專利名稱：：胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測的制作方法胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測^e每年約有876,000新發(fā)胃癌病例(Shibuy^Mathere等人，2002)。在美國，2005年胃癌的估i憤發(fā)病例和死亡人數(shù)分別為21,860和11,550(Jemal,Murray等人，2005)。胃部惡創(chuàng)巾瘤是胃癌的最常見類型(90%至95%),按照發(fā)病率次序其緊隨淋巴瘤、，瘤和間,形細胞瘤之后(Kumar,Cotran等人2003)。徹底的局部區(qū)域控制是挽救胃癌患者的主要治療方法，其包括胃^t刀除術或胃次全切除術、標記淋巴結(jié)清除術、擴展淋巴結(jié)清除斜卩受轉(zhuǎn)移影響的鄰近組織切除例如脾切除斜Q胰腺切除術(Hartgrink和vandeVelde2005;Kitagawa^Fujii等人，2005)。在手術治療后遭受復發(fā)的所有患者中，高達87.5%的是由局部錢頓ij余局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移弓胞的(Songui^Bonenkamp等人，1996)。在一項涵蓋148個胃一錄連接部(GEJ)癌患者的調(diào)查研究中，人們得出的結(jié)論是局部淋巴結(jié)內(nèi)微轉(zhuǎn)移的存在是預后不良的關謝旨示(Heer叫Kelder等人，2005)。目前胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的普遍分期/診斷JtM過觸診和手術中冰凍切片檢查實現(xiàn)的。淋巴結(jié)的冰凍切片檢查可以顯示74%的靈敏度(Kitagawa^Fujii等人，2005)。利用適當?shù)幕驑擞浳?，基因表達分析和檢測技術例如逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)或定量PCR可以提供一種可選擇的用于胃癌的診斷或預后的方法。這些方法有可能提供更好的用于轉(zhuǎn)移檢測K^的靈敏度和精確度。先辦艮道的基因標記物包括CK19(Matsuda^Kitagawa等人，2004)、癌胚抗原(CAE)、細胞角蛋白-20(CK-20)、和MAG&3(Okada^Fujiwara等人，2001)、CK18、MUC1、hTRT(Ajisaka和Miwa，2003)。不幸的是，如同公布的數(shù)據(jù)顯示的，它們中的大部分在檢測的所有腫瘤組織和腫瘤細胞系內(nèi)不能一^達。禾擁逆轉(zhuǎn)錄酶PCR不能在組織學檢查確認的15%(CEA)到70%以上(MAG&3)的具有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中檢測到標記物(Okada^Fujiwara等人，2001)。CK-20t細作豐^ia物用于M、結(jié)腸、胃、禾,癌的血液內(nèi)播散的癌細胞的逆轉(zhuǎn)錄酶PCR檢測(Chausovsky，Luchansky等人，1999;Ch叫Chen等人，2004)。在這里，鑒定了一種標記物組合其以可輕易檢測的水平在具有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)內(nèi)一致表達，這種可檢測的水平在正常的淋巴結(jié)內(nèi)可與其背景表達區(qū)分開來。這種標記物組合可用于檢測來自胃癌、或?qū)?胞來源的癌，例如食道癌、胰腺癌和腸癌的M^性癌細胞。
發(fā)明內(nèi)容在本發(fā)明的一方面中，組合使用一組標記物以檢測來自胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在具有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中，這些1^HB物的表ii7jc平顯著高于正常淋巴結(jié)的表達水平。標記物組合為CK19、CEA和MUC-2標記物。在本發(fā)明的另一方面中，診斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移包括從患者中獲取生物學樣品并測定選自標記物組的基因表達水平，其中皿預定臨界水平的基因表ii^平則表明胃癌轉(zhuǎn)移。^m地，生物學樣品為淋巴結(jié)樣品。在本發(fā)明的另一方面中，標記物被組合用于檢測胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法中。仍然在本發(fā)明的另一方面中，在手術中分析標記物?？梢酝ㄟ^一種方法進行手術中分析，該方法包括如下步驟制備從胃引出的淋巴結(jié)的RNA;實施針對一個或多個標記物的定量RT—PCR方法并確定出現(xiàn)的標記物是否超出預定截斷值。本發(fā)明包括用于實施這里提供的方法的微陣列驢因芯片，還有進摘分析的試劑盒和制品。該說明書中所描述和要求保護的發(fā)明方法、組分、制品、和試劑盒包括^HS物的組合。^H^明書中所使用的"^HS物"是指a)基因和基因表達產(chǎn)物，例如mRNA和相應cDNA、肽、蛋白質(zhì)，±M每種物質(zhì)的片段和補體，和b)組分例如探針、抗體、配體、半抗原、和標記物，其ffi31與a)的物理或化學相互作用表明基因的,或基因表達產(chǎn)物的存在，并且其中該基因、基因敬產(chǎn)物或組分對應于SEQIDNONM_002276、SEQIDNONM—002457、和SEQIDNOMl7303。如果基因包含那鵬列則其對應于SEQIDNO所指示的序列。如果基因,產(chǎn)品的區(qū)段(segment)或片斷(fegment)包含足以區(qū)分其為該基因或基因表達產(chǎn)品的序列的一部分參考基因表達產(chǎn)品，卜體,則該區(qū)段或片段相應于該基因或基因表達產(chǎn)品的序列。另外如果基因^ii產(chǎn)物的RNA、mRNA、或cDNA與具有這種序列的組分(例如探針)雜交，貝條基因表ii^也如前述那樣對應于這種序列，^在所述產(chǎn)物J1I太或蛋白質(zhì)的情況下,其由這種mRNA編碼。當基因表達產(chǎn)物區(qū)段(segment)或片段(fiagment)包含足以區(qū)分其為該基因序列或基因鋭產(chǎn)物的部分參考基因表達產(chǎn)物或其互豐唯時，則該基因表達產(chǎn)物區(qū)段(segment)或片段(fragment)也對應于這種基因序列或基因表達產(chǎn)物。本發(fā)明的標記物對應于編碼三個已知蛋白的基因癌胚抗原(SEQIDNOM7303X粘蛋白2(SEQIDNONM—002457)、和細胞角蛋白19(SEQIDNONM—002276)。當它們各自用作癌標記物時這些基因不能使分析具有可接受的功效，尤其是對于在手術中使用。但是，以組合方式，如同實施例中顯示的，這些*祝物提供了靈敏和特異性的檢測以確定胃癌轉(zhuǎn)移。通常還會分析對照品以確保陰性結(jié)果并非產(chǎn)生自分析中所產(chǎn)生的錯誤。組成性表達的基因例如PBGD(SEQIDNONM_000190)在這方面是有用的并且用于分析它們的試劑ttii包括在試劑盒組分內(nèi)。雌PBGD是因為，其中，在人體中它不包含已知的假基因、它組成性表達于人體組織并且它以相對低的7K平^ii而且因此很少會引起感興趣的目標序列擴增的抑制。樣品制備一般包括操作切除的組織，im淋巴結(jié)組織。組織中轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的分布在淋巴結(jié)或其它組織中并不一致。因此，應當獲TO夠大的樣品使得不會漏掉轉(zhuǎn)移。在目前的方法中一種樣品釆集方法是勻質(zhì)化大組織樣品，隨后采用適當部分的組織勻漿以制備用于好檢湖啲RNA。本發(fā)明方法中采用的樣品tt^為來自從胃引出的淋巴結(jié)的淋巴結(jié)樣品。接著是制備這種用于RT—PCR分析的樣品的有用步驟；OTOmni勻漿器和—次性探針用于勻漿后再用Rneasy(Qiagen)試劑盒試劑純化RNA:a)如果之前沒有記錄，以毫克確定樣品重量。將一張新的蠟自置在天平上、校準并秤量樣品。,淋巴結(jié)樣品^3l30mg。b)禾i傭新的手術刀，將同一淋巴結(jié)的所有組織切碎雌^^勺4mm的塊。注意在處M程中避免污染組織。c)將勻化(RLT)緩沖、鄉(xiāng)卩到聚丙烯勻化管中。每100mg組織雌艦2ml勻化緩沖液。d)禾傭干凈的鑷子，將組織轉(zhuǎn)移到勻腿沖液內(nèi)。e)將新的勻化Mimg在AX勻漿器上。f)完^J化旨淋巴結(jié)。g)按標準Qiagen規(guī)程中的齡RNA純化步驟鵬組織勻漿，在鵬前將RNA存儲在一65'C^M低MJt。h)去掉勻化探針。i)#(封可剩余的組織勻漿存儲在一65'C^M低旨用于以后可能的利用。然后可以進行診斷分析。本發(fā)明的標記物用于提供重要的臨床信息例如胃癌是否已經(jīng)轉(zhuǎn)移到了淋巴結(jié)、哪個標記物表示胃癌的臨床階段和患者的預后?？偟膩碚f，在本說明書中該信息被稱為"診斷信息"。另外，這種診斷信息包括其舒;f提供的治療中作為組分的用途。例如，擁有這種診斷信息的醫(yī)生可以使他的治療(例如，輔助療法)以胃癌已經(jīng)轉(zhuǎn)移到了淋巴結(jié)的^r征為依據(jù)。分析本發(fā)明標記物的優(yōu)選方法包括確定可以編碼蛋白或肽的基因產(chǎn)生的mRNA量。這可以ail競爭f4^轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)、實時RT-PCR、北方吸印技術(NorthemBlot)分析或其它具有相似功能的試驗來實現(xiàn)。也可以從mRNA(RNA)制備擴增的互補RNA(cRNA)，然后應用到DNA微陣列和其它正在開展的用于測縱吩析的檢測方式。用于生產(chǎn)所述陣列的許多陣列構(gòu)型和方法為本領域技術人員所熟知并且在如下列美國專利中得到了描述，例如5,445,934、5,532,128、5，556，752、5,242,974、5,384,261、5,405,783、5,412,087、5,424,186、5,429,807、5,436,327、5,472,672、5,527,681、5,529,756、5,545,531、5,554,501、5,561,071、5,571,639、5,593,839、5,599,695、5,624,711、5,658,734和5,700,637。最受歡迎的用于對PCR結(jié)，行定量的的檢測方法是Ct(循環(huán)閾值)測定，其中Ct被定義為熒光^t皿固定臨界值的循環(huán)數(shù)。根據(jù)用于確定Ct的算法的公知程序這很容易確定，該,被^A大多數(shù)PCR分析儀的軟件內(nèi)。一個這樣的實例體現(xiàn)為Cepheid公司的SmartCyclerPCR儀，其為優(yōu)選的分析平臺。微陣列技術允許測定基因的穩(wěn)態(tài)mRNA水平。這些分析的結(jié)果通常^接收自用于檢測從樣品制備的目標序列的探針組信號弓M^進行的測定，該探針組在微陣列的已知位置與核,列雜交。通常，該信號5M與制備的目標物的量成比例，并且因此其也與樣品細胞內(nèi)^ii的mRNA量成比例。許多這樣的脈是可獲得的并且是有用的。在美國專利6,271,002、6,218,122、6，218，114、和6,004，755中可以找到確定基因表達的,方法?？梢酝ㄟ^比較微陣列的信號強度來進行基因表達水平的分析。通過生成測試樣品內(nèi)基因表達強m對照樣品內(nèi)的那些基因表達強度的比值矩陣來完成這種分析。例如，病變組織的基因,5M可以與產(chǎn)生自相同類型的良性或正常組織的基因表達強度相比。這些表達強度的比例^測試樣品和對照樣品之間基因表達的倍數(shù)變化。本發(fā)明還包括，方法，在，方法中利用模式識別方法進行,模式的比較?？梢愿鶕?jù)雜交的微陣列探針的測定強度的倍數(shù)變化區(qū)分上調(diào)和下調(diào)水平。優(yōu)選1.5倍的差異用于作出這種區(qū)分(或者p值小于0.05)。也就是，在說某個基因在病變與正常細胞內(nèi)^ii不同之前，應發(fā)現(xiàn)病胞比正常細胞產(chǎn)生至少多于約1.5倍或少于1.5倍的強度。倍數(shù)差異越大，越ttii^ffi該基因作為一種診斷或預后工具。選擇用于本發(fā)明組合的基因具有能弓l起信號產(chǎn)生的表達水平，禾擁臨床實驗室儀器該信號以皿背景的量可區(qū)分于正常或未調(diào)節(jié)基因的那些信號。本發(fā)明包括用于實施這里提供的方法的微陣列或基因芯片。微陣列可以包含分離的核,列、它們的補體、或其對應于標記物的部分，在該部分的結(jié)合足以表征生物樣品內(nèi)胃癌或復發(fā)風險。微陣列，測定或定性至少約1.5倍的過度^足^ii,JK共統(tǒng)計上有顯著意義p值的皿^^達，或p值小于0.05。ifci^地，微陣列包含cDNA陣列g核苷酸陣列并且可以包含一個或多個內(nèi)對照試劑。相對于那些沒有轉(zhuǎn)移情況的淋巴結(jié)，具有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中基因標記物有差別iiy:調(diào)表達。上調(diào)為一個相對性術語，意,相對于一些基線在基因的表達量中發(fā)現(xiàn)可檢測的差異(超過用于測定其的系統(tǒng)內(nèi)的噪音貢獻)。在這種情況下，基線是沒有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)內(nèi)標記物的測定的基因表達。然后利用相同的測定方法測試淋巴結(jié)樣品內(nèi)感興趣的基因相對于基線水平或上調(diào)或不變。診斷或予鵬包括疾病/狀態(tài)問題的確定，例如確定復發(fā)的可能性以及治療類型。確定錢的可能性包括該模式與已知錢禾n/或已知未錢情況相關的模式比較，或與艦用于這種區(qū)分而設定的截斷值(在PCR的情況下通常為Ct)比較。在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明的標記物組合可以與其它基于基因的標記物以及在癌癥診斷、預后、或治療監(jiān)測中有用的非基因性診斷方法結(jié)合使用。例如，在一些瞎況下，將基于上述基因表達的方法的診斷能力與來自傳統(tǒng)^i己物例如血清蛋白標記物(例如，癌抗原27.29("27.29"))的相結(jié)合是有益的。當其它方法產(chǎn)生模糊結(jié)果時該方法尤其有用。本發(fā)明包括通過獲取患者的生物樣品產(chǎn)生胃癌診斷患者報告的方法以及由此獲取的報告；檢測樣品的基因表達；并且利用由此獲得的結(jié)果產(chǎn)生報告。該報告還可以包含患者的結(jié)果ifi胡卩/或相對于患者群體的危險概率。本發(fā)明包括包含對應于^iB物的娜車列探針組或PCR引物/探針組的組合物。依據(jù)本發(fā)明的制品還包括用于揭示基因表達信息的介質(zhì)鵬式化分析法。這些可包括，例如，微陣列，其中互補序列或探針被固定到基質(zhì)上，感興趣基因的指示序列結(jié)合到所述基質(zhì)上產(chǎn)生確定它們存在的可讀確定物。^#依據(jù)本發(fā)明的制品可以制成試劑診斷飾于進行雜交、擴增、以及用于檢測癌癥的興趣基因表ii^平的信號生成指示。依據(jù)本發(fā)明的試劑盒包括格式化的分析。這些可包括進行該分析需要的所有或部分材料，例如試劑和說明以^il31其分析核,列、它們的互補序列、或其部分的介質(zhì)。當要以另一種形式進摘分析時，試劑盒將具有那個形式特有的組分。例如，如果該形式為擴增形式例如PCR、滾環(huán)擴增方法(RCA)、連接,式反應方法(LCR)、^ES換擴增方法(SDA)、基于核,列的擴增方法(NASBA),然后試劑盒將包含適于這種技術的試齊IJ和材料。任艦，試劑盒包括樣品制備試劑和/或用于從組織例如淋巴結(jié)組織提取核酸的制品(例如，管)。試劑盒還可以包括最小化樣品污染風險的制品(例如，一次性手術刀和用于淋巴結(jié)切割和制備的表面)。在i^試劑盒中，單管QRT-PCRai呈必需的試劑包括例如逆轉(zhuǎn)錄酶、逆轉(zhuǎn)錄酶引物、相應的pcr引物對(用于i^Ha物和，im地，對照物)、熱穩(wěn)定DNA聚合酶，例如Taq聚合酶,以及魏的檢測試劑,例如,沒有限制地,scorpion探針、用于熒光5、核酸齢析的探針、肝標志探針、單染料弓嫩或針對雙鏈DNA的熒光染料，例如溴化乙錠。引Wfc選為產(chǎn)生高濃度的量。熱穩(wěn)定DNA聚合酶很普通并且可從各制造商那里商購到。試劑盒內(nèi)的其^&t才料可以包括合適的反應管或瓶、隔離組分例如石蠟小球，任選包括鎂；用于逆轉(zhuǎn)錄酶的反應混，(通常為10X的)和PCR階段，包括必需的緩沖液和試劑例如dNTP;不含核酸喊RNA酶的水；RNA柳制劑；對照核酸和/或ttM附加緩沖液、化糊、輔助因子、離子組分、蛋白和酶、聚糊等，其可以用于逆録中和/或QRT-PCR反應的PCR階段。條地，該試劑盒包括核^JI取試齊卿材料。提供下列實施例以說明但不限制要求保護的發(fā)明。本文所弓l用的全部參考文獻在此引入作為參考。實施例1該實施例基于采用實時PCR。在實時PCR中，在PCR的指數(shù)期^l呈中實時監(jiān)測聚合^^;反應的產(chǎn)物而不是終點檢測。因此，DNA和RNA的量化更加精確并且是可重現(xiàn)的。在旨循環(huán)過程中記錄熒光,^^在擴增反應中的那個點的擴增產(chǎn)物量。在反應開始出現(xiàn)的模板越多，至噠其中首次記錄的熒光信號在統(tǒng)計學上顯著高于背景的點花費的循環(huán)l^少，這是(CO值的定義。循環(huán)臨界值(Ct)的觀點允許利用基于RT-PCR的熒光的精確性和可重現(xiàn)性定量。PCR產(chǎn)物的勻漿化檢測,基于(a)雙鏈DNA結(jié)合染料(例如，SYBRGreen)，(b)熒光探針(例如，TaqManprobes,MolecularBeacons),和(c)直接標記引物(例如，Amplifluor引物)進行。從診斷為胃癌的患者得至U總共24個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的H&E和18個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的H&E。淋巴結(jié),為那些從胃部引出的。從^^淋巴結(jié)切取30mg的組織塊。按照以下,^^淋巴結(jié)組織的30mg塊U每組織塊加到2ml緩沖液RLT中并利用一次性組織研磨辭工勻漿20一40秒。2.itai渦旋在4.5ml的管中將400"1組織勻漿與400u170%的乙醇混合10秒。3.對于敏樣品，在多真空裝置上附加一個真空閥，并且在每個閥上附加—t次性真空接頭。4.將小柱子附加至慎空接頭上，蓋子打開。5.把700"由步驟2所得的組織勻M/乙醇混糊辦量加入到RNASpin払6.將真空閥轉(zhuǎn)到打開位置并施加真空(800-1200毫巴)直至孵品被過濾(大約30秒)。7.停止真空；加700u1洗脫緩沖液1至IJ柱子。開始真空并允許溶^131柱子過濾。停止真空。8.加700"1洗脫緩沖液2至lj柱子。開始真空并允許溶^M^柱子過濾。停止真空。9.從多頭抽真空裝置移去每個柱子并放置在2ml收集管(與柱子一起提供)內(nèi)。IO在鵬離心機中以>10,000RPM離心30秒。11.丟棄收集管。將柱子方i(A—個新的干凈收集管內(nèi)(1.5ml聚丙烯微離心管)。12.直接將50u1不含RNA酶的7X加到柱子的過濾膜上。13.在1tM離心機中以〉IO，OOORPM離心包含RNASpin柱的管30秒。R在繼續(xù)到步驟14之前，確保收集管己經(jīng)以這樣的方式被^H3過即可以識別來源標本(例如患者ID&淋巴結(jié)ID)。15.丟棄柱子。離心管內(nèi)會容納大約50"1洗脫的RNA溶液。提取的RNA在CepheidSmartCyclern內(nèi)進行一步RT-PCR擴增。反應包含下列組分50mMN-二甘氨,OH,pH8,2,115mM醋酸鉀，8%體粉體積甘油，0.2mg/ml牛血清白蛋白(BSA)，150mM海藻糖，0.2%#|R/#Pi溫20，0.2mMTris-ClpH8，3.5mM硫^f孟或錳(乙酸)，0.3mMdATP,0.3mMdCTP，0，3mMdGTP，0.3mMTTP，100U/mlTth,20ug/m抗體TP6-25.3，每個探針和引物0.4力.8uM。設計探針和引物序列使得最小化非特異性引物事件并且使得它們適合利用下列快速RT-PCR獻的多fiT增/檢測95°C3秒，60。C3射中，然后32個循環(huán)95'C3秒、65'C6秒*和72匸3秒一總擴增時間等于1佛該例中使用的引物和探針如下MUC2:上游引物ATGAACTACGCTCCTGGCTT(SEQIDNO::'i:NM_0<)2457)下游引物AAACTCTCTGGGCACATTGTC(犯QIDNO:J_:NMJ02457)探針FAM-CGTGAAGACCTGCGGCTGTGT-BHQ1.TT(SEQIDNO:J_:NM_002457)CEA:上游引物ACCACAGTCACGACGATCACA卿IDNO:丄M17303)下游引物CGGGGTTGGAGTTGTTGCT(SEQIDNO:」!:Ml7303)探針:TexasRed.CTATGCAGAGCCACCCAAACCCTT-BHQ2-TT(SEQIDNO::M17303)CK19:上游引物CACCCTTCAGGGTCTTGAGATT(SEQIDNO:UJ下游引物TCCGTTTCTGCCAGTGTGTC(SEQIDNO::U)探針5'Quasar570d(ACAGCTGAGCATGAAAGCTGCCIT)'BHQ-2-TT)3'(SEQIDNO:11)PBGD:引物1CTGCTTCGCTGCATCGCTGAAA(SEQIDNO:J4J引物2CAGACTCCTCCAGTCAGGTACA(SEQIDNO:H)探針-FAM-CCTGAGGCACCTGGAAGGAGGCTGCAGTGT.TAMRA(SEQIDNO:HJ樣品和i微結(jié)果總結(jié)在表l中。所得Ct,于確定M^有測，品基因的相對駄。用于標記物粒的Ct錢27并且內(nèi)對照(pbgd)粒的a35o具有3個標記物中的樹可一個Ct為27或更低的樣品將被認為是轉(zhuǎn)移陽性，但是具有3個標記物中的任何一個為27以上Ct值的樣品將被視為是轉(zhuǎn)移陰性。由于為了使陰性診斷結(jié)果有效內(nèi)對照的Ct值需低于35。基于這些截斷值，i^ffl于正確評估了18個陰性淋巴結(jié)中的17個(特異性94.4%)以及所有24個陽性淋巴結(jié)(靈敏變100%)。表l.具有胃腺癌的患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移檢測<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權利要求1.一種診斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，包括以下步驟a)從患者獲得生物學樣品，和b)檢測樣品中的標記物水平；其中高于預定截斷水平的水平表明胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。2、根據(jù)權利要求1的方法，其中標記物是基因、基因片段、或其補體。3、根據(jù)權利要求1的方法，其中標記物是蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段、或多肽。4、權利要求1的方法，進一步包括糊另一種診斷方法。5、權利要求4的方法，其中另一診斷方鄉(xiāng)!^行血清分析。6、權利要求1的方法，進一步包括,性表iiS因的測定。7、權利要求l的方法，具有至少80%的鵬性。8、權利要求l的方法，具有至少70%的特異性。9、權利要求1的方法，其中樣品包括淋巴結(jié)組織。10、一種確定或調(diào),于胃癌患者的治療方法的方法，包括以下步驟-a、從胃癌患者獲得生物學樣品，和b、測定樣品中的標記物水平；其中髙于或低于截斷水平的水平與疾病，或身皿況相一致，據(jù)此確定或調(diào)整治療方法。11、根據(jù)權利要求10的方法，其中I^B物是基因、基因片段、鄉(xiāng)補體。12、根據(jù)權利要求10的方法，其中^iB物是蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段、或多肽。13、權利要求10的方法，進一步包括^t性^iiS因的測定。14、權利要求10的方法，其中特異'膽少是70%。15、權利要求10的方法，其中敏感，少約為80%。16、釆用微陣列實施的權利要求1的方法。17、釆用微陣列實施的權利要求10的方法。18、使用擴增方法實施的權利要求1的方法。19、根據(jù)權利要求18的方法，其中擴增方法是PCR。20、根據(jù)權利要求19的方法，其中PCR是RT-PCR。21、使用擴增方法實施的權利要求10的方法。22、一種用以實施化驗以確定生物學樣品中的胃癌診斷的試劑盒，包括用來檢測標記物的材料。23、權利要求22的試劑盒，包括微陣列和試劑。24、權利要求22的試劑盒，包括PCR試劑。25、權利要求22的試劑盒，包括說明書。26、權利要求22的試劑盒，其中t疏物由CEA、MUC2和CK一19組成。27、一種診斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，包括以下步驟a)從患者獲得生物學樣品，和b)測定樣品中的標記物水平；其中高于預定截斷水平的7K平表明胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并且其中標記物由CEA、MUC2、禾卩CK-19艦。28、權利要求27的方法，進一步包括，另一種診斷方法。29、權利要求27的方法，其中另一診斷方魏括進行血淸分析。30、權利要求27的方法，進一步包括,性^iiS因的測定。31、權利要求27的方法，具有至少80%的,性。32、權利要求27的方法，具有至少70%的特異性。全文摘要本發(fā)明涉及一種診斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法、組分和制品，其對陰性淋巴結(jié)和具有胃癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)進行區(qū)分，檢測組織樣品以確定胃癌階段性狀態(tài)。文檔編號G01N33/68GK101236193SQ20071012828公開日2008年8月6日申請日期2007年6月5日優(yōu)先權日2006年6月5日發(fā)明者G·格林,J·瓊斯,M·徐,S·W·曹申請人:維里德克斯有限責任公司