本發(fā)明涉及一種苯酚降解菌的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù):
目前污水中,都會含有亞硝酸鹽,但是在污水中對酚類物質(zhì)如何清潔有效的去除,且不污染環(huán)境,尚處于研究階段。經(jīng)檢索并非發(fā)現(xiàn)相關(guān)文獻。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷,本發(fā)明提供一種苯酚降解菌的培養(yǎng)方法,本發(fā)明的技術(shù)方案是:
一種苯酚降解菌的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)制備苯酚降解菌培養(yǎng)基,具體制備方法如下:硫酸銨1g/l,磷酸氫二鉀0.2g/l,硫酸鎂0.05g/l,苯酚0.5g/l,瓊脂18g/l,按照成分比例制備苯酚降解菌培養(yǎng)基,并在微波爐加熱,加熱時間:2min,加熱溫度:80℃,至瓊脂完全融化為止,放入高壓滅菌鍋進行滅菌,滅菌溫度121℃,時間30min,然后在生物安全柜內(nèi)倒入已滅菌的干燥培養(yǎng)皿內(nèi),每個培養(yǎng)皿倒入15ml,將倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)至冷卻,冷卻時間:5h,冷卻溫度:室溫25℃,冷卻后可放入冰箱冷藏備用;
(2)將苯酚降解菌活化在苯酚降解菌培養(yǎng)基中,然后在超凈工作臺內(nèi)對苯酚降解菌進行平板涂布,同時將苯酚降解菌溶液濃度進行梯度稀釋,分別稀釋到10的-2次方,10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液槍取稀釋好的苯酚降解菌溶液分別200微升,分別注入在培養(yǎng)皿內(nèi)的苯酚降解菌培養(yǎng)基上,用涂布棒將苯酚降解菌溶液涂布均勻,并用記號筆在培養(yǎng)皿的底部進行標注,然后放入35℃的恒溫培養(yǎng)箱中,進行培養(yǎng),1-2天后,觀察苯酚降解菌的生長情況,用記號筆分別劃出培養(yǎng)基上生長的不同形態(tài)的苯酚降解菌,并標注序號,然后對標注的苯酚降解菌進行平板劃線;
(4)將劃好的平板放入恒溫培養(yǎng)箱,35℃,培養(yǎng)1-2天,觀察平板上苯酚降解菌的生長,并對生長好的苯酚降解菌進行染色鏡檢,記錄其形態(tài)特征,重復該操作,直至顯微鏡下觀察的苯酚降解菌形態(tài)完全純化為止,將純化的苯酚降解菌進行在試管斜面培養(yǎng)基中進行斜面劃線保藏。
所述的步驟(2)中具體稀釋方法為:用注射器取10ml蒸餾水放入試管中,將蒸餾水進行滅菌,在生物安全柜內(nèi),用移液槍取100微升的菌株溶液,注入到無菌蒸餾水的試管中,此時,該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方,同樣方法,將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步驟(3)平板劃線方法如下:在生物安全柜內(nèi),點燃酒精燈,用接種環(huán)頂部輕觸標序號的苯酚降解菌,劃在苯酚降解菌培養(yǎng)基上,每一序號的苯酚降解菌在培養(yǎng)基上劃四區(qū),每劃一區(qū)將接種環(huán)放在酒精燈上燃燒,重復操作。
所述的步驟(4)試管斜面培養(yǎng)基的制備方法:稱取蛋白胨10g/l,牛肉膏粉5g/l,瓊脂粉18g/l,氯化鈉5g/l,按照配比進行混合,混合后在微波爐中加熱,加熱時間:1-2min,加熱溫度:70-80℃,至瓊脂粉完全融化為止,用10ml的注射器取5ml注入試管中,將試管放入2l的燒杯進行包扎,然后放入高壓滅菌鍋進行滅菌,滅菌121℃,時間30min,滅菌后,將試管取出擺斜面,斜面的擺放標準是斜面上營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的長度不超過整個試管長度的2/3,靜置8h,待冷凝后,放入冰箱冷藏即可。
本發(fā)明的優(yōu)點是:經(jīng)過本發(fā)明培養(yǎng)的苯酚降解菌,能夠有效的去除酚類物質(zhì),而且不會污染環(huán)境。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明,本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的,并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是,在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換,但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
本發(fā)明涉及一種苯酚降解菌的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)制備苯酚降解菌培養(yǎng)基,具體制備方法如下:硫酸銨1g/l,磷酸氫二鉀0.2g/l,硫酸鎂0.05g/l,苯酚0.5g/l,瓊脂18g/l,按照成分比例制備苯酚降解菌培養(yǎng)基,并在微波爐加熱,加熱時間:2min,加熱溫度:80℃,至瓊脂完全融化為止,放入高壓滅菌鍋進行滅菌,滅菌溫度121℃,時間30min,然后在生物安全柜內(nèi)倒入已滅菌的干燥培養(yǎng)皿內(nèi),每個培養(yǎng)皿倒入15ml,將倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)至冷卻,冷卻時間:5h,冷卻溫度:室溫25℃,冷卻后可放入冰箱冷藏備用;
(2)將苯酚降解菌活化在苯酚降解菌培養(yǎng)基中,然后在超凈工作臺內(nèi)對苯酚降解菌進行平板涂布,同時將苯酚降解菌溶液濃度進行梯度稀釋,分別稀釋到10的-2次方,10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液槍取稀釋好的苯酚降解菌溶液分別200微升,分別注入在培養(yǎng)皿內(nèi)的苯酚降解菌培養(yǎng)基上,用涂布棒將苯酚降解菌溶液涂布均勻,并用記號筆在培養(yǎng)皿的底部進行標注,然后放入35℃的恒溫培養(yǎng)箱中,進行培養(yǎng),1-2天后,觀察苯酚降解菌的生長情況,用記號筆分別劃出培養(yǎng)基上生長的不同形態(tài)的苯酚降解菌,并標注序號,然后對標注的苯酚降解菌進行平板劃線;
(4)將劃好的平板放入恒溫培養(yǎng)箱,35℃,培養(yǎng)1-2天,觀察平板上苯酚降解菌的生長,并對生長好的苯酚降解菌進行染色鏡檢,記錄其形態(tài)特征,重復該操作,直至顯微鏡下觀察的苯酚降解菌形態(tài)完全純化為止,將純化的苯酚降解菌進行在試管斜面培養(yǎng)基中進行斜面劃線保藏。
所述的步驟(2)中具體稀釋方法為:用注射器取10ml蒸餾水放入試管中,將蒸餾水進行滅菌,在生物安全柜內(nèi),用移液槍取100微升的菌株溶液,注入到無菌蒸餾水的試管中,此時,該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方,同樣方法,將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步驟(3)平板劃線方法如下:在生物安全柜內(nèi),點燃酒精燈,用接種環(huán)頂部輕觸標序號的苯酚降解菌,劃在苯酚降解菌培養(yǎng)基上,每一序號的苯酚降解菌在培養(yǎng)基上劃四區(qū),每劃一區(qū)將接種環(huán)放在酒精燈上燃燒,重復操作。
所述的步驟(4)試管斜面培養(yǎng)基的制備方法:稱取蛋白胨10g/l,牛肉膏粉5g/l,瓊脂粉18g/l,氯化鈉5g/l,按照配比進行混合,混合后在微波爐中加熱,加熱時間:1-2min,加熱溫度:70-80℃,至瓊脂粉完全融化為止,用10ml的注射器取5ml注入試管中,將試管放入2l的燒杯進行包扎,然后放入高壓滅菌鍋進行滅菌,滅菌121℃,時間30min,滅菌后,將試管取出擺斜面,斜面的擺放標準是斜面上營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的長度不超過整個試管長度的2/3,靜置8h,待冷凝后,放入冰箱冷藏即可。
實施例:取帶有酚類物質(zhì)的污水,其中苯酚類物質(zhì)的含量為0.138g/l,加入本發(fā)明純化后的苯酚降解菌,苯酚類物質(zhì)的含量為0.069g/l,結(jié)果表明,對酚類物質(zhì)的去除率達到50%。