柿子單寧的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種柿子單寧的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 柿子（PersimmonDiospryroskakiL)果肉中含量豐富的單寧類物質(zhì)。研究表明， 柿子單寧具有很強的抗氧化性以及和蛋白質(zhì)結(jié)合能力，具有抑制人淋巴細胞白血病、降血 壓、清除體內(nèi)自由基以及明顯抑制蝮蛇、眼鏡蛇、五步蛇毒液中多種酶類以及毒素的活性。 雖然也有報道稱柿子提取物，有效成分為黃酮、三萜類和可水解單寧，對枯草芽孢桿菌表現(xiàn) 出了一定的耐藥性，但耐藥性并不穩(wěn)定。目前并未見到柿子單寧可用于抑制變形鏈球菌的 報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種柿子單寧的提取方法，提取的單寧可有效抑 制變形鏈球菌，具有很好的防齲齒效果。
[0004] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是柿子單寧的提取方法，包括以下步驟：
[0005] 1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用；
[0006] 2)將濾液濃縮，加入95V%乙醇，放置過夜，離心，取上清液；
[0007] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0008] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子 量為450~600的中空纖維膜，收集截留液備用；
[0009] 5)將截留液通過截留分子量為14000~15000的中空纖維膜，收集透過液，干燥， 即為柿子單寧粉末。
[0010] 步驟1)中，乙醇的體積濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在 60~80°C下提取1~3次，每次1~3h。
[0011] 步驟2)中，乙醇的加入量為濃縮液的2~4倍。
[0012] 步驟3)中，水的加入量為浸膏重量的3~5倍。
[0013] 本發(fā)明提取得到的柿子單寧具有很好的抑制變形鏈球菌的效果，可用于防齲齒。
【具體實施方式】
[0014] 以下具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但不作為對本發(fā)明的限定。
[0015] 實施例1
[0016] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的10倍的70v%乙醇，在60°C下提取lh，合并 提取液，過濾，取濾液備用；
[0017] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的2倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0018] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0019] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的3 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為450~600的中空纖維膜，收集截留液備用；
[0020] 5)將截留液通過截留分子量為14000~15000的中空纖維膜，收集透過液，真空冷 凍干燥，即為柿子單寧粉末。
[0021] 實施例2
[0022] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的20倍的80v%乙醇，在80°C下提取3次，每 次3h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0023] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的4倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0024] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0025] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的5 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為450~600的中空纖維膜，收集截留液備用；
[0026] 5)將截留液通過截留分子量為14000~15000的中空纖維膜，收集透過液，真空冷 凍干燥，即為柿子單寧粉末。
[0027] 實施例3
[0028] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次2h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0029] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0030] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0031] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的4 倍，過濾，取濾液通過截留分子量為450~600的中空纖維膜，收集截留液備用；
[0032] 5)將截留液通過截留分子量為14000~15000的中空纖維膜，收集透過液，真空冷 凍干燥，即為柿子單寧粉末。
[0033] 對照實施例1
[0034] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次2h，合并提取液，過濾，取濾液備用；
[0035] 2)將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過夜，離心， 取上清液；
[0036] 3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0037] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，真空冷凍干燥，即為柿子單寧粉末。
[0038] 實驗例（體外抑菌試驗）
[0039] 1、實驗方法：
[0040] 1)分別取實施例1~3以及對照實施例1的柿子單寧粉末lg粉碎后加10ml無菌 水配成混合溶液。
[0041] 2)抑菌片的制備：取無菌并干燥的濾紙片4片，每片分別滴加實施例1~3以及 對照實施例1制成的混合溶液20μ1，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平面皿內(nèi)，開蓋置溫 箱（37°C)中烤干，或置室溫下自然干燥后備用。陰性對照組抑菌片的制備：取無菌干燥濾 紙片，每片滴加無菌蒸餾水20μ1，干燥后備用。
[0042] 3)接種變形鏈球菌：用無菌棉拭子蘸取濃度為5Χ 105~5Χ 10 6cfu/ml變形鏈球 菌菌懸液，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次，每涂抹一次，平板轉(zhuǎn)動60°，最后將 棉拭子繞平板邊緣涂抹一周，蓋好平皿，置室溫干燥5min。
[0043] 4)抑菌片貼放：每次貼放一個染菌平板，每個平板貼放實施例以及對照實施例的 4片抑菌片和1片陰性對照組抑菌片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面，各樣片中心之間 相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼 于平板表面，蓋好平皿，置于37°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)16~18h，用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑（包 括貼片）并記錄，實驗重復(fù)三次。
[0044] 2、實驗結(jié)果
[0045]
【主權(quán)項】
1. 柿子單寧的提取方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用； 2) 將濾液濃縮，加入95v%的乙醇，放置過夜，離心，取上清液； 3) 將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 4) 將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子量為 450~600的中空纖維膜，收集截留液備用； 5) 將截留液通過截留分子量為14000~15000的中空纖維膜，收集透過液，干燥，即為 柿子單寧粉末。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的柿子單寧的提取方法，其特征在于：步驟1)中，乙醇的體積 濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在60~80°C下提取1~3次，每次 1~3h〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的柿子單寧的提取方法，其特征在于：步驟2)中，乙醇的加入 量為濃縮液的2~4倍。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的柿子單寧的提取方法，其特征在于：步驟3)中，水的加入量 為浸膏重量的3~5倍。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種柿子單寧的提取方法，包括以下步驟：1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液備用；2)將濾液濃縮，加入95V％乙醇，放置過夜，離心，取上清液；3)將上清液過AB-8大孔樹脂，先用水洗柱至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過濾，取濾液通過截留分子量為450～600的中空纖維膜，收集截留液備用；5)將截留液通過截留分子量為14000～15000的中空纖維膜，收集透過液，干燥，即為柿子單寧粉末。本發(fā)明提取的柿子單寧具有很好的抑制變形鏈球菌的作用，可用于防齲齒。
【IPC分類】C07H1/08, C07H13/08
【公開號】CN105348332
【申請?zhí)枴緾N201510759683
【發(fā)明人】文繼承, 蔣元勇, 朱昂輝, 雍小軍, 易華, 李麗金
【申請人】桂林茗興生物科技有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月10日