專利名稱：利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定食品、飲料中棉籽糖含量的方法，尤其是一種利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法。
背景技術(shù)：
棉籽糖是一種由三個單糖(果糖、葡萄糖、半乳糖)組成的新型功能性低聚糖。是除蔗糖以外，在自然界分布最廣的一種低聚糖。棉籽糖也被稱為蜜三糖、棉實糖、桉糖，是一種微生物和酶不能合成的功能性低聚糖，目前主要從棉籽柏和甜菜糖蜜中提取。
由于棉籽糖能夠順利的通過胃腸道而不被吸收，是人體腸道中雙歧桿菌等益生菌的增殖因子，可以促進鈣原子的吸收，從而增強了人體免疫力，而且其還能夠抑制腸內(nèi)腐敗產(chǎn)物、改善排便功能、防止便秘及增強機體免疫力、抵抗腫瘤等，因此其越來越受到人們的重視。目前對于棉籽糖的檢測方法有比色法、薄層色譜法和高效液相色譜法等。但是由于比色法和薄層色譜法檢測定性能力差，易受雜質(zhì)成分的干擾而導致檢測不準，通用的高效液相色譜法多使用壽命較短的氨基柱或者是昂貴的多糖分析柱，使用成本高，不利于廣大食品企業(yè)的推廣。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種定性效果強、定量準確的測定棉籽糖含量的方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的測定步驟為(1)用有機胺類物質(zhì)作為硅膠表面氨基的改善劑，將其加入到流動相中，活化處理硅膠色譜柱；(2)用活化好的硅膠色譜柱對檢測樣品的提取液進行色譜分離，色譜分離時的流動相中添加有有機胺類物質(zhì)；(3)經(jīng)色譜柱分離的各組分進入蒸發(fā)光散射檢測器中進行檢測，即可得到檢測樣品中的棉籽糖含量。
本發(fā)明所述步驟(I)和(2 )中的有機胺類物質(zhì)均為乙二胺；所述步驟(I)和(2 )中的流動相均為乙腈水。所述乙腈水的體積比均為乙腈水=2.6:1。所述步驟(I)中乙二胺在流動相中的體積分數(shù)為O. 3% ;所述步驟(2)中乙二胺在流動相中的體積分數(shù)為O. 03%。
本發(fā)明所述步驟(I)中活化時流動相的沖洗體積為100個柱體積。所述步驟(2) 中流動相的流速為I. OmL/min。
本發(fā)明所述步驟(3)中蒸發(fā)光散射檢測器的參數(shù)為漂移管溫度為85°C，氣體流速為2. 2L/min，模式為不分流模式。所述步驟(3)檢測時采用外標法定量。
本發(fā)明所述硅膠色譜柱的規(guī)格為15Qmm*4. 6mm ,粒徑 5 Mm。
本發(fā)明所述步驟(2)中提取液是將檢測樣品用水超聲提取，然后過濾而得。所述提取時檢測樣品與水的質(zhì)量體積比為1:25，超聲時間為15 25min，采用O. 45 |Jm濾膜過濾。
采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于本發(fā)明采用動態(tài)氨基修飾法對硅膠柱進行氨基修飾，然后利用高效液相色譜配合蒸發(fā)光散射檢測器進行棉籽糖的檢測，充分利用了硅膠色譜柱，不必購買昂貴的糖分析柱，而且檢測結(jié)果準確，檢出限低，具有分離度和靈敏度高，適應(yīng)性強，而且成本低廉的特點。
本發(fā)明定性效果強，定量準確，檢出限可低至10mg/L，可準確地測定食品、飲料等中的棉籽糖含量；本發(fā)明檢測效果好，可有效避免峰拖尾現(xiàn)象，分析方法準確快速，干擾小。


下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
圖I是本發(fā)明棉籽糖標準品的液相色譜圖；圖2是本發(fā)明檢測樣品的液相色譜譜圖。
具體實施方式
實施例本利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法采用下述測定步驟。
試驗條件高效液相色譜儀，配備蒸發(fā)光散射檢測器；所用試劑均為色譜純，色譜柱選擇規(guī)格為15Qmm*4a 6mm、粒徑5 ,的硅膠柱；流動相為乙腈水，流動相體積比乙腈 水=2. 6:1 ;蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度85°C，氣體流速2. 2L/min，不分流模式；進樣量為20 μ L ;系統(tǒng)記錄色譜，以保留時間定性，以峰面積作為信號響應(yīng)值，對棉籽糖進行定量分析。
(I)配制含體積分數(shù)O. 3%乙二胺的乙腈/水(體積比2. 6:1)溶液300mL，超聲脫氣、沖洗活化色譜柱，流速從O. 3mL/min逐漸增大至lmL/min，總共沖洗100個柱體積，再以含體積分數(shù)O. 03%乙二胺的乙腈/水(體積比2.6:1)作為流動相平衡色譜柱，流速I. OmL/ min。
(2)準確稱取棉籽糖標準品lOOmg，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用水溶解后定容，得到濃度約為2000mg/L的標準儲備溶液，置于冰箱中避光保存。使用前用水稀釋成O. 05,0. I、 O. 3,0. 5、0. 7和lmg/mL系列標準溶液。按上述試驗條件高效液相色譜配合蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，液相色譜圖見圖I ;標準品進樣做標準曲線進行分析，以峰面積為縱坐標、濃度為橫坐標做圖進行分析或者以峰面積和濃度的雙對數(shù)進行作圖分析，見表I。
權(quán)利要求
1.一種利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于，該方法的測定步驟為(1)用有機胺類物質(zhì)作為硅膠表面氨基的改善劑，將其加入到流動相中，活化處理硅膠色譜柱；(2)用活化好的硅膠色譜柱對檢測樣品的提取液進行色譜分離，色譜分離時的流動相中添加有有機胺類物質(zhì)；(3)經(jīng)色譜柱分離的各組分進入蒸發(fā)光散射檢測器中進行檢測，即可得到檢測樣品中的棉籽糖含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(I)和(2)中的有機胺類物質(zhì)均為乙二胺；所述步驟(I)和(2)中的流動相均為乙腈水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述乙腈水的體積比均為乙腈水=2.6:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(I)中乙二胺在流動相中的體積分數(shù)為O. 3% ;所述步驟(2)中乙二胺在流動相中的體積分數(shù)為O. 03%。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(I)中活化時流動相的沖洗體積為100個柱體積。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(2)中流動相的流速為I. OmL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求I一 5任意一項所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(3)中蒸發(fā)光散射檢測器的參數(shù)為漂移管溫度為85°C，氣體流速為2. 2L/ min,模式為不分流模式。
8.根據(jù)權(quán)利要求I一 5任意一項所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述娃膠色譜柱的規(guī)格為150mm*4. 6mm,粒徑5 μ m。
9.根據(jù)權(quán)利要求I一 5任意一項所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述步驟(2)中提取液是將檢測樣品用水超聲提取，然后過濾而得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，其特征在于所述提取時檢測樣品與水的質(zhì)量體積比為1:25，超聲時間為15 25min，采用O. 45 μ m濾膜過濾。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用硅膠色譜柱測定棉籽糖含量的方法，該方法的測定步驟為(1)用有機胺類物質(zhì)作為硅膠表面氨基的改善劑，將其加入到流動相中，活化處理硅膠色譜柱；(2)用活化好的硅膠色譜柱對檢測樣品的提取液進行色譜分離，色譜分離時的流動相中添加有有機胺類物質(zhì)；(3)經(jīng)色譜柱分離的各組分進入蒸發(fā)光散射檢測器中進行檢測，即可得到檢測樣品中的棉籽糖含量。本方法采用動態(tài)氨基修飾法對硅膠柱進行氨基修飾，然后利用高效液相色譜配合蒸發(fā)光散射檢測器進行棉籽糖的檢測，充分利用了硅膠色譜柱，不必購買昂貴的糖分析柱，而且檢測結(jié)果準確，檢出限低，具有分離度和靈敏度高，適應(yīng)性強，而且成本低廉的特點。
文檔編號G01N30/02GK102937628SQ20121042194
公開日2013年2月20日 申請日期2012年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月30日
發(fā)明者王磊, 溫盼來, 張偉, 楊清山, 張永哲 申請人:晨光生物科技集團股份有限公司