái)自實(shí)施例23的外消旋-N-(2-氨基-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak IF，5μm，250x 20mm，流動(dòng)相：50％異己烷，50％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。將產(chǎn)物收集于干冰上，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。
對(duì)映異構(gòu)體A：15mg(>99％ee)
Rt＝6.77min[Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：50％異己烷，50％乙醇+0.2％二乙胺，流速：1ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例25
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將32mg來(lái)自實(shí)施例23的外消旋-N-(2-氨基-2-甲基戊基)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通過制備型分離在手性相上分離成對(duì)映異構(gòu)體[柱：Daicel Chiralpak IF，5μm，250x20mm，流動(dòng)相：50％異己烷，50％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。將產(chǎn)物收集于干冰上，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。
對(duì)映異構(gòu)體B：15mg(98.8％ee)
Rt＝9.05min[Daicel Chiralpak AZ-H，250x 4.6mm，5μm，流動(dòng)相：50％異己烷，50％乙醇+0.2％二乙胺，流速：1ml/min，溫度：40℃，檢測(cè)：220nm]。
實(shí)施例26
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-2-甲基丁基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將50mg(0.073mmol)來(lái)自實(shí)施例74A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于2.5ml乙醇中，并且在氬氣下加入0.8mg(0.001mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化3.5小時(shí)。將反應(yīng)溶液通過微孔濾器過濾，并將濾液濃縮。將殘余物溶解于2.5ml乙醇中，并且在氬氣下加入28μl(0.367mmol)TFA和0.8mg(0.001mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化1.5小時(shí)。將反應(yīng)溶液通過微孔濾器過濾，并將濾液濃縮。將氨的甲醇溶液加入殘余物中，并將產(chǎn)物通過厚層色譜法(流動(dòng)相：二氯甲烷/2N氨的甲醇溶液20/1.5)純化。這得到24mg(理論值的72％)目標(biāo)化合物。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.74min
MS(ESpos)：m/z＝433(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝0.84(t，3H)，0.94(s，3H)，1.23-1.38(m，2H)，1.42(br.s，2H)，2.34(s，3H)，3.10-3.23(m，2H)，4.05(s，3H)，5.30(s，2H)，7.07(s，1H)，7.21-7.30(m，3H)，7.54-7.64(m，1H)，9.02(s，1H)。
實(shí)施例27
對(duì)映異構(gòu)-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體B)
將49mg(0.065mmol)來(lái)自實(shí)施例75A的對(duì)映異構(gòu)-{1-[({8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸芐酯三氟乙酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體B)溶解于7ml乙醇中，并且在氬氣下加入25μl(0.327mmol)TFA和2.1mg(0.002mmol)10％負(fù)載在活性碳上的鈀，并將該混合物在標(biāo)準(zhǔn)壓力下氫化1小時(shí)。將反應(yīng)溶液通過微孔濾器過濾，并用乙醇洗滌，并且將濾液在減壓下濃縮。將乙腈、水和TFA加入殘余物中，并且將產(chǎn)物通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分合并且濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。這得到31mg目標(biāo)化合物(理論值的91％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝0.82min
MS(ESpos)：m/z＝501(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝0.99(s，3H)，1.51(t，2H)，1.92(br.s，2H)，2.24-2.44(m，5H)，3.14-3.29(m，2H)，4.05(s，3H)，5.31(s，2H)，7.08(s，1H)，7.19-7.30(m，3H)，7.54-7.64(m，1H)，8.98(s，1H)。
實(shí)施例28
對(duì)映異構(gòu)-2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基-N-(6,6,7,7,7-五氟-2-羥基-2-甲基庚-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(對(duì)映異構(gòu)體A)
首先將40mg(0.113mmol)來(lái)自實(shí)施例71A的2-氯-8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同47mg(0.125mmol)HATU和99μl(0.567mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.4ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌10min。然后將34mg(0.125mmol)對(duì)映異構(gòu)-3-氨基-6,6,7,7,7-五氟-2-甲基庚-2-醇鹽酸鹽(對(duì)映異構(gòu)體A)[記載于WO2014/068104，實(shí)施例編號(hào)138A]加入反應(yīng)溶液中，并將混合物在室溫下攪拌4.5小時(shí)。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分濃縮，并將殘余物溶解于二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾、濃縮和凍干。這得到47mg目標(biāo)化合物(理論值的72％)。
LC-MS(方法O)：Rt＝2.30min
MS(ESpos)：m/z＝570(M+H)+
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：d＝1.14(s，3H)，1.21(s，3H)，1.67-1.77(m，1H)，2.00-2.10(m，1H)，2.12-2.31(m，2H)，2.35(s，3H)，3.97-4.04(m，1H)，4.75(s，1H)，5.32(s，2H)，7.12(s，1H)，7.20-7.27(m，2H)，7.55-7.63(m，1H)，7.69(d，1H)，8.55(s，1H)。
實(shí)施例29
8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-N-[(2R)-1-羥基己-2-基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
首先將50mg(0.144mmol)來(lái)自實(shí)施例72A的8-[(2,6-二氟芐基)氧基]-2-甲氧基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸連同71mg(0.187mmol)HATU和125μl(0.718mmol)N,N-二異丙基乙胺加入0.50ml DMF中，并將該混合物在室溫下攪拌20min。然后將22mg(0.187mmol)(2R)-2-氨基己-1-醇加入反應(yīng)溶液中，并將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入乙腈、水和TFA，并將反應(yīng)溶液通過制備型HPLC(RP18柱，流動(dòng)相：加入0.1％TFA的乙腈/水梯度)純化。將產(chǎn)物級(jí)分濃縮，并將殘余物溶解于二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。將合并的水相用二氯甲烷再萃取兩次。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾、濃縮和凍干。這得到22mg標(biāo)題化合物(理論值的33％)。
LC-MS(方法D)：Rt＝1.14min
MS(ESpos)：m/z＝448(M+H)+
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：d＝0.86(t，3H)，1.22-1.35(m，4H)，1.40-1.52(m，1H)，1.54-1.65(m，1H)，2.34(s，3H)，3.38-3.53(m，2H)，3.90-4.00(m，1H)，4.05(s，3H)，4.82(t，1H)，5.30(s，2H)，6.91(d，1H)，7.08(s，1H)，7.20-7.28(m，2H)，7.54-7.64(m，1H)，9.02(s，1H)。
B.藥理學(xué)效力的評(píng)估
使用下列簡(jiǎn)寫：
ATP 三磷酸腺苷
Brij35 聚氧乙烯(23)十二烷基醚
BSA 牛血清白蛋白
DTT 二硫蘇糖醇
TEA 三乙醇胺
本發(fā)明化合物的藥理學(xué)作用可以在下列測(cè)定中得以證明：
B-1.通過PPi檢測(cè)測(cè)量sGC酶活性
可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(sGC)在刺激下將GTP轉(zhuǎn)化成cGMP和焦磷酸鹽(PPi)。借助于WO 2008/061626中描述的方法檢測(cè)PPi。在該測(cè)定中產(chǎn)生的信號(hào)隨著反應(yīng)進(jìn)行而增加并且作為sGC酶活性的量度。借助于PPi參考曲線，可以以已知的方式表征該酶，例如用轉(zhuǎn)化率、刺激性或米氏常數(shù)來(lái)表征。
試驗(yàn)的實(shí)施
為了進(jìn)行該試驗(yàn)，首先將29μl酶溶液(0-10nM可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(根據(jù)等人，Journal of Molecular Medicine 77(1999)14-23制備)，于50mM TEA、2mM氯化鎂、0.1％BSA(級(jí)分V)、0.005％Brij35中，pH 7.5)加入微孔板中，并加入1μl刺激物溶液(0-10μM 3-嗎啉代斯德酮亞胺(morpholinosydnonimine)、SIN-1、Merck在DMSO中)。將微孔板在室溫下培養(yǎng)10分鐘。然后加入20μl檢測(cè)混合物(1.2nM熒火蟲熒光素酶(Photinus pyralis Luziferase，Promega)、29μM脫氫熒光素(根據(jù)Bitler&McElroy，Arch.Biochem.Biophys.72(1957)358制備)、122μM熒光素(Promega)、153μM ATP(Sigma)和0.4mM DTT(Sigma)于50mM TEA、2mM氯化鎂、0.1％BSA(級(jí)分V)、0.005％Brij 35中，pH 7.5)。酶反應(yīng)通過加入20μl底物溶液(1.25mM鳥苷5'-三磷酸(Sigma)于50mM TEA、2mM氯化鎂、0.1％BSA(級(jí)分V)、0.005％Brij 35中，pH 7.5)而開始，并且在光度計(jì)中連續(xù)地進(jìn)行分析。
B-2.對(duì)重組鳥苷酸環(huán)化酶報(bào)告細(xì)胞系的作用
使用重組鳥苷酸環(huán)化酶報(bào)告細(xì)胞系測(cè)定本發(fā)明化合物的細(xì)胞活性，如F.Wunder等人，Anal.Biochem.339，104-112(2005)中所描述的。
本發(fā)明化合物的代表性MEC值(MEC＝最低有效濃度)示于下表中(在一些情況下作為個(gè)體測(cè)定的平均值)：
表A：
B-3.體外血管舒張作用
通過敲擊頸部而將兔子打昏并進(jìn)行放血。移除主動(dòng)脈，除去粘附的組織并分成寬度為1.5毫米的環(huán)，在預(yù)應(yīng)力下在37℃下將其分別置于5ml具有碳合氣(Carbogen)噴洗的Krebs-Henseleit溶液的器官浴槽中，該Krebs-Henseleit溶液具有以下組成(各自為mM)：氯化鈉：119；氯化鉀：4.8；氯化鈣二水合物：1；硫酸鎂七水合物：1.4；磷酸二氫鉀：1.2；碳酸氫鈉：25；葡萄糖：10。收縮力用Statham UC2細(xì)胞測(cè)定，使用A/D換能器(DAS-1802HC，Keithley Instruments慕尼黑)擴(kuò)增和數(shù)字化，并且在線性記錄儀上平行記錄。為了獲得收縮，將苯腎上腺素以增加的濃度累積加入浴中。在幾個(gè)控制循環(huán)之后，在每個(gè)進(jìn)一步運(yùn)行中，每次以增加的劑量加入待研究的物質(zhì)，并且將收縮的量與在上一運(yùn)行中獲得的收縮的量進(jìn)行比較。由此計(jì)算將對(duì)照值的量減少50％所需的濃度(IC50值)。標(biāo)準(zhǔn)給藥體積為5μl，浴溶液中的DMSO含量對(duì)應(yīng)于0.1％。
B-4.麻醉大鼠的血壓測(cè)量
用硫噴妥鈉(100mg/kg i.p.)麻醉體重為300-350g的雄性Wistar大鼠。在氣管切開術(shù)后，將導(dǎo)管引入股動(dòng)脈中以測(cè)量血壓。將待測(cè)試的物質(zhì)作為溶液給藥，通過管飼法口服或通過股靜脈靜脈內(nèi)給藥(Stasch等人Br.J.Pharmacol.2002；135：344-355)。
B-5.無(wú)線電遙法測(cè)量清醒的、自發(fā)性高血壓大鼠的血壓
將由DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI，USA市售可得的遙測(cè)系統(tǒng)用于以下所述的清醒大鼠的血壓測(cè)量。
該系統(tǒng)由3個(gè)主要部件組成：
可植入發(fā)射器(遙測(cè)發(fā)射器)
接收器(接收器)，其通過多路轉(zhuǎn)接器(DSI數(shù)據(jù)交換矩陣)連接到
數(shù)據(jù)采集計(jì)算機(jī)。
該遙測(cè)系統(tǒng)能夠連續(xù)地記錄清醒的動(dòng)物在它們通常棲息地中的血壓、心率和身體活動(dòng)。
動(dòng)物材料
對(duì)體重>200克的成年雌性、自發(fā)性高血壓大鼠(SHR Okamoto)進(jìn)行研究。來(lái)自O(shè)kamoto Kyoto School of Medicine，1963年的SHR/NCrl是具有極大升高的血壓的雄性Wistar Kyoto大鼠和具有略微升高的血壓雌性大鼠的雜交種，并且在F13移交給美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(U.S.National Institutes of Health)。
在發(fā)射器植入后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單獨(dú)飼養(yǎng)在3型Macrolon籠中。它們可隨意獲得標(biāo)準(zhǔn)飼料和水。
在上午6:00和在下午7:00通過室內(nèi)照明改變實(shí)驗(yàn)室中的晝/夜節(jié)律。
發(fā)射器植入
在第一次實(shí)驗(yàn)使用前至少14天，將所用的TA11PA-C40遙測(cè)發(fā)射器在無(wú)菌條件下通過手術(shù)植入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中。以這種方式安裝有儀器的動(dòng)物可以在傷口愈合且植入物穩(wěn)定之后重復(fù)使用。
為了植入，用戊巴比妥(Nembutal，Sanofi：50mg/kg i.p.)麻醉禁食的動(dòng)物，并對(duì)其腹部的較大面積進(jìn)行剃毛和消毒。在沿白線打開腹腔后，將系統(tǒng)的填充液體的測(cè)量導(dǎo)管在分叉點(diǎn)上方沿顱骨方向插入降主動(dòng)脈并用組織膠(VetBonD TM，3M)固定。將發(fā)射器外殼在腹膜內(nèi)固定到腹壁肌肉上，并且將傷口逐層閉合。
手術(shù)后給予抗生素(Tardomyocel COMP，Bayer，1ml/kg，皮下)以防止感染。
物質(zhì)和溶液
除非另有說(shuō)明，否則待研究的物質(zhì)在每種情況下通過管飼法口服給予一組動(dòng)物(n＝6)。根據(jù)5ml/kg體重的給藥體積，將測(cè)試物質(zhì)溶解在合適的溶劑混合物中或懸浮在0.5％甲基纖維素中。
溶劑處理的動(dòng)物組用作對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)綱要
所存在的遙測(cè)測(cè)量單元被配置為24只動(dòng)物。在實(shí)驗(yàn)編號(hào)(V年月日)下記錄各實(shí)驗(yàn)。
每個(gè)在系統(tǒng)中存活的安裝有儀器的大鼠分配有單獨(dú)的接收天線(1010Receiver，DSI)。
植入的發(fā)射器可通過內(nèi)置的磁性開關(guān)在外部激活。在試驗(yàn)開始前，將它們切換至傳輸。所發(fā)射的信號(hào)可由數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(Dataquest TM A.R.T.for WINDOWS，DSI)在線檢測(cè)并相應(yīng)地處理。數(shù)據(jù)在每種情況下被儲(chǔ)存在為此目的創(chuàng)建的并帶有實(shí)驗(yàn)號(hào)的文件夾中。
在標(biāo)準(zhǔn)程序中，在每種情況下將下列這些測(cè)量持續(xù)10秒：
收縮血壓(SBP)
舒張血壓(DBP)
平均動(dòng)脈壓(MAP)
心率(HR)
活性(ACT)。
在計(jì)算機(jī)控制下以5分鐘為間隔重復(fù)測(cè)量值的采集。將作為絕對(duì)值獲得的源數(shù)據(jù)在圖中用當(dāng)前測(cè)量的氣壓(環(huán)境壓力參考監(jiān)測(cè)器；APR-1)校正，并作為單獨(dú)數(shù)據(jù)存儲(chǔ)。其他技術(shù)細(xì)節(jié)在制造商公司(DSI)的大量文件中給出。
除非另有描述，否則實(shí)驗(yàn)物質(zhì)在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天的上午9:00給予。在給藥后，在24小時(shí)內(nèi)測(cè)量上述參數(shù)。
評(píng)估
在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將所獲得的各個(gè)數(shù)據(jù)用分析軟件(DATAQUEST TM A.R.T.TM ANALYSIS)進(jìn)行分類?？瞻字翟诖思俣榻o藥前2小時(shí)，因此所選數(shù)據(jù)集包含從實(shí)驗(yàn)當(dāng)天上午7:00到次日上午9:00的時(shí)間段。
數(shù)據(jù)通過確定平均值(15分鐘平均值)在可預(yù)先給定的時(shí)間段中平滑并且作為文本文件傳輸?shù)酱鎯?chǔ)介質(zhì)。將以這種方式預(yù)分類和壓縮的測(cè)量值傳輸?shù)紼xcel模板并制表。對(duì)于每天的實(shí)驗(yàn)，將所獲得的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)在具有實(shí)驗(yàn)號(hào)的專用文件夾中。將結(jié)果和測(cè)試方案以按數(shù)字分類的紙件形式存儲(chǔ)在文件夾中。
文獻(xiàn)：
Klaus Witte，Kai Hu，Johanna Swiatek，Claudia Müssig，Georg Ertl andLemmer：Experimental heart failure in rats：effects on cardiovascular circadian rhythms and on myocardialβ-adrenergic signaling.Cardiovasc Res 47(2)：203-405，2000；Kozo Okamoto：Spontaneous hypertension in rats.Int Rev Exp Pathol 7：227-270，1969；Maarten van den Buuse：Circadian Rhythms of Blood Pressure，Heart Rate，and Locomotor Activity in Spontaneously Hypertensive Rats as Measured With Radio-Telemetry.Physiology&Behavior 55(4)：783-787，1994.
B-6.靜脈內(nèi)和口服給藥后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的測(cè)定
在雄性CD-1小鼠、雄性Wistar大鼠和雌性小獵犬中測(cè)定本發(fā)明化合物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。在小鼠和大鼠的情況下，借助物種特異性的血漿/DMSO制劑進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥，且在狗的情況下，借助水/PEG400/乙醇制劑進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥。在所有物種中，基于水/PEG400/乙醇制劑，通過管飼法進(jìn)行溶解物質(zhì)的口服給藥。通過在物質(zhì)給藥之前將硅膠導(dǎo)管插入右頸外靜脈中而使從大鼠中采血得以簡(jiǎn)化。該手術(shù)在實(shí)驗(yàn)前至少一天用異氟烷麻醉并給予止痛劑(阿托品/rimadyl(3/1)0.1ml皮內(nèi))來(lái)進(jìn)行。在包括物質(zhì)給藥后至少24小時(shí)至最多72小時(shí)的終端時(shí)間點(diǎn)的時(shí)間范圍內(nèi)采集血液(通常大于10個(gè)時(shí)間點(diǎn))。將血液移入肝素化管中。然后通過離心獲得血漿；如果需要，其可以被儲(chǔ)存在-20℃直至進(jìn)一步處理。
將內(nèi)標(biāo)(其也可以是化學(xué)無(wú)關(guān)的物質(zhì))加入到本發(fā)明化合物的樣品、校準(zhǔn)樣品和限定物(qualifier)中，然后借助過量的乙腈沉淀蛋白質(zhì)。加入與LC條件相匹配的緩沖溶液，隨后渦旋后，然后以1000g離心。通過LC-MS/MS使用C18反相柱和可變流動(dòng)相混合物分析上清液。通過由特定選擇的離子監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)的提取離子色譜圖的峰高度或面積將物質(zhì)量化。
借助經(jīng)驗(yàn)證的藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算程序，將所測(cè)定的血漿濃度/時(shí)間曲線圖用于計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，如AUC、Cmax、t1/2(終末半衰期)、F(生物利用度)、MRT(平均保留時(shí)間)和CL(清除率)。
由于物質(zhì)量化在血漿中進(jìn)行，因此必需確定物質(zhì)的血液/血漿分布，以便能夠相應(yīng)地調(diào)節(jié)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。為此，將限定量的物質(zhì)以在搖擺輥混合器(rocking roller mixer)中在所討論物質(zhì)的肝素化全血中培養(yǎng)20分鐘。在以1000g離心后，測(cè)量(借助LC-MS/MS；參見上文)并通過計(jì)算C血液/C血漿值的比率來(lái)確定血漿濃度。
B-7.代謝研究
為了測(cè)定本發(fā)明化合物的代謝分布圖，將它們與來(lái)自多種動(dòng)物物種(例如大鼠、狗)以及人類來(lái)源的重組人細(xì)胞色素P450(CYP)酶、肝微粒體或初級(jí)新鮮肝細(xì)胞一起孵育，以獲得和比較關(guān)于基本上完整的肝期I和肝期II代謝以及關(guān)于參與代謝的酶的信息。
將本發(fā)明的化合物以約0.1-10μM的濃度培養(yǎng)。為此，制備在乙腈中濃度為0.01-1mM的本發(fā)明化合物的儲(chǔ)備溶液，然后以1:100稀釋度移液至孵育混合物中。將肝微粒體和重組酶在37℃下、在pH 7.4的具有和不具有由1mM NADP+、10mM葡萄糖-6-磷酸和1單位葡萄糖-6-磷酸脫氫酶組成的NADPH產(chǎn)生系統(tǒng)的50mM磷酸鉀緩沖液中培養(yǎng)。將原代肝細(xì)胞同樣在37℃下在Williams E培養(yǎng)基中的懸浮液中培養(yǎng)。在0-4小時(shí)培養(yǎng)時(shí)間后，用乙腈(最終濃度約30％)終止培養(yǎng)混合物，并以約15 000x g離心出蛋白質(zhì)。將如此終止的樣品直接分析或儲(chǔ)存在-20℃直至分析。
通過具有紫外和質(zhì)譜檢測(cè)的高效液相色譜法(HPLC-UV-MS/MS)進(jìn)行分析。為此，將培養(yǎng)樣品的上清液用合適的C18反相柱和乙腈與10mM甲酸銨水溶液或0.05％甲酸的可變流動(dòng)相混合物進(jìn)行色譜分離。UV色譜圖與質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)合用于代謝物的鑒別、結(jié)構(gòu)闡明和定量估測(cè)，以及用于在培養(yǎng)混合物中本發(fā)明化合物的定量代謝減少。
B-8.Caco-2滲透性試驗(yàn)
借助Caco-2細(xì)胞系確定試驗(yàn)物質(zhì)的滲透性，所述Caco-2細(xì)胞系是用于胃腸屏障滲透性預(yù)測(cè)而建立的體外模型(Artursson，P.和Karlsson，J.(1991)Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial(Caco-2)cells.Biochem.Biophys.175(3)，880-885)。將CaCo-2細(xì)胞(ACC No.169，DSMZ，Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen，Braunschweig，德國(guó))播種在具有插入物的24孔板中，并培養(yǎng)14至16天。對(duì)于滲透性研究，將試驗(yàn)物質(zhì)溶解于DMSO中，并用轉(zhuǎn)移緩沖液(Hanks緩沖鹽溶液，Gibco/Invitrogen，具有19.9mM葡萄糖和9.8mM HEPES)稀釋至最終試驗(yàn)濃度。為了測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)的頂端至基底外側(cè)的滲透性(PappA-B)，將包含試驗(yàn)物質(zhì)的溶液施加至Caco-2細(xì)胞單層的頂側(cè)，并將轉(zhuǎn)移緩沖液施加至基底外側(cè)。為了測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)的基底外側(cè)至頂端的滲透性(PappB-A)，將包含試驗(yàn)物質(zhì)的溶液施加至Caco-2細(xì)胞單層的基底外側(cè)，并將轉(zhuǎn)移緩沖液施加至頂側(cè)。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，從各自的供體隔室中取樣以確保質(zhì)量平衡。在37℃下培養(yǎng)2小時(shí)后，從兩個(gè)隔室中取樣。通過LC-MS/MS分析樣品，并計(jì)算表觀滲透系數(shù)(Papp)。對(duì)于各細(xì)胞單層，測(cè)定熒光黃的滲透性以確保細(xì)胞層完整性。在各試驗(yàn)中，還測(cè)定了阿替洛爾(低滲透性的標(biāo)記物)和柳氮磺胺吡啶(主動(dòng)排泄的標(biāo)記物)的滲透性作為質(zhì)量對(duì)照。
B-9.hERG鉀電流測(cè)定
hERG(人類ether-a-go-go相關(guān)基因)鉀電流對(duì)人類心臟動(dòng)作電位的復(fù)極化作出了重要貢獻(xiàn)(Scheel等人，2011)。在極少的情況下，藥物對(duì)該電流的抑制可導(dǎo)致潛在的致命性心率失常，因此在藥物開發(fā)的早期階段進(jìn)行研究。
本文所用的功能性hERG測(cè)定是基于穩(wěn)定表達(dá)KCNH2(HERG)基因的重組HEK293細(xì)胞系(Zhou等人，1998)。在自動(dòng)化系統(tǒng)(PatchlinerTM；Nanion，Munich，Germany)中借助“全細(xì)胞電壓鉗(whole-cell voltage-clamp)”技術(shù)(Hamill等人，1981)——控制膜電壓并在室溫下測(cè)量hERG鉀電流——來(lái)研究這些細(xì)胞。PatchControlHTTM軟件(Nanion)控制Patchliner系統(tǒng)，數(shù)據(jù)捕獲和數(shù)據(jù)分析。電壓由被PatchMasterProTM軟件控制的2EPC-10四通道放大器(二者為：HEKA Elektronik，Lambrecht，Germany)控制。具有中等電阻(～2MΩ；Nanion)的NPC-16芯片用作電壓鉗實(shí)驗(yàn)的平面基板。
NPC-16芯片填充有細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外溶液(參見Himmel，2007)及細(xì)胞懸浮液。在形成千兆歐姆密封和建立全細(xì)胞模式(包括若干自動(dòng)質(zhì)量控制步驟)后，在-80mV保持電壓下鉗住細(xì)胞膜。隨后的電壓鉗方案(protocol)改變指令電壓為+20mV(持續(xù)1000ms)、-120mV(持續(xù)500ms)，并返回到-80mV保持電壓；該過程每12s重復(fù)一次。在初始穩(wěn)定期(約5-6分鐘)后，將實(shí)驗(yàn)物質(zhì)通過移液管以升高的濃度(例如0.1、1和10μmol/l)引入(每個(gè)濃度暴露約5-6分鐘)，然后進(jìn)行幾次洗滌步驟。
由電位從+20mV至-120mV的變化產(chǎn)生的向內(nèi)“尾”電流的幅度用于量化hERG鉀電流，并且被描述為時(shí)間的函數(shù)(IgorProTM軟件)。在各個(gè)時(shí)間間隔(例如試驗(yàn)物質(zhì)之前的穩(wěn)定期，試驗(yàn)物質(zhì)的第一/第二/第三濃度)結(jié)束時(shí)的電流幅度用于建立濃度/效應(yīng)曲線，由該曲線計(jì)算試驗(yàn)物質(zhì)的半數(shù)最大抑制濃度IC50。
Hamill OP,Marty A,Neher E,Sakmann B,Sigworth FJ.Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches.Pfluegers Arch 1981；391:85-100.
Himmel HM.Suitability of commonly used excipients for electrophysiological in-vitro safety pharmacology assessment of effects on hERG potassium current and on rabbit Purkinje fiber action potential.J Pharmacol Toxicol Methods 2007；56:145-158.
Scheel O,Himmel H,Rascher-Eggstein G,Knott T.Introduction of a modular automated voltage-clamp platform and its correlation with manual human ether-a-go-go related gene voltage-clamp data.Assay Drug Dev Technol 2011；9:600-607.
Zhou ZF,Gong Q,Ye B,Fan Z,Makielski JC,Robertson GA,January CT.Properties of hERG channels stably expressed in HEK293cells studied at physiological temperature.Biophys J 1998；74:230-241.
B-10.肝細(xì)胞體外清除率測(cè)定
新鮮原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)在37℃下、在1.5ml的總體積中用改進(jìn)的機(jī)器人(Perkin Elmer)來(lái)進(jìn)行，同時(shí)進(jìn)行搖動(dòng)。培養(yǎng)液通常含有1百萬(wàn)個(gè)活的肝細(xì)胞/ml、約1μM底物和0.05M磷酸鉀緩沖液(pH＝7.4)。培養(yǎng)液中的最終乙腈濃度為≤1％。
在2、10、20、30、50、70和90min后從培養(yǎng)液中取出125μl等份試樣，并轉(zhuǎn)移至96孔濾板(0.45μm弱結(jié)合的親水性PTFE；微孔：MultiScreen Solvinert)。這些試樣各含有250μl乙腈以終止反應(yīng)。在離心之后，通過MS/MS(通常為API 3000)分析濾液。
使用以下等式，由物質(zhì)降解的半衰期計(jì)算體外清除率：
CL'內(nèi)源性[ml/(min·kg)]＝(0.693/體外t1/2[min])·(肝臟重量[g肝臟/kg體重])x(細(xì)胞數(shù)[1.1·10^8]/肝臟重量[g])/(細(xì)胞數(shù)[1·10^6]/培養(yǎng)液體積[ml])
在不考慮游離級(jí)分(“無(wú)限制性攪拌良好模型”)的情況下，CL血液通過以下等式計(jì)算：
CL血液攪拌良好[l/(h·kg)]＝(QH[l/(h·kg)]x CL'內(nèi)源性[l/(h·kg)])/(QH[l/(h·kg)]+CL'內(nèi)源性[l/(h·kg)])
用于計(jì)算的物種特異性外推因子總結(jié)于下表中：
描述基于肝提取的最大可能生物利用度的Fmax值計(jì)算如下：
Fmax攪拌良好[％]＝(1-(CL血液攪拌良好[l/(h·kg)]/QH[l/(h·kg)]))x 100
C.藥物組合物的工作實(shí)施例
本發(fā)明的化合物可被轉(zhuǎn)化為如下的藥物制劑：
片劑：
組成：
100mg本發(fā)明的化合物、50mg乳糖(一水合物)、50mg玉米淀粉(天然的)、10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwigshafen，德國(guó))及2mg硬脂酸鎂。
片劑重量212mg，直徑8mm，曲率半徑12mm。
制備：
將本發(fā)明的化合物、乳糖和淀粉的混合物用5％(w/w)的PVP水溶液制粒。將所述顆粒干燥，然后與硬脂酸鎂混合5分鐘。用常規(guī)壓片機(jī)將該混合物壓縮(對(duì)于片劑的形式參見上文)。用于壓片的指導(dǎo)值為15kN的壓力。
用于口服給藥的混懸液：
組成：
1000mg本發(fā)明的化合物、1000mg乙醇(96％)、400mg(購(gòu)自FMC，Pennsylvania，USA的黃原膠)及99g水。
10ml口服混懸液相當(dāng)于100mg本發(fā)明化合物的單次劑量。
制備：
將Rhodigel懸浮于乙醇中；將本發(fā)明的化合物加入該懸浮液中。在攪拌下加入水。將所述混合物攪拌約6h直到Rhodigel完全膨脹。
用于口服給藥的溶液劑：
組成：
500mg本發(fā)明的化合物、2.5g聚山梨酸酯和97g聚乙二醇400。20g口服液相當(dāng)于100mg本發(fā)明化合物的單次劑量。
制備：
在攪拌下，將本發(fā)明的化合物懸浮于聚乙二醇和聚山梨酸酯的混合物中。持續(xù)攪拌操作直到本發(fā)明的化合物完全溶解。
i.v.溶液：
將本發(fā)明的化合物以低于飽和溶解度的濃度溶解于生理學(xué)上可接受的溶劑(例如等滲鹽水溶液、5％葡萄糖溶液和/或30％PEG 400溶液)中。將所得的溶液進(jìn)行無(wú)菌過濾并分裝到無(wú)菌且無(wú)熱原的注射容器中。