從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種或五種生物堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種或五種生物堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 藏藥角茴香（HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms)為罌粟科角茴香屬植物， 別名咽喉草、山黃連或野茴香等，藏藥名為巴爾哇打、巴爾巴達(dá)。生長于海拔4300m以下的 草原、草甸、砂礫地上，味苦性涼，清血熱、溫?zé)岷投緹?。《西藏常用中草藥》稱其有解熱鎮(zhèn)痛、 消炎解毒之功效，可治傷風(fēng)感冒、頭痛、四肢關(guān)節(jié)疼痛、膽囊炎，并解食物中毒?！蛾兏蕦幥嘀?草藥選》中稱：細(xì)果角茴香能治流感、咽喉腫痛、目赤等癥。現(xiàn)代分析化學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué) 研宄發(fā)現(xiàn)：細(xì)果角茴香中含有多種生物堿成分，如：原阿片堿、隱品堿、血根堿等。
[0003] 細(xì)果角茴香生物堿是從細(xì)果角茴香全草中提取得到的生物堿。通過查閱文獻(xiàn)，發(fā) 現(xiàn)還沒有對(duì)其活性成分進(jìn)行系統(tǒng)研宄。根據(jù)同屬植物的研宄發(fā)現(xiàn)，該屬植物的活性成分主 要為生物堿。到目前為止只報(bào)道了使用傳統(tǒng)的柱色譜法對(duì)細(xì)果角茴香中生物堿分離的報(bào) 道。
[0004]高速逆流色譜（High-speedcounter-currentchromatography，簡稱HSCCC)分離 技術(shù)是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)，它不用任何固態(tài)的支撐物或載體，利用 兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動(dòng)力學(xué)平衡，其中一相 作為固定相，另一相作為流動(dòng)相，在連續(xù)洗脫的過程中能保留大量的固定相，物質(zhì)的分離依 據(jù)其在兩相中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)，特別適合于天然產(chǎn)物活性成分的分離。
[0005]目前還未見有人使用HSCCC技術(shù)對(duì)細(xì)果角茴香中的生物堿進(jìn)行分離純化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種利用HSCCC技術(shù)從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種 或五種生物堿的方法。
[0007] 具體地，本發(fā)明提供了從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法，它包括 如下操作步驟：
[0008] (1)粗提物的制備：
[0009] 取細(xì)果角茴香，用70% -95% v/v乙醇為溶劑提取，提取液濃縮除去乙醇后，所得 浸膏加鹽酸，除去不溶物，溶液脫脂后，加堿調(diào)節(jié)pH至9~10,再用氯仿萃取，收集氯仿層， 除去溶劑后，干燥得到生物堿粗提物；
[0010] (2)采用高速逆流色譜法分離：
[0011] 取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=3 : 5 : 2 : 5,置于分液漏斗中配制兩相溶劑系 統(tǒng)，取下相加鹽酸至其濃度為5~10mM/L時(shí)作為固定相，上相加三乙胺至其濃度為10mM時(shí) 作為流動(dòng)相；將固定相充滿逆流色譜的色譜柱，在25-28°C下，主機(jī)正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800-900r/ min，然后以1. 5-1. 8mL/min的流速泵入流動(dòng)相，至兩相溶劑在柱中達(dá)到平衡狀態(tài)；步驟 (1)制備的粗提物，以固定相為溶劑溶解，制備樣品溶液；將樣品溶液進(jìn)樣，在280nm下監(jiān) 測，分別接收各目標(biāo)成分，即可分別得到組分a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、hydroprotopine；
[0012] (3)取組分a，上半制備色譜，即可分離得到1印topidine，其中，半制備色譜條件 如下：
[0013]C18柱，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度條件為甲醇：0-10min，40-42 % ;10-30min， 42-42% ;檢測波長 280nm。
[0014] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，乙醇濃度為95%v/v，提取溫度為50-70°C，優(yōu)選為60°C。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，鹽酸的加入量為浸膏體積的4倍，鹽酸體積分?jǐn)?shù)為2%。
[0016] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，脫脂處理是采用石油醚或氯仿萃取實(shí)現(xiàn)；優(yōu)選使用石油 醚。
[0017] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，所述堿為氨水。
[0018] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，粗提物用量為200mg。
[0019] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，接收出峰時(shí)間為49-57min的目標(biāo)成分，即可得到組分a; 接收出峰時(shí)間為7〇-75min的目標(biāo)成分，S卩可得到（-)-N-methylanadine;接收出峰時(shí)間為 102_106min的目標(biāo)成分，即可得到oxohydrastinine;接收出峰時(shí)間為126_133min的目標(biāo) 成分，即可得到hydroprotopine。
[0020] 本發(fā)明還提供了從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離五種生物堿的方法，它包括如下操 作：
[0021] A、按照上述方法制備組分a、（_)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine；
[0022] B、取組分a，上半制備色譜，依次可分離得到式a_l和leptopidine，其中，半制備 色譜條件如下：C18柱，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度條件為甲醇：0-10min，40-42% ;10-30min， 42-42% ;檢測波長 280nm。
[0023]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法，其特征在于：它包括如下操作步 驟： (1) 粗提物的制備： 取細(xì)果角茴香，用70% -95% v/v乙醇為溶劑提取，提取液濃縮除去乙醇后，所得浸膏 加鹽酸，除去不溶物，溶液脫脂后，加堿調(diào)節(jié)PH至9~10,再用氯仿萃取，收集氯仿層，除去 溶劑后，干燥得到生物堿粗提物； (2) 采用高速逆流色譜法分離： 取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=3 : 5 : 2 : 5,置于分液漏斗中配制兩相溶劑系統(tǒng)， 取下相加鹽酸至其濃度為5~10mM/L時(shí)作為固定相，上相加三乙胺至其濃度為10mM/L時(shí) 作為流動(dòng)相；將固定相充滿逆流色譜的色譜柱，在25-28°C下，主機(jī)正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800-900r/ min，然后以I. 5-1. 8mL/min的流速泵入流動(dòng)相，至兩相溶劑在柱中達(dá)到平衡狀態(tài)；步驟 (1)制備的粗提物，以固定相為溶劑溶解，制備樣品溶液；將樣品溶液進(jìn)樣，在280nm下監(jiān) 測，分別接收各目標(biāo)成分，即可分別得到組分a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine ； (3) 取組分a，上半制備色譜，接收出峰時(shí)間為24. 8-25. 4min的目標(biāo)成分，即可得到 leptopidine，其中，半制備色譜條件如下： C18柱，檢測波長280nm，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度條件為甲醇：0-10min，40-42% ; 10-30min，42-42%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，乙醇濃度為95% v/v，提取 溫度為50-70 °C，優(yōu)選為60 °C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，鹽酸的加入量為浸膏體積的 4倍，鹽酸體積分?jǐn)?shù)為2 %。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，脫脂處理是采用石油醚或氯 仿萃取實(shí)現(xiàn)；優(yōu)選使用石油醚。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，所述堿為氨水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟⑵中，粗提物用量為200mg。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，接收出峰時(shí)間為 49-57min的目標(biāo)成分，即可得到組分a、；接收出峰時(shí)間為70-75min的目標(biāo)成分，即 可得到（-)-N-methylanadine ;接收出峰時(shí)間為102_106min的目標(biāo)成分，即可得到 oxohydrastinine ;接收出峰時(shí)間為126_133min的目標(biāo)成分，即可得到hydroprotopine。
8. 從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離五種生物堿的方法，其特征在于：，其特征在于：它包 括如下操作： A、 按照權(quán)利要求 1 制備組分 a、（-)-N-methylanadine、oxohydrastinine、 hydroprotopine ； B、 取組分a，上半制備色譜，接收出峰時(shí)間為22. 7-23. 2min的目標(biāo)成分，即可得到組 分a-Ι ;接收出峰時(shí)間為24. 8-25. 4min的目標(biāo)成分，即可得到leptopidine，其中，半制備 色譜條件如下：C18柱，檢測波長是280nm，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度條件為甲醇：0-10min， 40-42% ；10-30min,42-42%
9. 式a-1所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物或晶型：
10. 式a-Ι所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物或晶型在制備抗氧 化的藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供了從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種或五種生物堿的方法。本發(fā)明中，用高速逆流色譜法從細(xì)果角茴香中提取分離四種或五種生物堿類化合物，相對(duì)傳統(tǒng)的柱色譜法操作簡單，分離時(shí)間明顯縮短，得到的化合物純度也相對(duì)較高。同時(shí)，本發(fā)明研究過程中分離得到了新化合物——式a-1，該化合物具有一定的抗氧化作用，為臨床用藥提供了新的選擇。
【IPC分類】A61P39-06, C07C235-34, C07C231-24, C07D455-03, C07D491-056, C07D217-20
【公開號(hào)】CN104761562
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410578856
【發(fā)明人】丁晨旭, 張秋龍, 胡娜, 馬濤, 李文聰, 索有瑞
【申請(qǐng)人】中國科學(xué)院西北高原生物研究所
【公開日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2014年10月17日