一株低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味的異常威克漢姆酵母菌株及其在食品生產(chǎn)中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味的異常威克漢姆酵母菌株及其在食品生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬于酒類釀造以及食品安全領(lǐng)域。本發(fā)明的異常威克漢姆酵母是從白酒發(fā)酵環(huán)境(大曲)中分離得到，命名為Wickerhamomyces anomalus JZ420，于2016年5月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC NO.12416。本發(fā)明的菌株具有低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味，耐酒精、耐酸的特征，是優(yōu)良的釀酒功能菌株，可應(yīng)用于釀造酒、蒸餾酒及其它食品領(lǐng)域，保證食品安全性。CGMCC NO. 1241620160506
【專利說(shuō)明】
一株低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味的異常威克漢姆酵母菌株及其在食品 生產(chǎn)中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一株低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味的異常威克漢姆酵母菌株及其在食品生產(chǎn)中的 應(yīng)用，屬于酒類釀造以及食品安全領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 傳統(tǒng)食品在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)不可避免地產(chǎn)生一種代謝副產(chǎn)物，即氨基甲酸乙酯 (ethyl carbamate，EC)。氨基甲酸乙酯的產(chǎn)生是由于發(fā)酵過(guò)程中微生物代謝所產(chǎn)生的或來(lái) 自原料當(dāng)中的尿素、瓜氨酸等與乙醇自發(fā)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)所形成的。形成EC的前體物質(zhì)主要 有尿素，氰化物以及瓜氨酸，而尿素是目前公認(rèn)的酒精飲料當(dāng)中EC形成的主要前體物質(zhì)，如 黃酒，葡萄酒等。在中國(guó)白酒發(fā)酵過(guò)程中，EC形成的主要前體物質(zhì)也被證實(shí)是尿素，其在酒 醅中的含量為26~80mg/kg。
[0003] 尿素主要是由酵母代謝精氨酸所產(chǎn)生的，由于國(guó)外的酒精飲料大多是單菌發(fā)酵或 者少數(shù)菌株共同參與的發(fā)酵，而釀酒酵母在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)揮主體作用。因此，大多數(shù)的研究 集中在釀酒酵母，并得出釀酒酵母是飲料酒中尿素產(chǎn)生的主要菌株。然而，許多發(fā)酵食品屬 于多菌種發(fā)酵，除釀酒酵母外，還有非釀酒酵母的參與，并在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)揮重要作用。異 常威克漢姆酵母(Wickerhamomyces anomalus，）在發(fā)酵過(guò)程具有產(chǎn)多種酯類物質(zhì)的特點(diǎn)， 是各種酒形成的重要前體，并且在食品生產(chǎn)過(guò)程中，胃；[01^1'1^1]101115^6 8 31101]^1118是重要的 菌株，因此，在發(fā)酵過(guò)程中，可通過(guò)添加 Wickerhamomyces anomalus菌株來(lái)改善食品的風(fēng) 味。如在芝麻香型麩曲白酒生產(chǎn)中，酵母麩曲會(huì)通過(guò)添加異常威克漢姆酵母，改善風(fēng)味。 [0004] 最近研究發(fā)現(xiàn)，Wickerhamomyces anomalus為重要的尿素產(chǎn)生菌株，其在發(fā)酵過(guò) 程當(dāng)中所產(chǎn)生的大量尿素會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵過(guò)程中EC的形成，從而產(chǎn)生安全問(wèn)題。因此，獲取低產(chǎn) 尿素且具有產(chǎn)風(fēng)味功能并能適應(yīng)多種食品生產(chǎn)環(huán)境的Wickerhamomyces anomalus，對(duì)于以 酵母作為主要功能微生物的發(fā)酵食品的生產(chǎn)就顯得尤為重要，對(duì)于食品安全具有重要貢 獻(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明篩選得到了 一株低產(chǎn)尿素的異常威克漢姆酵母 Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416,是從多種香型白酒發(fā)酵環(huán)境(大曲）當(dāng)中篩 選的。該菌株是從中國(guó)白酒釀造過(guò)程中獲得，具有產(chǎn)風(fēng)味、產(chǎn)酒精、耐酸等特性，是優(yōu)良的釀 酒功能菌株，能夠有效應(yīng)用于釀造酒、蒸餾酒、配制酒及其它食品領(lǐng)域，降低食品發(fā)酵過(guò)程 尿素和EC的形成，從而解決食品安全問(wèn)題。
[0006] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌 株，于2016年5月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為 CGMCC NO.12416。
[0007] 所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株是從白酒自然發(fā)酵過(guò)程中 (大曲）分離篩選得到的。
[0008]所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株，低產(chǎn)尿素且具有產(chǎn)風(fēng)味 功能并能適應(yīng)食品發(fā)酵環(huán)境。
[0009]所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株，可通過(guò)所有適合酵母生 長(zhǎng)的的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(其中在WL固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落如圖1)。培養(yǎng)方式選用靜置培養(yǎng) 或振蕩培養(yǎng)，溫度4-46Γ，培養(yǎng)時(shí)間足夠微生物的生長(zhǎng)即可。
[0010]所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株，經(jīng)高梁培養(yǎng)基發(fā)酵48h后 代謝風(fēng)味物質(zhì)中醇類達(dá)11365.08yg/L、酯類達(dá)23905.69yg/L、酮類達(dá)259.32yg/L、醛類達(dá) 176.95以 8/1、苯環(huán)類達(dá)4623.65以8/1、酸類達(dá)165.23以8/1、萜烯類達(dá)150.23以 8/1。其中，各主 要風(fēng)味物質(zhì)中，由以醇類和酯類含量為最多。其中，醇類中如:3_甲基-1-丁醇、苯乙醇、2-甲 基-1-丙醇;酯類中：乙酸乙酯含量最高，其次為2-苯乙基乙酸酯、丙酸乙酯、己酸乙酯等。
[0011] 所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株，生長(zhǎng)溫度范圍為4_46°C， 適溫為25-42 °C ;生長(zhǎng)pH范圍為2.3-12.0，優(yōu)選4.0-8.0，可在分別含60 %的葡萄糖、2.0 % KCl以及12%乙醇的環(huán)境生長(zhǎng)。
[0012] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供含有所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株的微生物菌劑。
[0013] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述微生物菌劑含有Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO .12416菌體的活細(xì)胞、冷凍干燥得到的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416干菌體、固定化的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416細(xì)胞、 Wickerhamomycesanomalus CGMCC NO. 12416的液體菌劑、Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416的固體菌劑，或者以其他任何形式存在的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO.12416菌株。這些形式的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO.12416菌株，均能 在乙醇濃度0-14%，溫度10-42°C，糖濃度0-60%及pH 2.3-11進(jìn)行培養(yǎng)，并能產(chǎn)風(fēng)味。
[0014] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述微生物菌劑中還含有任何可以應(yīng)用于食品或者 食品制備的任意種屬的菌株，比如地衣芽孢桿菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌等等。
[0015] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述微生物菌劑中還含有任意能用于食品的載體。
[0016] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416 的液體菌劑的制作方法，是將Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株接種于液 體酵母菌劑培養(yǎng)基中，于30°C培養(yǎng)24h;所述液體酵母菌劑培養(yǎng)基配方為A或者B;其中，
[0017] A:以g/L計(jì)，含有酵母膏10、蛋白胨20、葡萄糖20、其余為水；
[0018] B:以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料經(jīng)粉碎后，按原料與水的比例為1: 1-1:4w/v的比例混合，蒸煮l-5h，冷卻后加入糖化酶10-50單位/g原料，于40-80 °C保持2-1 Oh，過(guò)濾，離心所得濾液調(diào)節(jié)糖度為10-150Bx、pH為4-6;其中，原料為高粱、大麥、小麥、豌 豆、麩皮中的任意一種或者多種以任意比例的混合。
[0019] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416 的固體菌劑的制作方法，是將活化后的菌株以10%接種比例接種于固體酵母菌劑培養(yǎng)基 中，30 °C培養(yǎng)24-36h;所述液體酵母菌劑培養(yǎng)基配方為C或D;其中，
[0020] C:原料為高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮中的任意一種或者多種以任意比例的混合； 原料經(jīng)粉碎后，按原料與水的比例為1:0.5-1: 2w/v的比例混合后，80-100°C蒸煮30min;
[0021 ] D:在高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮中的任意一種或者多種以任意比例的混合得到 的發(fā)酵原料，于40-80°C保持2-10h，并加入0.1-lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為0-5。
[0022] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌 株的應(yīng)用，是應(yīng)用于食品技術(shù)領(lǐng)域，尤其是發(fā)酵食品技術(shù)領(lǐng)域。
[0023] 所述應(yīng)用，是應(yīng)用于釀造酒、蒸餾酒等方面，比如白酒、葡萄酒、黃酒、果酒方面，尤 其是芝麻香型麩曲白酒。
[0024] 所述應(yīng)用，是將Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到白酒、葡 萄酒、黃酒或者果酒釀造過(guò)程中。
[0025] 所述應(yīng)用，是將Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到種子（曲 或者種子培養(yǎng)液)中，比如添加到酵母麩曲中。
[0026] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種降低E C的方法，所述方法是將 Wickerhamomycesanomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到食品制備過(guò)程中。
[0027]本發(fā)明的有益效果：
[0028] 本發(fā)明得到了一株低產(chǎn)尿素、產(chǎn)風(fēng)味、耐酒精、耐酸的Wickerhamomyces anomalus 菌株，利用該酵母在釀造酒、蒸餾酒及其它食品領(lǐng)域的應(yīng)用可在一定程度上減少尿素和EC 的形成。本發(fā)明的菌株，可在分別含60 %的葡萄糖、2.0 %KCl以及12 %乙醇的環(huán)境生長(zhǎng)，尿 素產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于現(xiàn)有的其他Wickerhamomyces anomalus菌株，而且產(chǎn)風(fēng)味能力強(qiáng)。本發(fā)明 菌株在發(fā)酵過(guò)程中尿素產(chǎn)生的最大值為351.23yg/L，遠(yuǎn)低于其他同種的菌株，比如模式菌 株的最大值為3339.15yg/L。
[0029] 生物材料保藏
[0030] 異常威克漢姆酵母，分類學(xué)命名為異常威克漢姆酵母Wickerhamomyces anomalus，于2016年5月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏 編號(hào)為CGMCC NO. 12416,保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
【附圖說(shuō)明】
[0031 ] 圖l:Wickerhamomyces anomalus JZ420酵母在WL培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)；
[0032] 圖2:Wickerhamomyces anomalus JZ420酵母26S rDNA擴(kuò)增凝膠電泳圖；其中A為 模式菌株Wickerhamomyces anomalus 21886(中國(guó)普通微生物菌種保藏中心)擴(kuò)增結(jié)果，B 為Wickerhamomyces anomalus JZ420擴(kuò)增結(jié)果，M為2000DL maker。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 實(shí)施例1:低產(chǎn)尿素的酵母Wickerhamomyces anomalus的篩選及鑒定
[0034]取IOg大曲溶于100mL無(wú)菌生理鹽水中，搖床振蕩30分鐘后進(jìn)行梯度稀釋，涂布WL 固體平板，根據(jù)平板上菌落形態(tài)特征（圖1)，挑取Wickerhamomyces anomalus酵母單菌落進(jìn) 行高通量液體發(fā)酵，對(duì)獲得的潛在的低產(chǎn)尿素 Wickerhamomyces anomalus酵母進(jìn)行分子生 物學(xué)鑒定，利用酵母特異分類鑒定引物NLl和NL4分別擴(kuò)增酵母的26S rDNA的片段，凝膠電 泳檢測(cè)（圖2)。隨后進(jìn)行測(cè)序比對(duì)，確定所篩選得低產(chǎn)尿素的酵母在分類學(xué)上都屬于 Wickerhamomyces anomalus酵母。最終所得到一株低產(chǎn)尿素的異常威克漢姆酵母，命名為 Wickerhamomyces anomalus JZ420。將Wickerhamomyces anomalus JZ420保藏于中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC NO. 12416。
[0035] WL培養(yǎng)基:酵母浸粉4 · Og/L，胰蛋白陳5 · Og/L，葡萄糖50 · Og/L，磷酸二氫鉀0 · 55g/ L，氯化鉀0 · 425g/L，氯化鈣0 · 125g/L，硫酸鎂0 · 125g/L，氯化鐵0 · 0025g/L，硫酸錳0 · 0025g/ L，瓊脂20g/L，嗅甲酚綠22mg/L。
[0036] 實(shí)施例2:菌株代謝產(chǎn)風(fēng)味的功能
[0037] 種子培養(yǎng)基：取25ml試管，裝入5ml高粱培養(yǎng)基，并接種上述實(shí)施例1獲得的菌株 Wickerhamomyces anomalus JZ420,自然pH，30°C，200rpm，進(jìn)行好氧培養(yǎng)48h。
[0038] 發(fā)酵培養(yǎng)基:將培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接種在裝有50ml高粱培養(yǎng)基的250ml三角瓶 中，自然pH，接種量為5 %，30 °C，200rpm，發(fā)酵48h。
[0039] 運(yùn)用頂空固相微萃取技術(shù)(HS-SPME)和氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)方法對(duì)揮發(fā)性產(chǎn)物 進(jìn)行分析，取8mL樣品，放入裝有3g NaCl的頂空進(jìn)樣瓶中，加入IOyL濃度為42.60mg//L的4-甲基-2-戊醇為內(nèi)標(biāo)。將頂空瓶于50°C恒溫萃取45min，萃取完后進(jìn)行GC-MS分析。
[0040] 上述實(shí)施例1獲得的菌株，其發(fā)酵48h后代謝產(chǎn)風(fēng)味的能力如表1所示。
[0041] 表1風(fēng)味物質(zhì)含量(yg/L)
[0043] 各主要風(fēng)味物質(zhì)中，以醇類和酯類含量為最。其中，醇類中：3-甲基-1-丁醇 4324.18yg/L、苯乙醇 2653.32yg/L、2-甲基-1-丙醇 1232.68yg/L，正丙醇 1564.12yg/L、異戊 醇3641 · 32yg/L、乙醇2976 · 32yg/L;酯類中：乙酸乙酯含量最高，為147117 · 51yg/L、2-苯乙 基乙酸酯 31234 · 96yg/L、丙酸乙酯 2693 · 86yg/L、己酸乙酯 4569 · 32yg/L。
[0044] 實(shí)施例3:Wickerhamomyces anomalus JZ420酵母低產(chǎn)尿素
[0045] 種子培養(yǎng)基:取25ml試管，裝入5ml高粱培養(yǎng)基，并接種上述實(shí)施例1獲得的菌株， 自然pH，30 °C，200rpm，進(jìn)行好氧培養(yǎng)48h。
[0046] 發(fā)酵培養(yǎng)基:將培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接種在裝有50ml高粱培養(yǎng)基(添加500mg/L的 精氨酸前體物質(zhì)以及2%乙醇）的250ml三角瓶中，接種量為5%，30°C，200rpm，發(fā)酵96h，測(cè) 定發(fā)酵過(guò)程中酵母生長(zhǎng)情況(OD 6qq)和尿素生成情況。發(fā)現(xiàn)該菌株在發(fā)酵過(guò)程24h進(jìn)入穩(wěn)定 期(OD6qq為1.8)，發(fā)酵過(guò)程中尿素產(chǎn)量達(dá)到的最大值為227.42yg/L(48h)。
[0047]尿素檢測(cè):采用柱前衍生高效液相色譜熒光檢測(cè)器(HPLC-FLD)進(jìn)行測(cè)定發(fā)酵液尿 素的含量。具體操作為:500μ1發(fā)酵液加入500ml的無(wú)水乙醇，400μ19-羥基噸溶液以及100μΙ 的0.1 M鹽酸溶液，搖勻，室溫避光衍生30min。
[0048] 實(shí)施例4:Wickerhamomyces anomalus JZ420與Wickerhamomyces anomalus 21886產(chǎn)尿素情況對(duì)比
[0049] 種子培養(yǎng)基:取25ml試管，裝入5ml高粱培養(yǎng)基，并接種上述實(shí)施例1獲得的菌株以 及模式菌株Wickerhamomyces anomalus 21886(中國(guó)普通微生物菌種保藏中心，（菌種編號(hào) 2 · 1886))，自然pH，30 °C，200rpm，進(jìn)行好氧培養(yǎng)48h。
[0050] 發(fā)酵培養(yǎng)基:將培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接種在裝有50ml高粱培養(yǎng)基(添加500mg/L的 精氨酸，2 %乙醇）的250ml三角瓶中，接種量為5 %，30 °C，200rpm，發(fā)酵96h，測(cè)定發(fā)酵過(guò)程 中酵母生長(zhǎng)情況（0D6QQ)以及尿素生成情況。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株在發(fā)酵過(guò)程中尿素產(chǎn)生的能力明顯小于模式菌株Wickerhamomyces anomalus 21886，本發(fā)明的菌株在發(fā)酵過(guò)程中尿素產(chǎn)生的最大值為227.42yg/L，而模式菌株在發(fā)酵過(guò) 程中尿素產(chǎn)生的最大值為3451.34yg/L。
[0051] 尿素檢測(cè):采用柱前衍生高效液相色譜熒光檢測(cè)器(HPLC-FLD)進(jìn)行測(cè)定發(fā)酵液尿 素的含量。具體操作為:500μ1發(fā)酵液加入500ml的無(wú)水乙醇，400μ19-羥基噸溶液以及100μΙ 的0.1 M鹽酸溶液，搖勻，室溫避光衍生30min。
[0052] 實(shí)施例5:Wickerhamomyces anomalus JZ420與其他酵母產(chǎn)尿素的情況
[0053] 本實(shí)施例所包括的菌株有Saccharomycopsi s f ibul igera，Mi 11erozyma farinosa,Trichosporon asahii,Hanseniaspora osmophila,Pichiafermentans,Pichia membranifaciens和Clavispora lusitaniae，以及本發(fā)明的菌株Wickerhamomyces anomalus JZ420。這7種菌株都來(lái)自白酒釀造環(huán)境。
[0054] 種子培養(yǎng)基：取25ml試管，裝入5ml高粱培養(yǎng)基，并接種Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株以及Wickerhamomyces anomalus，Saccharomycopsisfibuligera， Millerozymafarinosa,Saccharomyces cerevisiae,Trichosporon asahii , Hanseniaspora osmophila，Pichiafermentans，Pichia membranifaciens和Clavispora lusitaniae，自然pH，30°C，200rpm，進(jìn)行好氧培養(yǎng)48h〇
[0055] 發(fā)酵培養(yǎng)基:將培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液接種在裝有50ml高粱培養(yǎng)基(添加500mg/L的 精氨酸，2 %乙醇）的250ml三角瓶中，接種量為5 %，30 °C，200rpm，發(fā)酵96h，測(cè)定發(fā)酵過(guò)程中 酵母生長(zhǎng)情況(OD6qq)以及尿素生成情況。通過(guò)比較發(fā)酵6h尿素的產(chǎn)量與OD 6(K),發(fā)現(xiàn)這8株酵 母的在發(fā)酵6h時(shí)單位時(shí)間內(nèi)尿素的產(chǎn)量分別為:Wickerhamomyces anomalus JZ420100-500yg/0D，而MiIlerozymafarinose和Trichosporon asahii 1300-2500yg/0D;其余的菌株 其產(chǎn)量均大于3000yg/0D。
[0056] 這說(shuō)明本發(fā)明的菌株Wickerhamomyces anomalus JZ420的尿素產(chǎn)生的能力明顯 小于其他從白酒發(fā)酵環(huán)境當(dāng)中分離得到的酵母。
[0057] 實(shí)施例6:菌株生理生化性質(zhì)
[0058] 生長(zhǎng)溫度范圍為4-48°C，適溫為25-33°C ;生長(zhǎng)pH范圍為2.3-12.0，優(yōu)選4.0-8.0， 可在分別含60%的葡萄糖、2.0%KC1以及12%乙醇的環(huán)境生長(zhǎng)中。
[0059] 將上述實(shí)施例1獲得的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株，接種于YF1D液體培 養(yǎng)基中，30 °C培養(yǎng)24h，然后用無(wú)菌生理鹽水稀釋至OD6qq為1，吸取0.5ml菌液至50ml耐受性 培養(yǎng)基中。
[0060] 溫度耐受性培養(yǎng)基:Yro培養(yǎng)基，分別于30°C，37 °C，40 °C，42 °C以及46°C進(jìn)行靜止 培養(yǎng)48h。結(jié)果顯示本發(fā)明的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株能夠在溫度范圍為28-46 °C進(jìn)行生長(zhǎng)。
[0061 ]酸度耐受性培養(yǎng)基:Yro培養(yǎng)基，用0.1 M乳酸調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，使其成pH分別為2.9， 2.7,2.5,2.4,2.3,于30 °C進(jìn)行靜置培養(yǎng)48h。結(jié)果顯示本發(fā)明的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株能夠在pH范圍為2.9-2.3進(jìn)行生長(zhǎng)。
[0062]酒精度耐受性培養(yǎng):YPD培養(yǎng)基，加入酒精，使其成酒精度含量分別為0,4%，6%， 8%，10%，12%，14%，于30°C進(jìn)行靜置培養(yǎng)48h。結(jié)果顯示本發(fā)明的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株能夠在酒精度范圍為0-12%進(jìn)行生長(zhǎng)。
[0063]糖度耐受性培養(yǎng)基:YPD培養(yǎng)基，加入不同質(zhì)量的葡萄糖，使其成葡萄糖濃度分別 為1 % ,40%，50 %，60 %，65 %，70 %，于30 °C進(jìn)行靜置培養(yǎng)48h。結(jié)果顯示本發(fā)明的 Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株能夠在葡萄糖濃度范圍為0-60%進(jìn)行生長(zhǎng)。
[0064]滲透壓耐受性培養(yǎng)基：YPD培養(yǎng)基，加入不同質(zhì)量的KCl，使其KCl濃度分別為0， 0· 7mol/L，lmol/L，1 ·4mol/L，1 · 7mol/L，2mol/L，于30°C進(jìn)行靜置培養(yǎng)48h。結(jié)果顯不本發(fā)明 的Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株能夠在KCL范圍為0_2mol/L進(jìn)行生長(zhǎng)。
[0065] 實(shí)施例7Wickerhamomyces anomalus JZ420在芝麻香白酒中的應(yīng)用
[0066] 將本發(fā)明的菌株Wickerhamomyces anomalus JZ420制作成液體菌劑，其制作方法 是將Wickerhamomyces anomalus JZ420菌株接種于液體酵母菌劑培養(yǎng)基中，于30°C培養(yǎng) 24h;所述液體酵母菌劑培養(yǎng)基配方為A或者B;其中，
[0067] A:以g/L計(jì)，含有酵母膏10、蛋白胨20、葡萄糖20、其余為水；
[0068] B:以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料經(jīng)粉碎后，按原料與水的比例為1: 1-1:4w/v的比例混合，蒸煮l-5h，冷卻后加入糖化酶10-50單位/g原料，于40-80 °C保持2-1 Oh，過(guò)濾，離心所得濾液調(diào)節(jié)糖度為10-150Bx、pH為4-6;其中，原料為高粱、大麥、小麥、豌 豆、麩皮中的任意一種或者多種以任意比例的混合。
[0069] 將液體菌劑添加進(jìn)入芝麻香白酒麩曲制作的原料當(dāng)中，等麩曲制作完成之后，加 入酒醅當(dāng)中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵完成后，檢測(cè)白酒生產(chǎn)發(fā)酵后期酒醅及原酒里面尿素與EC的含 量，發(fā)現(xiàn)添加 Wickerhamomyces anomalus JZ420的麩曲，在進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，能顯著減少酒醅和 原酒中尿素20~50%，同時(shí)，EC減少量為15~45%，原酒里面EC的減少量為15%~35%，說(shuō) 明添加權(quán)利一所述的菌株確實(shí)能達(dá)到減少食品當(dāng)中尿素及EC的含量。
[0070] 雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技 術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范 圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株異常威克漢姆酵母Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO· 12416菌株，于2016 年5月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC NO.12416。2. 一種微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑含有Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO .12416菌體的活細(xì)胞、冷凍干燥得到的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416干菌體、固定化的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416細(xì)胞、 Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416的液體菌劑、Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416的固體菌劑，或者以其他任何形式存在的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO.12416菌株。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑中還含有任何能夠 應(yīng)用于食品或者食品制備的任意種屬的菌。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑中還含有任意能用 于食品的載體。5. 權(quán)利要求1所述Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO.12416菌株或者權(quán)利要求2所 述的微生物菌劑在食品技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用，尤其是發(fā)酵食品方面的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是應(yīng)用于釀造酒、蒸餾酒。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，是應(yīng)用于白酒、葡萄酒、黃酒、果酒方面。8·根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是將Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到白酒、葡萄酒、黃酒或者果酒釀造過(guò)程中。9·根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是將Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到種子中。10. -種降低EC的方法，其特征在于，所述方法是將權(quán)利要求1的Wickerhamomyces anomalus CGMCC NO. 12416菌株添加到食品制備過(guò)程中。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK105861346SQ201610415338
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日
【發(fā)明人】吳群, 徐巖, 崔凱翔
【申請(qǐng)人】江南大學(xué)