然后往馬比木粉末中加入乙醇，控制料液比為 1:6,然后加熱，在60°C下回流提取3h，提取結(jié)束得到提取液；
[0045] (2)將步驟（1)得到的提取液過(guò)濾，回收乙醇，然后將提取液經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行 純化，提取液與樹(shù)脂的重量比為3:1，上樣速度為2BV/h，然后選用乙醇作為解析液進(jìn)行解 析，解析液流速為lBV/h,解析液體積為8BV,然后收集得到喜樹(shù)堿粗品；
[0046] (3)將步驟（2)的到的喜樹(shù)堿粗品進(jìn)行工業(yè)色譜分離純化，選擇二氯甲烷與丙酮 的混合物為流動(dòng)相，流速為5ml/min,料液比為1 :30,純化完畢得到純化后的喜樹(shù)堿；
[0047] (4)往步驟（3)得到的純化后的喜樹(shù)堿中加入結(jié)晶溶劑，料液比為1:550,水浴回 流使其溶解，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮，在4°C下靜置結(jié)晶12h，抽濾，得到喜樹(shù)堿結(jié)晶產(chǎn)物。
[0048] 步驟⑴中，所述的乙醇濃度為70 %。
[0049] 步驟⑵中，大孔樹(shù)脂為HZ816樹(shù)脂。
[0050] 步驟⑵中，解析液乙醇的濃度為95%。
[0051] 步驟（3)中，二氯甲烷與丙酮的混合物中兩者的體積比為88 :12。
[0052] 步驟⑷中，結(jié)晶溶劑為乙酸乙酯和丙酮，兩者的體積比為1:1。
[0053] 實(shí)施例3
[0054] 本發(fā)明的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法的具體步驟如下：
[0055] (1)首先將馬比木粉碎成粉末，然后往馬比木粉末中加入乙醇，控制料液比為 1:10,然后加熱，在70°C下回流提取lh，提取結(jié)束得到提取液；
[0056] (2)將步驟（1)得到的提取液過(guò)濾，回收乙醇，然后將提取液經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行 純化，提取液與樹(shù)脂的重量比為5. 5:1，上樣速度為4BV/h，然后選用乙醇作為解析液進(jìn)行 解析，解析液流速為2BV/h,解析液體積為10BV,然后收集得到喜樹(shù)堿粗品；
[0057] (3)將步驟（2)的到的喜樹(shù)堿粗品進(jìn)行工業(yè)色譜分離純化，選擇二氯甲烷與丙酮 的混合物為流動(dòng)相，流速為8ml/min,料液比為1 :40,純化完畢得到純化后的喜樹(shù)堿；
[0058] (4)往步驟⑶得到的純化后的喜樹(shù)堿中加入結(jié)晶溶劑，料液比為1:550,水浴回 流使其溶解，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮，在4°C下靜置結(jié)晶12h，抽濾，得到喜樹(shù)堿結(jié)晶產(chǎn)物。
[0059] 步驟（1)中，所述的乙醇濃度為70%。
[0060] 步驟⑵中，大孔樹(shù)脂為HZ816樹(shù)脂。
[0061] 步驟⑵中，解析液乙醇的濃度為95%。
[0062] 步驟（3)中，二氯甲烷與丙酮的混合物中兩者的體積比為88 :12。
[0063] 步驟⑷中，結(jié)晶溶劑為乙酸乙酯和丙酮，兩者的體積比為1:1。
[0064] 對(duì)實(shí)施例1-3制備的喜樹(shù)堿的轉(zhuǎn)移率和純度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表1所示：
[0065] 表 1
[0066]
[0067] 對(duì)比方法一（萃取-結(jié)晶法）
[0068] 取馬比木干粉10kg，用8倍量60 %乙醇對(duì)其進(jìn)行浸泡24小時(shí)后滲漉，收集滲漉 液，藥渣以適量水洗滌，洗滌液用于下一批滲漉套用：將乙醇滲漉液減壓濃縮（70~80°C)， 回收乙醇至1/9體積，濾過(guò)，濾液分別以1. 0,0. 8,0. 5倍量氯仿萃取3次，合并氯仿萃取液， 回收氯仿得萃取浸膏，以甲醇溶解重結(jié)晶得喜樹(shù)堿粗品，再以氯仿-甲醇（1 :
[0069] 3)混合溶劑對(duì)該喜樹(shù)堿粗品重結(jié)晶得喜樹(shù)堿粗品，最后以N，N-二甲基甲酰胺-乙 醇（1 : 5)對(duì)其重結(jié)晶精制得喜樹(shù)堿結(jié)晶產(chǎn)品6.2g，純度93. 1%，轉(zhuǎn)移率38.6%，得率 5.8/10000。
[0070] 對(duì)比方法二（大孔樹(shù)脂-結(jié)晶法）
[0071] 取馬比木干粉l〇kg，用8倍量70 %乙醇對(duì)其進(jìn)行預(yù)浸泡48小時(shí)后滲漉，每次滲流 液的流出體積lmΙ/g原料，續(xù)浸泡時(shí)間24小時(shí)，乙醇濃度60%，乙醇總用量為8ml/g原料 收集滲漉液，滲漉液濃縮，濃縮液稀釋至喜樹(shù)堿濃度為167ug/ml時(shí)。在20L/h流速下吸附， 解吸液總收集體積為20ml/g干樹(shù)脂，解吸流速為1倍柱體積/小時(shí)。解析液濃縮放置，析 出喜樹(shù)堿粗品。該粗品采用乙酸乙酯：丙酮（1 : 1)為結(jié)晶溶劑對(duì)其進(jìn)行重結(jié)晶，精制得 喜樹(shù)堿結(jié)晶產(chǎn)品7. 3g，純度94. 2%，轉(zhuǎn)移率45. 7%，得率6.8/10000。
[0072] 下面對(duì)比本發(fā)明的實(shí)施例3的方法與對(duì)比方法一和二的優(yōu)劣，結(jié)果如表2所示：
[0073] 表 2
[0074]
[0075] 從表2中可知，與傳統(tǒng)相比，大孔樹(shù)脂一工業(yè)色譜法提取所得喜樹(shù)堿在收率、轉(zhuǎn)移 率、工藝時(shí)間耗費(fèi)方面均較好，而且提取分離效率高，省溶劑，便于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
[0076] 盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以 理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換 和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：所述方法的具體步驟如下： (1) 首先將馬比木粉碎成粉末，然后往馬比木粉末中加入60-90%乙醇，控制料液比為 1:6-12,然后加熱，在60-80°C下回流提取0. 5-3h，提取結(jié)束得到提取液； (2) 將步驟（1)得到的提取液過(guò)濾，回收乙醇，然后將提取液經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行分 離，提取液與樹(shù)脂的重量比為3-7:1，上樣速度為2-6BV/h，然后選用乙醇作為解析液進(jìn)行 解析，解析液流速為l_3BV/h，解析液體積為8-12BV，然后收集得到喜樹(shù)喊粗品； (3) 將步驟（2)的到的喜樹(shù)堿粗品進(jìn)行工業(yè)色譜分離純化，選擇二氯甲烷與丙酮的混 合物為流動(dòng)相，流速為5-10ml/min，料液比為1 :30-50,純化完畢得到純化后的喜樹(shù)堿； (4) 往步驟（3)得到的純化后的喜樹(shù)堿中加入結(jié)晶溶劑乙酸乙酯和丙酮，兩者的體積 比為1:1-3,料液比為1:550,水浴回流使其溶解，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮，在0-KTC下靜置結(jié) 晶6-15h，抽濾，得到喜樹(shù)堿結(jié)晶產(chǎn)物。2. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（1)中， 所述的乙醇濃度為70%。3. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（1)中， 料液比為1:10,然后加熱，在70°C下回流提取lh。4. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（2)中， 大孔樹(shù)脂為HZ816樹(shù)脂。5. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（2)中， 提取液與樹(shù)脂的重量比為5. 5:1，上樣速度為4BV/h。6. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（2)中， 解析液乙醇的濃度為95%。7. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（2)中， 解析液流速為2BV/h，解析液體積為10BV。8. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（3)中， 二氯甲烷與丙酮的混合物中兩者的體積比為88 :12。9. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（3)中， 流動(dòng)相流速為8ml/min，料液比為1 :40。10. 如權(quán)利要求1所述的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，其特征在于：步驟（4) 中，結(jié)晶溶劑為乙酸乙酯和丙酮，兩者的體積比為1:1，結(jié)晶溫度4 °C，結(jié)晶時(shí)間為12h。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法，本發(fā)明方法的工藝路線如下：馬比木粉碎→乙醇回流提取→大孔吸附樹(shù)脂吸附分離→工業(yè)色譜純化→結(jié)晶得喜樹(shù)堿。本發(fā)明的從馬比木中提取分離喜樹(shù)堿的方法首次采用了以大孔樹(shù)脂-工業(yè)色譜為核心的整套分離新技術(shù)從馬比木中分離純化喜樹(shù)堿，具有工藝先進(jìn)、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、成熟、收率高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的方法產(chǎn)品得率高、純度高、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，適于馬比木中喜樹(shù)堿的提取分離。
【IPC分類(lèi)】C07D491/22
【公開(kāi)號(hào)】CN105272990
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410336367
【發(fā)明人】葛發(fā)歡, 李迎霞
【申請(qǐng)人】中山大學(xué), 廣州中大南沙科技創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)園有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2014年7月15日