1.一種山牡荊抗腫瘤化合物的研究方法,其特征在于,包括以下步驟;
S1:探索山牡荊有效成分的最佳提取方法,應(yīng)用傳統(tǒng)提取方法、超聲波提取方法、微波提取方法和超臨界流體萃取提取方法分別對山牡荊有效成分進(jìn)行提取,選取最佳的提取方法;
S2:對山牡荊中的有效成分進(jìn)行分離和純化,采用有效的分離方法對山牡荊中的有效成分進(jìn)行分離制備;
S3:將分離出的山牡荊有效成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,利用化學(xué)手段和現(xiàn)代儀器技術(shù)對分離得到的山牡荊各成分進(jìn)行鑒定;
S4:篩選對山牡荊最敏感的腫瘤細(xì)胞和有效的抗腫瘤藥物濃度,并進(jìn)行抗腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn),配制不同濃度的山牡荊提取物,進(jìn)行山牡荊體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn),篩選對山牡荊和單葉蔓荊最為敏感的腫瘤細(xì)胞和有效的抗腫瘤藥物濃度,并用最敏感的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效成分抗腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn),確定抗腫瘤活性成分的抗腫瘤效果;
S5:進(jìn)行活體抗腫瘤實(shí)驗(yàn);
S6:對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,發(fā)掘山牡荊抗腫瘤化合物,以活性較好的化合物作為先導(dǎo)化合物,通過進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)簡化,考察分子中各結(jié)構(gòu)片段對抗腫瘤活性的影響,并利用化學(xué)手段,結(jié)合計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)及構(gòu)效關(guān)系研究,對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,合成大量化合物,結(jié)合活性評價,發(fā)掘抗腫瘤效果好的山牡荊化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山牡荊抗腫瘤化合物的研究方法,其特征在于,所述山牡荊中有效成分的分離方法采用色譜分離法,所述色譜分離法包括高效液相制備色譜、中壓制備液相色譜和逆流色譜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山牡荊抗腫瘤化合物的研究方法,其特征在于,所述活體抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的具體方法為:選用對山牡荊抗腫瘤成分最敏感的腫瘤細(xì)胞構(gòu)建小鼠腫瘤模型,將山牡荊和單葉蔓荊抗腫瘤成分的高、中、低三個劑量設(shè)為實(shí)驗(yàn)組,以生理鹽水為空白組進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn),定期監(jiān)測小鼠皮下瘤體生長情況并對動物進(jìn)行生存觀察,觀察結(jié)束后,處死小鼠并取動物腫瘤及相關(guān)臟器組織進(jìn)行HE、免疫組化及凋亡染色,分析動物有無系統(tǒng)性損害。