專利名稱：用于在生物樣品過濾中通過超聲、回洗和過濾器運動進(jìn)行過濾器清潔的裝置和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從流體樣品中分離固體組分。具體而言，本發(fā)明涉及用 于從諸如骨髓樣品等生物樣品中分離治療性細(xì)胞組分的裝置和方法。
背景技術(shù)：
祖細(xì)胞在分化時具有多向潛能，并因此潛在地使其參與到不同的治 療性療法中。已確定將這些細(xì)胞的富集組分輸送至患病的或者受損的組 織部位，通過加速組織愈合而具有最佳治療效果。祖細(xì)胞通常是在一些 哺乳動物組織和體液內(nèi)包含于非治療性細(xì)胞的異質(zhì)混合物中的非常罕見 的細(xì)胞群(Caplan2005)。
在文獻(xiàn)中已報道各種俘獲細(xì)胞的技術(shù)和設(shè)備，包括沉淀(Takazawa& Tokashiki， 1989)、離心(Apelman等，1992; Jaeger， 1992)、旋轉(zhuǎn)過濾 (Himmerlflab等，1969)和橫向流微濾(Maiorella等1991)。然而，這些技術(shù) 都存在若干缺點。沉淀過程受到細(xì)胞的低沉淀速度和緩慢分離過程的影 響。離心裝置依賴于離心力驅(qū)使細(xì)胞偏向流體外側(cè)，盡管能實現(xiàn)快速回 收，但這些設(shè)備通常資產(chǎn)成本很高。旋轉(zhuǎn)過濾器和橫向流過濾器采用膜 以過濾細(xì)胞懸浮液，但其易于積垢而導(dǎo)致性能損失。使用這些過濾器的 其他方法包括可控剪切過濾(Vogel和Kroner, 1999)、切向流過濾(Radlett， 1972)和動態(tài)過濾。分離的速率和效率取決于積垢程度。動態(tài)過濾依賴于 膜和外殼之間的相對運動從而產(chǎn)生獨立于流經(jīng)過濾器的液流的剪切流 (Castilho & Medrohno, 2002)。渦流過濾器和轉(zhuǎn)盤過濾器是兩類常見的動 態(tài)過濾設(shè)備(Stromberg等，1989)。Karumanchi等(2002)提供了用于細(xì)胞和 生物大分子的場協(xié)助分離技術(shù)的綜述，包括電學(xué)、^磁學(xué)和聲學(xué)現(xiàn)象實現(xiàn) 所需要的分離。介電電泳(Dielectrophoresis)是由于非均勻電場產(chǎn)生的極化效應(yīng)而導(dǎo)致的側(cè)向運動(Docoslis等，1997, 1999)。這<又<又能應(yīng)用于非常4氐 導(dǎo)電性介質(zhì)否則將造成流體的過量發(fā)熱。磁分離分為兩類。第一種，待 分離的細(xì)胞內(nèi)在具有》茲性質(zhì)(例如紅血細(xì)胞、趨磁細(xì)菌)，第二類，所需 要的混合物的非磁性組分必須通過磁響應(yīng)實體而被賦予磁性。在兩種情 況下，流體必須受作用于磁場而實現(xiàn)分離。磁性分離已廣泛用于各種細(xì) 胞分離，包括骨髓處理以富集祖細(xì)胞(Roath等，1990)。聲學(xué)分離器已廣 泛使用以分離微生物體和細(xì)胞，但幾乎普遍地依賴于使用超聲波。由于 超聲波在與聲波傳播方向相對的方向上反射時形成駐波從而實現(xiàn)超聲細(xì) 胞保持。細(xì)胞陷入駐波的壓力節(jié)點面。Kilburn等，(1989)和W095/001214 首先報道了使用這些波作為從懸浮液中分離細(xì)胞的手段的可能性，并且 從此以后出現(xiàn)了許多采用該技術(shù)的報道 (Coakley等，1994; Dobelhoof-Dier, 1994; Gaida等，1996; Gorenflo等，2003, 2004)。超聲分離器 需要仔細(xì)地調(diào)校并通常具有受限制的上樣容量，因此僅能回收小量的細(xì) 胞。此外，該技術(shù)用于從流體相中除去均質(zhì)細(xì)胞群并因此不能從異質(zhì)混 合物中俘獲特定的細(xì)胞群。
本發(fā)明涉及用于從流體樣品中分離固體組分的裝置和方法。具體而 言，本發(fā)明涉及從流體樣品中的異質(zhì)混合物中分離細(xì)胞組分。該方法是 單步驟方法，且細(xì)胞分離基于僅使用物理手段的樣品機(jī)械過濾。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的 一 個方面提供了用于從流體樣品中分離固體組分的裝 置，所述裝置包括過濾單元，所述過濾單元包括 聲波發(fā)生元件；
至少一個過濾器，所述過濾器將所述單元分隔為用于接收流體樣品 的過濾前腔室和用于接收能傳導(dǎo)聲波的流體的過濾后腔室；和
經(jīng)設(shè)置與過濾后腔室相關(guān)連的基板，所述基板能在向其施加聲波時 共振；
其中，所述聲波發(fā)生元件經(jīng)設(shè)置與基板相關(guān)連從而使得所述聲波發(fā) 生元件引起所述基板的共振，所述基板隨之傳導(dǎo)聲駐波穿過過濾后腔室 里的流體和過濾前腔室里的流體樣品。
在分離過程中，聲駐波在所述過濾單元里的流體中的傳導(dǎo)導(dǎo)致流體 的擾動，或者為連續(xù)方式或者為間歇方式。該擾動的特別優(yōu)點在于使過 濾器最'J 、程度地積垢和阻塞。在其中所述裝置用于從流體樣品中分離細(xì)胞組分的本發(fā)明的實施方 式中，在所述單元中的流體的擾動還具有另一個優(yōu)點，在于使過濾前腔 室中細(xì)胞與過濾器的接觸或駐留時間最短。這是令人所希望的，因為如 果細(xì)胞與過濾器相接觸或者足夠接近，則存在細(xì)胞在周圍流體的壓力下 受力穿過孔的傾向。可通過細(xì)胞的變形實現(xiàn)如此穿過孔，但在穿越過程 中細(xì)胞可能暴露于不希望的壓力，諸如剪切力，其對于細(xì)胞有不利影響。
具體而言，已表明白細(xì)胞功能顯著受到剪切力的影響(Carter等，2003)。因 此所希望的是防止令人感興趣的細(xì)胞穿過過濾器。在這點上，過濾器經(jīng) 設(shè)計使得在將令人感興趣的細(xì)胞保留在過濾前腔室中的同時允許流體和 其他細(xì)胞組分通過。
聲波發(fā)生元件定義為能響應(yīng)動力信號而產(chǎn)生聲波的結(jié)構(gòu)。例如，在 單一揚聲器的情況下，動力信號將以確定的波幅和頻率使薄膜偏轉(zhuǎn)從而 產(chǎn)生聲駐波。其他聲學(xué)元件包括壓電傳感器，其響應(yīng)于施加的AC電壓產(chǎn) 生振動能量而所述物理振動作為聲學(xué)力傳導(dǎo)至流體。壓電元件的例子是 在兩側(cè)具有金屬膜電極的陶瓷片，這些壓電薄膜通常是氧化鋅。
聲波發(fā)生元件與能共振的基板的結(jié)合相比單獨使用聲學(xué)元件具有許 多優(yōu)勢。聲學(xué)元件并不與流體直接接觸，該元件經(jīng)設(shè)計使得在貼于基板 材料上時能提供更強(qiáng)的共振，所述基板材料具有比元件本身的錐體更大 的面積。這意味著在使用小聲學(xué)元件時仍能向流體輸送更多的能量?？?體上這顯著提高了所述設(shè)備的能量效率和足跡(footprint),這在處理大量 流體時尤其有利。適合的聲學(xué)元件可由NXT Technology Limited (Hong Kong)獲得，型號RM-ETN0033K19C-2K01。
在本發(fā)明的實施方式中，聲波發(fā)生元件產(chǎn)生頻率為約300 ~ 700 Hz的 聲駐波。在流體體積和所需的最佳頻率之間存在相互關(guān)系。因此，在本 發(fā)明的具體實施方式
中有利的是用戶能輸入流體樣品的體積，則聲駐波 的頻率將被計算得到。例如，對于體積為約5ml 15ml的樣品，聲駐波的 最佳頻率為約300 Hz ~ 700 Hz。
在本發(fā)明的具體實施方式
中，聲波發(fā)生元件是揚聲器，其具有0.4W 的功率、40hm的阻抗、峰峰間振幅為約4.2 V 7.36 V、頻率為約300 700 Hz。
在本發(fā)明的實施方式中，基板基本上平行于過濾器放置。 在本發(fā)明的實施方式中，基板位于過濾單元的底部。基板可由任意適合的材料制成，所述材料能響應(yīng)于聲學(xué)發(fā)生元件的 刺激而共振。例如，金屬、陶瓷或聚合物。有利的是，由于基板可與裝 置中所用的流體相接觸，因此基本由醫(yī)療級材料制得。這減少了任何毒 性物質(zhì)污染的風(fēng)險。
在本發(fā)明的實施方式中，聲波發(fā)生元件與基板可逆相連。該相連可 由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種手段實現(xiàn)，例如使用粘合劑。這在過濾單 元如果設(shè)計為一次性使用時特別有利，因為聲學(xué)元件可被拆下并在其他 單元中再次使用。
流體樣品穿過過濾器的運動可以是重力導(dǎo)致的被動運動。另外一種 方式，可以通過施加正壓力或負(fù)壓力1"吏流體樣品主動流過過濾器。流體 樣品穿過過濾器的流速可以是恒定的或者是可變的。
在本發(fā)明的實施方式中，在過濾后腔室中提供的能夠傳導(dǎo)聲駐波的 流體也用作清洗流。在該實施方式中，提供正壓力泵，其推動清洗流由 過濾后腔室穿過過濾器進(jìn)入過濾前腔室中。同時，負(fù)壓力泵抽取流體由 過濾前腔室進(jìn)入過濾后腔室。因此，流體樣品和清洗流以相反方向連續(xù) 通過過濾器，從而使得流體樣品的凈移動為進(jìn)入過濾后腔室，而被分離 的固體組分保留在過濾前腔室中。
流體樣品和清洗流以相反方向穿過過濾器的連續(xù)運動防止了過濾器
的積垢和阻塞，進(jìn)一步提高了分離過程的效率。該連續(xù)運動可以是循環(huán) 的，循環(huán)中的一相是使用清洗流的過濾器的快速回流，循環(huán)中的第二相 為迫使流體樣品向下穿過過濾器。該循環(huán)過程持續(xù)進(jìn)行以充分地減少樣 品體積而同時也能在過濾器上保持足夠體積的流體從而使得顆粒組分保 持在溶液之中。通常，樣品體積減少約10倍。
在本發(fā)明的其他實施方式中，過濾器本身在分離過程中受擾動。例 如可以通過將過濾器與可移動的固定器相關(guān)連從而實現(xiàn)該擾動。擾動可 以在縱向上或者橫向上或者同時在兩個方向上。在本發(fā)明的另外一些實 施方式中，過濾器可旋轉(zhuǎn)。
額外擾動所述清洗流體和/或流體樣品的其他手段包括使用旋轉(zhuǎn)元件 (例如流體中的葉輪或者插入物)、旋轉(zhuǎn)腔室壁或者旋轉(zhuǎn)腔室壁，其中腔室 壁配備有隔板或者使用主動翼片。
"流體樣品"是從其中將分離固體組分的任何流體。樣品可以來自 任何來源，諸如生物體、來自相同物種或不同物種的生物體群、來自環(huán)境諸如來自身體或者水或者來自土壤，或者來自食物來源或者工業(yè)來源。 樣品可以是經(jīng)加工或未經(jīng)加工的樣品。樣品可以是氣體或液體。樣品可 以是萃取物，例如土壤或食物樣品的液體萃取物。
所述裝置特別適用于粘滯的并且更容易傾向于通過在過濾器表面上 形成膜或覆層而使過濾器積垢的液體。清洗流流經(jīng)過濾器的回洗，以及 任選的流體樣品和/或過濾器的擾動顯著地減少了過濾器的積垢，并且同 時也將溶液中的顆粒組分保留在過濾前腔室中。
樣品可由受試對象獲得。受試對象可以是任何生物體諸如動物或者 人。動物包括任何動物諸如野生動物或者家畜。家畜也可以包i舌例如伴 倡動物，諸如狗或者貓。
樣品可以是生物樣品諸如血液樣品、滲出液、尿液樣品、精液、骨
髓抽取物、脊髓液、來自組織的細(xì)胞懸浮液、粘液、痰液或唾液。生物 樣品可由任何動物獲得并且不限于由人類獲得的生物樣品。
本文使用的"血液樣品"指經(jīng)加工或未經(jīng)加工的血液樣品，包括臍 帶血樣品、骨髓抽取物、內(nèi)部血液或者外周血液，可以是任意體積，并 且能來自于任何受試對象諸如動物或人。優(yōu)選的受試對象是人。
將從生物流體樣品中分離的固體組分可以包含至少一個細(xì)胞組分。 所述細(xì)胞組分優(yōu)選為包括治療性細(xì)胞，其可以是具有治療或治病效果的 任何細(xì)胞。
細(xì)胞組分可包含或者構(gòu)成于至少一種白血細(xì)胞。"白血細(xì)胞"是白 血球或者非網(wǎng)織紅細(xì)胞或血小板的造血細(xì)胞，可在動物或人類的血液中
發(fā)現(xiàn)。白血球可包括自然殺傷細(xì)胞("NK細(xì)胞")、淋巴細(xì)胞諸如B淋巴細(xì)胞 ("B細(xì)胞")或T淋巴細(xì)胞("T細(xì)胞")。白血球也可包括噬菌細(xì)胞諸如單核細(xì) 胞、巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞，包括嗜石威細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞(eosinophil)和嗜中性細(xì) 胞。白血球也可以包括肥大細(xì)胞。
細(xì)胞組分可包含或者構(gòu)成于至少一種紅血細(xì)胞。"紅血細(xì)胞"是紅 血球。
細(xì)胞組分可包含或者構(gòu)成于至少一種贅生性細(xì)胞。"贅生性細(xì)胞" 指具有不受控制的細(xì)胞增殖并在誘導(dǎo)新生的刺激消失以后持續(xù)生長的異
與正常組織的功能性協(xié)調(diào)，并且可以是良性的或者惡性的。細(xì)胞組分可包含或構(gòu)成于至少一種惡性細(xì)胞。"惡性細(xì)胞"指具有 局部入侵性和破壞性生長和轉(zhuǎn)移的性質(zhì)的細(xì)胞。惡性細(xì)胞的例子包括但 不限于在包括血液、骨髓、腹水、尿液、支氣管沖洗液在內(nèi)的各種體液 中的白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞、實體瘤的癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移實體瘤細(xì)胞(例如 乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞)。
細(xì)胞組分可以包含或者構(gòu)成于至少一種癌細(xì)胞。"癌細(xì)胞"指表現(xiàn) 出不受調(diào)控的生長的細(xì)胞，并且其在絕大多數(shù)情況下已經(jīng)失去其至少一 種分化性質(zhì)諸如但不限于特征性形態(tài)、非遷移性行為、細(xì)胞-纟田胞相互作 用和細(xì)胞信號傳遞行為、蛋白表達(dá)和分泌模式等等
細(xì)胞組分可以包含或者構(gòu)成于至少一種干細(xì)胞。"千細(xì)胞"是未分 化的細(xì)胞，其能夠通過一個或多個細(xì)胞分裂周期而產(chǎn)生至少一種分化細(xì) 胞類型。
細(xì)胞組分可包含或者構(gòu)成于至少一種祖細(xì)胞。"祖細(xì)胞"是定型的 但未分化的細(xì)胞，其能夠通過一個或多個細(xì)胞分裂周期而產(chǎn)生至少 一種 分化細(xì)胞類型。通常千細(xì)胞響應(yīng)于一條具體刺激或者一組刺激而通過一 個或多個細(xì)胞分裂產(chǎn)生祖細(xì)胞，祖細(xì)胞響應(yīng)于一條具體刺激或一組刺激 而產(chǎn)生一種或多種已分化的細(xì)胞。
骨髓(或者髓骨質(zhì))是在中空的骨內(nèi)部發(fā)現(xiàn)的軟組織。有兩種類型的骨 髓"紅骨髓(也稱之為骨髓組織)和黃骨髓。紅血細(xì)胞、血小板和絕大部分 白血細(xì)胞產(chǎn)生于紅骨髓， 一些白血細(xì)胞在黃骨髓中出現(xiàn)。
骨髓含有兩種干細(xì)胞造血干細(xì)胞和間質(zhì)干細(xì)胞。干細(xì)胞是所有保 留了通過細(xì)胞分裂更新自身的能力的多細(xì)胞生物體共有的原始細(xì)胞，并 且能分化為各種特化細(xì)胞類型。造血干細(xì)胞產(chǎn)生在血液循環(huán)中找到的三 類血細(xì)胞白血細(xì)胞(白血球)、紅血細(xì)胞(紅血球)和血小板(凝血細(xì)胞)。 間質(zhì)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)排列在骨髓中的中心竇周圍并且具有分化為造骨細(xì) 胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞和許多其它類型的細(xì)胞的能力。
胚胎干細(xì)胞是真正的干細(xì)胞，在于它們是全能的或者多能的并且顯 示出不受限制的自身更新能力，而位于骨髓之內(nèi)的成人干細(xì)胞更恰當(dāng)?shù)?稱為祖細(xì)胞，其類似于干細(xì)胞而具有自身更新和分化的能力，但遠(yuǎn)受到 更多限制。祖細(xì)胞通常是單能的或者專能的，而不是多能的。
9典型地獲得自骨髓的間質(zhì)干細(xì)胞或MSC是能分化為各種細(xì)胞類型的 專能干細(xì)胞。MSC表現(xiàn)出的能分化為的細(xì)胞類型包括造骨細(xì)胞、軟骨細(xì) 胞、肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞。
骨髓密度在患者之間并不相同，并且骨髓沒有均一的粘度。更年輕 的患者通常具有更致密的更稠的骨髓，這是空穴中更多小梁組織的結(jié)果。 此粘性骨髓傾向于使過濾設(shè)備中的過濾器積垢。
在本發(fā)明的實施方式中，流體樣品是骨髓抽取物。
在本發(fā)明的其他實施方式中，流體樣品是骨髓抽取物，而固體組分 是祖細(xì)胞。
本文中使用的"組織"包括存在于所有動物中的基本類型的組織 上皮、結(jié)締組織、肌肉組織和神經(jīng)組織。
結(jié)締組織的例子包括皮膚、肌肉、軟骨、骨骼、肌腱、韌帶、關(guān)節(jié) 嚢和脂肪組織。
本文中使用的"脂肪組織"意指身體中的平均脂肪和其他微脈管組 織來源。脂肪組織是含有多種細(xì)胞類型的復(fù)雜組織，包括脂肪細(xì)胞、周 細(xì)胞、纖維原細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、干細(xì)胞和微脈管細(xì)胞。由此，脂肪組織 是身體中祖細(xì)胞的最便捷來源之一 。
本文中使用的"微脈管細(xì)胞"意指含有微脈管結(jié)構(gòu)的平均細(xì)胞，諸 如內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和周細(xì)胞。
脂肪組織可以由位于體內(nèi)的"脂肪"儲藏部位獲取。合適的儲藏部 位包括附睪、肩胛間脂肪墊或髕下脂肪墊(霍法(Hoffas)脂肪墊)。另外一 種方式，潛在地更方便的是，所述脂肪組織可以是吸脂過程中獲得的吸 脂物。
雖然吸脂物能直接導(dǎo)入本發(fā)明的設(shè)備，脂肪組織碎片需要預(yù)加工。 組織碎片被粉碎和/或經(jīng)酶消化而釋放出組織的細(xì)胞組分。該細(xì)胞組分然 后可以懸浮在合適的載體中并導(dǎo)入所述設(shè)備中。
能設(shè)想的是如上所得的脂肪抽取物和/或細(xì)胞懸浮液在導(dǎo)入設(shè)備前進(jìn) 行再加工。例如，可以4吏用重力沉淀和/或離心以分離更大的脂肪小球和 來自基質(zhì)組分(包括干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞)的脂肪細(xì)胞。
在其中過濾生物樣品的本發(fā)明的實施方式中，過濾單元可以與吸氣 器相連從而使得流體直接由受試對象轉(zhuǎn)移到離心單元中。過濾單元可以在無菌環(huán)境中使用，而該設(shè)置降低了在從患者獲取樣品并導(dǎo)入過濾單元 之間樣品污染的風(fēng)險。
在另一個本發(fā)明的實施方式中，固體組分由能感染受試對象的致病
劑諸如細(xì)菌、真菌、原生動物、病毒、寄生蟲或朊病毒等構(gòu)成。 樣品可以是活體外細(xì)胞懸浮液。
過濾器，也能被稱為薄片，可以由適用于在本發(fā)明所描述的方法中 從流體樣品中分離固體組分的材料制造。過濾器可以由天然材料或合成
材料或者兩種材料的組合制成。合適的材料包括但不限于金屬、金屬合
金、陶瓷或聚合材料。實例包括聚碳酸酯(PLC)、聚對苯二曱酸乙二醇酯 (PET)、聚酰亞胺(polyidide)(PI)、鎳和不銹鋼。材料優(yōu)選為醫(yī)療級材料。 合適的履帶式蝕刻過濾器由it4ip (比利時)提供。合適的鎳箔過濾器由 Tecan Limited (U.K)提供。
在本發(fā)明的實施方式中，過濾器基本是平面的。也就是，過濾器具 有這樣的二維模式，即其中過濾器的直徑大于過濾器的高度。這樣的模 式提高了過濾器暴露于流體樣品的潛在過濾面積，由此提高了過濾速率。 該模式也使任何固體物質(zhì)在過濾器中阻塞的可能性降至最低。
過濾器的合適厚度的例子為ll、 23和50微米。過濾器越薄，通過其 的流體流速越快。
可以設(shè)想的是過濾器配備有具有相同幾何形狀的相同直徑或不同直 徑的孔。另外一種方式，過濾器可配備有具有不同幾何形狀的相同直徑 的孔。另外一種方式，過濾器可配備有具有不同直徑和不同幾何形狀的 孔。
適宜的孔形狀包括但不限于橫截面為圓形、橢圓形、方形、矩形或 三角形。
孔可以是錐形的?？椎腻F形有助于真空下細(xì)胞的變形。根據(jù)在錐形 體的每一端的孔徑和錐形的取向，可以實現(xiàn)基于尺寸的細(xì)胞優(yōu)先選擇。 在本發(fā)明的有利實施方式中，錐形孔的最狹窄點位于過濾器的上表面。 這種設(shè)置使得較小的細(xì)胞流過孔而較大的細(xì)胞保留在過濾器之上。相反， 似乎使得在清洗流向上回流通過過濾器時過濾后腔室中的細(xì)胞更難地返 回通過孔。已發(fā)現(xiàn)如果孔的最狹窄點位于過濾器的下表面，細(xì)胞傾向于 進(jìn)入孔并變形從而擠過最狹窄點。
在本發(fā)明的具體實施方式
中，孔具有約l微米 12微米的直徑。在本發(fā)明的其他實施方式中，孔可以為圓柱形。
在其中由骨髓抽取物中分離祖細(xì)胞的本發(fā)明的其他實施方式中，適
合的過濾器由PET制成，具有23微米的厚度，3微米的孔徑和400，000孔/cm2的孔密度。由真空泵產(chǎn)生的能有效地將流體"拉，，過過濾器的最佳負(fù)壓為約-0.1 -0.5psi，更具體為-0.2 -0.3psi。另外一種方式，可以產(chǎn)生正壓以有效地將流體"推"過過濾器。由該泵產(chǎn)生的最佳正壓為約+0.1 +0.5psi,更具體為+0.2 +0.3psi。
過濾單元的設(shè)計可經(jīng)過修改使得用于流體樣品的過濾前腔室的高寬比(aspect ratio)減小，因而提供更大的每單元體積過濾表面積。
在本發(fā)明的其他實施方式中，過濾單元的過濾前腔室分隔為多個腔室，可用于接受孔板格式的批次流體樣品。
在過濾后，含有被分離的(也稱為純化的、富集的、濃縮的)固體組分的保留流體樣品可通過使用例如移液器等進(jìn)行吸取而從過濾器單元的上部腔室中取出，并儲存或者使用。在本發(fā)明的其他實施方式中，尤其是在其中保留流體樣品含有治療性細(xì)胞組分的實施方式中，保留流體樣品可以與例如水凝膠或骨結(jié)合劑等相混合。在這些實施方式中，水凝膠或骨結(jié)合劑用作細(xì)胞儲庫。
根據(jù)本發(fā)明的 一 個方面提供了從流體樣品中分離固體組分的方法，所述方法包括步驟
(i) 將流體樣品導(dǎo)入本發(fā)明的裝置；
(ii) 過濾所述流體樣品；和
(m)從過濾前腔室中取出已分離的組分。
根據(jù)本發(fā)明的另 一個方面，提供了使用本發(fā)明的裝置從流體樣品中隔離或分離治療性細(xì)胞的方法。
在本發(fā)明的實施方式中，流體樣品可以是諸如血液樣品、滲出液、尿液樣品、精液、骨髓抽取物、脊髓液、來自組織的細(xì)胞懸浮液、粘液、痰液或唾液等生物樣品。
在本發(fā)明的實施方式中，治療性細(xì)胞是祖細(xì)胞。
根據(jù)本發(fā)明的再一個方面提供了使用本發(fā)明的裝置從骨髓抽取物中隔離或分離治療性細(xì)胞的方法。
在本發(fā)明的實施方式中，治療性細(xì)胞是祖細(xì)胞。系統(tǒng)可手動運行。然而，為了提高分離過程的整體效率和準(zhǔn)確性，尤其是當(dāng)裝置在手術(shù)室中由醫(yī)務(wù)工作者使用時，裝置有利地為自動運行。
可編程邏輯控制器(PLC)可經(jīng)編程以時控順序周期旋轉(zhuǎn)切換真空泵和回
洗泵的開關(guān)。真空泵在負(fù)壓下吸取流體樣品向下流過過濾器?；亓鞅闷仁骨逑戳飨蛏贤ㄟ^過濾器。
過濾腔室和/或過濾器可以是一次性使用的。控制單元可以是一次使用的或者是獨立專用單元。
在本發(fā)明的其他方面，經(jīng)分離的治療性細(xì)胞可以作為懸浮劑直接施用至對其有需要的位點。另外一種方式，細(xì)胞可以與適當(dāng)?shù)妮d體材料相結(jié)合或者相聯(lián)合，例如凝膠、糊劑、粘合劑、膠水、支撐架、膜、植入物或敷料。
可設(shè)想的是所分離的治療性細(xì)胞可用于針對人類和/或非人類動物的多種醫(yī)療用途以修復(fù)、再生和/或增強(qiáng)組織功能。
醫(yī)療應(yīng)用的實例包括整形外科、神經(jīng)病學(xué)、心血管、皮膚病學(xué)、美容手術(shù)和牙科。
可設(shè)想的是在本發(fā)明的某些實施方式中，所分離的治療性細(xì)胞包括間質(zhì)干細(xì)胞。這些細(xì)胞能分化為造骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。含有間質(zhì)干細(xì)胞的治療性組分可用于疾病或損傷造成的整形缺陷中，諸如軟骨修復(fù)、骨骼修復(fù)(包括骨折修復(fù))、脊柱融合術(shù)、推間盤退變治療
(包括環(huán)修復(fù)、髓核凄欠量增強(qiáng)(nucleous populous augmentation)、推間盤增強(qiáng)(disc augmentation))。
功能性內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)是血管生成和血管新生的核心。已表明EPC發(fā)展自成體動物的骨髓單核細(xì)胞。因此可設(shè)想的是在本發(fā)明的某些實施方式中，所分離的治療性細(xì)胞包括EPC，并且該治療性組分可用于其中受損的或者缺血的組織需要修復(fù)、再生或血管發(fā)生的缺陷，諸如外周血管疾病。
因此提供了方法用于i)在受試對象的組織中形成新血管，ii)提高受試對象組織中的血流，iii)治療受試對象的患病組織，iv)提高患病組織中的血管新生或v)防止受試對象的心力衰竭，所有的所述方法包括步驟
a) 使用本發(fā)明的裝置分離骨髓單核細(xì)胞，b) 將有效量的骨髓單核細(xì)胞局部植入組織中以在組織中形成新血管。
在本發(fā)明的實施方式中，骨髓單核細(xì)胞來自于自體。
骨髓單核細(xì)胞植入其中的組織包括患病的或者受損的組織以及任何
需要修復(fù)或再生的組織，包括但不限于灌流(underpurflised)組織，諸如在慢性貧血中發(fā)現(xiàn)的組織，以及心肌組織、骨骼肌組織、腦組織(例如受到中風(fēng)或AV畸形影響)、冠狀血管、腎、肝、胃腸道器官、受萎縮(包括神經(jīng)類肌肉萎縮)影響的肌肉組織。
本發(fā)明的實施方式中，新血管是毛細(xì)血管和/或側(cè)支血管。


以下將參考附圖描述本發(fā)明，其中
圖l:顯示本發(fā)明的一般運轉(zhuǎn)原理的示意圖。
圖2:本發(fā)明的裝置的實施方式的示意圖，其中在過濾前腔室和過濾后腔室中的流體持續(xù)流動穿過過濾器。
圖3:控制單元的照片。
圖4:過濾單元的照片。
圖5:與控制單元相連的過濾單元的照片。
圖6:聲波發(fā)生元件的照片。
圖7:用于過濾單元之內(nèi)的振動過濾器的固定器。
圖8:來自豬全血的單核細(xì)胞(MNC)的平均富集，采用本發(fā)明的裝置內(nèi)的具有指定平均孔徑的過濾器(n=6)。
圖9:從全豬血中富集MNC的處理時間，采用本發(fā)明的裝置內(nèi)的具有約2.9微米平均孔徑的過濾器(n=3)。
圖10:采用本發(fā)明的裝置，針對不同運行條件在8分鐘時豬骨髓組織的體積減少。所述裝置使用平均孔徑為約3」微米的過濾器，流速為6滴/分鐘。
圖11:通過用內(nèi)嵌針型閥限制真空壓力而最優(yōu)化的穿過過濾器的流速。
圖12:采用本發(fā)明的裝置造成的白血細(xì)胞和紅血細(xì)胞增加倍數(shù)。圖13:采用本發(fā)明的裝置造成的過濾前和過濾后全豬血樣品中白血細(xì)月包和紅血細(xì)"包之比。
14圖14:使用分離裝置的數(shù)據(jù)顯示可以實現(xiàn)多至以及超過10倍的體積 減少并同時回收>90%的單核細(xì)胞。體積減少和單核細(xì)胞濃度是線性相關(guān)
的。典型處理時間少于io分^7。
圖15:用于從豬BMA中分離單核細(xì)胞的PET過濾器內(nèi)孔徑分布的示 例性模式。
具體實施例方式
圖l:顯示本發(fā)明的一般運轉(zhuǎn)原理的示意圖，其中以下編號表示
1. 過濾單元
2. 多孔過濾器
3. 用于接收流體樣品的上層(過濾前)腔室
4. 流體樣品
5. 用于接收回洗流的下層(過濾后)腔室
6. 在過濾后腔室中提供的流體
7. 共振基板
8. 聲波發(fā)生元件
9. 真空吸取(任選的)
多孔過濾器2將過濾單元1分隔為兩個腔室上層(過濾前)腔室3和下 層(過濾后)腔室5，需要進(jìn)行細(xì)胞分離的液體樣品4導(dǎo)入上層(過濾前)腔室 3,能傳導(dǎo)聲駐波的流體6導(dǎo)入下層(過濾后)腔室5。聲學(xué)元件8與基板7相 連，所述基板7在下層腔室內(nèi)并位于底部，并且響應(yīng)于發(fā)聲元件而共振并 產(chǎn)生駐波穿過兩個流體相和過濾器從而擾動樣品。同時，真空吸取9的循 環(huán)過程導(dǎo)致樣品向下移動通過過濾器。由裝有合適泵和閥門的遠(yuǎn)程單元 控制真空壓力、流體流速和震動頻率。所需要的較大細(xì)胞的濃縮組分保 留在過濾器的頂部，同時較小的細(xì)胞穿過過濾器進(jìn)入廢物容器(未示出)。
在本發(fā)明的具體實施方式
中，聲學(xué)元件是揚聲器，其具有0.4W的功 率、40hm的阻抗、峰峰間振幅為約4.2 V 7.36 V、頻率為約300 700 Hz。
圖2:本發(fā)明的裝置的實施方式的示意圖，其中在過濾前腔室和過濾 后腔室中的流體持續(xù)流動穿過過濾器，其中以下編號表示
10. 過濾單元
11. 多孔過濾器
12. 用于接收從過濾單元中排出的流體的容器
13. 用于接收回洗流的容器14. 回洗泵
15. 真空泵
16. 聲波發(fā)生元件/共振基板
17. 電磁閥(回洗線路)
18. 電磁閥(真空線路)
19. PLC數(shù)字控制單元和顯示器
20. 針型閥
該圖描述了包括本發(fā)明的過濾單元(如圖1所示)和控制單元的裝置。 在控制單元19中的PLC控制器(Mitsubuishi AL2-24MR-04)可編程切換真 空泵15和回流泵14(均為Koge KPV14A-6A)的開關(guān)。它也用于控制電,茲閥 (Cole Parmer 98302-02) 17和18的觸動。這可編程為以時控順序運行閥門 和泵或者手動控制泵。內(nèi)建在控制單元中的放大器和信號產(chǎn)生器芯片使 得可以通過PLC設(shè)定聲學(xué)元件18的頻率和振幅。收集來自設(shè)備的排出的流 體的容器12和輸送回洗流的容器13通過適宜的流管與過濾器單元和控制 單元相連。
圖3:控制單元的照片，其中以下編號表示
21. 裝在控制盒之中的PLC單元
22. 控制鍵盤
23. 設(shè)備開/關(guān)
24. 真空線路電磁閥控制
25. 聲學(xué)元件開/關(guān)
26. 真空手動控制(override)
27. 回流手動控制(override)
28. 聲波頻率控制
29. 聲學(xué)元件振幅控制
30. 聲學(xué)元件頻率指示器
31. 下滴事件指示器LED
圖4:描述本發(fā)明的過濾單元的組件裝配的照片，其中以下編號表示
32. 上層腔室
33. 中層腔室
34. 固定上層腔室和中層腔室的夾子
35. 膜過濾器36. 當(dāng)上層腔室和中層腔室夾在一起時過濾器的O-環(huán)密封
37. 在中層腔室中的上層組織樣品容器
38. 進(jìn)入過濾器以下的鹽水容器的入口
39. 下層腔室
40. 聲學(xué)元件
41. 聲學(xué)元件的0-環(huán)密封
42. 聲學(xué)元件電連接的出口
圖5:與控制單元相連的過濾單元的照片，其中以下編號表示
43. 過濾單元
44. 過濾單元至真空泵的真空線路
45. 真空泵
46. 真空電》茲閥
47. 至廢液室的真空線路
48. 廢液室
49. 至過濾單元的回洗線路
50. 回洗泵
51. 回洗電^茲閥
52. 回洗鹽水容器
53. 下滴事件傳感器
圖6:聲波發(fā)生元件的照片。移動線圏NXT勵磁器顯示為54。 以下描述涉及本發(fā)明的實施方式，其中流體持續(xù)流動通過過濾器。 在正常運行中，過濾器單元中沒有流體?；叵幢么蜷_將流體輸送至 過濾單元13的下層腔室直至流體通過過濾器(12)進(jìn)入上層(過濾前)腔室。 聲學(xué)元件的峰峰間振幅為4.2 V 7.36 V,頻率為300 700Hz。該元件設(shè)定 為驅(qū)動駐波穿過流體并且觀察到流體處于持續(xù)擾動之中。真空泵打開抽 取液面下降剛好至通過過濾器。通過針型閥22調(diào)節(jié)通過過濾器的流速。 樣品流輸送到上層(過濾前)腔室中并觀察到持續(xù)擾動。由PLC啟動緩慢減 少樣品體積的快速回洗和真空抽取循環(huán)過程。樣品體積通常減小10倍， 并由PLC停止所述過程。從上層(過濾前)腔室中取出樣品。
圖7描述了用于本發(fā)明的裝置之中的過濾器固定器。過濾器固定器的 設(shè)計使得過濾器可在縱向或橫向或者同時兩個方向上的移動。固定器55 基本為圓形。馬蹄形或U形孔56將固定器分為兩個部分，外環(huán)部分57和中心環(huán)形島58。部分57與部分58通過橋元件59a和59b相連。部分58配備有 多個孔。所述孔以統(tǒng)一的方式分布。所述孔基本上為具有約3微米直徑的 圓形。栓元件60配備在部分57的外表面上并與橋元件59b成一直線。該栓 元件60由在裝置之外的馬達(dá)和凸輪(未示出)機(jī)械驅(qū)動。
合并的過濾器固定器和過濾器制造為單一塑料單元。
實施例
從流體樣品中分離固體部分的實施例
1. 人骨髓抽取物樣品
由Cambrex購買得到人骨髓抽取物，使用前經(jīng)過70 /am細(xì)胞過濾器以 除去任何脂肪細(xì)胞和大塊細(xì)胞聚集體。用coulter計數(shù)器計數(shù)白血細(xì)胞 (WBC)和紅血細(xì)胞(RBC)。將2ml細(xì)胞懸浮液加入到設(shè)備中，所述設(shè)備 已經(jīng)裝填有用作具有約3 pm孔徑的過濾器的光電成形的網(wǎng)篩。使用設(shè)備 的控制單元啟動分離過程并持續(xù)進(jìn)行直至在設(shè)備的上層腔室中于過濾器 上游保留約200pl的濃縮流體部分。后處理，從設(shè)備中過濾器的頂部取出 100 jxl的濃縮物然后通過coulter計數(shù)器，所述coulter計數(shù)器在每次實驗前 經(jīng)過日常標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)。得到所得樣品中的WBC和RBC計數(shù)。
2. 豬骨髓樣品
豬勿應(yīng)岸遂W^庠和潛^^^
由屠宰場獲得新鮮豬后腿。由每條腿的股骨頭中抽取蕈體柄 (Trabeculum)骨髓并收集到盛有PBS的鍋中。用剪刀將骨髓細(xì)微地剪碎， 并將所得漿液放置于37。C/5。/。 C02的定軌振蕩器中晃動，此后將上清液通 過70 nm的細(xì)胞過濾器進(jìn)入分離管。然后將試管在1500 rpm旋轉(zhuǎn)5分鐘并 棄去上清液，所得小球再懸浮于101111的^河￡]/1+ 15。/。FCS培養(yǎng)基中。
如上分離并處理骨髓，然后將IOO fil的骨髓懸浮液通過coulter計數(shù)器， 所述coulter計數(shù)器在每次實驗前經(jīng)過日常標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)。得到的WBC和RBC
1 x 107個細(xì)胞。將2ml該流體加入到設(shè)備中進(jìn)行分離 豬血漿的制備
從屠宰場收集新鮮豬血放入盛有4% (w/v)檸檬酸三鈉溶液(sigma)的 儲存瓶中，比例為l: 9(檸檬酸鈉:血)。將血液等分到50 ml離心管中并在 2500rpm旋轉(zhuǎn)30分鐘，然后小心地將上清液轉(zhuǎn)移到另 一離心管中。上清液再次于2500 rpm旋轉(zhuǎn)30分鐘并將上清液轉(zhuǎn)移到新的50 ml離心管中，并在 -2(TC保存直至準(zhǔn)備使用。
豬骨髓抽取物的葡聚糖分離
如上所述從新鮮豬后腿中抽取豬骨髓，最終細(xì)胞小球再懸浮于25 ml 的a-MEM + 15% FCS培養(yǎng)基中。
新鮮豬血用磷酸緩沖鹽水稀釋，以使RBC數(shù)目減少至大約每ml中3.5 乂109個細(xì)胞。 一旦完成，通過加入早先獲得的骨髓將WBC數(shù)目增加至大 約每ml中2.5x 107個細(xì)胞。血液隨后稀釋2:1 (補(bǔ)齊鹽溶液血液)，然后將 35 ml的該稀釋血液放置于15 ml葡聚糖(Amersham biosciences)頂部。試管 隨后于1800rpm旋轉(zhuǎn)30分鐘，制動被關(guān)閉(Megafbge l.OR SOP/CB/021.)。 然后抽取WBC層并制成小球然后再次懸浮于低葡萄糖DMEM培養(yǎng)基中， 對RBC和WBC產(chǎn)品進(jìn)行計數(shù)。
3.豬血樣品
從屠宰場收集新鮮豬血放入盛有4% (w/v)檸檬酸三鈉溶液(sigma)的 儲存瓶中，比例為l: 9(檸檬酸鈉:血)。通常，將20ml的等分試樣通過70ixm 細(xì)胞過濾器進(jìn)入收集試管。該過程重復(fù)三次，每次使用新過濾器。將2ml 最終過濾樣品放入設(shè)備進(jìn)行分離。
結(jié)果
圖8:具有約3微米孔徑的過濾器被證實為最佳的(pO.05)從全豬血中 回收MNC:采用的統(tǒng)計測試為單向ANOVA和Tukey事后分析以及95。/o的
置信區(qū)間。
圖9描述了當(dāng)使用孔徑約3微米的過濾器時，可以在6分鐘之內(nèi)從全豬 血中將MNC富集超過六倍。
圖10描述了當(dāng)在裝置中采用的運行條件包括(i)真空抽取流體樣品 向下穿過過濾器，(ii)回洗驅(qū)使清洗流向上通過過濾器和(iii)聲學(xué)元件產(chǎn) 生并傳到駐波向上通過清洗流和樣品流的時候，可得到約10倍的豬骨髓 組織的體積減少。
圖ll:確定了流體通過過濾器的最佳流速。流體樣品來自于豬骨髓。 過濾前流體體積為2ml。過濾后流體樣品體積為200 pl。 6滴/分鐘時實現(xiàn) 流體樣品體積減少的時間為8分鐘，12滴/分鐘時為4分鐘，25滴/分鐘時為 2分鐘，全部采用3微米網(wǎng)篩過濾器。最佳流速確定為6滴/分鐘，因為相比 12滴/分鐘或25滴/分鐘流速，這對應(yīng)于改善的-MNC富集。
19圖12描述了在過濾后流體樣品中WBC相比RBC的富集。小于1的數(shù)值 指示了RBC通過了過濾器。
圖13描述了過濾前和過濾后全豬血樣品中的RBC:WBC比率。過濾 前，RBC:WBC的比率為約375:1，過濾后，RBC:WBC的比率為約50:1。
圖14描述了使用具有23 pm厚度、400k孔密度和3.5 pm孔徑的PET過 濾器，人骨髓中骨髓成核細(xì)胞的濃縮倍數(shù)和骨髓成核細(xì)胞的保留百分比 %。
圖15描述了具有400,000孔密度的PET過濾器的孔徑分布。該圖進(jìn)一 步描述了當(dāng)考慮處理來自骨髓抽取物的細(xì)胞時的該過濾器的性能。 參考文獻(xiàn)
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1.用于從流體樣品中分離固體組分的裝置，所述裝置包括過濾單元，所述過濾單元包括聲波發(fā)生元件；至少一個過濾器，所述過濾器將所述單元分隔為用于接收流體樣品的過濾前腔室和用于接收能傳導(dǎo)聲波的流體的過濾后腔室；和經(jīng)設(shè)置與過濾后腔室相關(guān)連的基板，所述基板能在向其施加聲波時共振；其中，所述聲波發(fā)生元件經(jīng)設(shè)置與基板相關(guān)連從而使得所述聲波發(fā)生元件引起所述基板的共振，所述基板隨之傳導(dǎo)聲駐波穿過過濾后腔室里的流體和過濾前腔室里的流體樣品。
2. 如權(quán)利要求l所述的裝置，其中所述聲波發(fā)生元件與所述基板可逆相連。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的裝置，其中在過濾前和過濾后腔室中的流 體以相反方向連續(xù)移動通過所述過濾器，從而使得流體樣品的凈移動為 進(jìn)入過濾后腔室。
4. 如權(quán)利要求l所述的裝置，其中所述至少一個過濾器在分離過程中 被擾動。
5. 如權(quán)利要求3所述的裝置，其中所述過濾器與能夠在縱向或橫向或. 同時兩個方向上振動所述過濾器的固定器相關(guān)連。
6. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的裝置，其中所述流體樣品是液體。
7. 如權(quán)利要求6所述的裝置，其中所述液體是生物樣品。
8. 如權(quán)利要求7所述的裝置，其中所述生物樣品是血液樣品、滲出液、 尿液樣品、精液、骨髓抽取物、脊髓液、來自組織的細(xì)胞懸浮液、粘液、 痰液或唾液。
9. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的裝置，其中所述固體組分是細(xì)胞 組分。
10. 如權(quán)利要求9所述的裝置，其中所述細(xì)胞組分是白血細(xì)胞組分。
11. 如權(quán)利要求10所述的裝置，其中所述細(xì)胞組分是選自干細(xì)胞或 祖細(xì)胞的未分化細(xì)胞。
12. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的裝置，其中所述過濾器由合成材 料制造。
13. 如權(quán)利要求14所述的裝置，其中所述孔徑為約2 4微米。
14. 如權(quán)利要求15所述的裝置，其中所述孔徑為約3微米。
15. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的裝置，其中所述裝置是自動化的。
16. 從流體樣品中分離固體組分的方法，所述方法包括步驟(i) 將流體樣品導(dǎo)入如權(quán)利要求1所述的裝置；(ii) 過濾所述流體一羊品；和(iii) 從過濾前腔室中取出已分離的組分。
17. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中由所述聲波造成的過濾前和過濾 后腔室中的擾動在分離過程中持續(xù)進(jìn)行。
18. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中由所述聲波造成的過濾前和過濾 后腔室中的擾動在分離過程中間歇進(jìn)行。
19. 如權(quán)利要求16-18中任一項所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包 括使過濾前和過濾后腔室中的流體以相反方向連續(xù)移動的步驟，從而使 得流體樣品的凈移動為進(jìn)入過濾后腔室。
20. 如權(quán)利要求16-19中任一項所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包 括在分離過程中擾動過濾器的步驟。
21. 如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述過濾器與能夠在縱向或橫向 或同時兩個方向上振動所述過濾器的固定器相關(guān)連。
22. 如權(quán)利要求16-21中任一項所述的方法，其中所述流體樣品是液體。
23. 如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述液體是生物樣品。
24. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述生物樣品是血液樣品、滲出 液、尿液樣品、精液、骨髓抽取物、脊髓液、來自組織的細(xì)胞懸浮液、 粘液 痰液或唾液0
25. 如權(quán)利要求16—24中任一項所述的方法，其中所述固體組分是細(xì) 胞組分。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述細(xì)胞組分是白血細(xì)胞組分。
27. 如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述細(xì)胞組分是選自干細(xì)胞或 祖細(xì)胞的未分化細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及從流體樣品中分離固體組分，具體而言為通過多孔過濾器2從諸如骨髓樣品等生物樣品中分離治療性細(xì)胞組分，所述多孔過濾器將過濾單元1分隔為上層過濾前腔室3和下層過濾后腔室5，需要進(jìn)行細(xì)胞分離的液體樣品4導(dǎo)入上層過濾前腔室3，能傳導(dǎo)聲駐波的流體6導(dǎo)入下層過濾后腔室5。聲學(xué)元件8與基板7相連，所述基板7在下層腔室5內(nèi)并位于底部，并且響應(yīng)于發(fā)聲元件8而共振并產(chǎn)生駐波穿過兩個流體相和過濾器從而擾動樣品4。同時，真空吸取9的循環(huán)過程導(dǎo)致樣品4向下移動通過過濾器2。由裝有合適泵和閥門的遠(yuǎn)程單元控制真空壓力、流體流速和震動頻率。
文檔編號B01D29/66GK101678250SQ200880006915
公開日2010年3月24日 申請日期2008年2月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月2日
發(fā)明者S·柯倫 申請人:史密夫及內(nèi)修公開有限公司