專(zhuān)利名稱(chēng)：：根據(jù)gdf-15評(píng)價(jià)心臟介入風(fēng)險(xiǎn)的工具與方法根據(jù)GDF-15評(píng)價(jià)心臟介入風(fēng)險(xiǎn)的工具與方法本發(fā)明涉及基于對(duì)需要心臟介入的受治療者樣品中生長(zhǎng)分化因子-15(GDF-15)的測(cè)定，從而鑒定對(duì)心臟介入敏感的受治療者的方法。此外，本發(fā)明涉及基于對(duì)患有心血管并發(fā)癥的受治療者樣品中的GDF-15和利尿鈉肽(natriureticpeptide)和/或心肌釣蛋白(cardiacTroponin)的測(cè)定，從而預(yù)測(cè)所述受治療者的死亡或急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還包括用于實(shí)施上述方法的裝置和試劑盒。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的目的是提供個(gè)性化或個(gè)體化的治療方案。這是考慮患者個(gè)人需求或風(fēng)險(xiǎn)的治療方案。個(gè)性化或個(gè)體化治療方案還應(yīng)當(dāng)考慮緊急措施。尤其是在急性心血管事件的情況下，常常要在短時(shí)間內(nèi)確定某種治療方案。在西半球，心血管并發(fā)癥，特別是心臟病，是發(fā)病率和死亡率的主要原因。心血管并發(fā)癥可長(zhǎng)時(shí)間保持無(wú)癥狀狀態(tài)。然而，急性心血管事件，例如作為心血管并發(fā)癥病因的心肌梗死一旦發(fā)生，就可能帶來(lái)嚴(yán)重后果。心血管并發(fā)癥的常規(guī)診斷技術(shù)包括心電描記法測(cè)量和超聲心動(dòng)描記法測(cè)量、癥狀分析和患者之前的病史(例如胸痛)和一些臨床參數(shù)分析。近來(lái)，這些常規(guī)技術(shù)通過(guò)生物標(biāo)記分析，特別是通過(guò)急診患者血樣中心肌4丐蛋白的水平分析而被進(jìn)一步加強(qiáng)。此外，利尿鈉肽還被描述為診斷心血管并發(fā)癥的合適的生物標(biāo)記。最近，有研究提出GDF-15也是心血管并發(fā)癥的標(biāo)志(US2003/0232385;Kempf2006，CircRes98:351-360)。生長(zhǎng)分化因子-15(GDF-15)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-(3細(xì)胞因子超家族的一個(gè)成員。GDF-15最初被鑒定為巨噬細(xì)胞抑制性細(xì)胞因子-1(macrophage畫(huà)inhibitorycytokine-1，MIC-1)，稍后還4皮命名為胎盤(pán)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-卩(Bootcov1997,ProcNatlAcadSci94:11514-11519;Tan2000，ProcNatlAcadSci97:109-114)。最近的研究表明，當(dāng)經(jīng)歷模擬缺血和再灌注時(shí)，培養(yǎng)的心肌細(xì)胞通過(guò)一氧化氮和亞硝化應(yīng)激依賴(lài)性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑表達(dá)和分泌GDF-15。此外，在心肌缺血和再灌注損傷的小鼠模型中，還觀(guān)察到在冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后的缺血區(qū)域GDF-15表達(dá)水平快速升高，并在再灌注的心肌中保持升高達(dá)數(shù)天(Kempf，出處同上)。常規(guī)診斷技術(shù)，尤其對(duì)于急診情況，常常不能提供可靠的診斷和/或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。因此，基于所述診斷技術(shù)，無(wú)法以足夠的精確性來(lái)確定個(gè)性化治療方案。結(jié)果，許多患者將接受不適當(dāng)或者可能具有毒副作用的治療方案。在許多情況下，急性心血管事件一旦經(jīng)上述提及的常規(guī)診斷技術(shù)和/或通過(guò)患者的肌鉀蛋白水平確定后，目前都通過(guò)心臟介入進(jìn)行治療。這些心臟介入包括為了恢復(fù)例如冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)適當(dāng)血流量而實(shí)施的不同類(lèi)型的基于血管成形術(shù)的介入和/或冠狀動(dòng)脈分流術(shù)。然而，這些介入不總是成功的，甚至還可能對(duì)患者有害。另外，所述介入耗費(fèi)時(shí)間且成本昂貴。至于對(duì)心力衰竭患者的介入，例如藥物療法(例如用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張素受體阻滯藥、(3-阻滯藥或醛甾酮拮抗藥治療)和介入療法(例如心臟再同步療法(cardiacresynchronisationtherapy,CRT)或植入型心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器(implantablecardioverter-defibrillator,ICD)法)，現(xiàn)有風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)技術(shù)也產(chǎn)生同樣的困難和不足。因此，對(duì)于被認(rèn)為需要某些治療方案(例如心臟介入)的患者而言，需要可供個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)分層(individualriskstratification)的診斷或預(yù)后方法。此外，還需要可靠的綜合風(fēng)險(xiǎn)分層(generalriskstratification),其中包括患有心血管并發(fā)癥的患者、尤其是出現(xiàn)急性心血管事件或心力衰竭的患者的死亡或復(fù)發(fā)性不良心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。作為本發(fā)明基礎(chǔ)的技術(shù)問(wèn)題可被視為提供用于順應(yīng)上述需求的工具(means)和方法。該技術(shù)問(wèn)題通過(guò)所附權(quán)利要求書(shū)和下文中所表征的實(shí)施方案而得到解決。因此，本發(fā)明涉及鑒定對(duì)心臟介入:l文感的受治療者的方法，該方法包括a)測(cè)定需要心臟介入的受治療者樣品中GDF-15的量；和b)將步驟a)測(cè)定的GDF-15的量與參比量進(jìn)行比較，從而鑒定出對(duì)'"、臟介入敏感的受治療者。優(yōu)選本發(fā)明的方法為體外方法。此外，除了上述明確提及的步驟外，它還可包括其它步驟。例如，其它步驟可涉及樣品預(yù)處理或?qū)νㄟ^(guò)該方法得到的結(jié)果的評(píng)價(jià)。本發(fā)明的方法還可用于對(duì)需要心臟介入的受治療者進(jìn)行監(jiān)測(cè)、確診和細(xì)分。該方法可手工進(jìn)行或輔以自動(dòng)操作。優(yōu)選步驟(a)和/或步驟(b)可以整個(gè)或部分輔以自動(dòng)操作，例如，通過(guò)合適的自動(dòng)化設(shè)備和傳感設(shè)備在步驟(a)中進(jìn)行測(cè)定，或者在步驟(b)中計(jì)算機(jī)執(zhí)行的比較。本文所用術(shù)語(yǔ)"鑒定"是指評(píng)價(jià)受治療者是否對(duì)心臟介入敏感。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解的一樣，這種評(píng)價(jià)通常不是對(duì)于所有(即100。/。)待鑒定的受治療者都是正確的。然而，該術(shù)語(yǔ)要求，可以鑒定出有統(tǒng)計(jì)顯著性的部分受治療者(例如群組研究中的群組)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以應(yīng)用各種眾所周知的統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)工具而無(wú)需再費(fèi)周折，^便可確定某一部分是否是有統(tǒng)計(jì)顯著性，統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)工具例如測(cè)定置信區(qū)間、P值測(cè)定、斯圖登t檢驗(yàn)(Student'st-test)、曼恩-惠特尼檢驗(yàn)(Mann-Whitneytest)等。有關(guān)細(xì)節(jié)參見(jiàn)Dowdy和Wearden，StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983。優(yōu)選的置信區(qū)間為至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。P值優(yōu)選為0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。更優(yōu)選可通過(guò)本發(fā)明的方法正確地鑒定出群體中受治療者的至少60%、至少70%、至少80%或至少90°/。。本文所用術(shù)語(yǔ)"受治療者"是指動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。然而，根據(jù)本發(fā)明上述方法預(yù)期，受治療者應(yīng)為"需要心臟介入"，即表現(xiàn)出已知與胸部不適、呼吸困難、ECG改變和上述其它癥狀等急性心血管事件有關(guān)的癥狀和/或體征。更優(yōu)選受治療者在之前24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)一次或多次持續(xù)至少5分鐘的心絞痛發(fā)作，并且心月幾釣蛋白T或I檢測(cè)呈陽(yáng)性，或者已知不是以前存在的且不歸咎于共存疾病的至少0-5mm短暫性或持續(xù)性ST段壓低。任選但盡管如此仍?xún)?yōu)選受治療者應(yīng)表現(xiàn)出靜止時(shí)缺血癥狀加重或發(fā)生，或者最后一次發(fā)作在之前48小時(shí)內(nèi)的疑似急性心肌梗死得到證實(shí)。通過(guò)心電描記法(ST壓低=0-1mV或T波倒置=01mV)或者通過(guò)生化標(biāo)記(肌酸激酶[CK]-MB>6(ig/L、肌4丐蛋白T>0.01ng/ml、肌鈣蛋白T定性檢測(cè)陽(yáng)性或CK、CK-B或CKMB的催化活性比心肌梗死當(dāng)?shù)卦\斷局卩艮值高)升高來(lái)證實(shí)心肌缺血。急性心血管事件優(yōu)選為急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)。ACS患者可出現(xiàn)不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)或心肌梗死(MI)。MI可以是ST抬高M(jìn)I(STEMI)或非ST抬高M(jìn)I(NSTEMI)。ACS發(fā)生后可能發(fā)生左心室功能障礙(LVD)和心力衰竭癥狀。術(shù)語(yǔ)"心臟介入"包括了那些包括通過(guò)手術(shù)、顯微手術(shù)或影響心血管系統(tǒng)、優(yōu)選心臟的其它侵入療法介入的治療方案。優(yōu)選本文所用的心臟介入是目的在于恢復(fù)心臟適當(dāng)供氧的治療方案。優(yōu)選通過(guò)恢復(fù)支持心臟的整個(gè)血管(即冠狀血管)的血流量來(lái)實(shí)現(xiàn)。這些血管可能由于例如血栓形成或動(dòng)脈粥樣硬化斑而受損。因此，心臟介入優(yōu)選應(yīng)包括破壞和/或去除這類(lèi)斑塊，必要時(shí)修復(fù)血管。優(yōu)選的本發(fā)明的心臟介入選自經(jīng)皮冠狀血管成形術(shù)、經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀球嚢血管成形術(shù)(percutaneoustransluminalcoronaryballoonangioplasty)、激光血管成形術(shù)、冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)、旁路植入術(shù)(bypassimplantation)或管月空內(nèi)技術(shù)，目的在于恢復(fù)血流量、血管開(kāi)通(vesselpatency)、穩(wěn)定斑塊和/或減少冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓負(fù)載(thrombusload)。術(shù)語(yǔ)"樣品"是指體液樣品、分離細(xì)胞樣品或者組織或器官樣品。體液樣品可通過(guò)眾所周知的技術(shù)獲得，優(yōu)選包括血液、血漿、血清或尿液樣品，更優(yōu)選血液、血漿或血清樣品。組織或器官樣品可通過(guò)例如活組織檢查由任何組織或器官獲得。分離細(xì)胞可通過(guò)離心或細(xì)胞分選等分離技術(shù)由體液或者組織或器官獲得。優(yōu)選細(xì)胞樣品、組織樣品或器官樣品得自表達(dá)或產(chǎn)生本文所述肽的細(xì)胞、組織或器官。術(shù)語(yǔ)"生長(zhǎng)分化因子-15"或"GDF-15"是指作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-(3細(xì)胞因子超家族成員的多肽。術(shù)語(yǔ)多肽、肽和蛋白質(zhì)在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中可互換使用。GDF-15最初作為巨噬細(xì)胞抑制性細(xì)胞因子-1被克隆出來(lái)，稍后還被鑒定為胎盤(pán)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-P、胎盤(pán)骨形態(tài)發(fā)生蛋白、非類(lèi)固醇抗炎藥活化基因-1和前列腺衍生因子(Bootcov，出處同上；Hromas，1997BiochimBiophysActa1354:40-44;Lawton1997，Gene203:17-26;Yokoyama-Kobayashi1997，JBiochem(Tokyo),122:622-626;Paralkar1998，JBiolChem273:13760-13767)。與其它TGF-P相關(guān)細(xì)胞因子類(lèi)似，GDF-15合成成為經(jīng)歷二硫鍵連接的同二聚化的無(wú)活性的前體蛋白。當(dāng)N端肽原(pro-peptide)被蛋白酶剪切時(shí)，GDF-15分泌為~28kDa的二聚蛋白(Bauskin2000,EmboJ19:2212-2220)。GDF-15的氨基酸序列公開(kāi)于WO99/06445;WO00/70051;WO2005/113585;Bottner1999，Gene237:105-111;Bootcov,出處同上；Tan，出處同上；Baek2001，MolPharmacol59:901-908;Hromas,出處同上；Paralkar,出處同上，Morrish1996,Placenta17:431_441或Yokoyama-Kobayashi，出處同上。本文所用的GDF-15還包括上述特異性GDF-15多肽的變體。這類(lèi)變體具有至少與特異性GDF-15多肽相同的重要生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)。特別是如果它們通過(guò)說(shuō)明書(shū)中所述相同的特異性測(cè)定法可檢出時(shí)，則它們共享相同的重要生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)，所述方法例如ELISA測(cè)定法，采用特異性識(shí)別所述GDF-15多肽的多克隆抗體或單克隆抗體。優(yōu)選的測(cè)定法參見(jiàn)隨附的實(shí)施例。此外，需要了解的是，本發(fā)明中所述變體具有由于至少一個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加而有所不同的^JJ^列，其中變體的氨基酸序列與特異性GDF-15多肽的氨基酸序列優(yōu)選仍有至少50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或99%同一性。兩個(gè)氨基S吏序列之間的同一性程度可以通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知12的算法確定。優(yōu)選同一性程度通過(guò)比較窗(comparisonwindow)內(nèi)的兩個(gè)最佳比對(duì)序列的比較來(lái)確定，其中對(duì)于最佳比對(duì)，與參比序列(其不包括添加或缺失)相比時(shí)，比較窗內(nèi)tt酸序列的片段可包括添加或缺失(例如空位或突出端)。其百分比的計(jì)算如下通過(guò)測(cè)定兩條序列上出現(xiàn)相同氨基酸殘基的位置數(shù)以得到匹配的位置數(shù)，將匹配的位置數(shù)除以比較窗內(nèi)總的位置數(shù)，所得結(jié)果再乘以100，得到序列同一性的百分比。用于比較的序列可應(yīng)用以下方法進(jìn)行最佳比對(duì)局部同源性算法(Smith和WatermanAdd.APL.Math.2:482(1981))、同源性比對(duì)算法(Needleman和WunschJ.Mol.Biol.48:443(1970))、檢索相似性方法(Pearson和LipmanProc.Natl.AcadSci.(USA)85:2444(1988))、這些算法的計(jì)算機(jī)化執(zhí)行(GAP、BESTFIT、BLAST、PASTA以及TFASTA(WisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup(GCG)，575ScienceDr.，Madison,WI)或通過(guò)目觀(guān)U。假如已鑒定出兩個(gè)序列用于比較，則優(yōu)選采用GAP和BESTFIT以確定其最佳比對(duì)，進(jìn)而確定同一性程度。優(yōu)選使用空位權(quán)重(gapweight)默認(rèn)值5.00和空位權(quán)重長(zhǎng)度(gapweightlength)默認(rèn)值0.30。上述變體可以是等位基因變體或任何其它物種特定的同源物(homolog),即共生同源物(paralog)或直向同源物(ortholog)。此外，本文所述的變體包括特異性GDF-15多肽的片段或上述類(lèi)型的變體，只要這些片段具有上述重要的免疫學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)。這類(lèi)片段可為例如GDF-15多肽的降解產(chǎn)物。還包括由于翻譯后修飾(例如磷酸化或十四烷基化)而有所不同的變體。測(cè)定GDF-15或任何其它本說(shuō)明書(shū)所述的肽或多肽的量是指測(cè)定量或濃度，優(yōu)選半定量或定量測(cè)定。測(cè)定可以直接或間接進(jìn)行。直接測(cè)定是指基于從肽或多肽本身獲得的信號(hào)及與樣品中存在的肽的分子數(shù)直接相關(guān)的強(qiáng)度來(lái)測(cè)定肽或多肽的量或濃度。這種信號(hào)-有時(shí)本文稱(chēng)為強(qiáng)度信號(hào)-可以通過(guò)例如測(cè)定肽或多肽具體的物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度值而獲得。間接測(cè)定包括測(cè)定獲自第二成分(即不是肽或多肽本身的成分)或生物讀出系統(tǒng)(例如可測(cè)量的細(xì)胞反應(yīng)、配體、標(biāo)記或酶促反應(yīng)產(chǎn)物)的信號(hào)。根據(jù)本發(fā)明，測(cè)定肽或多肽的量可通過(guò)測(cè)定樣品中肽的量的所有已知手段實(shí)現(xiàn)。所述手段包括以各種夾心、竟?fàn)幓蚱渌鼫y(cè)定方式利用已標(biāo)記分子的免疫測(cè)定裝置和方法。所述測(cè)定法將放大表示肽或多肽存在與否的信號(hào)。此外，優(yōu)選信號(hào)強(qiáng)度可直接或間接地與樣品中存在的多肽的量相關(guān)(例如成反比)。其它合適的方法包括測(cè)定對(duì)肽或多肽是特異性的物理或化學(xué)性質(zhì)，例如其精確的分子量或NMR譜。所述方法優(yōu)選包括生物傳感器，即與免疫測(cè)定法、生物芯片、分析裝置(例如質(zhì)譜儀、NMR分析儀或色語(yǔ)儀)連接的光學(xué)儀器。此外，所述方法還包括基于微量培養(yǎng)板的ELISA法、全自動(dòng)或機(jī)器人免疫測(cè)定法(可用例如ElecsysTM分析儀)、CBA(酶促鈷結(jié)合測(cè)定法(enzymatic￡obalt旦inding^ssay),可用例如Roche-Hitachr分析儀)和乳膠凝聚測(cè)定法(可用例如Roche-HitachiTM分析儀)。優(yōu)選測(cè)定肽或多肽的量包括以下步驟(a)使能夠引起細(xì)胞反應(yīng)且其強(qiáng)度表示肽或多肽的量的細(xì)胞與所述肽或多肽接觸足夠的一段時(shí)間，(b)測(cè)定細(xì)胞反應(yīng)。對(duì)于測(cè)定細(xì)胞反應(yīng)，優(yōu)選將樣品或處理樣品加到細(xì)胞培養(yǎng)物中后，測(cè)定內(nèi)部或外部細(xì)胞反應(yīng)。細(xì)胞反應(yīng)可包括可測(cè)量的報(bào)道基因的表達(dá)或分泌的肽、多肽或小分子等物質(zhì)。所述表達(dá)或物質(zhì)將產(chǎn)生與肽或多肽的量相關(guān)的強(qiáng)度信號(hào)。同樣優(yōu)選測(cè)定肽或多肽的量包括測(cè)定從樣品的肽或多肽中獲得的特異性強(qiáng)度信號(hào)的步驟。如上所述，這類(lèi)信號(hào)可以是在質(zhì)譜或NMR語(yǔ)中觀(guān)察到的，對(duì)于肽或多肽是特異性的，以m/z變量表示的信號(hào)強(qiáng)度。優(yōu)選測(cè)定肽或多肽的量可包括以下步驟(a)使肽與特異性配體接觸，(b)(任選)除去未結(jié)合的配體，(c)測(cè)定結(jié)合配體的量。結(jié)合配體將產(chǎn)生強(qiáng)度信號(hào)。本發(fā)明的結(jié)合包括共價(jià)結(jié)合和非共價(jià)結(jié)合兩者。本發(fā)明的配體可以是與本文所述肽或多肽結(jié)合的任何化合物，例如肽、多肽、核酸或小分子。優(yōu)選的配體包括抗體、核酸、肽或多肽，例如肽或多肽及其含有肽結(jié)合域的片段的受體或結(jié)合配偶體(bindingpartner)以及適體，例如核酸適體或肽適體。這類(lèi)配體的制備方法是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，合適抗體或適體的鑒定和生產(chǎn)也可以由供應(yīng)商提-洪。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉開(kāi)發(fā)具有較高親和力或特異性的這類(lèi)配體的衍生物的方法。例如，可將隨機(jī)突變引入到核酸、肽或多肽中。然后按照本領(lǐng)域已知篩選方法(例如噬菌體展示)，測(cè)定這些衍生物的結(jié)合。本文所述抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體及其片R,例如能夠結(jié)合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。本發(fā)明還包括單鏈抗體和人源化雜合抗體，該人源化雜合抗體中具有所需抗原特異性的非人供體抗體的氨基酸序列與人接納體抗體的序列結(jié)合。供體序列通?？砂ㄖ辽俟w的結(jié)合抗原的氨基酸殘基，但也可包括供體抗體的其它結(jié)構(gòu)上和/或功能上有關(guān)的氨基酸殘基?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域眾所周知的若干方法制備這種雜合抗體。優(yōu)選配體或結(jié)合劑(agent)與肽或多肽特異性結(jié)合。本發(fā)明的特異性結(jié)合是指配體或結(jié)合劑基本上不會(huì)與待分析樣品中存在的其它肽、多肽或物質(zhì)結(jié)合(與之發(fā)生"交叉反應(yīng)")。優(yōu)選特異性結(jié)合的肽或多肽比起其它任何相關(guān)的肽或多肽，其親和力高至少3倍，更優(yōu)選高至少10倍，甚至更優(yōu)選高至少50倍。非特異性結(jié)合如果根據(jù)例如其在蛋白質(zhì)印跡中的大小或通過(guò)其在樣品中的相對(duì)豐度，仍然能夠被明確地區(qū)分開(kāi)并且測(cè)定出來(lái)，則也是可接受的。可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法測(cè)定配體的結(jié)合。優(yōu)選所述方法是半定量的或是定量的。合適的方法如下。首先，可以直接測(cè)定配體的結(jié)合，例如通過(guò)NMR或表面等離子共振。其次，如果配體還用作目標(biāo)肽或目標(biāo)多肽的酶活性的底物，則可以測(cè)定酶促反應(yīng)產(chǎn)物(例如可以通過(guò)測(cè)定例如蛋白質(zhì)印跡中裂解底物的量來(lái)測(cè)定蛋白酶的量)。或者，配體本身可具有酶的性質(zhì)，可使"配體/肽或多肽"復(fù)合物或分別結(jié)合了肽或多肽的配體與通過(guò)產(chǎn)生強(qiáng)度信號(hào)供檢測(cè)的合適底物接觸。至于測(cè)定酶促反應(yīng)產(chǎn)物，優(yōu)選底物的量是15飽和的。還可以在反應(yīng)之前用可檢測(cè)標(biāo)記對(duì)底物進(jìn)行標(biāo)記。優(yōu)選使樣品與底物接觸足夠的一段時(shí)間。足夠的一段時(shí)間是指待產(chǎn)生的產(chǎn)物的量可^:出、優(yōu)選可測(cè)量出的所必需的時(shí)間。除了測(cè)定產(chǎn)物的量以外，還可測(cè)量產(chǎn)物的指定(例如可檢出)量出現(xiàn)時(shí)所必需的時(shí)間。第三，配體可與供檢測(cè)和測(cè)量配體的標(biāo)記共價(jià)或非共價(jià)偶聯(lián)?？赏ㄟ^(guò)直接法或間接法進(jìn)4于標(biāo)記。直接標(biāo)記法包括將標(biāo)記與配體直4妄偶聯(lián)(共價(jià)或非共價(jià)偶聯(lián))。間接標(biāo)記法包括第二配體與第一配體結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合)。第二配體應(yīng)當(dāng)與第一配體特異性結(jié)合。所述第二配體可與合適的標(biāo)記和/或可以為與第二配體結(jié)合的第三配體的耙標(biāo)(受體)偶聯(lián)。采用第二、第三或甚至更高等級(jí)的配體通常用來(lái)增強(qiáng)信號(hào)。合適的第二和更高等級(jí)的配體可包括抗體、第二抗體和眾所周知的鏈霉抗生物素-生物素系統(tǒng)(VectorLaboratories,Inc.)。配體或底物還可用本領(lǐng)域已知的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)簽(tag)"加上標(biāo)簽，，。然后這類(lèi)標(biāo)簽可為更高等級(jí)配體的靶標(biāo)。合適的標(biāo)簽包括生物素、洋地黃毒苷、His標(biāo)簽、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、FLAG、GFP、myc標(biāo)簽、A型流感病毒血凝素(HA)、麥芽糖結(jié)合蛋白等。就肽或多肽而言，標(biāo)簽優(yōu)選在N端和/或C端。合適的標(biāo)記(label)是通過(guò)適當(dāng)檢測(cè)方法可檢出的任何標(biāo)記。典型的標(biāo)記包括金顆粒、乳膠珠、二氫吖啶酯(acridanester)、魯米諾(luminol)、釕、酶活性標(biāo)記、放射性標(biāo)記、磁性標(biāo)記("例如磁性珠"，包括順磁性標(biāo)記和超順磁性標(biāo)記)和熒光標(biāo)記。酶活性標(biāo)記包括例如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶、螢光素酶及其衍生物。用于檢測(cè)的合適底物包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、3,3',5,5'-四曱基聯(lián)苯胺、NBT-BCIP(氯化4-硝基藍(lán)四唑鏡和5-溴-4-氯-3-巧l哚基-磷酸鹽，可獲自RocheDiagnostics已制好的儲(chǔ)備液)、CDP-Star(AmershamBiosciences)、ECFTM(AmershamBiosciences)。合適的酶-底物組合可以產(chǎn)生可按照本領(lǐng)域已知方法(例如使用感光膠片或合適的照相系統(tǒng))測(cè)定出來(lái)的有色反應(yīng)產(chǎn)物、熒光或化學(xué)發(fā)光。至于測(cè)定酶反應(yīng)，可按類(lèi)似方法應(yīng)用上述標(biāo)準(zhǔn)。典型的焚光標(biāo)記包括焚光蛋白(例如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、德克薩斯紅、菱光素和Alexa染料(例如Alexa568)。更多的熒光標(biāo)記可得自例如MolecularProbes(Oregon)。還包括使用量子點(diǎn)(quantumdot)作為熒光標(biāo)記。典型的放射性標(biāo)記包括35S、125I、32P、"P等?？梢酝ㄟ^(guò)任何已知的適當(dāng)方法檢測(cè)放射性標(biāo)記，例如感光膠片或磷光成像儀(phosphorimager)。本發(fā)明合適的測(cè)定方法還包括沉淀法(特別是免疫沉淀法)、電化學(xué)發(fā)光法(電致化學(xué)發(fā)光法)、RIA(放射免疫測(cè)定法)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)、夾心酶免疫測(cè)試法(sandwichenzymeimmunetest)、電化學(xué)發(fā)光夾心免疫測(cè)定法(ECLIA)、解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫測(cè)定法(DELFIA)、閃爍親近測(cè)定法(SPA)、濁度測(cè)定法(turbidimetry)、比濁法(nephelometry)、乳月交增強(qiáng)濁度測(cè)定法或比濁法或者固相免疫測(cè)試法(solidphaseimmunetest)。本領(lǐng)域已知的更多方法(例如凝膠電泳、2D凝膠電泳、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、蛋白質(zhì)印跡法和質(zhì)譜法)可以單獨(dú)使用或者結(jié)合如上所述的標(biāo)記法或其它4全測(cè)方法^使用。肽或多肽的量還優(yōu)選如下測(cè)定(a)使包含上述規(guī)定的肽或多肽的配體的固相支持體與包含肽或多肽的樣品接觸，和(b)測(cè)定與固相支持體結(jié)合的肽或多肽的量。該配體優(yōu)選選自核酸、肽、多肽、抗體和適體，優(yōu)選以固定化形式存在于固相支持體上。用于制造固相支持體的材料是本領(lǐng)域眾所周知的，尤其包括市售的柱材料、聚苯乙烯珠、乳膠珠、磁性珠、膠體金屬4敬粒、玻璃和/或硅芯片和表面、硝酸纖維素條、膜、薄片、duracyte、孔和反應(yīng)盤(pán)壁、塑膠管，等等。配體或結(jié)合劑可與多種不同的載體結(jié)合。熟知的載體實(shí)例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、萄聚糖、尼龍、直鏈淀粉、天然纖維素、改性纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和^茲體。對(duì)于本發(fā)明的目的，載體的性質(zhì)可以是可溶解的或不能溶解的。固定/固化所述配體合適的方法是眾所周知的，包括但不限于離子相互作用、疏水相互作用、共價(jià)相互作用等。還包括使用"懸浮陣列(suspensionarray)"作為本發(fā)明的陣列(Nolan2002,TrendsBiotechnol.20(1):9-12)。在這類(lèi)懸浮陣列中，載體(例如微珠或微球)存在于懸浮液中。陣列由可能是被標(biāo)記的、攜帶不同配體的不同微珠或微球組成。產(chǎn)生這類(lèi)陣列的方法廣為人知(US5,744,305),例如基于固相化學(xué)法和對(duì)光不穩(wěn)定的保護(hù)基的方法。本文所用術(shù)語(yǔ)"量"包括多肽或肽的絕對(duì)量、所述多肽或肽的相對(duì)量或濃度以及與之相關(guān)或由其得到的任何數(shù)值或參數(shù)。這些數(shù)值或參數(shù)包括得自通過(guò)直接測(cè)定法由所述肽得到的所有具體的物理性質(zhì)或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度信號(hào)值，例如質(zhì)譜或NMR譜中的強(qiáng)度值。此外，還包括通過(guò)在本發(fā)明其它部分具體描述的間接測(cè)定法得到的所有數(shù)值或參數(shù)，例如由響應(yīng)肽或從特異性結(jié)合配體得到的強(qiáng)度信號(hào)的生物讀出系統(tǒng)測(cè)定出來(lái)的反應(yīng)水平。需要了解的是，還可以通過(guò)所有標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)運(yùn)算得到與上述量或參數(shù)相關(guān)的值。本文所用術(shù)語(yǔ)"比較"包括將待分析樣品所包含的肽或多肽的量與在本發(fā)明其它部分具體描述的合適的參比源相比較。需要了解的是，本文所用的比較是指相應(yīng)參數(shù)或數(shù)值的比較，例如，將絕對(duì)量與絕對(duì)參比量相比較，而將濃度與參比濃度相比較，或者將從試驗(yàn)樣品得到的強(qiáng)度信號(hào)與參比樣品的同一類(lèi)型的強(qiáng)度信號(hào)相比較。本發(fā)明方法步驟(b)中所述比較可以手工進(jìn)行或者用計(jì)算機(jī)輔助進(jìn)行。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助比較，可將測(cè)定量的值與通過(guò)計(jì)算機(jī)程序儲(chǔ)存在數(shù)據(jù)庫(kù)中的相應(yīng)的合適參比值進(jìn)行比較。計(jì)算機(jī)程序可進(jìn)一步評(píng)價(jià)比較結(jié)果，即以合適的輸出格式自動(dòng)提供所需要的評(píng)價(jià)。根據(jù)步驟a)測(cè)定的量與參比量的比較，可以評(píng)價(jià)受治療者是否是對(duì)心臟介入敏感，即是否屬于可以通過(guò)心臟介入得到成功治療的受治療者的組別。因此，要選擇這樣的參比量，以便在量比較中的差異或相似性可供鑒定出接受測(cè)試的受治療者屬于對(duì)心臟介入敏感的受治療者組，或者鑒定出接受測(cè)試的受治療者屬于對(duì)心臟介入不敏感的受治療者組。因此，本文所用術(shù)語(yǔ)"參比量"是指可供評(píng)價(jià)有需要的受治療者對(duì)如上所述的心臟介入是否^:感的量。因此，該參比量可得自(i)已知已得到成功治療的受治療者，即沒(méi)有發(fā)生由治療方案引起的不良反應(yīng)，例如再梗死或死亡或副作用，或(ii)已知沒(méi)有得到成功治療的受治療者，即在心臟介入之后發(fā)生再梗死或由心血管并發(fā)癥致死或者沒(méi)有從治療方案獲益的受治療者。此外，參比量可限定臨界量，量大于臨界值的表示受治療者對(duì)心臟介入敏感，而量小于臨界量則可以是無(wú)法通過(guò)心臟介入得到成功治療的受治療者的標(biāo)志。對(duì)于各個(gè)受治療者可適用的參比量將隨年齡、性別或亞種群(subp叩ulation)等各種生理參數(shù)以及用于測(cè)定本文所述多肽或肽的工具而改變。合適的參比量可通過(guò)本發(fā)明的方法由待分析參比樣品連同試驗(yàn)樣品一起(即同時(shí)或序貫)確定?？捎烧Ｉ舷拗?ULN),即在顯然是健康的受治療者群體中測(cè)得的生理量值的上限值，推導(dǎo)出優(yōu)選的用作閾值的參比量。指定的受治療者群體的ULN可通過(guò)各種眾所周知的技術(shù)確定。合適的技術(shù)可以是測(cè)定本發(fā)明方法中待測(cè)定肽或多肽量的群體的中位值。優(yōu)選的GDF-15的閾值(即參比量)至少是ULN的1-2倍。優(yōu)選本文所述ULN為1200pg/ml。因此，限定測(cè)定本發(fā)明所述GDF-15的臨界量的參比量為1800pg/ml或2400pg/ml，更優(yōu)選1200pg/ml。更優(yōu)選GDF-15的量大于參比量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。最有利的是，我們?cè)谝员景l(fā)明為^出的研究中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于有需要的受治療者，即患有心血管并發(fā)癥的受治療者，特別是受累于急性心血管事件或心力衰竭的受治療者，GDF-15是評(píng)價(jià)心臟介入成功的可靠的預(yù)后生物標(biāo)記。由于本發(fā)明，在對(duì)患者實(shí)施心臟介入前便可容易地進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)/成功分層。在確認(rèn)患者對(duì)心臟介入不敏感的情況下，可以避免這種危險(xiǎn)性大、耗時(shí)長(zhǎng)和/或成本高的療法。因此，除了防止受治療者免受伴隨心臟介入的不利的嚴(yán)重副作用外，本發(fā)明的方法由于可節(jié)約資源而有益于健康系統(tǒng)。需要了解的是，按照上下文所述本發(fā)明方法，GDF-15的量或其測(cè)定工具可用于制備用于鑒定對(duì)心臟介入敏感的受治療者的診斷組合物(diagnosticcomposition)。的上述方法可用來(lái)鑒定對(duì)心臟療法(cardiactherapy)敏感的受治療者，優(yōu)選如下具體描述的基于藥物的療法或抗血小板療法。在本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法還包括測(cè)定所述受治療者樣品中心肌鈣蛋白的量，并且將心肌鉤蛋白的量與參比量相比較。術(shù)語(yǔ)"心肌4丐蛋白"是指在心臟細(xì)胞、優(yōu)選在心內(nèi)膜下細(xì)胞中表達(dá)的所有肌鈣蛋白同等型(isoform)。本領(lǐng)域已對(duì)這些同等型進(jìn)行了充分的表4正，參見(jiàn)例如Anderson1995，CirculationResearch,第76巻，第4期681-686和Ferrieres1998,ClinicalChemistry,44:487-493。優(yōu)選心肌鉤蛋白是指肌鉤蛋白T和/或肌4丐蛋白I，最優(yōu)選是指肌4丐蛋白T。需要了解的是，可用本發(fā)明的方法一起測(cè)定(即同時(shí)或序貫)肌鈣蛋白的同等型或者個(gè)別測(cè)定，即完全無(wú)需測(cè)定其它同等型。人肌鉤蛋白T和人肌^5蛋白I的氨基酸序列可參見(jiàn)Anderson,出處同上和Ferrieres1998,ClinicalChemistry,44:487-493。術(shù)語(yǔ)"心肌4丐蛋白"還包括上述特異性肌媽蛋白的變體，即優(yōu)選肌4丐蛋白T或肌4丐蛋白I的變體。這類(lèi)變體具有至少與特異性心肌鈣蛋白相同的重要生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)。特別是如果通過(guò)本說(shuō)明書(shū)中所述的相同的特異性測(cè)定法，例如通過(guò)用特異性識(shí)別所述心肌鈣蛋白的多克隆抗體或單克隆抗體的ELISA測(cè)定法可^r出的話(huà)，則它們共享相同的重要生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)。此外，需要了解的是，本發(fā)明所述變體具有由于至少一個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加而有所不同的氨基酸序列，其中優(yōu)選變體的氨基酸序列與特異性肌鈣蛋白的氨基酸序列的同一性仍然至少有500/。、60%、70%、80°/。、85°/。、90o/o、92%、95%、97%、98%或99%。變體可為等位基因變體或任何其它物種特異性同源物，即共生同源物或直向同源物。此外，本文所述變體包括特異性心肌鈣蛋白或上述變體類(lèi)型的片段，只要這些片段具有如上所述的重要免疫學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)。這類(lèi)片段可以為例如肌鈣蛋白的降解產(chǎn)物。20還包括由翻譯后修飾(例如磷酸化或十四烷基化)而有所不同的變體。正如上面已^r述的一樣，優(yōu)選的用作閾值的參比量可以由ULN得出。指定受治療者群體的ULN可以按照本發(fā)明中其它部分具體描述的方法測(cè)定。對(duì)于心肌4丐蛋白，特別是對(duì)于肌鈞蛋白T或肌4丐蛋白I,優(yōu)選的閾值(即參比量)是ULN的至少一倍，更優(yōu)選2-5倍。優(yōu)選本文所述肌4丐蛋白T的ULN為0.01ng/ml，肌釣蛋白I的為0.1ng/ml。因此，限定本發(fā)明所述的肌鉀蛋白T的閾值的參比量?jī)?yōu)選為0.01ng/ml、0.02ng/ml或0.05ng/ml。更優(yōu)選大于參比量的心肌鉤蛋白的量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。在本發(fā)明方法的又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法還(即除了測(cè)定GDF-15和/或心肌鉀蛋白外)包括測(cè)定所述受治療者樣品中利尿鈉肽的量，并且將利尿鈉肽的量與參比量相比較。術(shù)語(yǔ)"利尿鈉肽(natriureticp印tide)"包括心房利尿鈉肽(AtrialNatriuretic￡eptide,ANP)型和月畝利尿鈉肽(旦rainNatriureticpeptide,BNP)型肽及其具有相同預(yù)測(cè)潛力的變體。本發(fā)明的利尿鈉肽包括ANP型肽和BNP型肽及其變體(參見(jiàn)例如Bonow，1996,Circulation93:1946-1950)。ANP型肽包括pre-proANP、proANP、NT-proANP和ANP。BNP型肽包括pre-proBN、proBNP、NT-proBNP和BNP。前肽原(pre-propeptide)(在pre-proBNP的情況下為134個(gè)氨基酸)包括一條短的信號(hào)肽,被酶切割釋放出肽原(在proBNP的情況下為108個(gè)氨基酸)。肽原被進(jìn)一步切割成N端肽原(NT-肽原，在NT-proBNP的情況下為76個(gè)氨基酸)和活性激素(在BNP的情況下為32個(gè)氨基酸，在ANP的情況下為28個(gè)氨基酸)。優(yōu)選的本發(fā)明的利尿鈉肽為NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP及其變體。ANP和BNP是活性激素，半壽期比其相應(yīng)的無(wú)活性對(duì)應(yīng)物NT-proANP和NT-proBNP的短。BNP在血液中代謝，而NT-proBNP則作為完整分子在血液中循環(huán)并且照原樣經(jīng)腎臟排出。NTproBNP的體內(nèi)半壽期比BNP的長(zhǎng)120分鐘，BNP的體內(nèi)半壽期為20分鐘(Smith2000，JEndocrinol.167:239-46)。用NT-proBNP的預(yù)分析更為全面，使得容易將樣品轉(zhuǎn)移到中心實(shí)驗(yàn)室(Mueller2004，ClinChemLabMed42:942-4)。血樣可在室溫下保存數(shù)天，或者可以郵寄或航運(yùn)而無(wú)回收損失。相比之下，BNP保存在室溫或攝氏4。下達(dá)48小時(shí)會(huì)導(dǎo)致濃度損失至少20%(Mueller,出處同上；Wu2004,ClinChem50:867-73)。因此，4艮據(jù)目標(biāo)時(shí)程或性質(zhì)，測(cè)定活性或無(wú)活性形式的利尿鈉肽可能是有利的。本發(fā)明最優(yōu)選的利尿鈉肽是NT-proBNP或其變體。正如上面的簡(jiǎn)述一樣，本發(fā)明所述的人NT-proBNP是優(yōu)選包含長(zhǎng)度為76個(gè)氨基酸的對(duì)應(yīng)于人NT-proBNP分子N端部分的多肽?，F(xiàn)有技術(shù)已有人BNP和NT-proBNP結(jié)構(gòu)的詳細(xì)記載，例如WO02/089657、WO02/083913或Bonow，出處同上。優(yōu)選本文所用的人NT-proBNP是公開(kāi)于EP0648228Bl中的人NT-proBNP。這些現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)通過(guò)引用有關(guān)其中所公開(kāi)的NT-proBNP及其變體的特異性序列而結(jié)合到本文中。本發(fā)明所述的NT-proBNP還包括上述人NT-proBNP的所述特異性序列的等位基因變體和其它變體。尤其包括其氨基酸水平與人NT-proBNP有至少60°/。同一性、更優(yōu)選至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一性的變體多肽?；鞠嗨频囊约斑€包括的有蛋白水解的降解產(chǎn)物，其通過(guò)診斷工具或通過(guò)針對(duì)相應(yīng)的全長(zhǎng)肽的配體仍可被識(shí)別。還包括的有與人NT-proBNP的氨基酸序列相比，具有氨基酸缺失、取代和/或添加的變體多肽，只要所述多肽具有NT-proBNP性質(zhì)。本文所述的NT-proBNP性質(zhì)具有免疫學(xué)和/或生物學(xué)性質(zhì)。優(yōu)選NT-proBNP變體具有與NT-proBNP免疫學(xué)性質(zhì)相當(dāng)?shù)拿庖邔W(xué)性質(zhì)(即表位組成)。因此，變體可通過(guò)用于測(cè)定利尿鈉肽的量的上述方法或配體來(lái)識(shí)別?？赏ㄟ^(guò)記載于以下文獻(xiàn)中的測(cè)定法來(lái)測(cè)定NT-proBNP的生物學(xué)和/或免疫學(xué)性質(zhì)Karl等，1999,ScandJClinInvest59:177-181;Yeo等，2003，ClinicaChimicaActa338:107-115。變體還包括糖基化肽等翻譯后修飾肽。此外，本發(fā)明的變體還是樣品收集后被修飾過(guò)的肽或多肽，例如標(biāo)記、特別是放射性或焚光標(biāo)記與肽的共價(jià)或非共價(jià)連接。如上所述，優(yōu)選的用作閾值的參比量可由UNL得出。用于指定受治療者群體的ULN可通過(guò)本說(shuō)明書(shū)其它部分具體描述的方法測(cè)定。對(duì)于利尿鈉肽，特別是NT-proBNP，優(yōu)選的閾值(即參比量)是ULN的至少一倍，更優(yōu)選2-4倍。優(yōu)選上下文所述本發(fā)明NT-proBNP的ULN為300pg/ml。其它利尿鈉肽的ULN為本領(lǐng)域所知，優(yōu)選對(duì)于ANP為40pg/ml，對(duì)于BNP為100pg/ml，對(duì)于NT-proANP為500pmo1/1。因此，限定本發(fā)明所述的NT-proBNP的閾值的參比量?jī)?yōu)選為600pg/ml或1200pg/ml，更優(yōu)選1000pg/ml。更優(yōu)選大于參比量的利尿鈉肽的量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。需要了解的是，本說(shuō)明書(shū)上下文中對(duì)術(shù)語(yǔ)所做定義和解釋進(jìn)而可適用于說(shuō)明書(shū)和隨附權(quán)利要求書(shū)中所述的所有實(shí)施方案。本發(fā)明還涉及鑒定對(duì)心力衰竭療法敏感的受治療者的方法，該方法包括a)測(cè)定需要心力衰竭療法的受治療者樣品中生長(zhǎng)分化因子15(GDF-15)的量；和b)將在步驟a)中測(cè)定的GDF-15的量與參比量相比較，從而鑒定出對(duì)心力衰竭療法敏感的受治療者。本文所用術(shù)語(yǔ)"心力衰竭(HF)"是指收縮期和/或舒張期心臟功能受損。優(yōu)選該術(shù)語(yǔ)是指可能是由各種潛在疾病或病癥引起的充血性心力衰竭。優(yōu)選本文所述心力衰竭還是慢性心力衰竭。按照紐約心臟協(xié)會(huì)(NewYorkHeartAssociation,NYHA),心力衰竭可歸類(lèi)到功能分類(lèi)系統(tǒng)。NYHAI級(jí)的患者沒(méi)有明顯的心血管疾病癥狀，但卻已具有功能受損的客觀(guān)證據(jù)。身體活動(dòng)不受限制，平常的身體活動(dòng)不會(huì)引起過(guò)度疲勞、心悸或呼吸,困難(呼吸短促)。NYHAII級(jí)的患者，身體活動(dòng)受到輕度限制。在靜止時(shí)感覺(jué)舒適，但是平常的身體活動(dòng)引起疲勞、心悸或呼吸困難。NYHAIII級(jí)的患者，身體活動(dòng)受到明顯限制。他們?cè)陟o止時(shí)感覺(jué)舒適，但是低于平常的活動(dòng)也會(huì)引起疲勞、心悸或呼吸困難。NYHAIV級(jí)的患者不能夠舒適地進(jìn)行任何身體活動(dòng)。他們?cè)陟o止時(shí)表現(xiàn)出心機(jī)能不全的癥狀。需要了解的是，通過(guò)上述方法鑒定的受治療者，優(yōu)選具有收縮期和/或舒張期心臟功能受損的客觀(guān)證據(jù)，如例如通過(guò)超聲心動(dòng)描記術(shù)、血管造影術(shù)、閃爍法(szintigraphy)或磁共振成像所示。這種功能受損可伴發(fā)如上所述的心力衰竭癥狀(NYHAII-IV級(jí))，盡管一些患者可能不表現(xiàn)出明顯癥狀(NYHA1)。優(yōu)選通過(guò)本發(fā)明所述療法選出的用于受治療者的所述療法是基于藥物的療法。更優(yōu)選所述藥物是ACE抑制劑，優(yōu)選卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、賴(lài)諾普利(lisinopril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril),雷米普利(ramipril)或群多普利(trandolapril);AT-1受體阻滯藥，優(yōu)選坎地沙坦(candesartan)、氯沙坦(losartan)或纈沙坦(valsartan);|3-受體阻滯藥，優(yōu)選比索洛爾(bisoproioi)、卡維地洛(carvedilol)、美托洛爾(metoprolol)或琥珀酸鹽或者醛甾酮拮抗藥，優(yōu)選螺內(nèi)酯(spironolacton)或依普利酮(eplerenone)。按照本發(fā)明選出的用于受治療者的另一種優(yōu)選療法是介入療法。本文所述的介入療法是基于受治療者軀體介入的療法，例如通過(guò)手術(shù)和/或電生理介入療法。更優(yōu)選所述介入療法是心臟再同步療法(CRT)或以植入型心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器(ICD)為基礎(chǔ)。最好通過(guò)測(cè)定患有心力衰竭的受治療者樣品中的GDF-15的量，來(lái)確定受治療者是否對(duì)上述療法^:感。準(zhǔn)確地講，預(yù)期GDF-15的量大于參比量的受治療者可適于通過(guò)上述療法進(jìn)行治療，而GDF-15少的受治療者不能從該療法中受益。此外，本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的死亡24或再發(fā)急性心血管事件(flirtheracutecardiovascularevent)風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白的量5和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌4丐蛋白的量與參比量相比較，從而預(yù)測(cè)死亡或再發(fā)心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。本文所用術(shù)語(yǔ)"預(yù)測(cè)"是指評(píng)價(jià)在未來(lái)某一規(guī)定的時(shí)間窗(預(yù)測(cè)窗(predictivewindow))內(nèi)，患有心血管并發(fā)癥的受治療者可能死亡的概率(即由心血管并發(fā)癥引起的死亡率)或發(fā)生急性心血管事件(例如心肌(再)梗死)的概率。預(yù)測(cè)窗是其中受治療者依照預(yù)測(cè)概率會(huì)發(fā)生急性心血管事件或會(huì)死亡的時(shí)間間隔。預(yù)測(cè)窗可以是受治療者在從本發(fā)明方法分析時(shí)起的整個(gè)剩余壽命。然而，優(yōu)選預(yù)測(cè)窗是心血管并發(fā)癥發(fā)生后(更優(yōu)選和正好獲得待本發(fā)明方法分析的樣品后)1個(gè)月、6個(gè)月或1年、2年、3年、4年、5年或IO年的時(shí)間間隔。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解的一樣，這種評(píng)價(jià)通常不是對(duì)100%待分析受治療者都是正確的。然而，該術(shù)語(yǔ)要求評(píng)價(jià)對(duì)于有統(tǒng)計(jì)顯著性部分的待分析受治療者是有效的。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)用名、種眾所周知的統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)工具而無(wú)需再費(fèi)周折便可確定某一部分是否有統(tǒng)計(jì)顯著性，統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)工具例如測(cè)定置信區(qū)間、P值測(cè)定、斯圖登t檢驗(yàn)、曼恩-惠特尼檢驗(yàn)等。有關(guān)細(xì)節(jié)參見(jiàn)Dowdy和Wearden，StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983。優(yōu)選的置信區(qū)間為至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。P值優(yōu)選為O.l、0.05、0.01、0.005或0.0001。優(yōu)選本發(fā)明所預(yù)期的概率使得預(yù)測(cè)對(duì)于指定群組的受治療者的至少60%、至少70%、至少80%或至少90%是正確的。本文所用術(shù)語(yǔ)"死亡率"是指由所述心血管并發(fā)癥(例如由于心肌(再)梗死)引起的死亡率。本文所用術(shù)語(yǔ)"心血管并發(fā)癥'，是指心血管系統(tǒng)或任何急性心血管事件的任何慢性病癥。優(yōu)選本文所用心血管系統(tǒng)的慢性病癥包括冠心病、穩(wěn)定型心絞痛(SAP)或心力衰竭，優(yōu)選慢性心力衰竭。優(yōu)選急性心血管事件為急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)。ACS患者可表現(xiàn)出不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)或心肌梗死(MI)。MI可以是ST抬高M(jìn)I(STEMI)或非ST抬高M(jìn)I(NSTEMI)。本文所用NSTTE-ACS包括UAP和NSTEMI。MI發(fā)生后可能出現(xiàn)左心室功能障礙(LVD)或發(fā)生心力衰竭。其它優(yōu)選的心血管并發(fā)癥包括心臟緩慢心律失?；蛐呐K快速心律失常，包括心臟性猝死和中風(fēng)(腦血管事件或意外)。最優(yōu)選所述心血管并發(fā)癥是ACS或心力衰竭。本文所用術(shù)語(yǔ)"預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)或再發(fā)(即復(fù)發(fā)性)急性心血管事件"是指通過(guò)本發(fā)明的方法，將待分析的受治療者分配到心血管并發(fā)癥后發(fā)生急性心血管事件或死亡風(fēng)險(xiǎn)正常(即非增加)的群體的受治療者組，.或者分配到風(fēng)險(xiǎn)顯著增加的受治療者組。本發(fā)明所述的風(fēng)險(xiǎn)增加是指相對(duì)于受治療者群體中急性心血管事件或心臟性死亡率的平均風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于受治療者預(yù)先確定的預(yù)測(cè)窗內(nèi)發(fā)生再發(fā)急性心血管事件或死亡的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。優(yōu)選對(duì)于一年預(yù)測(cè)窗，平均風(fēng)險(xiǎn)在0.5%和3.0%的范圍內(nèi)，優(yōu)選1.5%。至于一年預(yù)測(cè)窗，優(yōu)選本文所用風(fēng)險(xiǎn)增加是指3.0%以上的風(fēng)險(xiǎn)，優(yōu)選5.0%以上，最優(yōu)選在3.0%和8.00/。以?xún)?nèi)。有利的是，在本發(fā)明基礎(chǔ)上進(jìn)行的研究表明，測(cè)定(i)GDF-15和利尿鈉肽的量，或(ii)GDF-15和心肌铞蛋白的量，或優(yōu)選(iii)GDF-15、利尿鈉肽和心肌4丐蛋白的量，是在已患有心血管疾病的受治療者中對(duì)死亡風(fēng)險(xiǎn)或更多不良的急性心血管事件進(jìn)行可靠評(píng)價(jià)所必需的。上述方法比現(xiàn)有技術(shù)的方法更可靠，因?yàn)檠芯恳驯砻?，GDF-15和利尿鈉肽(例如NT-proBNP)是統(tǒng)計(jì)學(xué)上獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子。尤其是GDF-15水平(即GDF-15的量)在明顯健康的老年受治療者中，在450pg/ml(大約第10百分位數(shù)(rounded10thpercentile))和1200pg/ml(大約第卯百分位數(shù)，定義為正常上限值)之間變化，中位值762pg/ml。與健康個(gè)體相比，約％的NSTE-ACS患者的水平在正常上限值以上，'/3的水平在1800pg/ml以上。在GDF-15正常范圍內(nèi)的患者中，一年死亡率低至261.5%。在GDF-15中等升高(1200-1800pg/ml)的患者中，一年死亡率升高到5.0%,而在明顯升高(〉1800pg/ml)的患者中，一年死亡率非常高，為14.1%。早在指數(shù)事件后就觀(guān)察到死亡率的差異，且在l個(gè)月后已十分顯著。接收者工作特征(Receiveroperatingcharacteristic,ROC)曲線(xiàn)分析進(jìn)一步表明GDF-15是一年死亡率的強(qiáng)生化標(biāo)記，曲線(xiàn)下面積為0.757。用多重回歸分析，NSTE-ACS中入院時(shí)GDF-15水平與從癥狀出現(xiàn)到入院的時(shí)間(延遲時(shí)間(ddaytime))成負(fù)相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)可能與GDF-15水平和疾病/癥狀的嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)性有關(guān)，導(dǎo)致在具有較高GDF-15水平的患者中延遲時(shí)間較短。盡管在入院后，中位值GDF-15水平略微升高，但是它在72小時(shí)觀(guān)察期間，在每個(gè)患者體內(nèi)都保持得相當(dāng)穩(wěn)定。NSTE-ACS患者中，每位患者在不同情況下所測(cè)得的GDF-15水平密切相關(guān)，并且得到相似的有關(guān)死亡率的預(yù)后信息，這就表明，入院后得到的一次GDF-15測(cè)定結(jié)果可提供相當(dāng)好的預(yù)后信息。在NSTE-ACS患者中，在所有4個(gè)時(shí)間點(diǎn)上GDF-15水平預(yù)后信息得到驗(yàn)證，支持這些結(jié)果的可靠性。NSTE-ACS患者中，GDF-15水平分別獨(dú)立地與年齡、近期吸煙、糖尿病、心力衰竭史、心功能不全(NT-proBNP)、炎癥活性(CRP)和腎功能障礙(肌酸酐清除率)強(qiáng)相關(guān)，這就表明在NSTE-ACS患者中，GDF-15水平升高使較嚴(yán)重的心血管疾病和預(yù)后不良的若干重要臨床和生化指標(biāo)整合在一起。所有這些相關(guān)變量中，GDF-15表現(xiàn)為最強(qiáng)的一年死亡率上升的預(yù)測(cè)因子。GDF-15以夕卜，僅年齡、以前的心肌梗死和NT-proBNP水平附加了有關(guān)死亡率的獨(dú)立的預(yù)后信息。同樣地，研究發(fā)現(xiàn)，GDF-15水平為復(fù)發(fā)性MI提供了可靠的預(yù)后信息；參見(jiàn)圖l和下表l。由于本發(fā)明這一方面，可以容易地對(duì)已患有心血管并發(fā)癥的患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層。需要了解的是，按照上下文所述本發(fā)明方法，GDF-15與利尿鈉肽的量、GDF-15與心肌鉀蛋白的量或GDF-15與利尿鈉肽和心肌4丐蛋白組合的量或者其測(cè)定工具可用于制備用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物。此外，研究表明，包括測(cè)定GDF-15和利尿鈉肽的本發(fā)明方法優(yōu)選可用于測(cè)定死亡風(fēng)險(xiǎn)，而GDF-15和心肌釣蛋白的組合優(yōu)選可用于預(yù)測(cè)再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明還包括預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的死亡風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽的量；并將上述步驟所測(cè)的GDF-15和利尿鈉肽的量與參比量相比較。此外，本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括測(cè)定受治療者的樣品中GDF-15和心肌4丐蛋白的量，并將上述步驟測(cè)得的GDF-15和心肌4丐蛋白的量與參比量相比較。在本發(fā)明方法的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述GDF-15的參比量(即臨界量)為1200pg/ml。更優(yōu)選GDF-15的量大于參比量可表示死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。在本發(fā)明方法的又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肌鉤蛋白T的參比量(即臨界量)為0.01ng/ml。更優(yōu)選心肌釣蛋白的量大于參比量可表示死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。在本發(fā)明方法的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述NT-proBNP的參比量(即臨界量)為1000pg/ml。更優(yōu)選利尿鈉肽的量大于參比量可表示死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)增加。此外，本發(fā)明還包括預(yù)測(cè)患有心力衰竭的受治療者的有害心血管并發(fā)癥(adversecardiovascularcomplication)的風(fēng)險(xiǎn)的方法,該方法包括(a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量，和(b)將步驟a)中所測(cè)的GDF的量與參比量相比較。在本發(fā)明基礎(chǔ)上進(jìn)行的研究表明，表現(xiàn)出心力衰竭癥狀、優(yōu)選患有慢性心力衰竭的受治療者，其有害心血管并發(fā)癥、優(yōu)選再發(fā)急性心血管事件或者更優(yōu)選死亡的風(fēng)險(xiǎn)增加。在所述研究中，在已進(jìn)行了研究的各種生物標(biāo)記中，GDF-15證明是如上所述的有害心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)、特別是死亡風(fēng)險(xiǎn)增加的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。此外，本發(fā)明還涉及預(yù)測(cè)患有肺栓塞的受治療者死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量；和b)將在步驟a)中測(cè)定的GDF-15的量與參比量相比較，從而預(yù)測(cè)死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。本文所用術(shù)語(yǔ)"肺栓塞"是指由肺血管閉塞或狹窄引起的病癥。所述閉塞或狹窄的結(jié)果，將會(huì)使肺組織的氣體交換和供血受到損害。因此，肺的生理功能受到損害。本文所用肺栓塞可以是慢性或急性肺栓塞。然而，優(yōu)選該術(shù)語(yǔ)是指急性肺栓塞。肺栓塞可以通過(guò)眾所周知的診斷技術(shù)進(jìn)行診斷，并且伴隨發(fā)生如標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)教科書(shū)中所描述的癥狀。本發(fā)明所述的"隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥"是不良事件，優(yōu)選心肺事件，包括再次肺栓塞或需要介入(例如插管法、給予兒茶酚胺或心肺復(fù)蘇)的肺或心血管系統(tǒng)生理功能的任何其它損傷。隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥可能發(fā)生在受治療者正患有的初次肺栓塞后的可預(yù)測(cè)時(shí)間窗內(nèi)。本文所用術(shù)語(yǔ)"預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)，，是指通過(guò)本發(fā)明的方法將待分析的受治療者分配到肺栓塞之后具有正常(即非增力口)死亡風(fēng)險(xiǎn)的群體的受治療者組，或者分配到風(fēng)險(xiǎn)顯著增加的受治療者組。本發(fā)明所述的風(fēng)險(xiǎn)增加是指相對(duì)于受治療者群體的平均死亡風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于受治療者預(yù)先確定的預(yù)測(cè)窗內(nèi)的死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。優(yōu)選對(duì)于30天的預(yù)測(cè)窗，平均風(fēng)險(xiǎn)約為5.0%。本文所用的風(fēng)險(xiǎn)增加，優(yōu)選是指風(fēng)險(xiǎn)增加至少5倍，或者優(yōu)選風(fēng)險(xiǎn)增加至少10倍，即風(fēng)險(xiǎn)50.0%以上。此外，該術(shù)語(yǔ)還指6個(gè)月預(yù)測(cè)窗內(nèi)顯著增加的風(fēng)險(xiǎn)。在面臨本文所述死亡風(fēng)險(xiǎn)的受治療者中，所述預(yù)測(cè)窗內(nèi)死亡的正常風(fēng)險(xiǎn)優(yōu)選增加至少5倍，更優(yōu)選增力口7倍。在預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)者沒(méi)有面臨風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，GDF-15或測(cè)定GDF-15的量的方法大體上可用于制備用于預(yù)測(cè)患有肺栓塞的受治療者是否面臨死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物。有利的是，在本發(fā)明基礎(chǔ)上進(jìn)行的研究表明，在作為生物標(biāo)記的GDF-15的基礎(chǔ)上，可以可靠地為患有肺栓塞的受治療者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層。根據(jù)所述風(fēng)險(xiǎn)分層，可確定將需要哪些進(jìn)一步的方法(例如給予受治療者的具體療法)以及哪種程度的臨床監(jiān)測(cè)。在本發(fā)明上述方法的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，GDF-15可與其它栓塞標(biāo)記、優(yōu)選本說(shuō)明書(shū)其它部分所述的心肌鉤蛋白和/或利尿鈉肽一起進(jìn)行測(cè)定。此外，本發(fā)明包括的還有用于鑒定對(duì)適于實(shí)施本發(fā)明方法的心臟介入或心力衰竭療法敏感的受治療者的裝置，該方法包括測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的方法，并且將所述量與參比量相比較的方法，從而鑒定出對(duì)心臟介入或心力衰竭療法敏感的受治療者。本文所用術(shù)語(yǔ)"裝置"是指工具系統(tǒng)，即包括至少上述彼此有效連接供預(yù)測(cè)之用的工具的系統(tǒng)。在本發(fā)明方法上述有關(guān)方面，公開(kāi)了測(cè)定GDF-15的量、優(yōu)選結(jié)合測(cè)定心肌釣蛋白和/或利尿鈉肽的量的優(yōu)選工具以及進(jìn)行比較的工具。如何以操作的方式將所述工具連接起來(lái)將取決于包括裝置內(nèi)的工具類(lèi)型。例如，如果采用自動(dòng)測(cè)定肽的量的工具，則可通過(guò)例如計(jì)算機(jī)程序處理由所述自動(dòng)操作工具獲得的數(shù)據(jù)，從而獲得所需要的結(jié)果。在這種情況下，優(yōu)選工具包括在一個(gè)裝置中。因此，所述裝置可包括用于測(cè)定所用樣品的肽或多肽的量的分析單元和處理用于評(píng)價(jià)的所得數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)單元?；蛘撸绻褂脺y(cè)試條(teststripe)等工具測(cè)定肽或多肽的量，則用于比較的工具還包括30對(duì)照條(controlstripe)或供所測(cè)定的量與參比量對(duì)照的表格。優(yōu)選測(cè)試條與特異性結(jié)合本文所述肽或多肽的配體偶聯(lián)。優(yōu)選測(cè)試條或裝置包括用于檢測(cè)所述肽或多肽與所述配體結(jié)合的工具。在與上述本發(fā)明方法有關(guān)的實(shí)施方案方面，公開(kāi)了優(yōu)選的^r測(cè)工具。在這種情況下，工具被有效地連接起來(lái)，因?yàn)轸榻y(tǒng)的使用人員按照說(shuō)明書(shū)中給出的說(shuō)明和解釋將測(cè)定的量的結(jié)果與其診斷或預(yù)后評(píng)價(jià)結(jié)合在一起。在這種實(shí)施方案中，工具可呈單獨(dú)的裝置，并且優(yōu)選包裝在一起成為工具箱(kit)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)了解如何不用再費(fèi)周折便可將工具連接起來(lái)。優(yōu)選的裝置是無(wú)需專(zhuān)業(yè)臨床工作人員的專(zhuān)門(mén)知識(shí)便可應(yīng)用的裝置，例如測(cè)試條或者只需要加載樣品的電子裝置。結(jié)果可按原始數(shù)據(jù)輸出，需要臨床醫(yī)生予以解讀。然而，優(yōu)選裝置的輸出是原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)處理，即已經(jīng)過(guò)評(píng)價(jià)，不再需要臨床醫(yī)生解讀。此外優(yōu)選的裝置包括分析單元/裝置(例如生物傳感器、陣列、與特異性識(shí)別利尿鈉肽的配體偶聯(lián)的固相支持體、表面等離振子共振裝置、核磁共振波鐠儀、質(zhì)譜儀等)或上述本發(fā)明方法的評(píng)價(jià)單元/裝置。此外，本發(fā)明還涉及用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施本發(fā)明的方法的受治療者的死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的裝置，該裝置包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌4丐蛋白的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。此外還包括的有用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施本發(fā)明方法的患有心力衰竭的受治療者的有害心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的裝置，該裝置包括用于測(cè)定所述受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明還涉及用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施本發(fā)明方法的患有肺栓塞的受治療者是否有死亡或有隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的裝置，該裝置包括用于測(cè)定患有肺栓塞的受治療者樣品中GDF-15的量、優(yōu)選與利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白組合的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。此外，本發(fā)明還包括用于實(shí)施鑒定對(duì)心臟介入或心力衰竭療法敏感的受治療者的本發(fā)明方法的工具箱。所述工具箱包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而鑒定出對(duì)心臟介入或心力衰竭療法敏感的受治療者。本文所用術(shù)語(yǔ)"工具箱(kit)"是指上述工具(means)的集合，優(yōu)選各工具在獨(dú)立的容器中或者在一個(gè)容器中提供。優(yōu)選容器還包括實(shí)施本發(fā)明方法的說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明涉及用于實(shí)施本發(fā)明方法以預(yù)測(cè)死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的工具箱，該工具箱包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌釣蛋白的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明還涉及用于實(shí)施本發(fā)明方法以預(yù)測(cè)有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)的工具箱，該工具箱包括用于測(cè)定患有心力衰竭的受治療者樣品中GDF-15的量的工具，以及將所述量與參比量相比較的工具》從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。最后，本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施本發(fā)明方法的患有肺栓塞的受治療者是否有死亡或有隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的工具箱，該工具箱包括用于測(cè)定患有肺栓塞的受治療者樣品中GDF-15的量、優(yōu)選與利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白組合的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。本說(shuō)明書(shū)中所有參考資料都通過(guò)引用其完整的公開(kāi)內(nèi)容、尤其是本說(shuō)明書(shū)中所提及的公開(kāi)內(nèi)容而結(jié)合到本文中。附圖簡(jiǎn)述如下圖1:(A)在FRISCII臨床試驗(yàn)招募的1034名非侵入性NSTE-ACS患者中，按照入院時(shí)GDF-15水平的三分位數(shù)(tertile)(<1200n=400,1200-1800n=394,>1800n=240),在兩年內(nèi)急性心肌梗死的累積概率(log-rank檢驗(yàn)(log-ranktest)PO.OOOl)。(B)在FRISCII臨床試驗(yàn)招募的1045名侵入性NSTE-ACS患者中，按照入院時(shí)GDF-15水平的三分位數(shù)(<1200n=416,1200-1800n=376，>1800n=253)，在兩年內(nèi)急性心肌梗死的累積概率(log-rank檢驗(yàn)(log-ranktest)P=0.6915)。圖2:在GUSTO-IV臨床試驗(yàn)招募的2081名NSTE-ACS患者中，按照入院時(shí)GDF-15水平的三分位數(shù)，在一年內(nèi)死亡的累積概率(log-rank檢驗(yàn)PO細(xì))。圖3:在GUSTO-IV臨床試驗(yàn)招募的2081名NSTE-ACS患者中，將生物標(biāo)記水平與一年死亡率相關(guān)聯(lián)的接收者工作特征(ROC)曲線(xiàn)分析。計(jì)算出曲線(xiàn)下面積，GDF-15為0.757，NT-proBNP為0.735,肌酸酐清除率為0.728,CRP為0.629，肌鈣蛋白T為0.620。圖4:在GUSTO-IV臨床試驗(yàn)招募之前無(wú)心肌梗死史(圖A)和之前有心肌梗死史(圖B)的NSTE-ACS患者中，按照入院時(shí)GDF-15水平和NT-proBNP水平的三分位數(shù)，分層后的NSTE-ACS患者中一年隨訪(fǎng)期的死亡率。每條柱表示死亡H/患者數(shù)。圖5:(A)按照GDF-15的四分位數(shù)，推導(dǎo)群組(derivationcohort)慢性心力衰竭患者的累積存活率(log-rank檢驗(yàn)PO.OOl)。(B)驗(yàn)證群組(validationcohort)慢性心力衰竭患者的累積存活率；按照推導(dǎo)群組所規(guī)定的分界水平(cut-offlevel)對(duì)患者進(jìn)行分層(log-rank檢驗(yàn)PO.001)。圖下部分表示面臨風(fēng)險(xiǎn)的患者數(shù)。圖6:在推導(dǎo)群組(A)和驗(yàn)證群組(B)的慢性心力衰竭患者隨訪(fǎng)期間死亡率的單變量預(yù)測(cè)因子。圖中顯示了置信區(qū)間95%的危險(xiǎn)比(Hazardratio)、f和P值。肌酸酐、尿酸、NT-proBNP和GDF-15不是正態(tài)分布的，因此在分析前被轉(zhuǎn)換成其自然對(duì)數(shù)；危險(xiǎn)比是指在這些變量中按自然對(duì)數(shù)尺度增加一個(gè)單位。圖7:(A)30天時(shí)間窗內(nèi)無(wú)不良事件的患者的存活率。按照患者33的GDF-15水平(4，600ng/L以上或以下)對(duì)患者進(jìn)行了分類(lèi)；(B)180天時(shí)間窗的存活率。下面的實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。無(wú)論如何也不應(yīng)理解為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。實(shí)施例1:測(cè)定血清和血漿樣品中的GDF-15、NT-proBNP和肌4丐蛋白為了測(cè)定血清和血漿樣品中GDF-15的濃度，使用GDF-15親和層析法純化的多克隆山羊抗人GDF-15IgG抗體(得自R&DSystems)(AF957)，開(kāi)發(fā)出免疫放射分析法(IRMA)。將MaxisorpStartubes(Nunc)用0.5昭抗GDF-15IgG的0.1M碳酸鈉緩沖液(pH9.0)在4°C下包被過(guò)夜，然后用石岸酸緩沖鹽溶液與0.1%吐溫20(Tween20)洗滌兩次。將血清或血漿樣品(IOOjlU)用分析緩沖液(30g/LBSA、10g/L牛IgG、1%山羊血清、0.1%疊氮化鈉、1MNaCl、40mM磷酸鈉緩沖液，pH7.4)按l:l稀釋后，加到各管中，在4。C下孵育16小時(shí)。在兩次洗滌步驟后，將10ng[1251]-碘化的抗GDF-15IgG(比活0.74MBq/ng)稀釋于200W分析緩沖液中后，加到各管中，在室溫下孵育4小時(shí)。在三次最后的洗滌步驟后，用y計(jì)數(shù)器(LKBWallac1261)定量測(cè)定結(jié)合的放射性。在每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，用重組人GDF-15(得自R&DSystems)(957-GD/CF)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。在標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品中測(cè)出新批次的重組GDF-15蛋白的結(jié)果，在本項(xiàng)測(cè)定中任何10%以上的偏差都通過(guò)引入調(diào)整因子來(lái)校正。在最終的稀釋倍數(shù)校正后，得自同一患者血清和血漿樣品中的GDF-15的測(cè)定結(jié)果基本相同。本測(cè)定法的檢出限為20pg/ml。對(duì)于平均GDF-15水平為744pg/ml、1518pg/ml和8618pg/ml時(shí)，所測(cè)4尋的測(cè)定批次內(nèi)變異系數(shù)分別為5.6%、5.9%和6.5%。對(duì)于平均GDF-15水平為832pg/ml、4739pg/ml和9230pg/ml時(shí)，所測(cè)得的測(cè)定批次間變異系數(shù)分別為8.6%、5.7%和4.4%。通過(guò)第三代測(cè)定法，用檢出限為0.01ng/ml的Elecsys2010分析儀(RocheDiagnostics)測(cè)定了肌鉀蛋白T水平。用免疫測(cè)定法在檢出限為20pg/ml的Elecsys2010中測(cè)定了NT-proBNP水平。實(shí)施例2:FRISCII研究中NSTE-ACS患者侵入性和非侵入性治療方案之間差異的分析在1996年6月和1998年5月之間，在58家斯堪的納維亞醫(yī)院招募患者進(jìn)行FRISCII研究，其中16家醫(yī)院為介入中心。如果患者在靜止時(shí)顯示缺血癥狀加重或發(fā)生，或者已證實(shí)疑似急性心肌梗死，最后發(fā)作在開(kāi)始達(dá)肝素(dalteparin)或標(biāo)準(zhǔn)肝素治療之前48小時(shí)內(nèi)，則他們符合招募條件。通過(guò)心電描記法(ST壓低2(HmV或T波倒置20-lmV)或者通過(guò)生化標(biāo)記升高(肌酸激酶[CK]-MB>6pg/L、肌鉤蛋白T>0.10]Lig/L、肌鉤蛋白T定性檢測(cè)陽(yáng)性或CK、CK-B或CKMB的催化活性大于心肌梗死的當(dāng)?shù)卦\斷局限值)，證實(shí)了心肌缺血。排除標(biāo)準(zhǔn)排除了出血事件風(fēng)險(xiǎn)、貧血或者過(guò)去24小時(shí)有血栓溶解跡象或治療、過(guò)去6個(gè)月經(jīng)歷血管成形術(shù)、冠狀血管重建術(shù)候診、其它急性或嚴(yán)重心臟病、腎功能不全、肝功能不全、已知臨床上相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥、其它嚴(yán)重疾病、對(duì)任意藥物的超敏反應(yīng)、預(yù)期對(duì)本項(xiàng)或其它臨床試-驗(yàn)的配合或參與有困難、之前經(jīng)過(guò)心臟直視手術(shù)、高齡(例如>75歲)或使得發(fā)生隨機(jī)早期血管重建不良的其它疾病的患者。FRISCII研究是具有平行組的前瞻性多中心隨機(jī)性臨床試驗(yàn)。我們通過(guò)因子設(shè)計(jì)對(duì)侵入性和非侵入性治療進(jìn)行了比較。將各組中半數(shù)的患者隨機(jī)分配為經(jīng)皮下用達(dá)肝素或安慰劑長(zhǎng)期治療3個(gè)月。侵入性和非侵入性策略的比較是開(kāi)放的，長(zhǎng)期達(dá)肝素治療與安慰劑的比較是雙盲的。在侵入組中，目的是在開(kāi)始標(biāo)簽公開(kāi)達(dá)肝素(open-labeldalteparin)7天內(nèi)進(jìn)行所有侵入性手術(shù)。招募幾天內(nèi)，直接侵入性治療為冠狀血管造影術(shù)，目的在于在開(kāi)始標(biāo)簽公開(kāi)治療的7天內(nèi)進(jìn)行血管重建。我們推薦任何動(dòng)脈直徑阻塞至少70%的所有患者進(jìn)行血管重建以提供足夠比例的心肌。如果有一個(gè)或兩個(gè)目標(biāo)病變，則推薦經(jīng)皮冠狀血管介入，有三條血管或左主動(dòng)脈疾病的患者優(yōu)選進(jìn)行冠狀動(dòng)脈分流術(shù)。不論療法是否最大或者出院前癥狀限制性運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)(symptom-limitedexercisetest)中缺血是否嚴(yán)重，在具有難治性或復(fù)發(fā)性癥狀的患者中，非侵入性治療都包括了冠狀血管造影術(shù)。用于進(jìn)行血管造影術(shù)和血管重建的運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)是ST壓低20.3mV;與最大工作負(fù)荷低(<90W(男)或<70W(女))或血壓降低相關(guān)的局限性胸痛(limitingchestpain);或運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)時(shí)無(wú)之前伴發(fā)Q波或T波倒置的ST抬高。在長(zhǎng)期隨訪(fǎng)期間，不考慮隨機(jī)性策略，對(duì)于有不符合條件的癥狀、不穩(wěn)定復(fù)發(fā)或心肌梗死的所有患者，都會(huì)考慮侵入性手術(shù)。入院時(shí)，患者最初用調(diào)整活化部分促凝血酶原激酶時(shí)間的標(biāo)簽公開(kāi)皮下達(dá)肝素或標(biāo)準(zhǔn)肝素輸注進(jìn)行治療。進(jìn)行隨機(jī)分組，所有患者都接受達(dá)肝素120IU/kg，每12小時(shí)皮下(最大劑量10000IU)注射，非侵入組至少5天，侵入組直到進(jìn)行手術(shù)。此后，患者接受達(dá)肝素或安慰劑皮下注射一天兩次。體重80kg以下的女性和體重70kg以下的男性接受5000IU達(dá)肝素或安慰劑，體重超過(guò)這些體重值的則接受7500IU。這個(gè)方案持續(xù)3個(gè)月，在出院后，患者用預(yù)先裝入單劑量的注射器自行注射。冠狀動(dòng)脈手術(shù)前不遲于12小時(shí)給予最后一次標(biāo)簽公開(kāi)或雙盲達(dá)肝素注射治療。血管成形術(shù)之后，在除掉護(hù)套(sheath)后2-6小時(shí)重新開(kāi)始達(dá)肝素或安慰劑注射。在給予糖蛋白1Ib/IIIa抑制劑阿昔單抗(abciximab)輸注后，直到輸注后24小時(shí)才重新開(kāi)始達(dá)肝素或安慰劑注射。冠狀動(dòng)脈分流術(shù)后，所有患者都接受標(biāo)簽公開(kāi)達(dá)肝素5000IU，一天兩次直到可以活動(dòng)，在出院前幾天開(kāi)始雙盲治療。要求患者在日記中記錄所有注射，在患者就診時(shí)清點(diǎn)交回或未使用的注射器，以檢查遵守情況。入院時(shí)以初始劑量300-600mg給予所有患者阿司匹林，隨后給予維持劑量75-320mg，一天一次。給予(3-阻滯藥，除非有禁忌。需要時(shí)，可以加入有機(jī)硝酸鹽和鉀拮抗藥。根據(jù)現(xiàn)代治療方針，推薦降低膽固醇的他汀類(lèi)、用于左心室功能障礙的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和積極的抗糖尿病藥物治療。在經(jīng)皮冠狀血管介入期間，鼓勵(lì)使用阿昔單抗。支架放置后3-4周推薦p塞氯匹定(Ticlopidine)。入院時(shí)或者最遲隨機(jī)就地分析血樣的血紅蛋白濃度、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、凝血酶原時(shí)間、肌酸酐、葡萄糖、血紅蛋白AIO,必要時(shí)分析甘油三酯、膽固醇、HDL膽固醇和LDL膽固醇。入院時(shí)，嚴(yán)重胸痛新發(fā)作后以及血管重建前、血管重建后4-24小時(shí)，分析心肌損傷的生化標(biāo)記。最常用的心肌損傷標(biāo)記是CK-MB物質(zhì)(CK-MBmass),但是一些中心使用總CK、CK-B或兩者的催化活性。在大多數(shù)醫(yī)院，可以定量測(cè)定肌4丐蛋白T。對(duì)于篩選目的，我們提供的所有中心都具備第二強(qiáng)心藥(Cardiac-T)(Roche-BoehringerMannheim，Mannheim，Germany)肌鈣蛋白T定性測(cè)試。從所有患者中隨機(jī)采集血樣并保存在-70°。下用于中心分析肌鈣蛋白T和其它標(biāo)記。入院時(shí)、在侵入性手術(shù)前24小時(shí)內(nèi)、出院時(shí)、在3個(gè)月和6個(gè)月的患者就診時(shí)及在任何懷疑復(fù)發(fā)性不穩(wěn)定型心絞痛或心肌梗死時(shí)，隨機(jī)進(jìn)行了常規(guī)12導(dǎo)聯(lián)心電描記法。在出院前，對(duì)非侵入組中沒(méi)有禁忌的患者進(jìn)行了癥狀限制性自行車(chē)運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)16。在出院前和總在侵入性手術(shù)前，對(duì)1951名患者進(jìn)行了超聲心動(dòng)描記術(shù)與左心室功能標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)。將所有運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)結(jié)果和超聲心動(dòng)圖送往中心實(shí)驗(yàn)室用于評(píng)價(jià)。主要目的是比較6個(gè)月后侵入性和非侵入性策略對(duì)死亡和心肌梗死復(fù)合終點(diǎn)的影響。其它預(yù)先確定的終點(diǎn)為總死亡、心肌梗死、心絞痛癥狀、冠狀血管造影術(shù)和血管重建的近期需要、出血事件和中風(fēng)。通過(guò)三項(xiàng)常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)--典型胸痛、診斷心電描記法記錄(主要是新的Q波)或按照以下定義的心肌損傷生化標(biāo)記升高--發(fā)生兩項(xiàng)來(lái)限定心肌梗死。對(duì)于非手術(shù)相關(guān)性心肌梗死一次測(cè)定中，超過(guò)當(dāng)?shù)蒯t(yī)院心肌梗死診斷極P艮值的CK-MB物質(zhì)的濃度；在兩次連續(xù)測(cè)定中，超出當(dāng)?shù)貥O限值的CK、CK-B或CK-MB的催化活性；在一次測(cè)定中，超過(guò)當(dāng)?shù)貥O限值兩倍的CK、CK-B或CK-MB的催化活性。對(duì)于與經(jīng)皮冠狀血管介入有關(guān)的心肌梗死在一次測(cè)定中，CK-MB物質(zhì)為當(dāng)?shù)蒯t(yī)院心肌梗死診斷極限值的1.5倍；在一次測(cè)定中，超過(guò)當(dāng)?shù)貥O限值3倍的CK、CK-B或CK-MB的催化活性；或者在兩次測(cè)定中超過(guò)當(dāng)?shù)貥O限值1.5倍的催化活性。僅新Q波被用來(lái)診斷與冠狀動(dòng)脈分流術(shù)有關(guān)的心肌梗死。死亡原因應(yīng)通過(guò)尸體解剖確定。所有報(bào)告的死亡、心肌梗死、與經(jīng)皮冠狀血管介入有關(guān)的生化標(biāo)記升高和由中心實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的心電描記法中的新Q波都由獨(dú)立的臨床事件委員會(huì)(clinical-eventcommittee)判定。通過(guò)制藥公司發(fā)起人聘用的外部監(jiān)管人員對(duì)所有病例記錄形式的原始數(shù)進(jìn)行不間斷地驗(yàn)證以確保數(shù)據(jù)質(zhì)量。所有心臟事件(有效終點(diǎn))和不良事件數(shù)據(jù)不斷由中心直接送往數(shù)據(jù)和安全監(jiān)測(cè)理事會(huì)。本研究遵守赫爾辛基宣言(DeclarationofHelsinki),所有地方倫理委員會(huì)均批準(zhǔn)了該方案。入院時(shí)，采用在GUSTOIV研究(參見(jiàn)實(shí)施例l,見(jiàn)上文)中所述的相同免疫放射分析(IRMA)測(cè)定了血清或血漿GDF-15濃度。在所分配的侵入性治療策略組中以及在所分配的非侵入性治療策略組中，以GDF-15水平的三分位數(shù)(<1200pg/ml;1200-1800pg/ml;>1800pg/ml)記錄了結(jié)果事件(兩年心肌梗死、兩年死亡、兩年心肌梗死和死亡)比例的差異。運(yùn)用Kaplan-Meier方法來(lái)說(shuō)明在隨訪(fǎng)期間兩組中與GDF-15三分位數(shù)有關(guān)的事件的時(shí)間選擇(圖1)。下表1表示死亡和/或再發(fā)急性心M^死(AMI)的風(fēng)險(xiǎn)。38表1:在FRISCII臨床試驗(yàn)招募的1045名侵入性NSTE-ACS患者和1034名非侵入性NSTE-ACS患者中與侵入性相對(duì)于非侵入性策略有關(guān)的兩年期結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>實(shí)施例3:對(duì)GUSTO-IV研究的NSTE-ACS患者的短期和長(zhǎng)期死亡率和心肌再梗死的分析研究樣品來(lái)自1999年和2000年之間在NSTE-ACS患者中進(jìn)行GUSTO-IV臨床試驗(yàn)的患者。已經(jīng)公開(kāi)了臨床試驗(yàn)的詳細(xì)設(shè)計(jì)和主要結(jié)果(Simoons2001，Lancet98:351-360;Ottervanger2003，Circulation,107:437-442)。符合條件的患者至少21歲，入院24小時(shí)內(nèi)有一次或多次持續(xù)至少5分鐘的心絞痛發(fā)作，以及心肌4丐蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性或至少0.5mmST^:壓低。除了標(biāo)準(zhǔn)治療外，患者被隨機(jī)分配輸注阿昔單抗或安慰劑達(dá)24小時(shí)或48小時(shí)。在30天的隨訪(fǎng)期間，記錄了全因死亡率(all-causemortality)和確診的心肌梗死比率。在一年隨訪(fǎng)內(nèi)，只收集了全因死亡率信息。在對(duì)瑞典站點(diǎn)招募的399名連續(xù)患者進(jìn)行的小組研究中，在入院時(shí)(即在基線(xiàn))和24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)采集了系列血漿樣品，這些是首次在本研究中進(jìn)行的分析?；谶@個(gè)群組的重要結(jié)果，才決定對(duì)臨床試驗(yàn)的其它1682名隨機(jī)患者入院時(shí)采集的血清樣品進(jìn)行GDF-15水平分析，以達(dá)到至少2000名患者，并且能夠研究與其它預(yù)后生物標(biāo)記，即肌鈣蛋白T、NT-proBNP、CRP和肌酐清除率的相互作用。血漿樣品還得自包括在瑞典男女性及缺血性心臟病(SWediwomenandmenandISCHemicheartdisease,SWISCH)研究中明顯健,的受治療者。這一群體由429名老年人組成，其年齡和性別與法安E〉(FRagmin)和冠狀動(dòng)脈疾病不穩(wěn)定期快速血管重建(FRagminandfastrevascularizationduringInstabilityinCoronaryarterydisease,FRISC)II臨床試驗(yàn)中所包括的其它同齡的NSTE-ACS群體相當(dāng)。已經(jīng)公開(kāi)了SWISCH臨床試驗(yàn)的詳細(xì)設(shè)計(jì)和一些生物標(biāo)記結(jié)果。異常靜止12導(dǎo)聯(lián)ECG、心血管藥物治療、已確診的心血管疾病、其它慢性疾病或急性疾病的受治療者被排除在對(duì)照群體之外。要求所有SWISCH參與者表現(xiàn)出肌酸酐、血糖和血紅蛋白水平正常以及白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)正常。基線(xiàn)特征用數(shù)值和比例表示。連續(xù)數(shù)據(jù)以中位值和四分位數(shù)間距給出。通過(guò)非參數(shù)曼恩-惠特尼U檢驗(yàn)評(píng)價(jià)了病例和對(duì)照之間連續(xù)變量的比較。為了評(píng)價(jià)GDF-15水平和基線(xiàn)特征之間的關(guān)系，以及肌鈣蛋白T、NT-proBNP、CRP和肌酸肝清除率的水平在GDF-15的三分位數(shù)內(nèi)，采用了GDF-15水平和這些因子之間的斯皮爾曼(Spearman)秩相關(guān)系數(shù)以及若千組中比例間關(guān)聯(lián)的Cochran-Armitage趨勢(shì)檢驗(yàn)兩者。采用斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)和威爾科克森(Wilcoxon)符號(hào)秩檢驗(yàn)對(duì)患者組內(nèi)GDF-15隨時(shí)間的變化進(jìn)行了比較。按GDF-15水平的三分位數(shù)，對(duì)結(jié)果事件(30天心肌梗死、30天死亡、30天心肌梗死和死亡、一年死亡)比例上的差異用Cochran-Armitage趨勢(shì)檢驗(yàn)作判斷。Kaplan-Meier方法用來(lái)說(shuō)明隨訪(fǎng)期間與GDF-15的三分位數(shù)有關(guān)的事件的時(shí)間選擇，采用log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)(圖2)。采用單因素邏輯斯詩(shī)(logistic)回歸分析來(lái)鑒定一年死亡的預(yù)測(cè)因子。然后所有變量用多因素邏輯斯諦回歸分析檢驗(yàn)。有關(guān)一年死亡的GDF-15、月幾鉤蛋白T、NT-proBNP、CRP和肌酸酐清除率的預(yù)后值的額外比較，繪200780028658.1明顯健康的對(duì)照受治療者的GDF-15水平對(duì)照由男288名(67.1%)和女141名(32.9%)組成，年齡中位值65歲(四分位數(shù)間距59-71歲)，其中14.5%為近期吸煙者。這個(gè)群體中GDF-15水平中位值為762pg/ml，460762pg/ml和1191pg/ml，分別為第IO和第90百分位數(shù)。因此，將正常上限值(ULN)化成整數(shù)1200pg/ml。NT-proBNP、CRP和肌酸酐清除率水平的中位值(四分位數(shù)間距)分別為74(46-113)pg/ml、1.40(0.79-2.40))ng/ml和73(62-86)m1/分鐘。GDF-15水平與年齡(斯皮爾曼(Spearman)p-0.21;PO.001)和炎癥活性(CRP,p=0.18;PO.001)呈正相關(guān)，與月幾酸酐清除率呈負(fù)相關(guān)(p二0.14;P=0.002)。在這個(gè)組中，與性別、近期吸煙或NT-proBNP無(wú)顯著相關(guān)性。NSTE-ACS患者入院時(shí)的GDF-15水平NSTE-ACS患者由男1315名(63.2。/。)和女766名(36.8°/。)組成，年齡中位值66歲(四分位數(shù)間距57-74歲)。盡管患者比健康對(duì)照(P-0.014)年紀(jì)稍大，但是兩個(gè)群組就年齡和性別而言極為相當(dāng)。隨機(jī)化阿昔單抗治療對(duì)在任何時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的GDF-15水平都沒(méi)有影響，因此，將隨機(jī)分組的各組合并。表2表示這個(gè)患者群體中從癥狀出現(xiàn)到入院的時(shí)間、心血管風(fēng)險(xiǎn)因素現(xiàn)狀、之前心血管疾病的表現(xiàn)和治療、正在發(fā)生的缺血的ECG癥狀以及肌鈣蛋白T、NT-proBNP、CRP和肌酸酐清除率的基線(xiàn)水平。與健康對(duì)照相比，NSTE-ACS患者顯示GDF-15水平顯著(PO.001)較高；中位值為1445pg/ml，850pg/ml、1187pg/ml、1817pg/ml和3314pg/ml分別標(biāo)為第10、第33、第66和第90百分位數(shù)。因此，在健康對(duì)照中，大約2/3的NSTE-ACS患者具有超過(guò)ULN的GDF-15水平(第90百分位數(shù))。因?yàn)樵揢LN對(duì)應(yīng)于患者的較低三41分位數(shù)，當(dāng)涉及結(jié)果時(shí)，將患者資料按三分位數(shù)進(jìn)行分層(截止限(CUtofflimit)1200pg/ml和1800pg/ml)。NSTE-ACS患者中GDF-15水平與臨床和生化因子之間的關(guān)系入院時(shí)，GDF-15的三分位數(shù)遞增與年齡、女性、高血壓史、糖尿病史、之前心臟病的表現(xiàn)(即心絞痛、心肌梗死)、冠狀血管重建和心力衰竭、ACE抑制劑療法呈正相關(guān)，還與正在發(fā)生的缺血和壞死的標(biāo)記、心肌功能障礙、炎癥(如ST段壓低所表明的一樣)以及肌4丐蛋白T、NT-proBNP和CRP的水平呈正相關(guān)(表2);GDF-15水平與近期吸煙和肌酸酐清除率呈負(fù)相關(guān)(表2)。在多重回歸分析中，采用GDF-15的自然對(duì)數(shù)作為因變量，下列因素與GDF-15顯著相關(guān)年齡(PO.OOl)、男性(PO.OOl)、由癥狀出現(xiàn)到入院的時(shí)間(P-0.006;反比關(guān)系)、近期吸煙(P〈0.001)、糖尿病(PO.OOl)、心力衰竭史(P〈0.001)、ST段壓低(P^.050)、NT-proBNP(P<0.001)、CRP(PO.001)和肌酸酐清除率(PO.001;反比關(guān)系)。沒(méi)有與肌4丐蛋白T水平成獨(dú)立關(guān)系的因素(P-0.436)。表2:入院時(shí)NSTE-ACS患者按照GDF-15水平的三分位數(shù)的特征推導(dǎo)研究P值(n=235(n=220)臨床特征年齡[歲]6(56-72)63(58-69)0.161男性215(91.5)197(89.5)0.479BMI[kg/m2]a25.426.10.444(23.0-29.3)(23.7-28.7)缺血病因168(71.5)140(63.6)0.085心力衰竭嚴(yán)重程度和生物標(biāo)記NYHA級(jí)別2.7±0.82.2±0.7〈0.001IIIIIIIVLVEF[%]肌酸Sf[pmol/L]肌酸酐清除率[ml/分鐘]a尿酸[pmol/L]b血紅蛋白[g/dL]cNT-proBNP[ng/L]GDF-15[ng/L]基線(xiàn)藥物治療ACE抑制劑或ARBP-阻滯藥利尿藥螺內(nèi)酯12(5.1)84(35.7)96(40.9)43(18.3)102(84-137)71.5(45.6-90.8)422(345-529)13.8(12.3-14.9)1340(434-3740)2240(1232-4010)183(77.9)112(47.7)167(71.1)58(24.7)31(14.1)111(50.5)72(32.7)6(2.7)30(24-40)33(27匿38)99(卯-115)68.4(53.8-88.8)390(330-450)14.0(13.1-14.8)521(209-1070)1465(1004-2194)213(96.8)146(66.4)194(88.2)50(22.7)0.0820.4300.6380.3920.108〈0.001<0扁0.004<0扁<0駕0.703數(shù)值為n(%),中位值(第25和第75百分位數(shù))或平均值土SD。。數(shù)據(jù)得自推導(dǎo)群組中的216名患者和驗(yàn)證群組中的198名患者；b數(shù)據(jù)得自驗(yàn)證群組中的207名患者；c數(shù)據(jù)得自驗(yàn)證群組中的214名患者。BMI表示體重指數(shù)；LVEF,左心室射血分?jǐn)?shù)；ARB,血管緊張素受體阻滯藥。NSTE-ACS患者中GDF-15水平的時(shí)間評(píng)價(jià)在入院時(shí)以及24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后已獲得樣品的NSTE-ACS群體的399名患者群組中，對(duì)不穩(wěn)定冠狀動(dòng)脈疾病發(fā)作期間GDF-15血清水平的時(shí)間評(píng)價(jià)進(jìn)行了研究。GDF-15自然對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間的線(xiàn)性回歸分析揭示出低但是有統(tǒng)計(jì)顯著性(P-0.010)的斜率，這就表明在這一時(shí)間間隔內(nèi)呈逐步增加。然而，如表3所示，這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，GDF-15水平保持在同一范圍內(nèi)。個(gè)體內(nèi)隨時(shí)間的變化非常有限，正如入院與稍后時(shí)間點(diǎn)上GDF-15水平之間的密切關(guān)系所示(表3)。因此，67.4%、69.7%和70.4%患者分別在24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)具有超出ULN的GDF-15水平表3:NSTE-ACS患者中GDF-15水平的時(shí)間評(píng)價(jià)基線(xiàn)GDF-15(ng/L)中位值1499四分位數(shù)間距(11512203)24小時(shí)48小時(shí)72小時(shí)15751630脇-(1112-(1163-(11402286)2396)2357)斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)(隨訪(fǎng)對(duì)基線(xiàn))0.89P〈0麓0.80PO.0010.72PO週GDF-15水平的變化(隨訪(fǎng)對(duì)基線(xiàn)，ng/L)中位值四分位數(shù)間距4874124(-111至253)(-146至360)(-143至434)P=0.001PO.001PO扁在399名患者的群組，測(cè)定了入院時(shí)(基線(xiàn))和24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后的GDF-15水平。計(jì)算出斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)和P值以說(shuō)明隨訪(fǎng)GDF-15水平與基線(xiàn)GDF-15水平的關(guān)系。通過(guò)威爾科克森符號(hào)秩檢驗(yàn)對(duì)隨訪(fǎng)GDF-15水平與基線(xiàn)相比的變化進(jìn)行了評(píng)價(jià)。NSTE-ACS患者中GDF-15水平與死亡率在隨訪(fǎng)期間，NSTE-ACS患者中死亡風(fēng)險(xiǎn)隨入院時(shí)GDF-15水平的升高而顯著增加(圖2)。對(duì)于不同三分位數(shù)的Kaplan-Meier死亡率曲線(xiàn)顯示早期分離，30天死亡率分別為0.6%、2.0%和4.3%(PO.OOl)。曲線(xiàn)分離延續(xù)到指數(shù)事件后整整一年內(nèi)，在一年隨訪(fǎng)后，相應(yīng)三分位數(shù)的死亡率為1.5%、5.00/。和14.1%(PO.OOl)。ROC分析進(jìn)一步表明比起NT-proBNP(AUC=0.735)、肌酸酐清除率(AU00.728)、CRP(八1100.629)和肌4丐蛋白T(AUC=0.620)，GDF-15是死亡率的強(qiáng)生化指標(biāo)，曲線(xiàn)下面積(AUC)為t).757(圖3)。根據(jù)單因素邏輯斯諦回歸分析，年齡、高血壓史、糖尿病、之前有心絞痛或心"幾梗死、充血性心力衰竭史以及肌鈣蛋白T、NT-proBNP、CRP、肌酸酐清除率和GDF-15的水平全都與一年死亡率有關(guān)(表4)。采用多因素邏輯斯諦回歸法，年齡、之前有心肌梗死以及NT-proBNP和GDF-15水平升高表現(xiàn)為僅有的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(表4)。在這些獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)中，GDF-15水平表現(xiàn)為最強(qiáng)的死亡預(yù)測(cè)因子(表4)。當(dāng)采用向后逐步法(backwardstepwiseapproach)或GDF-15水平分層和三分位數(shù)的其它生物標(biāo)記時(shí)，結(jié)果都不會(huì)發(fā)生改變。同樣當(dāng)在逐步篩選中一次加1(單位)時(shí)，保留顯著性的僅有的變量是年齡、之前有心肌梗死、NT-proBNP和GDF-15。值得注意的是，在399名患者的群組中，入院時(shí)或在稍后時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的GDF-15水平在一年死亡率方面提供類(lèi)似的預(yù)后信息，盡管似乎最初24小時(shí)內(nèi)的GDF-15水平具有最高的可預(yù)測(cè)價(jià)值(表5)。表4:2081名NSTE-ACS患者中有關(guān)基線(xiàn)特征、病史和入院時(shí)測(cè)定值的一年死亡率的邏輯斯諦回歸分析單變量模型多變量模型優(yōu)勢(shì)比估計(jì)值(95%(31)P值優(yōu)勢(shì)比估計(jì)值(95。/。CI)P值年齡(每歲)1.087(1.066-1.108)<0.0011.044(1.013-1.077)0駕性別(男性對(duì)女性)0.723(0.513-l扁)0.064U34(0.730-1.764)0.574自癥狀起的時(shí)間0.995(0.971-1.020)0.6950細(xì)(0.951-1.010)0.185(每小時(shí))近期吸煙10.727(0.466-1.135)0.1611.674(0.930-3.012)0駕高血壓史11.796(1.265-2.550)0扁1.102(0.715-1.699)0.658高膽固醇血癥史11.016(0.692-l.柳)0.9361.386(0.876-2.192)0.163糖尿病12.251(1.564-3.240)<0細(xì)1.396(0.883-2.207)0.153之前有心絞痛11.727(1.221-2.445)0扁1.075(0.694-1.664)0.746之前有心肌梗死12.945(2.087-4.156)〈0.0011.904(1.224-2.963)0駕之前有血管重建10.746(0.437-1.273)0.2830.583(0.3U-1.093)0.092心力衰竭史13.404(2.124-5.454)<0扁1.161(0.647-2.084)0.617ST段壓低20.5mm11.348(0.851-2.134)0.203l細(xì)(0.603-1，)0.822肌釣蛋白T21.255(1.141-1.381)<0駕1.085(O駕-1.241)0.236NT-proBNP21.902(1.674-2.161)<0.0011.296(1.063-1.580)0細(xì)CRP21.453(1.278-1.654)O.0011.045(0.888-1.230)0.5%肌酸酐清除率30.962(0.954-0.971)<0扁0.995(0.982-1，)0.494GDF-1524.817(3.625-6.402)<0扁2.197(1.431-3.371)<0細(xì)'是；2為自然對(duì)數(shù)值中的一個(gè)單位，因?yàn)樵诜治銮白兞考♀}蛋白T、NT-proBNP、CRP和GDF-15被轉(zhuǎn)換成其自然對(duì)數(shù)；3為1ml/分鐘變化。表5:基線(xiàn)和隨訪(fǎng)時(shí)GDF三分位數(shù)作為一年死亡率的預(yù)測(cè)因子按照GDF-15水平的一年死亡率基線(xiàn)24小時(shí)48小時(shí)72小時(shí)GDF-15<1200ng/L1(0.8)3(2.5)3(2.7)5(4.5)GDF-151200-1800ng/L3(2.4)o(o)5(4.3)2(1.7)GDF-15>1800ng/L19(12.7)20(12.1)15(8.7)16(9.5)p值承O.001<0麓0.0370.051在399名患者群組中，入院時(shí)(基線(xiàn))和24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后測(cè)得的GDF-15水平。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，按照GDF-15水平的三分位數(shù)對(duì)患者進(jìn)行分層。提供了按照GDF-15三分位數(shù)的一年死亡數(shù)(。/。)。*Cochran-Armit年齡趨勢(shì)檢驗(yàn)。NSTE-ACS患者中GDF-15水平與復(fù)發(fā)性心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)入院時(shí)GDF-15水平與30天死亡或復(fù)發(fā)性心肌梗死的復(fù)合終點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)高度相關(guān)。隨著GDF-15的三分位數(shù)升高，30天死亡或心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)分別為5.0%、6.9%和10.8%(PO.OOl)。這一關(guān)聯(lián)性主要是由GDF-15與死亡率的相關(guān)性驅(qū)動(dòng)的。雖然，在指數(shù)事件后30天內(nèi)再發(fā)心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)與GDF-15的三分位數(shù)升高顯著相關(guān)，比率分別為4.8%、5.6%和7.2%(P=0.048),但是根據(jù)多因素邏輯斯諦回歸分析，GDF-15與30天復(fù)發(fā)性心肌梗死率之間不存在獨(dú)立關(guān)系。NSTE-ACS患者中GDF-15與預(yù)后標(biāo)記的組合多因素邏輯斯諦回歸分析表明，GDF-15和NT-proBNP是僅有的對(duì)于死亡率具有獨(dú)立預(yù)后重要性的生物標(biāo)記。因此，將這些標(biāo)記的三分位數(shù)結(jié)合起來(lái)，并且另外使用死亡率、之前有心肌梗死的獨(dú)立臨床預(yù)測(cè)因子。結(jié)果表明，GDF-15的三分位數(shù)遞增與NT-proBNP水平的組合提供了額外的預(yù)后信息，并鑒定出一年死亡率的患者層，其中在之前無(wú)心肌梗死史的患者中范圍為0.3%至13.7%,在之前有心肌梗死的患者中范圍為4.7%至23.6%(圖4)。這些關(guān)系僅僅通過(guò)患者年齡而47得到進(jìn)一步修正，對(duì)于年齡每長(zhǎng)一歲死亡風(fēng)險(xiǎn)便有4.4%的相對(duì)變化沐4)。實(shí)施例3:慢性心力衰竭患者中GDF-15的預(yù)后效用在4個(gè)歐洲中心即雅典(希臘，n=51)、倫敦(英國(guó)，n-89)和弗羅茨瓦夫/扎布熱(波蘭，11=95)招募的235名CHF患者的群組(推導(dǎo)群組)中，對(duì)GDF-15水平與臨床和生化基線(xiàn)參數(shù)及存活進(jìn)行了初步研究。在驗(yàn)證群組中，我們前瞻性評(píng)價(jià)了得自推導(dǎo)群組(即為CHF患者提供獨(dú)立的預(yù)后信息的GDF-15循環(huán)水平升高)的原則性假設(shè)。驗(yàn)證群組包括在維羅納(意大利)招募的220名CHF患者。所有患者都參與了設(shè)計(jì)用來(lái)研究慢性心力衰竭中新的神經(jīng)激素和炎癥預(yù)后生物標(biāo)記的計(jì)劃，并且提交了書(shū)面知情同意書(shū)。在所有患者中，CHF的診斷是基于癥狀和臨床表現(xiàn)以及經(jīng)放射性核素或侵入性心室造影術(shù)或超聲心動(dòng)描記術(shù)獲得的左心室增大或收縮期功能受損的證據(jù)。所有患者的CHF史都至少有6個(gè)月，在研究前至少4周內(nèi)經(jīng)藥物治療后達(dá)到穩(wěn)定。排除了過(guò)去12周內(nèi)的心肌梗死、已知炎癥性疾病或惡性疾病、或者肌酸酐水平〉400pmol/L的患者。所有參與研究地方的機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)都批準(zhǔn)了該方案。通過(guò)門(mén)診評(píng)價(jià)和電話(huà)聯(lián)系對(duì)患者進(jìn)行了隨訪(fǎng)。在2005年5月25曰檢查了推導(dǎo)群組的存活狀態(tài)，在2006年5月31日檢查了驗(yàn)證群組的存活狀態(tài)。無(wú)患者失訪(fǎng)。研究的最初終點(diǎn)為全因死亡率。在驗(yàn)證群組中，也可獲得有關(guān)死亡原因的信息。經(jīng)檢查，進(jìn)行心臟移植的9名患者在事件時(shí)間點(diǎn)上存活。以半臥位休息^10分鐘后，抽出靜脈血樣用于評(píng)價(jià)GDF-15和其它參數(shù)。正如最近所^^開(kāi)一樣，采用GDF-15親和層析法純化的多克隆山羊抗人GDF-15IgG抗體(得自R&DSystems)(AF957)，通過(guò)免疫放射分析(IRMA)測(cè)定了GDF-15濃度。所有GDF-15測(cè)定值由漢諾威醫(yī)學(xué)院(HannoverMedicalSchool)的研究人員進(jìn)行，研究人員不了解患者特征和結(jié)果。通過(guò)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ELICIA,RocheDiagnostics)測(cè)定了NT-proBNP水平。在參與該研究的研究中心進(jìn)行了肌酸酐、尿酸和血紅蛋白的測(cè)定。根據(jù)Cockcroft和Gault公式計(jì)算出肌酸酐清除率。合適的話(huà)，基線(xiàn)特征用中位值(第25和第75百分位數(shù))、平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差或絕對(duì)數(shù)和百分比表示。科爾莫戈羅夫_斯米爾諾夫(Kolmogorov-Smirnov)檢驗(yàn)用來(lái)檢驗(yàn)各連續(xù)變量的正態(tài)分布。通過(guò)曼恩_惠特尼(Mann-Withney)檢驗(yàn)或不配對(duì)斯圖登t檢驗(yàn)對(duì)各連續(xù)變量進(jìn)行了比較?；颊邔又g的比較通過(guò)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)或ANOVA進(jìn)行。比例用卡方oa檢驗(yàn)進(jìn)行比較。多重回歸分析用來(lái)鑒定與GDF-15水平獨(dú)立相關(guān)的因子。單變量和多變量Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析用來(lái)評(píng)價(jià)預(yù)后相關(guān)性。Kaplan-Meier曲線(xiàn)用來(lái)說(shuō)明在隨訪(fǎng)期間GDF-15水平有關(guān)事件的時(shí)間選擇，用Cox回歸分析進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。對(duì)于GDF-15、肌酸酐、尿酸、血紅蛋白和NT-proBNP的預(yù)后值的其它比較，繪制了接收者工作特征(ROC)曲線(xiàn)，計(jì)算出曲線(xiàn)下面積(AUC)。運(yùn)用StatView5.0.1或MedCalc8.2.0.3(ROC分析)統(tǒng)計(jì)程序之一進(jìn)行了所有數(shù)據(jù)的分析。推導(dǎo)群組由235名患者組成，中位值年齡66歲(第25和第75百分位數(shù)，56-72)?；颊叩呐R床和生化特征概括于表6中。中位值GDF-15水平為2240(1232-4010)ng/L。大約3/4的患者(75.3%)的GDF-15水平超過(guò)明顯健康的老年受治療者的正常上限值(ULN)1200ng/L。GDF-15水平與NYHA功能級(jí)別密切相關(guān)NYHAI:850(646-1747)ng/L、NYHAII:1621(1025-2563)ng/L、NYHAIII:2510(1385-3686)ng/L、NYHAIV:4869(2722-8807)ng/L(趨勢(shì)PO.OOl)。因?yàn)橥茖?dǎo)群組中ULN相當(dāng)于較低的四分位數(shù)邊界，所以將患者按四分位數(shù)(截止限1200ng/L、2200ng/L和4000ng/L)分層以進(jìn)行進(jìn)一步分析。推導(dǎo)群組中235名患者有68(28.9%)在隨訪(fǎng)期間死亡。12個(gè)月死亡率和18個(gè)月死亡率分別為15.00/0(95%CI，10.3畫(huà)19.7)和22.9%(95%CI,16,5陽(yáng)29.3)。隨訪(fǎng)期間死亡風(fēng)險(xiǎn)隨GDF-15的四分位數(shù)升高而顯著增加(圖5A)。按相應(yīng)的四分位數(shù)，12個(gè)月死亡率為2.0%、8.7%、10.5%和37.5%，18個(gè)月死亡率為2.00/0、23.8%、19.10/o和45.6o/o(P〈0.001)。驗(yàn)證群組由220名患者組成，中位值年齡63歲(58-69)。驗(yàn)證群組中患者癥狀較輕(NYHA級(jí)別)，表現(xiàn)出較低的NT-proBNP水平，更常用ACE抑制劑或血管緊張素受體阻滯藥、P-阻滯藥或利尿藥治療，但是與推導(dǎo)群組相比，具有相似的年齡、性別分布、體重指數(shù)、心力衰竭病因、LVEF、腎功能、尿酸和血紅蛋白水平(表6)。中位值GDF-15水平為1465(1004-2194)ng/L，這顯著低于推導(dǎo)群組(表6);驗(yàn)證群組中60.5%的患者表現(xiàn)出GDF-15水平超過(guò)ULN。在驗(yàn)證群組中，GDF-15水平與NYHA功能級(jí)別密切相關(guān)NYHAI:1106(849-1682)ng/L,NYHAII:1294(1007國(guó)1945)ng/L，NYHAIII:1903(1122-2650)ng/L，NYHAIV:4147(1971畫(huà)5905)ng/L(趨勢(shì)PO.OOl)。表6:患者特征<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>II84(35.7)111(50.5)III96(40.9)72(32.7)IV43(18.3)6(2.7)LVEF[%]肌酸酐[pmol/L]肌酸酐清除率[ml/分鐘]a血紅蛋白[g/dL〗cNT陽(yáng)proBNP[ng/L]GDF-15[ng/L]藥物治療基線(xiàn)ACE抑制劑或ARBP-阻滯藥利尿藥螺內(nèi)酯尿酸[pmol/L]b30(24-40)33(27-38)0.082102990.430(84-137)(90-115)71.568.40.638(45.6-90.8)(53.8-88.8)13.814.00.108(12.3-14.9)(13.1-14.8)1340521O.001(434-3740)(209-1070)22401465<0篇(1232-4010)(1004-2194)183(77.9)213(96.8)58(24.7)50(22.7)422390(345-529)(330-450)0扁112(47.7)146(66.4)<0扁167(71.1)194(88.2)<0細(xì)0.7030.392數(shù)值為n(%)、中位值(第25和第75百分位數(shù))或平均值土SD。3推導(dǎo)群組中的數(shù)據(jù)得自216名患者，驗(yàn)證群組中的得自198名患者；b驗(yàn)證群組中的數(shù)據(jù)得自207名患者；c驗(yàn)證群組中的數(shù)據(jù)得自214名患者。BMI表示體重指數(shù)；LVEF,左心室射血分?jǐn)?shù)；ARB，血管緊張素受體阻滯藥。驗(yàn)證群組中，220名患者中有49名(22.3%)在隨訪(fǎng)期間死亡。12個(gè)月死亡率、18個(gè)月死亡率和60個(gè)月死亡率分別為4.6%(95%CI，1.9-7.3)、6.9%(95%CI,3.610.2)和18.6%(95%CI,13.3陽(yáng)23.9)。采用在推導(dǎo)群組確立的截止限，GDF-15水平的升高與全因死亡率密切相關(guān)(圖5B)。在GDF-15水平S1200ng/L、介于1201ng/L和2200ng/L之間、介于2201ng/L和4000ng/L之間和>4000ng/L的患者中，12個(gè)月死亡率分別為3.5%、3.8%、8.0%和6.3%,18個(gè)月為5.9%、3.8%、10.7%和26.3%，60個(gè)月10.7%、16.2%、27.2%和53.1%(PO.OOl)。與生存者相比，因進(jìn)行性心力衰竭死亡的患者以及猝死患者兩者的GDF-15水平顯著較高(表7)。表7:全因死亡率的多變量Cox回歸分析推導(dǎo)群組驗(yàn)證群組特征HR(95%CI)P值HR(95%CI)P值年齡(每10歲)U58(0.906-1.479)0.2411.190(0.776-1.826)0.425男性3.491(0.787-15.49)0.1001.018(0,369-2.811)0.973缺血病因1.101(0.627-1.931)0.7381，(0.525-1.939)0.979LVEF(每10%降低)1.609(1.241-2夠<0.0011.843(1.177-2.885)0細(xì)NYHA級(jí)別(每級(jí))1.296(0.889-1.891)0.1771.039(0.640-1.688)0.877Ln肌酸酐2.329(0.939-5.781)0.0680.523(0.102-2.684)0.437Ln尿酸0.903(0.398-2.047)0.8060.817(0.239-2.787)0.747Hb(每1g/dL降低)1.094(0.939-1.273)0.2480.952(0.758-1.197)0.676LnNT-proBNP1.076(0.836-1.386)0.5691.153(0.824-1.613)0.407LnGDF-152.156(1.307-3.566)0駕2.888(1.345-6.200)0扁表中顯示了95。/。置信區(qū)間(CI)的危險(xiǎn)比(HR)和P值。肌酸酑、尿酸、NT-proBNP和GDF-15不是正態(tài)分布的，因此在分析前被轉(zhuǎn)換成其自然對(duì)數(shù)；危險(xiǎn)比是指這些變量的自然對(duì)數(shù)尺度增加的一個(gè)單位。Hb表示血紅蛋白。CHF患者中，若干臨床特征和生化參數(shù)表示預(yù)后不良，單變量Cox回歸分析證實(shí)了在兩個(gè)患者群組確定的這些標(biāo)記的效用(圖6，A和B)。在兩個(gè)群組中，高齡、NYHA級(jí)別較高、LVEF降低、肌酸酐清除率較低以及肌酸肝和NT-proBNP水平升高全都與死亡風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。尿酸水平升高、體重指數(shù)降低和血紅蛋白濃度降低僅僅在推導(dǎo)群組中預(yù)測(cè)了全因死亡率。與圖5中所示數(shù)據(jù)一致，在兩個(gè)群組中，較高的GDF-15水平與死亡率顯著增加有關(guān)。通過(guò)多變量Cox回歸分析，在推導(dǎo)群組和驗(yàn)證群組中，GDF-15和LVEF表現(xiàn)為全因死亡率的僅有的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(表7)。對(duì)于GDF-15作為連續(xù)變量，所獲得的結(jié)果沒(méi)有發(fā)生改變。在合并的資料中，GDF-15(P〈0.001)連同LVEF(PO.001)和年齡(P-0.003)—起表現(xiàn)為獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。當(dāng)模型中包括體重指數(shù)和肌酸酐清除率(數(shù)據(jù)得自408名患者)時(shí)，GDF-15(PO.001)連同LVEF(P〈0.001)和肌酸酐清除率(P-0.045)—起獨(dú)立預(yù)測(cè)出全因死亡率。ROC曲線(xiàn)分析進(jìn)一步表明，GDF-15是死亡率的強(qiáng)生化指標(biāo)，曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.830(95%CI,0.783-0.870)，這與NT-proBNP的AUC(0.852;95%CI,0.806-0.890)沒(méi)有顯著不同(P-0,523)，但是即顯著(PO.001)大于以下指標(biāo)的AUC:肌酸酐(0.646;95%CI，0.589-0.700)、尿酸(0.657;95%CI,0.598-0.708)和血紅蛋白(0.655;95%CI,0.598-0.708)。在合并的患者群體中，預(yù)測(cè)18個(gè)月死亡率的最佳GDF-15水平為2729ng/L(靈敏度81.1%;特異性71.2%;陽(yáng)性概率比2.81)。另外的ROC曲線(xiàn)分析表明，2729ng/L也是預(yù)測(cè)12個(gè)月后死亡率的最佳截止值(數(shù)據(jù)未顯示)。實(shí)施例4:肺栓塞患者中GDF-15的預(yù)后效用按照上述實(shí)施例中所述方法，在123名患有急性肺栓塞的患者群組中，對(duì)血清樣品中GDF-15的量進(jìn)行了測(cè)定。與健康個(gè)體比較，患有肺栓塞的患者表現(xiàn)出GDF-15的中位值水平顯著升高(2，196pg/ml;百分位25.-75.:1,333-3,457pg/ml)(p<0.001)。準(zhǔn)確地講，82%(n=101)的GDF-15水平超出正常上限值1,200pg/ml。發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥(需要插管法、給予兒茶酚胺或心肺復(fù)蘇)或取樣后30天內(nèi)死亡的患者(n-17)顯示出血清水平中位值高達(dá)6,039pg/ml,百分位25,75.為2,778-19,722pg/ml，而無(wú)并發(fā)癥的患者的血清水平中位值為2，036pg/ml,百分位25,75.為1,279pg/ml至3，176pg/ml(p<0.001)。數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)表明，超出4,600pg/ml的GDF-15水平表示發(fā)生并發(fā)癥或死亡的風(fēng)險(xiǎn)增加10倍(即風(fēng)險(xiǎn)從5.0%增加至52.20/0;pO.001);參見(jiàn)圖7(A)。6個(gè)月內(nèi)，死亡風(fēng)險(xiǎn)繼續(xù)增加高達(dá)7.7倍(n=22);參見(jiàn)圖7(B)。權(quán)利要求1.一種鑒定對(duì)心臟療法或介入敏感的受治療者的方法，該方法包括a)測(cè)定需要心臟介入的受治療者樣品中生長(zhǎng)分化因子15(GDF-15)的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15的量與參比量相比較，從而鑒定出對(duì)心臟療法敏感的受治療者。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述心臟介入選自經(jīng)皮冠狀血管成形術(shù)、經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀球嚢血管成形術(shù)、激光血管成形術(shù)和冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)、旁路植入術(shù)或管腔內(nèi)技術(shù)，目的在于恢復(fù)血流量、血管開(kāi)通、穩(wěn)定斑塊和/或降低冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓負(fù)載。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述方法還包括測(cè)定所述受治療者樣品中心肌鉀蛋白的量，并且將心肌鈣蛋白的量與參比量相比較。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述心肌釣蛋白是肌鉤蛋白T。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括測(cè)定所述受治療者樣品中利尿鈉肽的量，并且將利尿鈉肽的量與參比量相比較。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述利尿鈉肽是NT-proBNP。7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述GDF-15的參比量為1200pg/ml。8.權(quán)利要求7的方法，其中GDF-15的量大于參比量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。9.權(quán)利要求3-8中任一項(xiàng)的方法，其中所述心肌鉤蛋白的參比量為0.01ng/ml，所述心肌鈣蛋白是肌4丐蛋白T。10.權(quán)利要求9的方法，其中心肌4丐蛋白的量大于參比量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。11.權(quán)利要求5-10中任一項(xiàng)的方法，其中所述利尿鈉肽的參比量為1000pg/ml，所述利尿鈉肽是NT-proBNP。12.權(quán)利要求11的方法，其中利尿鈉肽的量大于參比量表示受治療者對(duì)心臟介入敏感。13.—種筌定對(duì)心力衰竭療法^:感的受治療者的方法，該方法包括a)測(cè)定需要心力衰竭療法的受治療者樣品中生長(zhǎng)分化因子15(GDF-15)的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15的量與參比量相比較，從而鑒定出對(duì)心力衰竭療法敏感的受治療者。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述療法是基于藥物的療法。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述藥物是ACE抑制劑、AT-1受體阻滯藥、P-受體阻滯藥或醛甾酮拮抗藥。16.權(quán)利要求13的方法，其中所述療法是介入療法。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述介入療法是心臟再同步療法(CRT)或基于植入型心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器(ICD)的療法。18.權(quán)利要求13-17中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括測(cè)定所述受治療者樣品中心肌鈣蛋白的量，并且將心肌4丐蛋白的量與參比量相比專(zhuān)交。19.權(quán)利要求18的方法，其中所迷心肌鈣蛋白是肌4丐蛋白T。20.權(quán)利要求13-19中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括測(cè)定所述受治療者樣品中利尿鈉肽的量，并且將利尿鈉肽的量與參比量相比較。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述利尿鈉肽是NT-proBNP。22.權(quán)利要求13-21中任一項(xiàng)的方法，其中所述GDF-15的參比量為1200pg/ml。23.權(quán)利要求22的方法，其中GDF-15的量大于參比量表示受治療者對(duì)心力衰竭療法敏感。24.權(quán)利要求18-23中任一項(xiàng)的方法，其中所述心肌鈣蛋白的參比量為0.01ng/ml，所述心肌4丐蛋白是肌鈣蛋白T。25.權(quán)利要求24的方法，其中心肌4丐蛋白的量大于參比量表示受治療者對(duì)心力衰竭療法敏感。26.權(quán)利要求20-25中任一項(xiàng)的方法，其中所述利尿鈉肽的參比量為1000pg/ml，所述利尿鈉肽是NT-proBNP。27.權(quán)利要求26的方法，其中利尿鈉肽的量大于參比量表示受治療者對(duì)心力衰竭療法敏感。28.—種用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白的量;和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌釣蛋白的量與參比量相比較，從而預(yù)測(cè)死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。29.—種用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的死亡風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15和利尿鈉肽的量與參比量相比較，/人而預(yù)測(cè)死亡的風(fēng)險(xiǎn)。30.—種用于預(yù)測(cè)患有心血管并發(fā)癥的受治療者的再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和心肌4丐蛋白的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15和心肌4丐蛋白的量與參比量相比較，從而預(yù)測(cè)再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。31.權(quán)利要求28-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述心血管并發(fā)癥是急性冠狀動(dòng)脈綜合征或心力衰竭。32.權(quán)利要求28、29或31中任一項(xiàng)的方法，其中所述利尿鈉肽是NT-proBNP。33.權(quán)利要求28、30或31中任一項(xiàng)的方法，其中所述心肌鈣蛋白是肌鈣蛋白T。34.權(quán)利要求28-33中任一項(xiàng)的方法，其中所述GDF-15的參比量為1200pg/ml。35.權(quán)利要求34的方法，其中GDF-15的量大于參比量表示死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。36.權(quán)利要求28、30、31、33、34或35中任一項(xiàng)的方法，其中所述心肌鉀蛋白的參比量為0.01ng/ml，所述心肌4丐蛋白是肌鉀蛋白T。37.權(quán)利要求36的方法，其中心肌铞蛋白的量大于參比量表示死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。38.權(quán)利要求28、29、31、32、34或35中任一項(xiàng)的方法，其中所述利尿鈉肽的參比量為1000pg/ml，所述利尿鈉肽是NT-proBNP。39.權(quán)利要求38的方法，其中利尿鈉肽的量大于參比量表示死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。40.—種用于預(yù)測(cè)患有心力衰竭的受治療者的有害心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包4舌a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF的量與參比量相比較，從而預(yù)測(cè)有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述GDF-15的參比量為1200pg/ml。42.權(quán)利要求41的方法，其中GDF-15的量大于參比量表示存在有害心血管并發(fā)癥。43.—種用于鑒定對(duì)適于實(shí)施權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法的心臟介入敏感的受治療者的裝置，所述裝置包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而鑒定出對(duì)心臟介入敏感的受治療者。44.一種用于鑒定對(duì)適于實(shí)施權(quán)利要求13-27中任一項(xiàng)的方法的心力衰竭療法敏感的受治療者的裝置，所述裝置包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而鑒定出對(duì)心力衰竭療法敏感的受治療者。45.—種用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施權(quán)利要求28-39中任一項(xiàng)的方法的受治療者死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的裝置，所述裝置包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心月幾釣蛋白的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。46.—種用于預(yù)測(cè)適于實(shí)施權(quán)利要求40-42中任一項(xiàng)的方法的患有心力衰竭的受治療者的有害心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的裝置，所迷裝置包括用于測(cè)定GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。47.—種用于實(shí)施權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法的工具箱，所述工具箱包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而鑒定出對(duì)心臟介入敏感的受治療者。48.—種用于實(shí)施權(quán)利要求13-27中任一項(xiàng)的方法的工具箱，所述工具箱包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而鑒定出對(duì)心力衰竭療法敏感的受治療者。49.一種用于實(shí)施權(quán)利要求28-39中任一項(xiàng)的方法的工具箱，所述工具箱包括用于測(cè)定受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。50.—種用于實(shí)施權(quán)利要求40-42中任一項(xiàng)的方法的工具箱，所述工具箱包括用于測(cè)定患有心力衰竭的受治療者樣品中GDF-15的量的工具及將所述量與參比量相比較的工具，從而預(yù)測(cè)受治療者是否面臨有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。51.GDF-15或用于測(cè)定GDF-15的量的工具在制備用于鑒定對(duì)心臟介入敏感的受治療者的診斷組合物中的用途。52.GDF-15或用于測(cè)定GDF-15的量的工具在制備用于鑒定受治療者對(duì)心力衰竭療法敏感的診斷組合物中的用途。53.GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌釣蛋白或用于測(cè)定GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白的量的工具在制備用于預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物中的用途。54.GDF-15和利尿鈉肽或用于測(cè)定GDF-15和利尿鈉肽的量的工具在制備用于預(yù)測(cè)受治療者是否面臨死亡風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物中的用途。55.GDF-15和心肌鉤蛋白或用于測(cè)定GDF-15和心肌4丐蛋白的量的工具在制備用于預(yù)測(cè)受治療者是否面臨再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物中的用途。56.GDF-15或用于測(cè)定GDF-15的量的工具在制備用于預(yù)測(cè)受治療者是否面臨有害心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物中的用途，其中所述受治療者患有心力衰竭。57.—種用于預(yù)測(cè)患有肺栓塞的受治療者的死亡或隨后肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的方法，該方法包括a)測(cè)定受治療者樣品中GDF-15的量；和b)將步驟a)中測(cè)定的GDF-15的量與參比量相比較，從而對(duì)死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。58.GDF-15或用于測(cè)定GDF-15的量的工具在制備用于預(yù)測(cè)患有肺栓塞的受治療者是否面臨死亡或隨后的肺栓塞相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的診斷組合物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及基于對(duì)需要心臟介入的受治療者樣品中GDF-15的測(cè)定從而鑒定對(duì)心臟介入敏感的受治療者的方法。此外，本發(fā)明涉及基于對(duì)患有心血管并發(fā)癥的受治療者樣品中GDF-15和利尿鈉肽和/或心肌鈣蛋白的測(cè)定從而預(yù)測(cè)所述受治療者死亡或再發(fā)急性心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還包括用于實(shí)施上述方法的裝置和工具箱。文檔編號(hào)G01N33/68GK101517415SQ200780028658公開(kāi)日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年8月2日優(yōu)先權(quán)日2006年8月4日發(fā)明者H·德雷克斯勒,K·C·沃勒特,L·沃倫廷,T·坎普夫申請(qǐng)人:漢諾威醫(yī)學(xué)院