一種從萹蓄中提取、純化萹蓄苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 篇蓄苷，CAS號：572-30-5 ;分子式：C2(lH18On;分子量：434. 35 ;性狀：黃色針狀晶 體；熔點(diǎn)217°C;無水物熔點(diǎn)為222°C。篇蓄苷具有抗炎、抑菌、抗病毒作用，還具有抗氧化作 用；結(jié)構(gòu)式為：
篇蓄為寥科一年生草本植物，生長于田野、路旁、荒地及河邊等處，每年小暑時間采取 莖葉，曬干作藥用。主產(chǎn)于河南、四川、浙江、山東、吉林、河北等地。具有一定的藥理作用。 全草含篇蓄甙、槲皮甙、d-兒茶精、沒食子酸、咖啡酸、草酸、硅酸、綠原酸、P-香豆酸、粘質(zhì)、 葡萄糖、果糖及蔗糖。硅酸的分布：葉1. 6%，莖0. 6%，根0. 4%(如用作硅酸鹽藥物，可在其整 個生長期采集，如用作黃酮藥物，則宜于剛開花時采集)。
[0003] 經(jīng)現(xiàn)代研宄證明，篇蓄具有的藥理作用為：①利尿作用②降壓作用③對子宮及止 血作用④抗菌作用。
[0004] 超臨界流體結(jié)晶技術(shù)：超臨界流體是指尚于流體臨界點(diǎn)，以單相形式存在的流體， 其物理化學(xué)性質(zhì)與非臨界狀態(tài)液體和氣體有很大的不同。由于密度是溶解能力、粘度大小 是流體的阻力、擴(kuò)散系數(shù)是傳質(zhì)速率高低的主要參數(shù)，素以流體的特殊物理性質(zhì)決定了超 臨界流體結(jié)晶技術(shù)的一系列重要特點(diǎn)。超臨界流體的擴(kuò)散系數(shù)比液體要大得多，粘度類似 于氣體，遠(yuǎn)小于液體，有比液體快得多的溶解溶質(zhì)和攜帶能力，這對傳質(zhì)極為有利，縮短了 相平衡所需的時間，是高效傳質(zhì)的理想介質(zhì)。它具有不同尋常的巨大壓縮性，通過簡單的減 壓、升溫即會引起流體密度的很大變化，從而使其中的溶質(zhì)迅速地過飽和結(jié)晶析出，所以超 臨界流體是一種優(yōu)良的結(jié)晶溶劑。而當(dāng)在超臨界流體中添加第二種、第三種有機(jī)溶劑后，還 能在很大程度上使改性超臨界流體結(jié)晶的選擇性大大提高。而且，能夠方便地通過條件的 控制獲取從亞微米級超細(xì)晶粒到常規(guī)大顆粒結(jié)晶，還可控制其粒度尺寸的分布。由于超臨 界流體是一種介于氣相與液相之間的狀態(tài)，物質(zhì)結(jié)晶時避免了相的沖突，克服了表面張力 的影響，固體微粒表面能不升高，因而生成的固體微粒不易發(fā)生聚集。超臨界流體結(jié)晶技術(shù) 具備操作簡便、速度快、產(chǎn)率高、溶劑易徹底除去而無二次污染、少污染或不污染環(huán)境等優(yōu) 點(diǎn)。
[0005] 目前，國內(nèi)很少見篇蓄苷提取方法的相關(guān)專利報道。在現(xiàn)有公開專利"一種制備 篇蓄苷的方法"（專利號201010549755. 9)中采用的工藝步驟為：包括將篇蓄藥材粉碎，用 6-10倍量30-40%低碳醇回流提取2-3次，每次1-2h，合并提取液減壓回收醇，趁熱加入大 孔樹脂柱中吸附，水洗無糖色，再用5-6BV30-60%低碳醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液加 入水飽和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇層減壓濃縮，加水回流趁熱過濾，濾液調(diào)pH3-5放 置結(jié)晶，再依次用低碳醇、丙酮回流溶解重結(jié)晶，干燥即得產(chǎn)品。該法溶劑使用量大，操作過 程復(fù)雜，所得篇蓄苷純度低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種從篇蓄中提取、純化篇蓄 苷的方法，此法操作簡單，所得產(chǎn)品純度高。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法通過以下技術(shù)方案來實 現(xiàn)： 1) 材料預(yù)處理：取篇蓄經(jīng)60~80°c干燥，粉碎，過40~80目篩； 2) 酶解：稱取一定量的粗粉，加入料液比為1 :3~6的蒸餾水浸泡，并加入粗粉重量 0. 1%~0. 3%的生物酶在pH值4~5,溫度為45~50°C的條件下酶解l~3h ; 3) 微波提?。好附饨Y(jié)束，將所得酶解物在溫度為70~80°C的條件下微波提取，濾渣重復(fù) 提取2~3次，每次300~600s，過濾，收集濾液； 4) 純化：濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過超濾膜，收集透過液，將透過液上聚 酰胺樹脂柱，先用5%~10%、2~4倍柱體積的乙醇洗脫，再用50~70%、3~5倍柱體積的乙醇洗 脫，收集洗脫液； 5) 超臨界流體結(jié)晶：將洗脫液通過溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為 50~200ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的篇蓄苷晶體。
[0008] 步驟2)中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的 混合物。
[0009] 步驟3)中所述微波的提取功率為800~1000W。
[0010] 步驟4)中所述超濾膜可選用截留分子量為1000~5000的超濾膜。
[0011] 步驟5 )中所述結(jié)晶釜工作壓力為10~20MPa，溫度為30~40 °C，結(jié)晶時間為 30~IOOmin0
[0012] 本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)為：1、采用了生物酶酶解輔助微波提取的提取方法，提取效率 高，溶劑用量少，對環(huán)境污染??；2、采用了超濾膜和聚酰胺樹脂柱相結(jié)合的純化方法，使得 所得產(chǎn)品純度高；3、采用了超臨界流體結(jié)晶技術(shù)，這種技術(shù)能夠制備出平均粒徑很小的細(xì) 微顆粒，同時還能控制粒度尺寸的分布，從而能增加藥物的溶解度、改善吸收效率、提高生 物利用度，從而顯著增強(qiáng)藥效。
【具體實施方式】
[0013] 下面將結(jié)合【具體實施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0014] 實施例1 : 取篇蓄經(jīng)60°C干燥，粉碎，過40目篩；稱取一定量的粗粉，加入料液比為1 :3的蒸餾 水浸泡，并加入粗粉重量〇. 1%的果膠酶在PH值為4,溫度為45°C的條件下酶解Ih ;酶解結(jié) 束，將所得酶解物在70°C、800W的功率下微波提取，濾渣重復(fù)提取2次，每次300s，過濾，收 集濾液；濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過截留分子量為1000的超濾膜，收集透過 液，將透過液上聚酰胺樹脂柱，先用5%、2倍柱體積的乙醇洗脫，再用50%、3倍柱體積的乙醇 洗脫，收集洗脫液；將洗脫液通過溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為50ml/min， 在結(jié)晶釜底部收集析出的篇蓄苷晶體。結(jié)晶釜工作壓力為lOMPa，溫度為30°C，結(jié)晶時間為 30min。經(jīng)HPLC檢測，含量為92. 2%。
[0015] 實施例2 : 取篇蓄經(jīng)70°C干燥，粉碎，過60目篩；稱取一定量的粗粉，加入料液比為1 :5的蒸餾水 浸泡，并加入粗粉重量〇. 2%的纖維素酶和果膠酶混合物在pH值為4,溫度為45°C的條件下 酶解2h ;酶解結(jié)束，將所得酶解物在75°C、1000W的功率下微波提取，濾渣重復(fù)提取2次，每 次500s，過濾，收集濾液；濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過截留分子量為3000的超 濾膜，收集透過液，將透過液上聚酰胺樹脂柱，先用7%、3倍柱體積的乙醇洗脫，再用60%、4 倍柱體積的乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液通過溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流 速為100ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的篇蓄苷晶體。結(jié)晶釜工作壓力為15MPa，溫度為 35°C，結(jié)晶時間為70min。經(jīng)HPLC檢測，含量為93. 1%。
[0016] 實施例3: 取篇蓄經(jīng)80°C干燥，粉碎，過80目篩；稱取一定量的粗粉，加入料液比為1 :6的蒸餾水 浸泡，并加入粗粉重量〇. 3%的半纖維素酶在pH值為5,溫度為50°C的條件下酶解3h ;酶解 結(jié)束，將所得酶解物在80°C、1000W的功率下微波提取，濾渣重復(fù)提取3次，每次600s，過濾， 收集濾液；濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過截留分子量為5000超濾膜，收集透過 液，將透過液上聚酰胺樹脂柱，先用1〇%、4倍柱體積的乙醇洗脫，再用70%、5倍柱體積的乙 醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液通過溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為200ml/ min，在結(jié)晶釜底部收集析出的篇蓄苷晶體。結(jié)晶釜工作壓力為20MPa，溫度為40°C，結(jié)晶時 間為IOOmin。經(jīng)HPLC檢測，含量為94. 2%。
【主權(quán)項】
1. 一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 材料預(yù)處理：取篇蓄經(jīng)60~80°C干燥，粉碎，過40~80目篩； 2) 酶解：稱取一定量的粗粉，加入料液比為1 :3~6的蒸餾水浸泡，并加入粗粉重量 0. 1%~0. 3%的生物酶在pH值4~5,溫度為45~50°C的條件下酶解l~3h; 3) 微波提取：酶解結(jié)束，將所得酶解物在溫度為70~80°C的條件下微波提取，濾渣重復(fù) 提取2~3次，每次300~600s，過濾，收集濾液； 4) 純化：濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過超濾膜，收集透過液，將透過液上聚 酰胺樹脂柱，先用5%~10%、2~4倍柱體積的乙醇洗脫，再用50~70%、3~5倍柱體積的乙醇洗 脫，收集洗脫液； 5) 超臨界流體結(jié)晶：將洗脫液通過溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為 50~200ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的篇蓄苷晶體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，其特征在于步驟2) 中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的混合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，其特征在于步驟3) 中所述微波的提取功率為800~ 1000W。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，其特征在于步驟4) 中所述超濾膜可選用截留分子量為1〇〇〇~5000的超濾膜。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從篇蓄中提取、純化篇蓄苷的方法，其特征在于步驟5) 中所述結(jié)晶釜工作壓力為l〇~20MPa，溫度為30~40°C，結(jié)晶時間為30~100min。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從萹蓄中提取、純化萹蓄苷的方法。其制備過程如下：取萹蓄經(jīng)60~80℃干燥，粉碎，過40~80目篩；稱取一定量的粗粉，加入料液比為1：3~6的蒸餾水浸泡，并加入粗粉重量0.1%~0.3%的生物酶酶解；酶解結(jié)束，將所得酶解物微波提取，濾渣重復(fù)提取2~3次，每次300~600s，過濾，收集濾液；濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液通過超濾膜，收集透過液，將透過液上聚酰胺樹脂柱，先用5%~10%、2~4倍柱體積的乙醇洗脫，再用50~70%、3~5倍柱體積的乙醇洗脫，收集洗脫液；將所得洗脫液采用超臨界流體結(jié)晶技術(shù)制得萹蓄苷晶體。本方法高效、快速、應(yīng)用范圍廣，適合高純度萹蓄苷的生產(chǎn)。
【IPC分類】C07H17/07, C07H1/08
【公開號】CN104926895
【申請?zhí)枴緾N201510265035
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年5月22日