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      檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法

      文檔序號:6112496閱讀:225來源:國知局
      專利名稱:檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及中藥制劑的質(zhì)量控制方法,具體地說是采用高效液相色譜法建立指紋圖譜以檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的一種方法。
      背景技術(shù)
      夏桑菊制劑是國家批準(zhǔn)上市的公知產(chǎn)品,它由中藥材夏枯草、桑葉、野菊花為原料制成,具有清肝明目、疏風(fēng)散熱、除濕痹、解瘡毒的功能,用于風(fēng)熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭暈耳鳴、咽喉腫痛、療瘡腫毒等癥。夏桑菊制劑在中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊已有收載,是深受歡迎的中藥制劑,現(xiàn)已有夏桑菊無糖顆粒劑,夏桑菊口服液,夏桑菊飲料等劑型上市,用公開的夏桑菊制劑處分,一般技術(shù)人員很容易用常規(guī)的技術(shù)制備其它的制劑如膠囊劑、片劑、合劑等。
      國家和企業(yè)對夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制主要采用薄層色譜法鑒別是否有主藥夏枯草的熊果酸的成分;楊冬梅等在文獻“夏桑菊沖劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究”安徽醫(yī)藥,2001,5(3)218報道了用分光光度法測定夏桑菊制劑中總黃酮的含量;馬穩(wěn)等在雜志“分析科學(xué)學(xué)報”2004,20(3)284公開了用高效液相色譜紫外可見檢測夏桑菊中熊果酸的分析方法;黃淑彰在文獻“現(xiàn)代中藥研究與實踐”2004,18(3)33報道了采用HPLC法測定了夏桑菊顆粒中熊果酸的含量;熊國營等在文獻“江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報”2004,16(6)48)中報道了用HPLC法測定顆粒中所含活性成分綠原酸的含量方法。
      以上均是針對個別成分進行鑒別或含量測定的方法,難以全面表征復(fù)方夏桑菊制劑的物理化學(xué)特征,因此,對復(fù)方夏桑菊制劑的質(zhì)量控制方法有待進一步完善。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是提供一種有效控制夏桑菊制劑質(zhì)量的檢測方法,主要是建立指紋圖譜來檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法。
      為達到本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案用高效液相色譜法建立指紋圖譜,檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,具體方法包括如下步驟
      (a)參照品溶液的制備取天門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸17種標(biāo)準(zhǔn)品用純水配成濃度均為100μmol·L-1的混合氨基酸對照品溶液,取混合氨基酸對照品溶液20μL放入干燥管中,加入160μL硼酸緩沖液,混和并加入20μL 1%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,混和15min,樣品管封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘,冷卻,作為參照品溶液。
      (b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊固體制劑0.1~10g或夏桑菊液體制劑0.01~10mL,置1~50mL容量瓶中,加水溶解,并加水至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取過濾液10~100μL放入干燥管中,加入80~500μL硼酸緩沖液,混和并加入10~100μL體積濃度為0.1~5%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯乙腈溶液,混和10~30秒鐘,樣品管封口,于45~90℃烘箱中加熱30~5分鐘后放冷,即得供試品溶液;(c)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;采用梯度洗脫,流動相為pH為4.50~5.05的0.05~0.10mol/L醋酸鈉緩沖液(流動相A)與20~80%的乙腈水溶液(流動相B)組成的梯度洗脫液;柱溫30~50℃;熒光檢測激發(fā)波長為250nm,發(fā)射波長為395nm;流速0.5~1.5mL·min-1;時間30~80min;(d)測定精密吸取供試品溶液5~25μL注入高效液相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得到指紋圖譜。
      本發(fā)明可優(yōu)選如下方法檢測(b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊有糖顆粒劑1.6g或夏桑菊飲料60μL置5mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20uL濾液至干燥管中,加入160uL硼酸緩沖液,混和并加入20uL體積濃度為1%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,混和15秒鐘,樣品管封口,于60℃烘箱中加熱10分鐘后放冷,即得;(c)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;流動相為pH是5.05的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液(A相)與60%乙腈組成的梯度洗脫液(B相);柱溫37℃;流速1.0mL.min-1;分析時間50min;在步驟(c)中,所述的梯度洗脫,優(yōu)選梯度洗脫程序以如下體積濃度配制進行0分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液0.5分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;1分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;10分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;19分鐘時,流動相A為93%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為7%的60%乙腈溶液;25分鐘時,流動相A為90%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為10%的60%乙腈溶液;38分鐘時,流動相A為67%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;39分鐘時,流動相A為67%的0.05%醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;40分鐘時,流動相A為0%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為100%的60%乙腈溶液;45分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;50分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液。
      具體見下表


      按照本發(fā)明方法測定廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊顆粒劑中氨基酸類成分建立的指紋圖譜,指紋圖譜中主要有有12個特征共有峰。其中4個為人體必需氨基酸,分別為9號峰纈氨酸(Val)、10號峰異亮氨酸(Ile)、11號峰亮氨酸(Leu)、12號峰苯丙氨酸(Phe),具體如下1號峰為天門冬氨酸,平均保留時間RT為19.54min,RSD為0.25%,2號峰為絲氨酸,平均保留時間RT為20.45min,RSD為0.25%,3號峰,平均保留時間RT為23.37min,RSD為0.16%,4號峰,平均保留時間RT為25.61min,RSD為0.17%,5號峰,平均保留時間RT為26.36min,RSD為0.27%,6號峰,平均保留時間RT為30.19min,RSD為0.24%,7號峰為脯氨酸,平均保留時間RT為30.60min,RSD為0.14%,8號峰,平均保留時間RT為31.69min,RSD為0.14%,9號峰為纈氨酸,平均保留時間RT為35.35min,RSD為0.13%,10號峰為異亮氨酸,平均保留時間RT為38.84min,RSD為0.12%,11號峰為亮氨酸,平均保留時間RT為39.56min,RSD為0.12%,12號峰為苯丙氨酸,平均保留時間RT為40.08min,RSD為0.12%。
      RT為42min以后出現(xiàn)的峰為溶劑峰。
      用本發(fā)明所提供的方法可測定夏桑菊制劑中氨基酸類成分,所說的制劑包括固體制劑和液體制劑如含糖顆粒劑,無糖顆粒劑、片劑,膠囊劑,飲料,合劑、口服液等。用本方法測定廣州星群(藥業(yè))股份有限公司所生產(chǎn)的夏桑菊含糖顆粒劑、無糖顆粒劑、片劑、膠囊劑、飲料、口服液等制劑均能得到相同、相近似的指紋圖譜。
      不同廠商生產(chǎn)的夏桑菊制劑由于原材料的不同,生產(chǎn)工藝不完全相同,用本發(fā)明所提供的方法所建立的指紋圖譜的特征峰可能不同。
      本發(fā)明的有益效果如下
      (1)以夏桑菊制劑中氨基酸類組分為指標(biāo)建立起來的HPLC指紋圖譜,能有效地表征夏桑菊制劑的質(zhì)量,有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量;(2)本發(fā)明顯示夏桑菊制劑中含有人體必需氨基酸4個,纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe),并含有其他人體所需的氨基酸,體現(xiàn)了夏桑菊具有“養(yǎng)陰扶正以降火”的功效;(3)本發(fā)明具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點;(4)該方法可快速、準(zhǔn)確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。
      下面通過實施例及其附圖詳細闡述本發(fā)明的技術(shù)方案,所列舉的實施例及附圖對本發(fā)明并沒有限制,如在使用不同的檢測儀器時或所采用的被測樣品不同采用本發(fā)明的方法所獲得的測定結(jié)果(指紋圖譜),可能有所不同。


      圖1夏桑菊顆粒劑氨基酸類成分的HPLC對照指紋圖譜圖2夏桑菊顆粒劑氨基酸類成分的10批次成品指紋圖譜(原始圖譜)圖3夏桑菊顆粒劑氨基酸類成分的10批次成品指紋圖譜(匹配后圖譜)圖4夏桑菊顆粒劑氨基酸類成分的HPLC指紋圖譜(共有模式)具體實施方式
      實施例1檢測夏桑菊含糖顆粒劑中氨基酸類成分的指紋圖譜1.儀器與試藥1.1儀器 Waters2695高效液相色譜儀,Waters 2475(熒光檢測器),Empower色譜工作站。瑞士梅特勒公司AE-200型電子分析天平。
      1.2試劑 衍生劑6-氨基酸喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺基-氨基甲酸酯(縮寫AQC)、氨基酸對照品AminoAcid stadard H(Waters公司);乙腈(色譜純)、二次重蒸水、醋酸鈉(分析純)、三乙胺(分析純)2、高效液相色譜2.1色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;流動相pH=5.05的醋酸鈉緩沖液-乙腈(梯度洗脫),柱溫37℃,熒光檢測激發(fā)波長(Ex)為250nm,發(fā)射波長(Em)為395nm,流速1.0mL,分析時間50min;進樣量供試品溶液與參照品溶液各20μL。理論塔板數(shù)按脯氨酸計算應(yīng)不低于5000。梯度洗脫程序如下表

      2.2參照品溶液的制備2.2.1稀釋氨基酸對照品制備采用Waters公司含17種水解氨基酸的標(biāo)樣[天門冬氨酸(Asp),絲氨酸(Ser),谷氨酸(Glu),甘氨酸(Gly),組氨酸(His),精氨酸(Arg),蘇氨酸(Thr),丙氨酸(Ala),脯氨酸(Pro),半胱氨酸(Cys),酪氨酸(Tyr),纈氨酸(Val),蛋氨酸(Met),賴氨酸(Lys),異亮氨酸(Ile),亮氨酸(Leu),苯丙氨酸(Phe)],每種氨基酸(除Cys2以外)的濃度均為2.5mmol·L-1,取40μL氨基酸標(biāo)樣置于清潔的自動進樣瓶中,加入960μL純水,混勻,備用。此標(biāo)樣含胱氨酸50μmoL·L-1(等價于100umol·L-1半胱氨酸),含其它各種氨基酸均為100μmol·L-1。
      2.2.2參照品溶液的制備 取稀釋氨基酸對照品溶液20μL放入衍生管中(干燥),加入160μL硼酸緩沖液,渦旋混和并加入20μL1%的AQC乙腈溶液,渦旋混和15min,樣品管用石臘膜封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘,冷卻,作為參照品溶液。
      2.3供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊顆粒(含糖)1.6g,置5mL容量瓶中加水搖勻,用超微孔濾膜過濾,備用。取20μL放入衍生管中(干燥),加入160μL硼酸緩沖液,渦旋混和并加入20μL1%的AQC乙腈溶液,渦旋混和15min。樣品管用石臘膜封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘,冷卻,即得夏桑菊顆粒樣品的供試液,備用。平行2份。
      2.4測定精密吸取供試品溶液與參照物、對照品溶液各20μL注入相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得到指紋圖譜,如圖1所示。
      實施例2 檢測10批次夏桑菊含糖顆粒劑中氨基酸類成分的指紋圖譜取夏桑菊顆粒10批次,按實施例1條件進行檢測,得10批樣品的氨基酸HPLC圖譜,如圖2所示,通過10批HPLC圖譜的比較,進行相似度評價,確定其特征共有峰指紋圖譜中有12個特征共有峰,現(xiàn)將圖譜的保留時間、峰面積的平均值以及RSD值匯總,具體如下1號峰為天門冬氨酸,平均保留時間RT為19.54min,RSD為0.05%,峰面積為785808,RSD為25.04%,占總峰面積的1.58%。
      2號峰為絲氨酸,平均保留時間RT為20.45min,RSD為0.05%,峰面積為721818,RSD為33.86%,占總峰面積的1.46%。
      3號峰,平均保留時間RT為23.37min,RSD為0.06%,峰面積為3275018,RSD為47.31%,占總峰面積的5.18%。
      4號峰,平均保留時間RT為25.61min,RSD為0.07%,峰面積為4522600,RSD為23.58%,占總峰面積的10.07%。
      5號峰,平均保留時間RT為26.36min,RSD為0.07%,峰面積為5918528,RSD為7.48%,占總峰面積的11.98%。
      6號峰,平均保留時間RT為30.19min,RSD為0.04%,峰面積為7870364,RSD為5.43%,占總峰面積的15.53%。
      7號峰為脯氨酸,平均保留時間RT為30.60min,RSD為0.04%,峰面積為13526273,RSD為5.91%,占總峰面積的26.78%。
      8號峰,平均保留時間RT為31.69min,RSD為0.04%,峰面積為7788927,RSD為6.09%,占總峰面積的15.41%。
      9號峰為纈氨酸,平均保留時間RT為35.35min,RSD為0.03%,峰面積為734037,RSD為14.75%,占總峰面積的1.39%。
      10號峰為異亮氨酸,平均保留時間RT為38.84min,RSD為0.02%,峰面積為539246,RSD為18.32%,占總峰面積的0.94%。
      11號峰為亮氨酸,平均保留時間RT為39.56min,RSD為0.02%,峰面積為467307,RSD為13.58%,占總峰面積的0.81%。
      12號峰為苯丙氨酸,平均保留時間RT為40.08min,RSD為0.02%,峰面積為250546,RSD為30.37%,占總峰面積的0.38%。
      RT為42min以后出現(xiàn)的峰為溶劑峰。
      圖譜中,夏桑菊顆粒氨基酸類成分有12個特征共有峰,其中單峰面積超總峰面積1%的峰有9個,分別是1號峰(天門冬氨酸)、2號峰(絲氨酸)、3號峰,4號峰、5號峰、6號峰、7號峰(脯氨酸)、8號峰、9號峰(纈氨酸);其中單峰面積超總峰面積5%的峰有6個,分別是3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰(脯氨酸)、8號峰;其中單峰面積超總峰面積10%的峰有5個,分別是4號峰、5號峰、6號峰、7號峰(脯氨酸)、8號峰。
      相似度評價采用中國藥典委員會推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2004A版)對HPLC圖譜進行綜合評價,相似度評價結(jié)果見表2,經(jīng)匹配后的圖譜與共有模式見圖3、圖4。
      表2 氨基酸HPLC指紋圖譜相似度評價

      供試品指紋圖譜與共有模式圖譜經(jīng)計算機輔助相似度評價軟件計算,相似度大于0.90。
      實施例3 廣州星群夏桑菊含糖顆粒氨基酸類成分指紋圖譜的測定方法(b)供試品溶液的制備精密稱取廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊顆粒1.0g,置10mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取10uL濾液至衍生管中,加入170uL硼酸緩沖液,和加入20uL濃度為0.5%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,渦旋混和15秒鐘,樣品管封口,放于50℃烘箱中加熱20分鐘后放冷,即得。
      (c)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;采用梯度洗脫,流動相為pH是5.05的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液(A相)與60%乙腈組成的梯度洗脫液(B相);梯度洗脫程序如下0分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;0.5分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;1分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;10分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;19分鐘時,流動相A為93%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為7%的60%乙腈溶液;25分鐘時,流動相A為90%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為10%的60%乙腈溶液;38分鐘時,流動相A為67%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;39分鐘時,流動相A為67%的0.05%醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;40分鐘時,流動相A為0%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為100%的60%乙腈溶液;45分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;50分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;柱溫37℃;流速1.0mL.min-1;分析時間50min。
      (d)測定精密吸取供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得到指紋圖譜;實施例4 廣州星群夏桑菊含糖顆粒氨基酸類成分指紋圖譜的測定方法(b)供試品溶液的制備精密稱取廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊顆粒3.0g,置5mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20uL濾液至衍生管中,加入160uL硼酸緩沖液,和加入20uL濃度為4%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,渦旋混和15秒鐘,樣品管封口,放于70℃烘箱中加熱5分鐘后放冷,即得。
      其它同實施例3操作。
      實施例5 廣州星群夏桑菊含糖顆粒氨基酸類成分指紋圖譜的測定方法(b)夏桑菊顆粒溶液的制備精密稱取廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊顆粒1.6g,置5mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20uL濾液至衍生管中,加入160uL硼酸緩沖液,和加入20uL濃度為1%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,渦旋混和15秒鐘,樣品管封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘后放冷,即得。
      其它同實施例3操作。
      實施例6、夏桑菊飲料氨基酸類成分指紋圖譜的測定方法供試品溶液的制備精密稱取廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊飲料60uL,置5mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20uL濾液至衍生管中,加入160uL硼酸緩沖液,和加入20uL濃度為4%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,渦旋混和15秒鐘,樣品管封口,放于70℃烘箱中加熱5分鐘后放冷,即得。
      其它同實施例3操作。
      實施例7、夏桑菊口服液氨基酸類成分指紋圖譜的測定方法供試品溶液的制備精密稱取廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊口服液30uL,置25mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20uL濾液至衍生管中,加入160uL硼酸緩沖液,和加入20uL濃度為4%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,渦旋混和15秒鐘,樣品管封口,放于70℃烘箱中加熱5分鐘后放冷,即得。
      其它同實施例3操作。
      權(quán)利要求
      1.一種檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,其特征在于采用高效液相色譜法建立指紋圖譜,具體包括如下步驟(a)參照品溶液的制備取天門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸17種標(biāo)準(zhǔn)品用純水配成濃度均為100μmol·L-1的混合氨基酸對照品溶液,取混合氨基酸對照品溶液20μL放入干燥管中,加入160μL硼酸緩沖液,混和并加入20μL1%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,混和15min,樣品管封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘,冷卻,作為參照品溶液。(b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊固體制劑0.1~10g或夏桑菊液體制劑0.01~10mL置1~50mL容量瓶中,加水溶解,并加水至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取過濾液10~100μL放入干燥管中,加入80~500μL硼酸緩沖液,混和并加入10~100μL體積濃度為0.1~5%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,混和10~30秒鐘,樣品管封口,于45~90℃烘箱中加熱30~5分鐘后放冷,即得供試品溶液;(c)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;采用梯度洗脫,流動相是pH為4.50~5.05的0.05~0.10mol/L醋酸鈉緩沖液與20~80%的乙腈水溶液組成的梯度洗脫液;柱溫30~50℃;熒光檢測激發(fā)波長為250nm,發(fā)射波長為395nm;流速0.5~1.5m L·min-1;時間30~80min;(d)測定精密吸取供試品溶液5~25μL注入高效液相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得到指紋圖譜。
      2.如權(quán)利要求1所述的檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,其特證在于所述步驟(b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊有糖顆粒1.6g或夏桑菊飲料60μL置5mL容量瓶,加水溶解至刻度,搖勻,用超微孔濾膜過濾,取20μL濾液至干燥管中,加入160μL硼酸緩沖液,混和并加入20μL體積濃度為1%的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液,混和15秒鐘,樣品管封口,放于60℃烘箱中加熱10分鐘后放冷,即得;(c)色譜條件中流動相為pH是5.05的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液與60%乙腈組成的梯度洗脫液,柱溫37℃;流速1.0mL.min-1;分析時間50min。
      3.如權(quán)利要求2所述的檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,其特證在于所述步驟(c)色譜條件中所述的梯度洗脫,梯度洗脫程序以如下體積濃度配制進行0分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液0.5分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;1分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;10分鐘時,流動相A為99%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1%的60%乙腈溶液;19分鐘時,流動相A為93%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為7%的60%乙腈溶液;25分鐘時,流動相A為90%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為10%的60%乙腈溶液;38分鐘時,流動相A為67%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;39分鐘時,流動相A為67%的0.05%醋酸鈉緩沖液、流動相B為33%的60%乙腈溶液;40分鐘時,流動相A為0%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為100%的60%乙腈溶液;45分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液;50分鐘時,流動相A為100%的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0%的60%乙腈溶液。
      4.如權(quán)利要求2和3所述的檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,其特證在于其所建立的指紋圖譜中主要有12個特征共有峰,具體如下1號峰為天門冬氨酸,平均保留時間RT為19.54min,RSD為0.25%,2號峰為絲氨酸,平均保留時間RT為20.45min,RSD為0.25%,3號峰,平均保留時間RT為23.37min,RSD為0.16%,4號峰,平均保留時間RT為25.61min,RSD為0.17%,5號峰,平均保留時間RT為26.36min,RSD為0.27%,6號峰,平均保留時間RT為30.19min,RSD為0.24%,7號峰為脯氨酸,平均保留時間RT為30.60min,RSD為0.14%,8號峰,平均保留時間RT為31.69min,RSD為0.14%,9號峰為纈氨酸,平均保留時間RT為35.35min,RSD為0.13%,10號峰為異亮氨酸,平均保留時間RT為38.84min,RSD為0.12%,11號峰為亮氨酸,平均保留時間RT為39.56min,RSD為0.12%,12號峰為苯丙氨酸,平均保留時間RT為40.08min,RSD為0.12%。
      全文摘要
      檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法,涉及中藥制劑的質(zhì)量控制方法,具體是建立指紋圖譜以檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法。方法為(a)參照品溶液的制備(b)供試品溶液的制備(c)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;流動相為pH 4.50~5.05的0.05~0.10mol/L醋酸鈉緩沖液與20~80%的乙腈水溶液組成的梯度洗脫液;柱溫30~50℃;熒光檢測激發(fā)波長為250nm,發(fā)射波長為395nm流速0.5~1.5mL·min-1;時間30~80min;(d)測定高效液相色譜法得指紋圖譜。本方法能有效表征夏桑菊制劑的質(zhì)量,有利于監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量;具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好;可快速、準(zhǔn)確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。
      文檔編號G01N30/06GK1865988SQ200610036029
      公開日2006年11月22日 申請日期2006年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月21日
      發(fā)明者孫維廣, 柯雪紅, 蘇廣豐, 姚江雄, 方鐵錚 申請人:廣州星群(藥業(yè))股份有限公司
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