專利名稱：一種評價蜂王漿貯存條件適合性的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種食品質(zhì)量評價方法，具體是涉及一種蜂王漿貯存 條件適合性的評價方法。
背景技術：
蜂王漿(Royaljelly)是由哺育蜂頭部咽下腺(Hypopharyngeal gland) 和上顎腺(Mandibulargland)共同分泌的，具有酸、浬、辣、甜且略帶 特殊芳香氣味的乳白色或淡黃色的漿狀物。蜂王漿在蜜蜂的級型分化 中發(fā)揮著重要的作用，同樣由蜂王產(chǎn)下的受精卵孵化成的小幼蟲，如 果在整個幼蟲期都被飼喂蜂王漿，只需16d就能發(fā)育成生殖器官完全 的蜂王；如果只在幼蟲期的前三天詞喂蜂王漿，隨后改喂蜂蜜和花粉， 需要21d，并只能發(fā)育成生殖器官不完全的工蜂。
蜂王漿的組分非常復雜，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂類，還包 含許多可能發(fā)揮重要生理功能的微量組分。蜂王漿含有豐富的生物活 性物質(zhì)，具有諸如抗疲勞、抗菌消炎、抗腫瘤、降血壓、促生長等多 方面的營養(yǎng)保健作用，在保健食品、醫(yī)藥、化妝品等領域具有很高的 應用價值。
由于一些活性成分對貯存溫度和貯存時間敏感，蜂王漿對貯存條 件要求較高。若貯存不當(溫度過高或貯存時間過長)，其物理性狀、 化學成分及其品質(zhì)會發(fā)生顯著變化，致使其保健功效降低甚至喪失。 人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲實驗表明，貯存不當?shù)姆渫鯘{不能使蜜蜂幼蟲正常 發(fā)育。長期臨床驗證也表明，蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件是決定蜂王漿 品質(zhì)的極其關鍵的因素。但是由于缺少相應的評價方法，質(zhì)量監(jiān)管部 門及加工、貿(mào)易企業(yè)迄今無法在蜂王漿生產(chǎn)和流通過程中進行有效的 監(jiān)管和控制，難以對蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件和品質(zhì)做出如實的評
價，從而導致巿場上蜂王漿質(zhì)量良莠不齊。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種可如實反應蜂王漿所經(jīng) 歷貯存條件、評定蜂王漿品質(zhì)的方法。
美拉德反應是食品中胺基化合物(氨基酸、肽及蛋白質(zhì))與羰基 化合物(糖類)在食品加工和儲藏過程中自然發(fā)生的反應。其反應過 程會使食品中的蛋白質(zhì)和氨基酸大量損失。蜂王漿富含蛋白質(zhì)、氨基 酸和碳水化合物(如果糖、葡萄糖等)，貯存過程中發(fā)生美拉德反應 幾乎是不可避免的。在貯存過程中，蜂王漿中游離氨基酸和組成蛋白 質(zhì)或多肽的一些氨基酸易參與美拉德等反應或通過氨基酸的脫氨基、 脫羧基反應發(fā)生降解，從而引起一些氨基酸含量在貯存過程中發(fā)生變 化。
實驗發(fā)現(xiàn)，蜂王漿游離氨基酸Gln與lfc存時間和貯存溫度存在線 性相關，與蜂王漿的品質(zhì)也存在線性相關。因此，本發(fā)明提供一種能 夠如實、準確地評價蜂王漿所經(jīng)歷貯存條件、評定蜂王漿品質(zhì)的方法。
本發(fā)明提供一種評價蜂王漿貯存條件適合性的方法，包括以下步
驟
1) 測定蜂王漿中游離Gln含量；
2) 根據(jù)蜂王漿游離Gln含量來判斷蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件。 本發(fā)明的評價蜂王漿貯存條件適合性的方法，通過游離Gln含量
來判斷蜂王漿所經(jīng)歷的貯存時間和溫度
當游離Gln含量小于1.08土0.10 mg/g時，相當于蜂王漿在25。C條 件下貯存超過了l個月。在這里，以蜂王漿在25。C條件下貯存超過了1 個月時的游離Gln含量的上限和下限作為兩個閾值，來評價蜂王漿的 新鮮度，即當游離Gln含量小于或等于0.98 mg/g時，相當于蜂王漿在 25。C條件下貯存超過了l個月，為不新鮮蜂王漿；游離Gln含量大于或 等于U8 mg/g的蜂王漿為新鮮蜂王漿;游離Gln含量處于0.98和1.18
mg/g之間的蜂王漿介于其中，為較不新鮮蜂王漿。
氨基酸含量測定可以釆用氨基酸分析儀或液相色譜儀。 根據(jù)長期的科學研究和實踐經(jīng)驗，蜂王漿不能在高溫下長期保
存， 一般認為蜂王漿在25'C保存不能超過1個月，在4'C下保存不能超 過3個月。蜂王漿的貯存時間超過了這個周期就被認為經(jīng)歷了不適當 的貯存，王漿也就被認為是不新鮮的。因此，我們可以選用蜂王漿在 25'C保存l個月游離Gln含量作為評價蜂王漿貯存條件適合性和新鮮 度的一個l萄值。經(jīng)過多樣品測試，發(fā)現(xiàn)蜂王漿在25'C保存1個月時的 游離Gln含量為1.08 ± 0.10 mg/g。因此，選擇蜂王漿在25。C保存l個月 時的游離Gln含量的上限1.18 mg/g和下限0.98 mg/g作為評價蜂王漿貯 存適合性和新鮮度的兩個閾值。
本發(fā)明評價蜂王漿貯存條件適合性的方法具有如下優(yōu)點
1) 能如實反應蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件，溫度梯度和時間梯度 均能在游離Gln含量高低上表現(xiàn)出差異，從而確定蜂王漿的品質(zhì)，以 及判斷是否經(jīng)歷不適當?shù)馁A存及貯存條件是否合格等；
2) 靈敏度高，分析方法簡單。


圖l是26種氨基酸標準樣品的UPLC色譜圖。 圖2是蜂王漿在25。C貯存過程中游離氨基酸Gln含量變化圖。 圖3是在不同溫度下貯存6個月的蜂王漿的游離氨基酸色譜圖， 從上到下分別為貯存于2 5 。C 、 4 。C和-18 。C的王漿樣品。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。 實施例1
將巿購的26種氨基酸標準樣品組氨酸(His),絲氨酸(Ser)，精 氨酸(Arg),甘氨酸(Gly)，天門冬氨酸(Asp)，谷氨酸(Glu)，蘇氨 酸(Thr)，丙氨酸(Ala)，羥基賴氨酸(Hylys),脯氨酸(Pro)，半胱
氨酸(Cys)，賴氨酸(Lys)，酪氨酸(Tyr)，蛋氨酸(Met)，纈氨酸(Val), 異亮氨酸(Ile)，亮氨酸(Leu),苯丙氨酸(Phe)，?；撬?Tau), y-氨基丁酸(GABA)，氨基異丁酸(AABA)，鳥氨酸(Orn),谷氨酰胺 (Gln),天門冬酰胺(Asn)，羥基脯氨酸(Hypro)和色氨酸(Trp)(sigma 公司)溶于純凈水中，終濃度為5pmoles/pL(其中Cys為2.5pmoles爾L ), 用超高效液相色譜儀測定，得到標準液相色譜，見圖l。
將新釆收的王漿(茶花蜂王漿，浙江)分為5份，在25。C下貯存， 分別在采收當天、釆收后1個月、3個月、6個月和10個月測定游離氨 基酸含量。
稱取1.0g蜂王漿于50mL塑料離心管，精確到0.01g。加入25mL 90%乙醇溶液，渦旋振蕩2min，超聲提取3min后，5000 rpm離心10 min，取上清。在沉淀物中重新加入25 mL 90%乙醇溶液，重復以上 步驟兩次，合并上清液。在4(TC利用旋轉蒸發(fā)儀將液體蒸干，殘渣用 超純水溶解，并定容至50 mL，即為分析樣液。用0.22 pm濾膜(Millipore: MA， USA)過濾后用超高效液相色譜儀測定。
結果表明，釆收當天、釆收后1個月、3個月、6個月和10個月蜂 王漿游離氨基酸Gln的含量分別為1.34、 1.08、 0.64、 0.06、 0.02 mg/g， 呈梯度下降趨勢(圖2)。說明蜂王漿游離Gln含量能很好的反應蜂王 漿的貯存時間造成的影響。 實施例2
將新釆收的王漿(油菜蜂王漿，河南)分為3份，分別在-18。C、 4'C和25X:下貯存，分別在貯存期為6個月測定游離氨基酸。
稱取1.0g蜂王漿于50mL塑料離心管，精確到0.01g。加入25mL 90%乙醇溶液，渦旋振蕩2 min,超聲提取3min后，5000 rpm離心10 min，取上清。在沉淀物中重新加入25 mL 90%乙醇溶液，重復以上 步驟兩次，合并上清液。在4(TC利用旋轉蒸發(fā)儀將液體蒸干，殘渣用 超純水溶解，并定容至50mL，即為分析樣液。用0.22 pm濾膜(Millipore:
MA,USA)過濾后用超高效液相色譜儀測定(圖3)。
結果表明，當貯存期為6個月時，貯存于-18。C、 4。C和25。C的蜂王 漿游離氨基酸Gln的含量分別為1.25、 1.10和0.06mg/g，呈梯度下降趨 勢，說明游離氨基酸Gln含量能很好地反應貯存地溫度條件對蜂王漿 所造成的影響。 實施例3
分別釆集新鮮的茶花蜂王漿(浙江)、荊條蜂王漿(北京)、洋槐 蜂王漿(山東)、油菜蜂王漿(青海)樣品各50份，共200個樣品，在 25。C下貯存l個月。然后稱取1.0g蜂王漿于50mL塑料離心管，精確到 0.01 g。加入25mL卯。/o乙醇溶液，渦旋振蕩2 min,超聲提取3 min后, 5000 rpm離心10 min,取上清。在沉淀物中重新加入25 mL 90%乙醇 溶液，重復以上步驟兩次，合并上清液。在40。C利用旋轉蒸發(fā)儀將液 體蒸干，殘渣用超純水溶解，并定容至50mL,即為分析樣液。用0.22 pm濾膜(Mimpore, MA， USA)過濾后用超高效液相色譜儀測定。
結果表明，在25。C下貯存1個月時的茶花蜂王漿(浙江)、荊條蜂 王漿(北京)、洋槐蜂王漿(山東)、油菜蜂王漿(青海)的游離Gln 含量分別為1.05 ±0.10mg/g、 1.09 ± 0.12 mg/g、 1,10 ± 0.05 mg/g、 1.08 ±0.11mg/g,說明在25。C下貯存1個月時，不同來源的蜂王漿的游離 Gln含量基本保持在0.98 1.18 mg/g之間，保持穩(wěn)定，平均含量為1.08 ±0.10mg/g。 實施例4
分別釆集新鮮的茶花蜂王漿(浙江)、荊條蜂王漿(北京)、洋槐 蜂王漿(山東)、油菜蜂王漿(青海)樣品5份，在4。C下貯存3個月。 然后稱取1.0g蜂王漿于50mL塑料離心管，精確到0.01g。加入25mL 90%乙醇溶液，渦旋振蕩2 min, 超聲提取3 min后，5000 rpm離心10 min，取上清。在沉淀物中重新加入25 mL 90%乙醇溶液，重復以上 步驟兩次，合并上清液。在40'C利用旋轉蒸發(fā)儀將液體蒸干，殘渣用
超純水溶解，并定容至50mL，即為分析樣液。用0.22^im濾膜(Mmipore, MA， USA)過濾后用超高效液相色譜儀測定。
結果表明，在4。C下jfc存3個月時的茶花蜂王漿(浙江)、荊條蜂 王漿(北京)、洋槐蜂王漿(山東)、油菜蜂王漿(青海)的游離Gln 含量分別為1.02 ± 0.09 mg/g、 1.08 ±0.11 mg/g、 1,07 ± 0.11 mg/g、 1.03
±0.13 mg/g，說明在4。C下貝i存3個月時，不同來源的蜂王漿的游離 Gln含量基本保持在1.00 U5 mg/g之間，保持穩(wěn)定，平均含量為1.04
± 0.09 mg/g。 實驗例
分別稱取巿售蜂王漿樣品A(山東，批號20070815 )， B(北京， 批號20080409)， C(湖北，批號20070106)和D(浙江，批號20071013 ) 樣品5份，在25。C下貯存1個月。然后準確稱取1.0g蜂王漿于50mL塑 料離心管，精確到0.01g。加入25mL卯。/。乙醇溶液，渦旋振蕩2min, 超聲提取3min后，5000 rpm離心10 min，取上清。在沉淀物中重新加 入25mL90。/。乙醇溶液，重復以上步驟兩次，合并上清液。在40。C利 用旋轉蒸發(fā)儀將液體蒸干，殘渣用超純水溶解，并定容至50mL,即 為分析樣液。用0.22 pm濾膜(Mmipore, MA, USA)過濾后用超高效液 相色譜儀測定。
結果表明，巿售的四種蜂王漿樣品游離Gln含量分別為A， 1.26 mg/g; B， 1.37mg/g; C， 0.96 mg/g; D, 0.65 mg/g;從而判斷A和B 品質(zhì)等級為新鮮，C和D品質(zhì)等級為不新鮮。其中，樣品D的生產(chǎn)批號 為20071013，但仍不新鮮的原因在于企業(yè)生產(chǎn)加工前蜂王漿可能已經(jīng) 在不適條件下貯存了一段時間。試驗結果與感官檢驗的結果是一致 的。
權利要求
1、一種評價蜂王漿貯存條件適合性的方法，其特征在于，包括以下步驟1)測定蜂王漿中游離Gln含量；2)根據(jù)蜂王漿游離Gln含量來判斷蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件。
2、 如權利要求l所述的評價蜂王漿貯存條件適合性的方法，其特 征在于，通過游離Gln含量來判斷蜂王漿所經(jīng)歷的貯存時間和溫度游離Gln含量小于或等于0.98 mg/g時，相當于蜂王漿在25。C條件 下貯存超過了l個月，為不新鮮蜂王漿；游離Gln含量大于或等于1.18 mg/g的蜂王漿為新鮮蜂王漿；游離Gln含量處于0.98和1.18 mg/g之間 的蜂王漿介于其中，為較不新鮮蜂王漿。
3、 如權利要求1或2所述的評價蜂王漿貯存條件適合性的方法， 其特征在于，氨基酸含量測定采用氨基酸分析儀或液相色譜儀。
全文摘要
本發(fā)明提供一種蜂王漿貯存條件適合性的評價方法。該方法通過測定蜂王漿中游離Gln含量；然后根據(jù)蜂王漿游離Gln含量來判斷蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件的適合性，進而評判蜂王漿的品質(zhì)優(yōu)劣。本發(fā)明能靈敏地判定蜂王漿所經(jīng)歷的貯存條件，為生產(chǎn)廠家和消費者準確判斷蜂王漿的品質(zhì)提供依據(jù)，也可完善現(xiàn)行蜂王漿質(zhì)量標準，有效監(jiān)控蜂王漿質(zhì)量。
文檔編號G01N30/02GK101363830SQ20081022349
公開日2009年2月11日 申請日期2008年9月28日 優(yōu)先權日2008年9月28日
發(fā)明者吳黎明, 周金慧, 熠 李, 胡福良, 薛曉鋒, 靜 趙 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院蜜蜂研究所