專利名稱：裝置及設(shè)備的制作方法
裝置及設(shè)備本發(fā)明涉及的設(shè)備及系統(tǒng)，適合用于實(shí)施以及檢測化學(xué)或生化反應(yīng)的產(chǎn)物，諸如提純和/或檢測樣本如生物樣本中的核酸，以及，本發(fā)明涉及裝置或裝置的組合，尤其是適合在這種設(shè)備及系統(tǒng)中使用的用后可棄單元，以及使用上述設(shè)備及単元的核酸提純和/或檢測方法。在研究、診斷尤其是疾病狀況以及遺傳狀況的診斷、微生物的取證(forensics)及檢測例如用于衛(wèi)生保健、環(huán)境監(jiān)測或軍事目的等領(lǐng)域中，樣本尤其是生物樣本中核酸的檢測是周知的，這些情況下都要求快速檢測潛在有害的微生物諸如細(xì)菌。在診斷領(lǐng)域長期使用側(cè)流裝置(LFDs)來檢測靶分析物，諸如包括激素、抗原、抗體等的蛋白質(zhì)。在這些裝置中，含有或者懷疑含有分析物的液體樣本沿膜流動(dòng) 在此處樣本依次遇到標(biāo)記、標(biāo)記結(jié)合配體(labelled binding partner)和/或固定結(jié)合配體(immobilised binding partner),藉此,取決于樣本中分析物的有無,在膜上顯現(xiàn)可察覺的可見信號(hào)。使樣本沿側(cè)流裝置有效流動(dòng)所需的液體量通常相當(dāng)多。用作側(cè)流裝置基底的膜是多孔的，并且通常會(huì)吸收大量液體。此外，液流必須充足到保證將經(jīng)標(biāo)記部分運(yùn)送到達(dá)裝置上的檢測區(qū)。它們也可以用來檢測包含核酸諸如RNA或DNA的分析物。在這種情況下，關(guān)于分析物的結(jié)合配體包括與特定靶序列雜交的寡核苷酸，或者可選擇地，針對(duì)例如在預(yù)備擴(kuò)增反應(yīng)期間已結(jié)合入RNA或DNA中的結(jié)合劑的結(jié)合配體。例如，核酸擴(kuò)增反應(yīng)也可以用來將結(jié)合劑諸如生物素結(jié)合入靶，以便于在檢測區(qū)中捕獲。在生物素已被結(jié)合入靶核酸的情況下，如果側(cè)流裝置的檢測區(qū)中存在鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素抗體，將導(dǎo)致在捕獲區(qū)中捕獲經(jīng)生物素標(biāo)記的靶核酸。可以通過下述方式實(shí)現(xiàn)標(biāo)記過程使用也雜交至例如靶序列以便當(dāng)靶在檢測區(qū)中固定不動(dòng)時(shí)產(chǎn)生可見信號(hào)的標(biāo)記探針，或者，通過例如在使用標(biāo)記引物來產(chǎn)生固有標(biāo)記產(chǎn)物的擴(kuò)增反應(yīng)期間將標(biāo)記結(jié)合入靶序列。合適的標(biāo)記在本領(lǐng)域是周知的化學(xué)或生化標(biāo)記，諸如熒光標(biāo)記包括例如熒光素或熒光素衍生物，或者菁染料；或者可以以酶方式諸如異輕基洋地黃毒甙元檢測出的標(biāo)記。在另ー實(shí)施例中，標(biāo)記可以包括微粒狀標(biāo)記，諸如金、銀、以及乳膠的微球或顆粒，其直接產(chǎn)生可見信號(hào)。這些標(biāo)記可以布置成在檢測區(qū)中與靶核酸相互作用。為了達(dá)到此目的，對(duì)顆粒自身進(jìn)行標(biāo)記，例如，使其與和靶核酸相互作用的部分(例如，與祀核酸雜交的其他核酸)結(jié)合(conjugate),或者,可以使它們與結(jié)合劑諸如鏈霉親和素結(jié)合，結(jié)合劑與已結(jié)合入靶核酸序列的結(jié)合配體諸如生物素相互作用。事實(shí)上，在大多數(shù)情況下，生物樣本中靶核酸的濃度較低，并且肯定低于在側(cè)流裝置上直接產(chǎn)生可見信號(hào)的濃度。因此，作為預(yù)備步驟，通常需要使核酸擴(kuò)增。核酸擴(kuò)增技術(shù)是本領(lǐng)域中的ー種強(qiáng)大手段。有許多這種技術(shù)，有些以等溫方式進(jìn)行，而有些則要求熱循環(huán)諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，這些都允許將樣本中非常少量的靶核酸擴(kuò)增到可檢測的水平。然而，這些技術(shù)的高靈敏度意味著它們非常容易被污染或交叉污染。在這些方法中即使非常少量的污染核酸也會(huì)經(jīng)過擴(kuò)增而導(dǎo)致假陽性。為解決這ー問題已經(jīng)進(jìn)行了許多嘗試，這些嘗試主要集中于保證在與擴(kuò)增處理盡可能相隔開的環(huán)境中對(duì)樣本進(jìn)行處理。因此，已經(jīng)開發(fā)了不少方法，用于在均相反應(yīng)(此反應(yīng)中不必打開反應(yīng)容器)中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)以及檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。然而，為了釋放核酸例如從真核細(xì)胞和原核細(xì)胞或者從病毒中釋放核酸，經(jīng)常必須使生物樣本經(jīng)過某些預(yù)處理步驟，以允許擴(kuò)增進(jìn)行。顯然，理想的是，按照使任何污染風(fēng)險(xiǎn)減到最低的方式進(jìn)行這種過程。例如，美國專利No. 6，649，378、美國專利公開No. 2004/0110167、以及美國專利公開No. 2006/0160078描述了一系列自給裝置(self-contained device)，將核酸提取、擴(kuò)增、以及檢測集成在単一裝置中。
然而，一般而言，這種裝置需要執(zhí)行物理操作來實(shí)現(xiàn)該方法。例如，美國專利No. 6，649，378和美國專利公開No. 2004/0110167描述了這樣的系統(tǒng)，其中，在第一裝置中進(jìn)行DNA提取，將內(nèi)容物傳送至擴(kuò)增管諸如PCR管，最后，將側(cè)流裝置(“結(jié)果桿(resultstick)”)引進(jìn)管中。這類操作可能導(dǎo)致污染物的引入。美國專利公開No. 2006/0160078的裝置描述了ー種系統(tǒng)，在側(cè)流裝置膜上的不同區(qū)段處進(jìn)行提取、擴(kuò)增、以及檢測，其中初始使各區(qū)段分隔開，然后，相繼使其成一體，例如，通過除去插入的塑料片，或者通過使用柱塞以使ー個(gè)區(qū)段落到后續(xù)區(qū)段上。然而，在這種情況下，各階段存在的液體量在一定程度上隨側(cè)流裝置膜的要求以及其如何吸收或者傳送液體而變。然而，優(yōu)選的擴(kuò)增反應(yīng)最好以少量“自由”液體在溶液中進(jìn)行，而在要求一定量以流過側(cè)流裝置的情況下，諸如美國專利公開No. 2006/0160078的情況下，這是不可能實(shí)現(xiàn)的。對(duì)于集成系統(tǒng)有這樣ー種需求，允許快速進(jìn)行分析，而無需繁重的人工操作，而且，具有最小限度的污染風(fēng)險(xiǎn)，并具有最大效率。本申請(qǐng)人已經(jīng)開發(fā)出一種設(shè)備，其允許在用后可棄的隔離單元中進(jìn)行化學(xué)和生化反應(yīng)諸如核酸分析，并且具有最低的污染風(fēng)險(xiǎn)。特別地，本申請(qǐng)人已經(jīng)設(shè)計(jì)出ー種裝置，可以在具有適宜容積的井孔中，在液相中進(jìn)行核酸擴(kuò)增，并且將該反應(yīng)的產(chǎn)物傳送至側(cè)流裝置的膜，而不暴露于環(huán)境。結(jié)果，本發(fā)明提供了ー種裝置，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的靶核酸，該裝置包括(i)第一井孔，其中，在液相中實(shí)現(xiàn)靶核酸的核酸擴(kuò)增反應(yīng)；(ii)第一通道，自第一井孔延伸而出；(iii)側(cè)流測定裝置，布置成收納來自第一通道的樣本并檢測其中的靶核酸。取決于所使用的量，沿第一通道通過的液體可以直接傳送至側(cè)流測定裝置的樣本接納段。該段可以包括芯吸墊(wicking pad)。然而,在特定實(shí)施例中，在經(jīng)由第一通道傳送大量液體的情況下，設(shè)置第二井孔會(huì)比較方便，將第二井孔布置成接收來自第一通道的液體。在這種情況下，側(cè)流測定裝置布置成接收來自第二井孔的樣本。例如，側(cè)流測定裝置的接納段可以伸進(jìn)第二井孔。傳送的量較大時(shí)這樣會(huì)比較方便，較大的量可以方便地被側(cè)流裝置的接納段直接吸收。因此，在特定實(shí)施例中，本發(fā)明提供了ー種裝置，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的靶核酸，該裝置包括
(i)第一井孔，其中，在液相中實(shí)現(xiàn)靶核酸的核酸擴(kuò)增反應(yīng)；(iia)第二井孔，利用第一通道使其與第一井孔連接，其中，第一通道布置成使得第一井孔的內(nèi)容物可以傳送至第二井孔；
(iii)側(cè)流測定裝置，布置成接收來自第二井孔的樣本并檢測其中的靶核酸。本發(fā)明的裝置可以是整體裝置，在集成的單元或?qū)嶓w中包含所有組成部分(i)、( )以及(iii)，在(iia)存在的情況還也包括(iia)。例如，裝置的組成部分可以全部容納在單一殼體內(nèi)。然而，在特定實(shí)施例中，裝置可以是模塊化的，特別地，可以使第一井孔
(i)設(shè)置為獨(dú)立單元，可安裝至裝置以供使用。在這種情況下，各個(gè)模塊形成本發(fā)明的另外一些方面，這些單個(gè)模塊其一是如上定義的裝置，但代替第一井孔，可以具有用于第一井孔的收納裝置，而另一個(gè)單個(gè)模塊則是適合于接收進(jìn)入該收納裝置的第一井孔。這種模塊化的第一井孔適宜于自支撐，并且可以設(shè)置有環(huán)狀凸緣或唇邊，以便于操控以及將其安裝至收納裝置。在本文使用時(shí)，術(shù)語“側(cè)流測定裝置”指任意借助于液體沿吸收膜的流動(dòng)而操作的測定裝置。因此，這包括常規(guī)的“測桿(dipsticks)”，其可以豎直方式使用，以及這樣的裝置，其中將膜固定于水平位置，使得沿膜的流動(dòng)以水平方式或側(cè)向方式發(fā)生。術(shù)語“通道”指限定在實(shí)心本體中的通路，例如，在壓差和/或重力影響下，尤其不必依賴于毛細(xì)管作用，液體可以自由流動(dòng)通過其中。將通過吸收流動(dòng)來傳送液體的區(qū)段與允許正常液體流動(dòng)的區(qū)段結(jié)合在同一裝置中，從而，本發(fā)明的裝置允許測定的各階段(擴(kuò)增及檢測)在優(yōu)選條件下進(jìn)行。因此，對(duì)第一井孔中的任何擴(kuò)增反應(yīng)混合物的量可以進(jìn)行選擇，以便提供最佳擴(kuò)增條件。然而，在傳送至第二井孔并繼而傳送至側(cè)流裝置時(shí)，可以改變該量，尤其是通過添加稀釋劑而增加，以便提供適宜量用在側(cè)流測定裝置中。多個(gè)區(qū)段容納在同一裝置內(nèi)的事實(shí)，便于液體在吸收區(qū)段與正常液體流動(dòng)區(qū)段之間的傳送。此外，本裝置適合于測定的自動(dòng)或半自動(dòng)操作。在特定實(shí)施例中，第二井孔是封閉的。連接第一井孔與第二井孔的第一通道適當(dāng)包封在裝置內(nèi)，例如，包封在至少容納第一井孔和第二井孔的殼體內(nèi)。在另一實(shí)施例中，第一井孔是可封閉的。在本文使用時(shí)，術(shù)語“封閉”指多個(gè)井孔與環(huán)境隔離，盡管它們可以彼此連通。類似地，術(shù)語“可封閉”指可以與環(huán)境隔離的井孔，例如，利用蓋子、帽蓋、塞子、或者密封件。在模塊化裝置的情況下，第一井孔設(shè)置為裝置的獨(dú)立的但可安裝的組成部分，裝置自身可以設(shè)置該裝置的蓋子、帽蓋、塞子、或者密封件。在這種情況下，裝置設(shè)置有合適的收納裝置，諸如向下伸出的隆起或插口(spigot)，其例如利用搭扣或螺紋配合方式適配進(jìn)第一井孔的開口。在這種情況下，在可安裝式第一井孔中必須做好準(zhǔn)備，以容納第一通道以及如下所述存在第二通道時(shí)還要容納該第二通道，使得它們在裝置中就位時(shí)不會(huì)被第一井孔的壁阻塞。例如，第一通道以及第二通道(如果存在的話)適合穿過凸部或插口，以便當(dāng)其在收納裝置上就位時(shí)通到第一井孔中，但是，也可以設(shè)想其他布置。在第二井孔是封閉的并且第一通道也被包封的情況下，可以進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，并將得到的擴(kuò)增產(chǎn)物傳送至側(cè)流裝置用于檢測，而不暴露于環(huán)境，所以，使污染的風(fēng)險(xiǎn)減到最小。在特定實(shí)施例中，本裝置進(jìn)一步包括(iv)第三井孔，第三井孔適合用于容納稀釋齊U，并且利用第二通道使其與第一井孔連接，其中，第二通道布置成使得來自第三井孔的稀釋劑可以傳送至第一井孔。這種實(shí)施例意味著，可以以少量液體進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，這對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)是適宜的甚至是最優(yōu)的，以及，在進(jìn)入第二井孔之前，通過添加稀釋劑，可以使擴(kuò)增產(chǎn)物充分稀釋，以允許其沿側(cè)流裝置自由流動(dòng)。第三井孔可以容納預(yù)裝載的稀釋劑，并且如上限定使其封閉。然而，由于該井孔可以通向第一通道及第二通道，并因此通向側(cè)流裝置中可以吸水的膜，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)在盡可能晚的時(shí)刻添加稀釋劑會(huì)更為有利。為了允許這成為集成成套部件的一部分，在特定實(shí)施例中，在密封容器內(nèi)提供稀釋劑，只在需要使用稀釋劑時(shí)可在第三井孔內(nèi)打開該密封容器。因此，例如，可以將稀釋劑容納在密封的撓性袋、泡罩包裝(blister pack)或細(xì)頸瓶種，它們都收容于第三井孔中或者提供為可以與之接觸，而用于打開袋或者細(xì)頸瓶的裝置諸如刺穿工具如針或切割器則設(shè)置在第三井孔內(nèi)。刺穿工具布置成，在處理期間，使得僅在向容器或刺穿工具施加壓力時(shí)將稀釋劑容器戳破或打開。例如，刺穿工具可以設(shè)置在第三井孔的基部內(nèi)，并且在需要時(shí)可以強(qiáng)制使稀釋劑容器與之處于刺穿接觸。這避免了液體稀釋劑在其使用之前過早地接觸側(cè)流裝置的膜，這種過早接觸可能導(dǎo)致裝置劣化。第一井孔適合于特定地允許核酸擴(kuò)增反應(yīng)在其中進(jìn)行。這種反應(yīng)通常以相對(duì)較少的量進(jìn)行，因此，第一井孔的容積可以相對(duì)較小，如下文進(jìn)一步討論的那樣。然而，特別地，第一井孔適宜的是適應(yīng)于使其能加熱至在核酸擴(kuò)增中通常需要承受的期望溫度。因此，該井孔適宜由這樣的材料構(gòu)造而成，該材料可以耐受典型核酸擴(kuò)增反應(yīng)中所涉及的這種溫度和/或溫度波動(dòng)以及變化。在特定實(shí)施例中，第一井孔布置于裝置的凸部或邊緣，使其易于進(jìn)行加熱和/或冷卻，以實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增，例如，使用外部加熱裝置或者適當(dāng)?shù)臒嵫h(huán)儀。在特定實(shí)施例中，第一井孔的容積小于第二井孔(如果存在的話)以及第三井孔的容積。例如，第一井孔的容量可以為10-250 μ 1，諸如15-50 μ 1，例如大約25 μ 1，而第二井孔以及第三井孔適合具有的容量在40-4000 μ I的范圍，例如40-2500μ I。在特定實(shí)施例中，第二井孔以及第三井孔可以具有大約2500μ I的容量。在其他實(shí)施例中，井孔的容量可以為40-1000μ 1，諸如50-250μ 1，例如，大約100μ I。例如，第一井孔的直徑可以在2_3mm的范圍、深度為大約4-10mm，例如大約5mm，而第二井孔和第三井孔的直徑可以在7_20mm的范圍，例如，大約10mm，并具有類似深度。這種布置意味著，本裝置適合用于進(jìn)行一定范圍的化學(xué)或生化反應(yīng)，反應(yīng)自身以相對(duì)少量液體最優(yōu)方式實(shí)現(xiàn)，并且該量通常少于在常規(guī)側(cè)流裝置上有效提供信號(hào)所要求的量。因此，根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種裝置，用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并且檢測其產(chǎn)物，該裝置包括(i)第一井孔，其中，在液相中實(shí)現(xiàn)化學(xué)或生化反應(yīng)；(ii)第一通道，自第一井孔延伸而出；(iii)側(cè)流測定裝置，布置成在其吸收膜上可選地經(jīng)由第二井孔接收來自第一通道的液體內(nèi)容物，其中，該膜包含能檢測上述化學(xué)或生化反應(yīng)的產(chǎn)物的成分，以及
(iv)第三井孔，其布置成容納稀釋劑，并且利用第二通道使其與上述第一井孔連接，其中，第二通道布置成，使得來自上述第三井孔的稀釋劑可以傳送至第一井孔，以及，其中，第二井孔和第三井孔的容量明顯大于第一井孔的容量。
這種裝置的優(yōu)選實(shí)施方式按照與在此描述的實(shí)施例類似的方式操作，但側(cè)流裝置的膜裝載有適當(dāng)?shù)臋z測試劑。這種化學(xué)和生化反應(yīng)可以包括任何形式的化學(xué)或生化反應(yīng)。適宜地，該側(cè)流測定裝置完全包封在裝置內(nèi)，例如，使其封裝在裝置的殼體內(nèi)，也使污染的風(fēng)險(xiǎn)最小化。在這種情況下，在裝置或殼體中適當(dāng)?shù)卦O(shè)置觀察窗，以允許讀取測定的結(jié)果，或者由透明材料制成任意殼體自身。側(cè)流測定裝置可以布置成使得膜伸進(jìn)第二井孔，并因此直接從第二井孔吸收樣本。然而，在特定實(shí)施例中，液流元件尤其是芯吸元件布置成，接收來自第二井孔的樣本，并將其傳送至側(cè)流裝置中膜的樣本接納段。合適的芯吸元件包括芯吸纖維墊，例如由致密親水纖維狀材料諸如纖維素等構(gòu)成。芯吸元件至少在一端伸進(jìn)第二井孔，并在另一端與側(cè)流測定裝置中膜的末端區(qū)域接觸，從而保證液體以可以接受并且受控的流動(dòng)從第二井孔傳送至膜。在特定實(shí)施例中，芯吸元件襯于第二井孔的基部，使得傳送進(jìn)入井孔的液體直接施加至芯吸元件。芯吸元件可以自身作為貯存器，用于側(cè)流測定裝置中使用以顯現(xiàn)信號(hào)的試劑。例如，用于擴(kuò)增后的靶核酸的結(jié)合配體可以貯存在芯吸元件內(nèi)，如上所述，擴(kuò)增后的靶核酸適宜地進(jìn)行了標(biāo)記。然后，將其與樣本一起沿側(cè)流測定裝置的膜傳送至膜上的適當(dāng)檢測區(qū)。本裝置適宜為預(yù)期單次使用的用后可棄單元。裝置的至少一部分以及適宜地其整個(gè)裝置都適當(dāng)?shù)厝菁{在殼體內(nèi)，殼體適宜為剛性塑料材料。第一井孔可以以可控方式進(jìn)行加熱或冷卻。盡管加熱元件(諸如加熱電阻元件)或冷卻元件或恒溫元件以及溫度控制或溫度測量元件(諸如熱敏電阻或熱電偶)可以包括在裝置自身內(nèi)，但在特定實(shí)施例中，第一井孔布置成與設(shè)備內(nèi)的這種元件相鄰、接觸或者被其包封，該設(shè)備適合于容納本裝置用于測定目的。本裝置適宜適應(yīng)于適配進(jìn)設(shè)備中，使得可以對(duì)第一井孔加熱，加熱適宜為受控加熱。因此，例如，第一井孔可以例如在如上所述的凸部上向殼體外延伸，因而，可以將其容納在可選以形成設(shè)備一部分的加熱或熱循環(huán)元件(諸如臺(tái)式加熱器)內(nèi)的對(duì)應(yīng)井孔中。可選擇地，伸出的井孔可以布置成適配在例如強(qiáng)制熱風(fēng)加熱器、循環(huán)變溫加熱器、或恒溫器的空氣冷卻或加熱室內(nèi)?？蛇x擇地，本裝置可以包括溝槽、通道或其他凹槽，其布置成，當(dāng)本裝置在設(shè)備內(nèi)就位時(shí)，設(shè)備內(nèi)的加熱或恒溫元件在第一井孔周圍或在其附近伸進(jìn)本裝置，從而允許對(duì)第一井孔的內(nèi)容物以受控方式加熱。材料適宜地可在氣動(dòng)、液壓或真空受控流動(dòng)下通過第一通道和/或第二通道進(jìn)行傳送。例如，在有些實(shí)施例中，殼體進(jìn)一步包括與第三井孔連結(jié)的第一端口。該端口適宜為正常密封，但就在為了進(jìn)行測定而將本裝置引入設(shè)備之前或引入的過程中，使該端口打開并與動(dòng)能源例如液壓或氣壓或真空源連接，使其能驅(qū)動(dòng)稀釋液從第三井孔進(jìn)入第一井孔?？梢栽O(shè)置與第二井孔連接的出氣口，以允許液體通過該通道在井孔之間流動(dòng)。能源適宜是與第三井孔連接的泵，并且布置成在完成擴(kuò)增反應(yīng)之后按需自動(dòng)操 作，但它也可以包括簡單的柱塞式裝置，其可以手動(dòng)操作，以驅(qū)動(dòng)稀釋劑從第三井孔進(jìn)入第一井孔，并在之后以液壓方式使其進(jìn)入第二井孔。在后一情況下，適宜的是，在壓下柱塞以驅(qū)動(dòng)因此形成的混合物反向通過第一井孔并進(jìn)入第二井孔之前，首先稍稍向上拉柱塞，以抽吸第一井孔的內(nèi)容物反向進(jìn)入第三井孔，作為預(yù)備混合操作。
可選擇地，通過在設(shè)備內(nèi)施加可施加的減小壓力或真空，可以從第三井孔抽吸稀釋劑進(jìn)入第一井孔。這是使用裝置內(nèi)與第一井孔或者第二井孔連結(jié)的類似的常見密封端口實(shí)現(xiàn)的。在設(shè)備內(nèi)，上述密封端口成為與真空源連接，以在裝置內(nèi)產(chǎn)生所要求的液體流動(dòng)。如有需要，通過在裝置內(nèi)設(shè)置一個(gè)或更多附加稀釋劑容納井孔，可以實(shí)現(xiàn)第一井孔的內(nèi)容物與稀釋劑的更有效混合。這些井孔適宜布置成，使得稀釋劑的獨(dú)立液流連同第一井孔的內(nèi)容物一起饋入第二井孔。適宜地，該流在進(jìn)入第二井孔之前匯聚，以導(dǎo)致紊流，在施加至側(cè)流裝置之前，紊流提供了來自第一井孔的內(nèi)容物與稀釋劑的加強(qiáng)混合。對(duì)來自多個(gè)稀釋劑井孔的流動(dòng)進(jìn)行適宜的協(xié)調(diào)并加以控制，以保證有利的混合。這可以使用用于液壓、氣動(dòng)或真空壓力的控制系統(tǒng) 進(jìn)行布置。在使用一連串柱塞施加稀釋劑時(shí)，這些柱塞可以適宜地互相連接，例如使用控制桿或懸臂裝置互相連接，并將這些柱塞布置成，當(dāng)向控制桿施加壓力時(shí)，保證對(duì)來自各個(gè)井孔的流動(dòng)自動(dòng)進(jìn)行協(xié)調(diào)。通道自身布置成便于必要的傳送。因此，例如，第一通道可以與第一井孔的基部連接，因而，當(dāng)施加驅(qū)動(dòng)氣壓或真空時(shí)，所有材料都可以從中除去。第一通道可以在第二井孔的上側(cè)區(qū)域進(jìn)入第二井孔。類似地，第二通道可以與第三井孔的基部連結(jié)，并且與第一井孔的上側(cè)區(qū)域連接。當(dāng)?shù)诙椎娜萘看笥诘谝痪椎娜萘繒r(shí)，抽吸或者分送進(jìn)入第一井孔的稀釋劑有效地溢出第一井孔而進(jìn)入第二井孔。然而，對(duì)第三井孔中的稀釋劑施加氣壓可以持續(xù)至內(nèi)容物通過第一井孔并分送至第二井孔。可選擇地，在裝置中可以設(shè)置類似的常見密封真空端口，使其與第二井孔連結(jié)，以將第三井孔的液體經(jīng)由第一井孔抽吸進(jìn)入第二井孔。因此，第一井孔中的任何擴(kuò)增產(chǎn)物都可以稀釋形式分送至第二井孔。一般而言，側(cè)流裝置膜中包括的樣本接納區(qū)的末端區(qū)域可以位于第二井孔內(nèi)，因而，將含有任何擴(kuò)增核酸的液體吸進(jìn)膜中，并且沿其長度芯吸。按常規(guī)方式在上述一端的膜下游設(shè)置一個(gè)或多個(gè)檢測或控制區(qū)，其中固定有用于靶部分的合適結(jié)合配體，因而，在上述區(qū)中捕獲靶核酸(或者在競爭測定格式的情況下)。核酸適宜以下述方式進(jìn)行標(biāo)記在擴(kuò)增反應(yīng)期間直接進(jìn)行標(biāo)記，或者，通過與標(biāo)記探針接觸，將標(biāo)記探針引入擴(kuò)增反應(yīng)或者可移動(dòng)方式定位于側(cè)流裝置。因此，檢測區(qū)中標(biāo)記材料(例如與如上所述的粒狀標(biāo)志(例如乳膠微粒)相關(guān)聯(lián)的標(biāo)記材料)積累，在側(cè)流裝置中給出了可見信號(hào)。例如在US2004/0110167中說明了這種裝置的實(shí)例。合適的膜可以包括纖維素基材料，諸如纖維素、硝化纖維素、或者羧甲基纖維素；親水性聚合物，包括合成親水性聚合物，諸如聚酯、聚酰胺、碳水化合物聚合物；疏水聚合物，諸如，鹵代聚合物諸如聚四氟乙烯、玻璃纖維或多孔陶瓷。特別合適的膜包括纖維素膜尤其是可以層合的硝化纖維素膜，諸如從Millipore可以購買的那些膜。這些膜可以支撐于襯里材料諸如塑料襯里的膜，諸如聚酯(Mylar )或PET襯里的纖維素膜。這種膜的襯里自然是疏水的，而纖維素自身親水，這產(chǎn)生了所需的芯吸效應(yīng)。然而，當(dāng)這些在免疫測定過程的背景下使用時(shí)，親水性可能產(chǎn)生問題。根據(jù)需要，這些裝置中所使用的膜可使用常規(guī)封阻劑加以封阻。封阻劑是這樣的，它們可減少樣本中任意蛋白質(zhì)與膜之間的非特異相互作用，或者增加樣本的芯吸速率。它們通常在施加固定結(jié)合劑之后進(jìn)行施加，并且經(jīng)常選自三類試劑，包括蛋白質(zhì)、表面活性劑、以及合成聚合物。可以用作封阻劑的蛋白質(zhì)特定示例包括牛血清白蛋白(BSA)，脫脂奶粉成分諸如酪蛋白。
可以用作封阻劑的表面活性劑的示例包括非離子型表面活性劑，諸如以TWeenTM20商品名銷售的聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯；以及辛基酚乙氧基化物，例如Dow 銷售的 Triton X 系列例如 Triton X-IOO0可以用作封阻劑的合適的合成聚合物包括聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrroline, PVP)、聚乙二醇(PEG)、以及聚氧乙烯脂肪族醚(諸如衍生自十二烷醇、十六烷醇、十八烷醇、以及油醇的聚氧乙烯脂肪族醚)，以及以商品名Bri j 銷售的產(chǎn)
品O一般認(rèn)為可以特別采用兩種或者更多的這些類型或分類封阻劑的混合物，例如包括如上所述的表面活性劑與合成聚合物的混合物。然而,在優(yōu)選實(shí)施例中,在膜上沒有使用封阻劑。
用于進(jìn)行擴(kuò)增的試劑，諸如引物、酶、探針等，可以預(yù)先加載進(jìn)入第一井孔，使其準(zhǔn)備好直接接收樣本進(jìn)行擴(kuò)增。特別地，這種試劑可以干燥形式尤其是以凍干形式存在，以保證它們不會(huì)分解或者過早反應(yīng)。然而，在特定實(shí)施例中，利用試劑分配器(其適宜為“塞子”、桿、或帽蓋的形式，于其外表面上凍干有試劑)，將這種試劑引入本裝置。所以，一旦添加試劑，試劑分配器還起到封閉第一井孔的作用。由于針對(duì)特定核酸測定可能需要特有的試劑分配器，這種試劑分配器可以獨(dú)立于本裝置提供，而本裝置自身通?？梢栽谝欢ǚ秶臏y定中使用。然而，試劑分配器可以與本裝置結(jié)合提供，因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供如上所述的裝置與試劑分配器(或塞子、桿、或帽蓋)的結(jié)合產(chǎn)品。試劑分配器諸如塞子、桿、或帽蓋適宜在密封容器中提供，獨(dú)立于該組合的其他元件諸如本裝置，包裝該密封容器，以確保將其保持為不含水分。在任一情況下，適宜的是，擴(kuò)增反應(yīng)的液體成分諸如擴(kuò)增緩沖劑僅在擴(kuò)增反應(yīng)開始時(shí)引入第一井孔。這使污染風(fēng)險(xiǎn)減到最小，并且也避免過早發(fā)生反應(yīng)。為了達(dá)到這一點(diǎn)，本裝置適宜包括封閉的第四井孔，其預(yù)裝載有液體試劑諸如測定緩沖劑。因此，此第四井孔作為試劑的貯存器。同樣利用通道使第四井孔與第一井孔連結(jié)，從而，在需要時(shí)可以將內(nèi)容物分送進(jìn)入第一井孔，以進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。同樣，也設(shè)置氣動(dòng)、液壓或者真空系統(tǒng)的部件(諸如至氣動(dòng)或真空端口的通道)，以允許第四井孔的內(nèi)容物在適當(dāng)時(shí)間受驅(qū)動(dòng)或被抽吸進(jìn)入第一井孔。這些元件布置成與設(shè)備(其設(shè)計(jì)成容納本裝置進(jìn)行測定)中對(duì)應(yīng)的氣動(dòng)或真空元件以可操作方式互相作用。類似地，本設(shè)備包括加熱裝置，適合按允許井孔中進(jìn)行期望擴(kuò)增反應(yīng)的方式與如上所述的第一井孔相互作用。一般而言，適宜的是，所進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng)是本領(lǐng)域周知的多種等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)之一，諸如依賴核酸序列的擴(kuò)增(NASBA)、鏈置換擴(kuò)增(SDA)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增(TMA)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)、Q-0復(fù)制和滾環(huán)擴(kuò)增、3SR、分枝擴(kuò)增(如由Zhang等人在Molecular Diagnosis (2001) 6No 2, pl41_150中所描述的)、重組酶聚合酶擴(kuò)增(可從TwistDx得到)以及其他擴(kuò)增。這些擴(kuò)增要求的加熱布置沒有熱循環(huán)反應(yīng)諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)所要求的復(fù)雜。然而，如果是包括熱循環(huán)裝置的設(shè)備，則能夠進(jìn)行要求熱循環(huán)的擴(kuò)增反應(yīng),諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。如有要求，并且，如果能以適當(dāng)形式得到樣本，將樣本直接添加至第一井孔。然而，一般而言，如上所述，需要從樣本尤其生物樣本中提取并提純核酸。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，本裝置進(jìn)一步包括核酸提取和/或提純系統(tǒng)。雖然這可以采取不同形式，從樣本中提取純化核酸的特別優(yōu)選裝置涉及使用吸收膜，如W02007/104962中所述，該文獻(xiàn)披露的內(nèi)容在此以引用方式并入本文。通過允許液體樣本沿以上關(guān)于側(cè)流裝置所描述類型的吸收膜流動(dòng)，發(fā)現(xiàn)核酸結(jié)合于膜的表面，所以，提供了一種裝置，用于使核酸與樣本材料中的其余物分開。因此，在特定實(shí)施例中，將用于核酸提取和提純目的的吸收膜結(jié)合入本裝置。該膜適宜基本完全封裝在裝置內(nèi)，以使污染的風(fēng)險(xiǎn)最小化。將該膜布置成在第五井孔(其作為樣本保持或接收井孔)與第一井孔之間延伸，因而，第五井孔中的樣本可以沿膜芯吸至第一井孔。適宜地，該膜至少局部在第一井孔的開口上方延伸。采用這種布置，例如，使用設(shè)置于上述塞子、桿、或帽蓋的切割器，可以從中切下膜的小片段。這種動(dòng)作使膜的片段落入第一井孔，此時(shí)，可以使該片段與塞子、桿或帽蓋上的其他試劑、以及來自第四井孔的緩沖劑混合，以形成擴(kuò)增反應(yīng)混合物。所以，可以對(duì)膜片段上存在的任意核酸進(jìn)行擴(kuò) +
>曰ο盡管在某些情況下第五井孔可以作為樣本收納井孔，通常適宜的是，使樣本經(jīng)過某些初步處理，例如，溶解存在于樣本中的細(xì)胞或微生物，以在從中提取核酸之前釋放細(xì)胞內(nèi)容物。為此，第五井孔可以如上所述是封閉的，但利用適當(dāng)?shù)耐ǖ琅c設(shè)置在本裝置中的開放第六井孔連接。在這種情況下，在傳送至第五井孔以及吸收膜的末端區(qū)域之前，可以將液體樣本添加至第六井孔，用于預(yù)備溶解步驟。與上述關(guān)于其他液壓傳送操作所述的一樣，這種情況下的傳送適宜使用動(dòng)能源諸如液壓或氣動(dòng)或真空源實(shí)現(xiàn)，因此，第五井孔和第六井孔設(shè)置有適當(dāng)布置的端口，用于與設(shè)備的動(dòng)能源連接。在使用氣動(dòng)系統(tǒng)的情況下，可能也需要與第五井孔連結(jié)的適當(dāng)出氣口。細(xì)胞溶解可以以多種方式實(shí)現(xiàn)。例如，促溶劑諸如鹽酸胍或去污劑可以添加至樣本收納井孔，或者可以預(yù)先分配在其中。然而，在樣本收納井孔中實(shí)現(xiàn)細(xì)胞溶解的適當(dāng)方法可以為通過本質(zhì)為物理方式的裝置，諸如施加熱或超聲法，尤其通過加熱該井孔，以在樣本收納井孔中達(dá)到大約100°c的溫度。因此，在布置有本裝置以進(jìn)行測定的設(shè)備中，設(shè)置有能實(shí)現(xiàn)這種處理的加熱裝置、或者超聲裝置。—旦向其添加樣本之后，并且，在將本裝置布置在設(shè)備內(nèi)用于實(shí)現(xiàn)測定目的之前或者之后，樣本收納井孔(第五井孔或第六井孔)適宜是可封閉的，例如，利用帽蓋或塞子。在獲得液體樣本的情況下，可以在溶解操作之前將其添加至樣本收納井孔(第五井孔或第六井孔)。然而，如果樣本為固體狀諸如拭子樣本，那么，拭子可能需要洗滌以釋放測試材料。在這種情況下，本裝置可設(shè)置有第七井孔，其適宜是封閉的并且容納洗滌液。第七井孔與樣本收納井孔連接，并且設(shè)置有與設(shè)備的氣動(dòng)、液壓或真空系統(tǒng)的適當(dāng)連接，以允許第七井孔的內(nèi)容物在適當(dāng)時(shí)間傳送至樣本收納井孔，用于洗滌固體樣本。因此，在使用中，將上述裝置裝進(jìn)適合于對(duì)其進(jìn)行接納的設(shè)備。一旦在設(shè)備中就位，設(shè)置在本裝置中的各種氣動(dòng)或真空端口與設(shè)備的氣動(dòng)、液壓或真空系統(tǒng)連接。另外，設(shè)置在設(shè)備中的可控制加熱元件能與第一井孔相互作用，用于在其中進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的目的，以及，可選地，還與樣本收納井孔相互作用，以在需要時(shí)通過加熱而使細(xì)胞溶解。本設(shè)備適宜通過編程來實(shí)現(xiàn)此過程的不同階段，包括將液體依序從一個(gè)井孔傳送至另一個(gè)井孔，以及自動(dòng)加熱適當(dāng)?shù)木祝ＷC在單一操作中從樣本提取核酸、提純、擴(kuò)增、以及檢測。這種設(shè)備形成了本發(fā)明的又一方面，類似于如上所述包括裝置及設(shè)備的系統(tǒng)，也可選地包括試劑分配器。因此，在特定的方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種設(shè)備，用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并且檢測產(chǎn)物，尤其是檢測樣本中核酸的測定中，上述設(shè)備包括⑴用于收納如上述裝置的裝置，以及(ii)加熱裝置，布置成可控制方式加熱第一井孔，以允許在其中進(jìn)行核酸擴(kuò)增反
應(yīng)。 需要時(shí)，本設(shè)備可以進(jìn)一步包括(iii)運(yùn)送系統(tǒng)，尤其是可與上述裝置連接的氣動(dòng)、液壓或真空系統(tǒng)，以允許材料在上述裝置的井孔之間傳送。然而，在本裝置包括一個(gè)或更多的柱塞用于實(shí)現(xiàn)如上所述液體稀釋劑的傳送的情況下，運(yùn)送系統(tǒng)可以是用于如上所述柱塞或控制桿的致動(dòng)器，或者，可以手動(dòng)操作一個(gè)或多個(gè)柱塞。本設(shè)備適宜進(jìn)一步包括控制系統(tǒng)，諸如計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，通過控制運(yùn)送系統(tǒng)，在本裝置內(nèi)自動(dòng)實(shí)現(xiàn)期望的測定過程。在適當(dāng)情況下，以及在本裝置包括要進(jìn)行細(xì)胞溶解的井孔(即如上所述的第六井孔)的情況下，本設(shè)備進(jìn)一步包括用于加熱該井孔以實(shí)現(xiàn)溶解的裝置。申請(qǐng)人:相信本發(fā)明首先提出將氣動(dòng)、液壓或真空控制的液體流動(dòng)與吸收或毛細(xì)流動(dòng)進(jìn)行結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)以及分析復(fù)雜的生化反應(yīng)，如上文所述。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種系統(tǒng)，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的核酸，該系統(tǒng)包括一種裝置，其包括擴(kuò)增反應(yīng)腔；第一吸收膜，布置成從樣本中提取核酸并將其分送至擴(kuò)增腔；第二吸收膜，布置作為側(cè)流裝置，以檢測在上述腔中得到的擴(kuò)增產(chǎn)物內(nèi)的核酸；以及用于將擴(kuò)增腔中得到的產(chǎn)物分送至上述側(cè)流裝置中樣本接納區(qū)的裝置。本發(fā)明的裝置、設(shè)備及其組合得到了能夠進(jìn)行核酸擴(kuò)增及檢測且容易操作的裝置。通過在本裝置的封閉井口中貯存處理所需的試劑，并且使本裝置用后可棄，使污染風(fēng)險(xiǎn)減到最少。根據(jù)又一方面，本發(fā)明提供了一種方法，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的核酸，該方法包括將樣本添加至根據(jù)權(quán)利要求I至權(quán)利要求13中任一項(xiàng)權(quán)利要求的裝置；給上述裝置增加根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的試劑分配器；將上述裝置裝進(jìn)根據(jù)權(quán)利要求17至權(quán)利要求19的設(shè)備；以及，促使上述設(shè)備進(jìn)行核酸擴(kuò)增并在其中檢測反應(yīng)，從側(cè)流裝置讀取結(jié)果。下面，結(jié)合附圖
示例方式詳細(xì)描述本發(fā)明，附圖中圖I是根據(jù)本發(fā)明的用后可棄裝置的示意性圖示，該裝置布置成用于從樣本中提取核酸以及擴(kuò)增所提取的核酸并檢測擴(kuò)增產(chǎn)物；圖2是根據(jù)本發(fā)明的用后可棄裝置的替代形式示意性圖示，該裝置用于樣本中核酸的擴(kuò)增以及檢測；圖3是根據(jù)本發(fā)明的裝置或其替代形式的示意性俯視圖；圖4是圖3所示裝置的示意性側(cè)視圖；圖5是根據(jù)本發(fā)明裝置的另一替代形式的示意性俯視圖；圖6是圖5所示裝置的示意性底側(cè)視圖；圖7是本發(fā)明裝置的一部分的示意性底側(cè)視圖，具有圖5所示第一井孔的替代布置；以及
圖8是本發(fā)明的裝置在示范測定中使用之后的圖示。第一實(shí)施例圖I的裝置包括塑料殼體(I)，該殼體實(shí)質(zhì)上是分層結(jié)構(gòu)，包括夾在上蓋板(3)與下基板(4)之間的中塊(2)。如圖所示，中塊(2)在其中包括若干井孔(5、6、7、8、9、10及11)以及連結(jié)這些井孔的通道(12、13、14、15及16)。附加通道(17、18、19、20、21及22)連結(jié)大多數(shù)井孔與設(shè)置在殼體(I)上蓋(3)中的氣動(dòng)端口(分別為 23、24、25、26、27及28)。蓋⑶進(jìn)一步包括開口(29)，其與一個(gè)井孔(6)對(duì)準(zhǔn)，以允許其作為樣本收納井孔；以及又一開口(30)，其與作為擴(kuò)增腔的另一井孔(8)對(duì)準(zhǔn)。然而，其余所有井口都被蓋(3)有效密封。吸收膜(31)布置在本體(2)中的水平通路中，并且在井孔(7)與井孔(8)(其為擴(kuò)增腔)之間延伸。膜(31)的相反端位于各井孔(7)及⑶中，使得井孔(7)內(nèi)的液體沿膜朝井孔(8)芯吸。適宜地，膜(31)的至少一部分延伸橫越蓋(3)中的開口(30)。本體(2)內(nèi)的類似通路從井孔(16)延伸而出，以及，在此通路中容納有側(cè)流裝置
(32)。設(shè)置塞子(33)，以在樣本被收納進(jìn)入井孔￠)中之后將井孔(6)封閉。設(shè)置另一塞子(34)以封閉擴(kuò)增腔井孔(8)。然而，適宜的是，塞子(34)在表面以凍干形式攜帶至少一些實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增反應(yīng)所需的試劑。它還可以包括切割器(未示出)，適合于在將塞子(34)推進(jìn)井孔中時(shí)從延伸橫越井孔(8)開口(30)的膜(31)中切割樣本。然后，所切割的樣本落進(jìn)井孔(8)準(zhǔn)備進(jìn)行擴(kuò)增。提取/擴(kuò)增/檢測處理中所使用的某些試劑預(yù)先裝載進(jìn)一些封閉的井孔中。特別地，樣本洗滌液裝載進(jìn)作為樣本洗滌貯存器的井孔(5)中。類似地，擴(kuò)增反應(yīng)中所使用的緩沖劑裝載進(jìn)井孔(9)中，井孔(9)適宜為具有類似于第一井孔(8)的尺寸。最后，將洗脫稀釋劑裝進(jìn)井孔(10)中。使用之前，將用后可棄覆蓋物諸如塑料封帶、膜或片施加于蓋(3)之上，因而密封開口(30、31)以及端口(23、24、25、26、27及28)，這樣做用于兩個(gè)目的，首先，避免環(huán)境污染(因此，裝置內(nèi)的井孔及其相應(yīng)的內(nèi)容物保持純凈)；第二，避免任何氣流通過端口，從而保持液體處于它們各自的井孔中。在使用中，應(yīng)用下列操作順序 用戶啟封裝置(1)，從蓋(3)上移去封帶，以露出氣動(dòng)端口(23、24、25、26、27及28)以及樣本和擴(kuò)增井孔(30、31)。然后，可以將裝置(I)裝進(jìn)適合于容納本裝置的設(shè)備中，使得氣動(dòng)端口(23、24、25、26、27及28)與氣壓源連接。另外，使井孔(6、8)與設(shè)備中合適的加熱裝置或恒溫器裝置對(duì)準(zhǔn)?！と绻褂靡后w樣本，用戶將其裝進(jìn)作為樣本端口的井孔(6)，并插入樣本塞子?！と绻麡颖镜米允米?，本設(shè)備(經(jīng)由氣動(dòng)端口 23和通道17)驅(qū)動(dòng)樣本洗滌劑從樣本洗滌貯存器井孔(5)沿通道(12)進(jìn)入樣本井孔￠)，并且用戶插入拭子以洗掉其內(nèi)容物。然后，將樣本塞子(33)插進(jìn)樣本井孔(6)?！び稍O(shè)備對(duì)樣本井孔(6)加熱(達(dá)到大約100°C )，以從樣本母體中提取DNA。 然后，設(shè)備(分別經(jīng)由氣動(dòng)端口 23或24以及通道17和12或18)驅(qū)動(dòng)提取產(chǎn)物經(jīng)由通道(13)進(jìn)入相鄰井孔(7)，以與膜(31)接觸(經(jīng)由通道19和氣動(dòng)端口 25排氣)。
·然后，設(shè)備保持靜止足夠時(shí)間，以允許樣本通過毛細(xì)管作用沿膜(31)運(yùn)送?！と缓螅瑢⒁愿稍镉谄渫獗砻娴姆绞綌y帶有擴(kuò)增反應(yīng)所需試劑(諸如擴(kuò)增特異引物、酶等)的塞子(34)，插進(jìn)作為擴(kuò)增腔的井孔(8)。塞子(34)攜帶切割器，切割器布置成在(或者由用戶手動(dòng)，或者由設(shè)備自動(dòng))將其插進(jìn)井孔(8)時(shí)，切割器沖壓出膜(31)的頂端以使其落進(jìn)井孔(8)的底部?！ぴO(shè)備(經(jīng)由氣動(dòng)端口 26以及通道14及20)驅(qū)動(dòng)液體測定試劑諸如緩沖劑及鹽溶液進(jìn)入井孔⑶(經(jīng)由通道16及22向氣動(dòng)端口 28排氣)?！と缓?，使井孔⑶處于適合進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的加熱狀態(tài)。例如，由儀器使井孔(8)加熱達(dá)到適合于進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增的溫度，大多數(shù)情況下，該溫度處于15-85°C的范圍，較適宜在20-80°C之間，例如，處于大約65°C。
·在完成擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)，設(shè)備(經(jīng)由氣動(dòng)端口 27以及通道21及15)驅(qū)動(dòng)來自井孔
(10)的稀釋劑，使其通過收集擴(kuò)增產(chǎn)物的井孔(8)，并將混合物傳送進(jìn)入相鄰的井孔(11)(經(jīng)由通道16及22向氣動(dòng)端口 28排氣)，以與側(cè)流裝置(32)的樣本接納區(qū)接觸。側(cè)流裝置(32)設(shè)定為，響應(yīng)于樣本中一種或多種靶核酸的存在與否，產(chǎn)生一個(gè)或更多的可檢測信號(hào)，諸如可見目標(biāo)線以及控制線?！x器容許足夠的時(shí)間，以允許用戶從側(cè)流裝置(32)讀取結(jié)果以及將裝置(I)從設(shè)備取下。本過程適合于自動(dòng)進(jìn)行，因而，按適當(dāng)?shù)捻樞蛳蛳嚓P(guān)氣動(dòng)端口施加壓力。當(dāng)不使用時(shí)，設(shè)備內(nèi)的閥門可以有效地封閉端口(23、24、25、26、27及28)。第二實(shí)施例圖2示出根據(jù)本發(fā)明的替代裝置。在這種情況下，殼體(40)包括第一井孔(41)，可利用帽蓋(42)封閉第一井孔(41)。第一井孔(41)經(jīng)由通道(44)與第二井孔(43)連結(jié)。通道(44)在井孔(43)的上側(cè)區(qū)域與其連結(jié)。通道(44)和第二井孔(43)都嵌置在殼體(40)內(nèi)。側(cè)流裝置(45)包括吸收膜，吸收膜設(shè)置有檢測靶核酸所需試劑，吸收膜在井孔
(43)的下側(cè)區(qū)域伸進(jìn)其中。另一通道(46)在第一井孔(41)的下側(cè)區(qū)域與稀釋劑貯存器(47)之間延伸，通道
(46)也位于殼體(40)內(nèi)。稀釋劑貯存器(47)充滿稀釋劑(48)，并且利用柱塞(49)將其密封而與周圍環(huán)境隔絕。在使用中，將含有或懷疑含有靶核酸的樣本以及進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)所需試劑裝進(jìn)第一井孔(41)。然后，用帽蓋(42)將該井孔密封，并使裝置暴露于某些條件例如溫度條件，藉此使存在于井孔(41)中的任何靶核酸序列擴(kuò)增，并且，例如通過雜交，使允許在側(cè)流裝置上檢出擴(kuò)增產(chǎn)物所需的任何結(jié)合劑或標(biāo)記合并或結(jié)合至擴(kuò)增產(chǎn)物。一旦擴(kuò)增反應(yīng)完成，操作柱塞(49)，例如通過手動(dòng)方式，但在本裝置布置在合適設(shè)備中的情況下也可以將其布置成自動(dòng)進(jìn)行。在有些情況下，適宜地，可以首先上拔柱塞(49)，以促使井孔(41)中包含擴(kuò)增產(chǎn)物的內(nèi)容物在朝井孔(48)(在此處與稀釋劑混合)的方向后退。然后，壓下柱塞(49)。此時(shí)，稀釋劑(48)從貯存器(47)沿通道(46)流出，并涌入井孔(41)。結(jié)果，強(qiáng)制使井孔(41)中包含擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物的內(nèi)容物通過通道(44)進(jìn)入第二井孔(43)。到達(dá)井孔(43)中的液體遇到芯吸墊(50)的第一端部，并且被吸進(jìn)墊(50)。芯吸墊(50)的另一端部與側(cè)流裝置(45)中膜的樣本接納部接觸。所以，液體沿墊(50)芯吸，并且以可靠并且受控的方式將液體分送至側(cè)流裝置。由于側(cè)流裝置(45)上存在試劑以及擴(kuò)增反應(yīng)中包含任何結(jié)合或標(biāo)記試劑，在側(cè)流裝置(45)上顯現(xiàn)出指示靶核酸樣本是否存在的信號(hào)。因此，本裝置提供了一種簡單、容易使用并且可靠的手段，用于進(jìn)行擴(kuò)增及檢測反應(yīng)，且具有最小化的污染風(fēng)險(xiǎn)。第三實(shí)施例在圖3所示的實(shí)施例中，可以將進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的第一井孔(51)連同經(jīng)由通道(55,56)連結(jié)起來的第二井孔(53)以及稀釋劑井孔(54) —起設(shè)置在殼體(52)內(nèi)。然而，在這種情況下，除了第一稀釋劑井孔(52)之外，設(shè)置了又一稀釋劑井孔(57)，該稀釋劑井孔(57)經(jīng)由通道(58)與通道(56)連接。這些通道(56、58)在位于第二井孔(53)上游的“T”結(jié)點(diǎn)處相交。和之前一樣，第二井孔(53)的液體內(nèi)容物經(jīng)由芯吸纖維墊(60)可以傳送 至側(cè)流裝置(59)。樣本在第一井孔(51)中經(jīng)過核酸擴(kuò)增反應(yīng)之后，使來自井孔(54)的稀釋劑涌入井孔(51)。適宜地，利用柱塞(分別為62、63)操作各稀釋劑井孔(54、57)，并且利用控制桿(61)使這些柱塞一起聯(lián)動(dòng)，如圖4所示。在箭頭所示方向壓下控制桿￠1)導(dǎo)致稀釋劑以不同速率從兩個(gè)井孔(52、57)有差異但受控方式排出。將控制桿￠1)布置為，在T結(jié)點(diǎn)處提供按要求比例的混合。這保證來自第一井孔的內(nèi)容物與稀釋劑在它們到達(dá)第二井孔(53)中時(shí)得到良好混合。之后，混合物沿芯吸纖維墊(60)通過，并且到達(dá)側(cè)流裝置(59)的樣本接納段。因此，取決于擴(kuò)增后的靶核酸是否存在，在側(cè)流裝置中產(chǎn)生信號(hào)。第四實(shí)施例圖5中示出根據(jù)本發(fā)明裝置的又一實(shí)施例。在本圖中，裝置包括本體(70)。為了易于制造，本體(70)分別包括上層(70a)和下層(70b)，在上層(70a)與下層(70b)之間放置有隔板(83)，在隔板(83)中形成有如下文具體說明的各種結(jié)構(gòu)。本體(70)設(shè)置有側(cè)向凸部(71)，其中容納有可用帽蓋(73)封閉的第一反應(yīng)井孔(72)(圖6)。包封在本體(70)內(nèi)的通道(74)在反應(yīng)井孔(72)與第二井孔(75)之間延伸，第二井孔(75)大于第一井孔(72)并且嵌置在本體(70)的結(jié)構(gòu)內(nèi)。芯吸墊(76)伸進(jìn)第二井孔(75)。芯吸墊(76)中遠(yuǎn)離井孔(75)的端部與側(cè)流測定部件中長吸收膜(77)的第一端相接觸。該膜上具有與現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)一樣的固定或者自由的結(jié)合劑以及標(biāo)記結(jié)合劑(它們專門用于特定的靶核酸)。裝置布置成，隨著因從芯吸墊(76)到膜(77)遠(yuǎn)端的毛細(xì)管流動(dòng)，使含有靶核酸的液體沿此進(jìn)行芯吸，根據(jù)液體內(nèi)是否存在靶物，產(chǎn)生可見信號(hào)。適宜的是，本體(70)是透明的，使得任何信號(hào)都可以看到。然而，也可在本體(70)內(nèi)設(shè)置觀察窗，以在需要時(shí)能夠看到信號(hào)顯現(xiàn)。膜(77)布置成使其橫越本體(70)內(nèi)的縫隙(78)，并且由一系列橫向支撐(79)沿縫隙長度進(jìn)行支撐，橫向支撐(79)也嵌置在本體(70)的結(jié)構(gòu)內(nèi)。用于稀釋劑的第三井孔(80)也設(shè)置在本體(70)內(nèi)，并且可利用柱塞(81)將其封閉。井孔(80)的容積也大于反應(yīng)井孔(72)的容積，并且利用第二通道(82)使其與井孔(72)連結(jié)。
在使用中，將化學(xué)或者生化反應(yīng)混合物諸如核酸擴(kuò)增反應(yīng)混合物添加至井孔
(72)，并施加適當(dāng)?shù)臈l件例如溫度條件，以在其中實(shí)現(xiàn)要求的反應(yīng)。凸部(71)可以封裝在合適的加熱設(shè)備中，以實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。按這種方式，施加于反應(yīng)井孔(72)的條件并沒有施加至裝置中可能損壞或劣化的其余部分例如膜(77)。所施加的條件取決于要實(shí)現(xiàn)的特定反應(yīng)，可能包括以相對(duì)恒定溫度進(jìn)行保溫，例如在等溫核酸擴(kuò)增反應(yīng)的情況下，或者在一定溫度范圍之間的熱循環(huán)，諸如常規(guī)反應(yīng)，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。之后，將稀釋劑投放至井孔(80)，例如，從密封貯存器分配。如有需要，密封貯存器可以預(yù)先裝在井孔(80)內(nèi)，其包含有刺穿裝置(未示出)，并且，通過用柱塞(81)抵靠該刺穿裝置而壓迫該貯存器，從而分配稀釋劑。分配之后，壓迫柱塞(81)，進(jìn)一步強(qiáng)制稀 釋劑沿通道(82)進(jìn)入井孔(72)，在此處稀釋劑與反應(yīng)混合物混合，并溢出而進(jìn)入通道(74)，之后進(jìn)入芯吸墊(76)。這將吸收流動(dòng)的液體，并將其傳到膜(77)的第一末端區(qū)域。通過吸收或毛細(xì)管流動(dòng)使液體沿膜(77)的長度行進(jìn)，在此過程期間，液體與試劑諸如標(biāo)記試劑混合，以及，與側(cè)流測定中常規(guī)情況一樣，靶組成部分諸如靶核酸在目標(biāo)區(qū)和/或控制區(qū)中顯現(xiàn)信號(hào)諸如信號(hào)線。這些信號(hào)可以通過本體(70)進(jìn)行讀取。然后，圖5和圖6的裝置可以扔掉。因此，本發(fā)明提供了一種可以容易操作以用于不同目的的簡單裝置。其操作簡單，并且使因樣本污染而得到不正確結(jié)果的可能性最小化。在這種裝置的改進(jìn)形式中(圖7)，凸部(71)是實(shí)心的，但包括向下伸出的隆起
(83)，隆起(83)能與可拆式第一井孔(72)形成密合。通道(74，以及82)穿過此隆起(83)，并開口于隆起(83)的下表面。適合預(yù)先裝載有干燥形式擴(kuò)增試劑的獨(dú)立第一井孔(72)設(shè)置有環(huán)狀凸緣(84)，以便易于操控。在本實(shí)施例中，不需要單獨(dú)的帽蓋(73)。在使用中，將樣本施加至第一井孔(72)，并將隆起(83)緊貼地插入井孔(72)的開口，因此將其密封。之后，本裝置可以按照與上述關(guān)于圖5實(shí)施例相同的方式使用。第五實(shí)施例在LAMP等溫測定中使用大致如圖5和圖6所示的裝置來檢測樣本中是否存在馬性病。使用針對(duì)馬生殖道泰勒氏菌的16S核糖體RNA基因的LAMP引物，對(duì)在水中沸騰10分鐘而溶解得到的靶細(xì)菌DNA進(jìn)行擴(kuò)增。用生物素或熒光素對(duì)該反應(yīng)的環(huán)狀引物進(jìn)行標(biāo)記，并且通過這些部分，使產(chǎn)物在側(cè)流裝置上分別與乳膠微粒或者陽性反應(yīng)區(qū)相關(guān)聯(lián)。在裝在裝置上的反應(yīng)井孔(72)(總?cè)莘e25 μ I)中，于適當(dāng)緩沖劑(225μ1的PBS)中，在稀釋反應(yīng)之前，在65°C下保溫20分鐘,使用來自GeneSys (英國，Camberley)的LAMP混合液(mastermix)，進(jìn)行擴(kuò)增。將緩沖劑裝進(jìn)井孔(80)，并且通過按壓柱塞(81)強(qiáng)制使其進(jìn)入反應(yīng)井孔(72)。伴隨稀釋，由正壓力強(qiáng)制稀釋后的擴(kuò)增產(chǎn)物通過通道(74)并到達(dá)側(cè)流裝置芯吸材料(76)。然后，反應(yīng)產(chǎn)物通過毛細(xì)管作用沿側(cè)流裝置長度行進(jìn)，與乳膠微粒關(guān)聯(lián)，并且在反應(yīng)區(qū)(測試線和控制線)處進(jìn)行累積(從而可見)。在測試線(上線)和控制線(下線)二者處，關(guān)于陽性反應(yīng)的線顯現(xiàn)，表明測試材料已經(jīng)過擴(kuò)增并且為陽性。示于圖8的結(jié)果說明本發(fā)明的裝置及方法是有效的，并且提供了有用的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種裝置，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的靶核酸，所述裝置包括 (i)第一井孔或者用于這種第一井孔的收納裝置，在所述第一井孔中可以實(shí)現(xiàn)所述靶核酸的核酸擴(kuò)增反應(yīng)； (ii)第一通道，自所述第一井孔延伸而出； (iii)側(cè)流測定裝置，布置成在其吸收膜上收納來自所述第一通道的樣本，其中，所述膜含有能檢測所述靶核酸的成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的裝置，進(jìn)一步包括 (iia)第二井孔，利用所述第一通道使所述第二井孔與所述第一井孔連接，其中，所述第一通道布置成，使得所述第一井孔的液體內(nèi)容物能傳送至所述第二井孔，以及，其中，所述側(cè)流測定裝置布置成在其所述吸收膜上收納來自所述第二井孔的液體內(nèi)容物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或權(quán)利要求2所述的裝置，其中，組成部分(i)是一種收納裝置，并且進(jìn)一步包括第一井孔，該第一井孔能夠與所述收納裝置相接合。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，其中，所述第一井孔預(yù)裝載有適合于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，進(jìn)一步包括(iv)第三井孔，其布置成容納稀釋劑，以及，利用第二通道使所述第三井孔與所述第一井孔連接，其中，所述第二通道布置成使得來自所述第三井孔的稀釋劑能傳送至所述第一井孔。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的裝置，進(jìn)一步包括將稀釋劑密封于容器內(nèi)，可以打開所述容器以將稀釋劑分配至所述第三井孔中。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，其中，所述第一井孔的容積小于第二井孔和/或第三井孔的容積。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，其中，所述第一井孔、所述第二井孔、所述通道、以及所述側(cè)流測定裝置容納在殼體內(nèi)。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，其中，設(shè)置與至少一些井孔連結(jié)的一個(gè)或多個(gè)端口，以利用氣動(dòng)、液壓或真空壓力系統(tǒng)使內(nèi)容物得以在井孔之間傳送。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，進(jìn)一步包括封閉的第四井孔，其預(yù)裝載有液體試劑，以及，利用通道使所述第四井孔與所述第一井孔連接，使得所述第四井孔的內(nèi)容物能分送進(jìn)入所述第一井孔。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，其中，在所述第二井孔與所述側(cè)流測定裝置的樣本接納段之間設(shè)置芯吸元件，以及，所述芯吸元件布置成使來自所述第二井孔的液體能夠分送至所述樣本接納段。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，進(jìn)一步包括核酸提取和/或提純系統(tǒng)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的裝置，其中，所述核酸提取和/或提純系統(tǒng)包括吸收膜。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的裝置，其中，所述吸收膜在所述第一井孔與所述裝置中的第五井孔之間延伸，使得所述第五井孔中的液體能沿所述膜芯吸至所述第一井孔。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的裝置，其中，所述膜伸到所述第一井孔的開口之上。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的裝置，其中，所述第五井孔作為樣本收納井孔，以及，可利用帽蓋封閉所述第五井孔。
17.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的裝置，其中，所述第五井孔是封閉的，以及與第六井孔連接，在所述第六井孔中能發(fā)生細(xì)胞溶解。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至權(quán)利要求17中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，進(jìn)一步包括容納洗滌液的封閉的第七井孔，所述第七井孔與所述第五井孔或第六井孔連接，從而，能夠向其傳送所述內(nèi)容物。
19.一種裝置，用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并檢測其產(chǎn)物，所述裝置包括 (i)第一井孔，其中，在液相中實(shí)現(xiàn)化學(xué)或生化反應(yīng)； ( )第一通道，自所述第一井孔延伸而出； (iii)側(cè)流測定裝置，布置成在其吸收膜上從所述第一通道接收液體內(nèi)容物，可選地經(jīng)由第二井孔，其中，所述膜含有能檢測所述化學(xué)或生化反應(yīng)的產(chǎn)物的成分；以及 (iv)第三井孔，布置成容納稀釋劑，以及利用第二通道使所述第三井孔與所述第一井孔連接，其中，所述第二通道布置成使得來自所述第三井孔的稀釋劑能傳送至所述第一井孔，以及，其中，所述第二井孔和所述第三井孔的容量明顯大于所述第一井孔的容量。
20.一種試劑分配器，包括塞子、桿、或帽蓋，其適合于適配進(jìn)根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)權(quán)利要求所述裝置的第一井孔，以及，包括進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)所要求的至少一些試劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的試劑分配器，進(jìn)一步包括切割器，所述切割器布置成將延伸跨越所述第一井孔中開口的膜切割成樣本，并使所述樣本放置在所述第一井孔中。
22.一種根據(jù)權(quán)利要求I至權(quán)利要求19中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置與根據(jù)權(quán)利要求19或權(quán)利要求20所述的試劑分配器的組合。
23.一種設(shè)備，用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并且檢測產(chǎn)物，所述設(shè)備包括 (i)收納裝置，用于收納根據(jù)權(quán)利要求I至權(quán)利要求19中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述裝置，以及 ( )加熱裝置，其布置成可控制方式加熱所述第一井孔，以允許化學(xué)或生化反應(yīng)在其中進(jìn)行。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括(iii)傳送系統(tǒng)，其可與所述裝置連接，以允許材料在所述裝置的井孔之間傳送。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的設(shè)備，其中，所述傳送系統(tǒng)是氣動(dòng)、液壓、或真空壓力系統(tǒng)。
26.根據(jù)權(quán)利要求23至權(quán)利要求25中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中，所述裝置包括在其中易于發(fā)生細(xì)胞溶解的井孔，以及，所述設(shè)備包括用于加熱所述井孔以實(shí)現(xiàn)溶解的裝置。
27.—種系統(tǒng)，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的核酸，所述系統(tǒng)包括根據(jù)權(quán)利要求I至權(quán)利要求18中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述裝置與根據(jù)權(quán)利要求23至權(quán)利要求26中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述設(shè)備的組合。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的系統(tǒng)，進(jìn)一步包括根據(jù)權(quán)利要求20或權(quán)利要求21所述的試劑分配器。
29.—種系統(tǒng)，用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的核酸，所述系統(tǒng)包括裝置，其包括擴(kuò)增反應(yīng)腔；第一吸收膜，其布置成從樣本中提取核酸并分送至所述擴(kuò)增腔；以及第二吸收膜，其布置作為側(cè)流裝置，以檢測在所述腔中所得到擴(kuò)增產(chǎn)物內(nèi)的核酸；以及用于將所述擴(kuò)增腔中所得到產(chǎn)物分送至所述側(cè)流裝置中樣本接納區(qū)的裝置。
30.一種用于進(jìn)行測定以檢測樣本中的核酸的方法，所述方法包括將樣本添加至根據(jù)權(quán)利要求I至權(quán)利要求18中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的裝置，將所述裝置裝進(jìn)根據(jù)權(quán)利要求23至權(quán)利要求25中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的設(shè)備，以及，使所述設(shè)備在其中進(jìn)行核酸擴(kuò)增以及檢測反應(yīng)，從所述側(cè)流測定裝置讀取結(jié)果。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中，使用根據(jù)權(quán)利要求20或權(quán)利要求21所述的試劑分配器，將進(jìn)行所述核酸擴(kuò)增所需的試劑裝進(jìn)所述裝置。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中，進(jìn)行所述核酸擴(kuò)增所需的試劑適宜以干燥形式預(yù)裝載進(jìn)所述第一井孔。
33.一種用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并且在側(cè)流測定裝置的膜上檢測產(chǎn)物的方法，所述方法包括將樣本添加至根據(jù)權(quán)利要求19所述裝置的第一井孔，向所述井孔提供發(fā)生所述化學(xué)或生化反應(yīng)的條件，之后，將存在于所述裝置的所述第三井孔中的稀釋劑傳送至所述第一井孔，以促使內(nèi)容物沿所述第一通道流動(dòng)至所述第二井孔，并在之后沿所述側(cè)流測定 裝置的所述膜流動(dòng)，之后，從那里讀取結(jié)果。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述稀釋劑容納在密封容器內(nèi)，并且在使用之前分配至所述第三井孔。
35.一種模塊化的第一井孔，適合于將其容納在根據(jù)權(quán)利要求I所述裝置的所述收納裝置中。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的井孔，使其預(yù)裝載有用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增的試劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種裝置，用于進(jìn)行化學(xué)或生化反應(yīng)并檢測產(chǎn)物，諸如進(jìn)行測定以檢測樣本中的靶核酸，該裝置包括(i)第一井孔或用于這種第一井孔的收納裝置，可以在第一井孔的液相中實(shí)現(xiàn)化學(xué)或生化反應(yīng)，諸如核酸擴(kuò)增反應(yīng)；(ii)第一通道，自第一井孔延伸而出；(iii)側(cè)流測定裝置，布置成在其吸收膜上可選地經(jīng)由第二井孔收納來自第一通道的液體內(nèi)容物，其中，該膜含有能檢測化學(xué)或生化反應(yīng)產(chǎn)物諸如靶核酸的成分。本發(fā)明還描述并要求保護(hù)使用這些裝置的方法以及使用這些裝置進(jìn)行測定的設(shè)備。
文檔編號(hào)B01L3/00GK102655938SQ201080049483
公開日2012年9月5日 申請(qǐng)日期2010年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月2日
發(fā)明者格雷厄姆·古特賽爾, 菲利普·韋克利 申請(qǐng)人:環(huán)境，食品及農(nóng)村國務(wù)部，由動(dòng)物衛(wèi)生和獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)所代理