一種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置的制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)一種用于負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，屬于生物樣品的提取和純化領(lǐng)域。該裝置主體有三部分組成，分別為純化柱、支撐管架及廢液收集瓶；其中支撐管架的上部是接樣口，下部是排液管；在接樣口處通過(guò)第一橡膠塞和通用型注射器針頭與純化柱相連接，在排液管處通過(guò)第二橡膠塞與廢液收集瓶相連；廢液收集瓶上有一接口與負(fù)壓裝置相連。該實(shí)用新型的主體部分和連接配件部分都是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)器材。組合在一起可以形成一套完整的負(fù)壓核酸純化簡(jiǎn)易裝置，拆開(kāi)之后又可以單獨(dú)用作其它的實(shí)驗(yàn)操作。因此該裝置不僅可以用于連續(xù)分離和純化樣品，而且操作簡(jiǎn)單、便于拆卸、維護(hù)成本低、使用效率高，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
【專利說(shuō)明】
一種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本實(shí)用新型屬于生物樣品的提取和純化領(lǐng)域，特別涉及一種用于負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，經(jīng)常需要分離和純化生物樣品中DNA和RNA等大分子物質(zhì)。因此快速的分離純化DNA和RNA核酸物質(zhì)是提高分子生物學(xué)研究效率的關(guān)鍵技術(shù)。目前利用硅膠純化柱來(lái)提取核酸大分子已經(jīng)成為分子生物學(xué)研究的常用手段。對(duì)于硅膠柱核酸提取技術(shù)，常用有兩種方式:離心分離法和負(fù)壓抽氣分離法。離心法是目前實(shí)驗(yàn)室中最常用的，具體操作過(guò)程如下:細(xì)胞樣品使用裂解液裂解后離心取上清;在上清中加入一定比例體積的核酸柱結(jié)合液，混合后轉(zhuǎn)移到純化柱中；將純化柱置于相匹配的離心管中，離心；取出純化柱將離心管中濾液倒棄;將純化柱重新放回原離心管中，加入核酸洗滌液，離心棄濾液;重新在純化柱中加入核酸洗滌液，離心棄濾液(可選)；將純化柱重新放回原離心管中，離心除去純化柱膜上殘留的洗滌液;將純化柱置回新的離心管中，在純化柱的膜中央加入一定量的核酸洗脫液，靜置一段時(shí)間后，離心洗脫即獲得滿足分子生物學(xué)質(zhì)量要求的核酸。在離心方法中，純化柱需要與離心管多次配合使用，每一次離心，純化柱都需要經(jīng)過(guò)從離心管取出、重新置入的過(guò)程，因此操作過(guò)程較為復(fù)雜，不利于多個(gè)樣品的處理。負(fù)壓法的具體操作過(guò)程如下:將純化柱插到負(fù)壓裝置的接口上;細(xì)胞樣品使用裂解液裂解后取上清;在上清中加入一定比例體積的核酸柱結(jié)合液，混合后轉(zhuǎn)移到純化柱中；開(kāi)啟負(fù)壓設(shè)備，抽吸掉純化柱中的液體;保持負(fù)壓，加入洗滌液對(duì)純化柱進(jìn)行洗滌;保持負(fù)壓，除去純化柱膜上殘留的洗滌液;將純化柱置入新的離心管中，在純化柱的膜中央加入一定量的核酸洗脫液，靜置一段時(shí)間后，離心洗脫即獲得滿足分子生物學(xué)質(zhì)量要求的核酸。負(fù)壓法的優(yōu)勢(shì)在于使用負(fù)壓抽氣的方式替換了大部分離心法中繁雜的離心過(guò)程，使得整個(gè)操作過(guò)程省時(shí)省力，而且能連續(xù)的分離和純化多個(gè)樣品。目前市面上有一些公司生產(chǎn)和銷售核酸負(fù)壓提取純化裝置，雖然這些商業(yè)化的裝置能夠提高科研者的工作效率，但普遍價(jià)格較貴、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、不易維護(hù)，通常需要配套的耗材才能使用，因此單獨(dú)購(gòu)買這樣的裝置，經(jīng)濟(jì)成本較高。本實(shí)用新型是利用實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)器材組合成的簡(jiǎn)易負(fù)壓核酸提取裝置，不僅可以連續(xù)分離和純化樣品，實(shí)現(xiàn)負(fù)壓法核酸提取的優(yōu)勢(shì)，而且操作簡(jiǎn)單、便于拆卸、維護(hù)成本低和使用效率高，減少核酸提取時(shí)間和繁瑣操作過(guò)程。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本實(shí)用新型的目的在于提供一種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置。
[0004]本實(shí)用新型的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0005]—種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，該裝置主體有三部分組成，分別為純化柱、支撐管架及廢液收集瓶；
[0006]其中支撐管架的上部是接樣口，下部是排液管;在接樣口處通過(guò)第一橡膠塞和通用型注射器針頭與純化柱相連接，在排液管處通過(guò)第二橡膠塞與廢液收集瓶相連;廢液收集瓶上有一接口與負(fù)壓裝置相連。
[0007]優(yōu)選的，所述的支撐管架和廢液收集瓶的材質(zhì)是普通玻璃材質(zhì)。
[0008]優(yōu)選的，所述的廢液收集瓶?jī)?yōu)選為實(shí)驗(yàn)室通用型抽濾瓶。
[0009]優(yōu)選的，所述的支撐管架的本體長(zhǎng)度為30cm，內(nèi)徑長(zhǎng)度為3cm;接樣口的內(nèi)徑長(zhǎng)度為1.5cm;排液管的內(nèi)徑長(zhǎng)度為0.5cm。
[00?0]所述的支撐管架的壁厚為2mm。
[0011]優(yōu)選的，所述的接樣口個(gè)數(shù)為8個(gè)。
[0012]優(yōu)選的，所述的廢液收集瓶上與外面負(fù)壓裝置相連接口的位置在瓶身的2/3處。
[0013]優(yōu)選的，所述的負(fù)壓裝置可以是循環(huán)水真空栗或油壓真空栗。
[0014]本實(shí)用新型相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0015]本實(shí)用新型所述的一種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，該裝置主體有三部分組成，分別為純化柱、支撐管架及廢液收集瓶。該實(shí)用新型的的主體部分和連接配件部分都是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)器材。組合在一起可以形成一套完整的負(fù)壓核酸純化簡(jiǎn)易裝置，拆開(kāi)之后又可以單獨(dú)用作其它的實(shí)驗(yàn)操作。因此該裝置不僅可以用于連續(xù)分離和純化樣品，而且操作簡(jiǎn)單、便于拆卸、維護(hù)成本低、使用效率高，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1是一種用負(fù)壓方法的8樣品核酸純化簡(jiǎn)易裝置組裝前每個(gè)配件示意圖。
[0017]圖2是一種用負(fù)壓方法的8樣品核酸純化簡(jiǎn)易裝置示意圖。
[0018]其中，I為支撐管架;2為接樣口；3為排液管;4為第一橡膠塞(已預(yù)打孔)；5為通用型注射器針頭;6為純化柱;7為出樣管嘴;8為網(wǎng)狀隔板;9為硅膠膜；10為第二橡膠塞(已預(yù)打孔)；11為廢液收集瓶;12為接口。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本實(shí)用新型的實(shí)施方式不限于此。
[0020]具體的實(shí)施例是本實(shí)用新型下的有限列舉，并不排除本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員把現(xiàn)有技術(shù)和本實(shí)用新型結(jié)合起來(lái)產(chǎn)生其他的具體的實(shí)施方案。
[0021]實(shí)施例1
[0022]—種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其示意圖如圖1、2所示；圖1是組裝前每個(gè)配件示意圖；圖2是裝置示意圖。該裝置主體有三部分組成，分別為純化柱6、支撐管架I及廢液收集瓶11;所述的支撐管架I包括上部的接樣口 2和下部的排液管3。支持管架I的接樣口 2是由配套規(guī)格的第一橡膠塞4進(jìn)行封口，在第一橡膠塞4上插入通用型注射器針頭5，該針頭的長(zhǎng)度要能夠貫穿第一橡膠塞4。純化柱6通過(guò)出樣管嘴7與第一橡膠塞4和實(shí)驗(yàn)室通用型注射器針頭5組合的接頭連接到支撐管架I的接樣口 2上。純化柱6的底部與出樣管嘴7之間有多孔的網(wǎng)狀隔板8，網(wǎng)狀隔板8承載著硅膠膜9。支持管架I的排液管3通過(guò)第二橡膠塞10與廢液收集瓶11相連。第二橡膠塞10首先使用與排液管尺寸配套規(guī)格的打孔器預(yù)打孔，再將排液管3套入第二橡膠塞10。廢液收集瓶11通過(guò)第二橡膠塞10接頭連接支撐管架I的排液管3上。廢液收集瓶11通過(guò)瓶上的接口 12與外接的負(fù)壓裝置相連。這樣就接連組合成一個(gè)用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置。
[0023]實(shí)用新型所述的純化系統(tǒng)，可以用于提取核酸，如DNA或者RNA，也可以用于除去生物樣品預(yù)處理時(shí)的雜質(zhì)。
[0024]實(shí)用新型所述的純化柱主體和隔板的材質(zhì)為醫(yī)療級(jí)的聚丙烯，生產(chǎn)過(guò)程無(wú)核酸和核酸酶污染。同時(shí)純化柱所用到的硅膠膜為市售通用型規(guī)格，該硅膠膜的對(duì)核酸的純化原理是:高鹽吸附，低鹽洗脫。
[0025]本實(shí)用新型的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置可用于連續(xù)負(fù)壓抽氣的方式提取核酸。
[0026]實(shí)施例2多樣品高純度質(zhì)粒DNA的大量提取
[0027]1、材料和試劑
[0028]核酸純化系統(tǒng):支撐管架和廢液收集瓶(實(shí)驗(yàn)室通用型抽濾瓶)的材質(zhì)均為普通玻璃材質(zhì)，圖2是本次實(shí)例應(yīng)用的玻璃負(fù)壓簡(jiǎn)易裝置示意圖。
[0029]支撐管架:其本體長(zhǎng)度為30cm，內(nèi)徑長(zhǎng)度為3cm;接樣口的內(nèi)徑長(zhǎng)度1.5cm;排液管的內(nèi)徑長(zhǎng)度0.5cm;接樣口的個(gè)數(shù)為8個(gè)。
[0030]廢液收集瓶:IL容量，該裝置的壁厚2mm，瓶上與外面的負(fù)壓裝置相連的接口的位置在瓶身的2/3處。
[0031 ]純化柱:直徑適合50mL的離心管的的大體積純化柱，娃膠膜的厚度為2mm;
[0032]三個(gè)主體組合成負(fù)壓核酸純化系統(tǒng)。
[0033]外接的負(fù)壓裝置:循環(huán)水真空栗。
[0034]離心機(jī)及50mL離心管。
[0035]質(zhì)粒裂解所用到的溶液1、溶液Π、溶液m的配方參考奧斯伯的《精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》(科學(xué)出版社，2008年)。
[0036]洗滌液IV:4M的鹽酸胍、20%異丙醇、1mM EDTA、pH 5.0的0.2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液。
[0037]洗滌液V:70%的無(wú)水乙醇、pH 5.0的0.2mOl/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液。
[0038]洗脫液V1:2mmol/L Tris-HCl，pH=8.0。
[0039]核酸酶:RNaseA。
[0040]2、步驟
[0041]I)將8個(gè)不同含有高拷貝數(shù)質(zhì)粒(該質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性)的大腸桿菌菌種，接種到10mL氨芐青霉素終濃度100ng/mL的LB培養(yǎng)基并培養(yǎng)12小時(shí)，10，000 X g室溫離心lmin，分別收集菌體沉淀(注:如果是低拷貝數(shù)質(zhì)粒，則需要的菌液量為200mL);
[0042]2)小心去除上清液，加1mL溶液I/RNase A(溶液I用前加入RNase A)，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體；
[0043 ] 3)加I OmL溶液Π，來(lái)回顛倒1?15次輕柔混勻，得到澄清的裂解液；
[0044]4)加5mL溶液ΙΠ，顛倒混勻幾次直至出現(xiàn)均勻的白色絮狀沉淀，室溫放置2?3min，讓其充分反應(yīng)；
[0045]5)10，000\8，離心5111丨11得上清；
[0046]6)將步驟5中的上清液分別倒入純化柱中，并做好標(biāo)記；
[0047]7)將核酸純化簡(jiǎn)易裝置與循環(huán)水真空栗相連；
[0048]8)開(kāi)動(dòng)真空栗，吸走純化柱中的液體；
[0049]9)繼續(xù)保持負(fù)壓，加入1mL洗滌液IV洗滌，至吸光純化柱中的液體；
[0050]10)繼續(xù)保持負(fù)壓，加入1mL洗滌液V洗滌，至吸光純化柱中的液體；
[0051]11)重復(fù)步驟10;
[0052]12)保持負(fù)壓5min，除去純化柱膜上殘留的洗滌液；
[0053]13)把純化柱套在一個(gè)新的50mL離心管中，加入3mL洗脫液VI，室溫放置2?5min，8000 Xg離心2min洗脫質(zhì)粒DNA。
[0054]3、質(zhì)粒質(zhì)量檢測(cè)
[0055]用瓊脂糖凝膠電泳和核酸濃度測(cè)定儀來(lái)檢測(cè)提取質(zhì)粒的質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果顯示分離純化的質(zhì)粒濃度和純度均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求;8個(gè)樣品的質(zhì)量參數(shù)范圍:濃度范圍180?250ngAiL，A260/A280范圍 I.82?I.96，A260/A230范圍 I.85?I.92。
[0056]該實(shí)施例2是本發(fā)明人使用該核酸純化簡(jiǎn)易裝置的一個(gè)最常見(jiàn)的應(yīng)用，本發(fā)明人實(shí)驗(yàn)室中使用的大容量離心機(jī)型號(hào)是Eppendorf 5804R，一次最多可以處理6個(gè)大量提取質(zhì)粒的樣品，當(dāng)樣品數(shù)多余6個(gè)的時(shí)候通常會(huì)使實(shí)驗(yàn)時(shí)間加倍。本裝置的使用，大大加快了大量質(zhì)粒提取的效率;本裝置用于分離純化8個(gè)質(zhì)粒樣品的時(shí)間僅為離心法提取8個(gè)樣品的時(shí)間的1/5。同時(shí)對(duì)于小于8個(gè)樣品的處理，本裝置也可以應(yīng)用，具體操作是取下橡膠塞上多余的純化柱和注射器針頭即可。
[0057]上述實(shí)施例為本實(shí)用新型較佳的實(shí)施方式，但本實(shí)用新型的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本實(shí)用新型的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于:該裝置主體有三部分組成，分別為純化柱、支撐管架及廢液收集瓶； 其中支撐管架的上部是接樣口，下部是排液管；在接樣口處通過(guò)第一橡膠塞和通用型注射器針頭與純化柱相連接，在排液管處通過(guò)第二橡膠塞與廢液收集瓶相連;廢液收集瓶上有一接口與負(fù)壓裝置相連。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的支撐管架和廢液收集瓶的材質(zhì)是普通玻璃材質(zhì)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的廢液收集瓶為實(shí)驗(yàn)室通用型抽濾瓶。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的支撐管架的本體長(zhǎng)度為30cm，內(nèi)徑長(zhǎng)度為3cm;接樣口的內(nèi)徑長(zhǎng)度為1.5cm;排液管的內(nèi)徑長(zhǎng)度為0.5cm ο5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的支撐管架的壁厚為2mm。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的接樣口的個(gè)數(shù)為8個(gè)。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的廢液收集瓶上與外面的負(fù)壓裝置相連的接口的位置在瓶身的2/3處。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用負(fù)壓方法純化核酸的簡(jiǎn)易裝置，其特征在于: 所述的負(fù)壓裝置是循環(huán)水真空栗或油壓真空栗。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK205653449SQ201620421622
【公開(kāi)日】2016年10月19日
【申請(qǐng)日】2016年5月10日 公開(kāi)號(hào)201620421622.6, CN 201620421622, CN 205653449 U, CN 205653449U, CN-U-205653449, CN201620421622, CN201620421622.6, CN205653449 U, CN205653449U
【發(fā)明人】潘力, 周斌, 楊海燕, 廖瑜玲, 王斌
【申請(qǐng)人】華南理工大學(xué)