專利名稱：一種有形成份計(jì)數(shù)池及其制作方法和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有形成份計(jì)數(shù)裝置，特別是涉及一種有形成份計(jì)數(shù)池及 其制作方法和使用這種計(jì)數(shù)池來檢測有形成份密度的方法。
背景技術(shù)：
實(shí)驗(yàn)室對細(xì)胞、精子或其他細(xì)小有形成份密度進(jìn)行測定時(shí)，通常需 要使用專業(yè)計(jì)數(shù)池(板)。由于不同類型標(biāo)本中的待測有形成份密度存在 分布差異，為保證檢測結(jié)果的可靠性，因此不同類型的標(biāo)本需要使用相 對應(yīng)的專業(yè)化計(jì)數(shù)池，如檢測血液標(biāo)本中的紅、白細(xì)胞密度需要使用血 細(xì)胞計(jì)數(shù)池、測定精液標(biāo)本中的精子密度需要使用精子計(jì)數(shù)池等等。但 是并不是所有類型的標(biāo)本都可以獲得與之測定需求相匹配的商品化計(jì)數(shù)
池。細(xì)胞密度相對較低的標(biāo)本，需要更深的計(jì)數(shù)深度與更多的計(jì)數(shù)視野； 反之，細(xì)胞密度相對較高的標(biāo)本，則需要更淺計(jì)數(shù)深度的計(jì)數(shù)池。而且 商品化的專業(yè)計(jì)數(shù)池價(jià)格相對較高，尤其是諸如精子計(jì)數(shù)池等特殊用途 的計(jì)數(shù)池。 一般說來，這些商品化的專業(yè)計(jì)數(shù)池是反復(fù)使用的，需要人 工多次擦洗計(jì)數(shù)池內(nèi)具有潛在感染性的標(biāo)本，這勢必對操作者的健康造 成威脅。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單易行、深度可根據(jù)檢測需
要而調(diào)整的有形成份計(jì)數(shù)池；本發(fā)明還提供其制作方法和使用這種有形 成份計(jì)數(shù)池來檢測有形成份密度的方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在 于，包括底部固相支撐平面，在所述底部固相支撐平面上間隔設(shè)有用來 控制計(jì)數(shù)深度的三個(gè)或三個(gè)以上支撐部件。
所述支撐部件頂部蓋有蓋片。
所述支撐部件為4敞球。
所述支撐部件以粘稠度高、難揮發(fā)性的材料粘附在底部固相支撐平 面上。
所述支撐部件為四個(gè)；所述支撐部件以粘稠度高、難揮發(fā)性的真空 硅酮脂質(zhì)材料粘附在底部固相支撐平面上；所述支撐部件為玻璃或金屬 或塑料材質(zhì)；所述底部固相支撐平面為玻片或塑料載片。
每一個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的支撐部件高度相同，所述支撐部件高度根據(jù)有形 成份計(jì)數(shù)池所需的深度而定。
本發(fā)明還提供一種制作所述有形成份計(jì)數(shù)池的方法，包括如下步驟
步驟一清洗支撐部件；
步驟二將支撐部件干燥；
步驟三將高度真空硅酮脂與支撐部件按體積比2 15: 1充分混勻； 步驟四將支撐部件設(shè)置于底部固相支撐平面，形成至少3個(gè)支撐點(diǎn)。所述步驟一中洗滌支撐部件的方法為
A. 以無水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力攪拌器攪拌，傾去 乙醇或丙酮。如此重復(fù)洗涂2次。用蒸餾水沖洗5次。
B. 用lmol/LHCl浸泡微球，置于磁力攪拌器攪拌30分鐘，傾去鹽 酸。用蒸餾水沖洗5次。
C. 用去離子水洗滌10次，每次磁力攪拌2分鐘。 當(dāng)支撐部件為微球時(shí)，所述步驟四中將支撐部件設(shè)置于底部固相支
撐平面上的方法為點(diǎn)樣法，具體步驟如下
A. 拔出10ml注射器的針?biāo)ǎ瑢⑺霾襟E三的脂質(zhì)與微球混合物加 入其中，裝上針?biāo)ǎ?br> B. 排盡注射器中的空氣，將10號鈍針頭裝在注射器上，待用；
C. 推動裝有脂質(zhì)與微球混合物的注射器針?biāo)ǎ瑢⒅|(zhì)與微球混合物 推壓出鈍針頭尖少許，在底部固相支撐平面點(diǎn)樣，每個(gè)計(jì)數(shù)池點(diǎn)四個(gè)呈 方形排列的支撐點(diǎn)，四個(gè)支撐點(diǎn)點(diǎn)樣的范圍不得超過蓋片的覆蓋范圍。
本發(fā)明還提供一種使用所述有形成份計(jì)數(shù)池檢測有形成份密度的方 法，包括如下步驟
A. 取帶有支撐部件的底部固相支撐平面，將待測標(biāo)本加于支撐部件 之間的區(qū)域；
B. 在幾個(gè)支撐部件上蓋予蓋片，并自蓋片上向下輕輕施壓，直至最 低位置；
C. 將裝有標(biāo)本的計(jì)數(shù)池置于顯微鏡下計(jì)數(shù)若干個(gè)^L野，計(jì)算平均每 個(gè)視野待測有形成份的個(gè)數(shù)，并按公式計(jì)算有形成份密度有形成份密度=平均每視野有形成份的個(gè)數(shù)+計(jì)數(shù)池的計(jì)數(shù)體積=平均每視野有形成 份的個(gè)數(shù)+ (計(jì)數(shù)池深度x顯微鏡視野面積)=平均每視野有形成份個(gè)數(shù) + (支撐部件高度x顯微鏡視野面積)。
本發(fā)明的有益效果在于(1)以幾個(gè)微小的支撐部件控制底部固相 支撐平面與頂部蓋片的距離，可以根據(jù)實(shí)際檢測應(yīng)用的需要，通過更換 不同高度的支撐部件(進(jìn)一步方案中是更換不同直徑的微球)來實(shí)現(xiàn)對 計(jì)數(shù)池深度的自由控制，制作十分簡單。(2)將待測標(biāo)本加于幾個(gè)支撐 點(diǎn)之間，根據(jù)支撐部件高度從而獲得計(jì)數(shù)池的理論計(jì)數(shù)深度，并由此可 計(jì)算出待測標(biāo)本中有形成份的密度，使用非常方便。(3)所用材質(zhì)易于 獲得且成本十分低廉；(4)所制作的有形成份計(jì)數(shù)池可為一次性使用裝 置，大大減少了傳染性標(biāo)本對健康的潛在威脅。
進(jìn)一步技術(shù)方案中將微球包埋在粘稠度高、難揮發(fā)性真空硅酮脂質(zhì) 材料內(nèi)，通過點(diǎn)樣的方式輕松建立支撐點(diǎn)，且不易從底部固相支撐平面 上脫落，在室溫條件下有效期至少可達(dá)3年。


下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一 步詳細(xì)說明。 圖1為本發(fā)明的計(jì)數(shù)池底部平面上粘附四個(gè)微球支撐點(diǎn)示意圖。 圖2為本發(fā)明的計(jì)數(shù)池池內(nèi)加入待計(jì)數(shù)標(biāo)本示意圖。 圖3為本發(fā)明的計(jì)數(shù)池池內(nèi)加入待計(jì)數(shù)標(biāo)本后加蓋蓋片并施壓示意圖。
具體實(shí)施例方式
請參閱圖1 ~圖3所示，本發(fā)明的有形成份計(jì)數(shù)池，由底部固相支撐 平面1、中部四個(gè)控制計(jì)數(shù)深度的支撐部件2—一微球和頂部的蓋片3組 成，四個(gè)微球在底部固相支撐平面上形成方形的容納待檢測標(biāo)本的區(qū)域。 所述的微球以粘稠度高、難揮發(fā)性的真空硅酮脂質(zhì)材料粘附在底部固相 支撐平面上，不易脫落。每一個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的4個(gè)微球直徑相同，因此支 撐部件高度相同，形成均一的計(jì)數(shù)池深度。但不同需要的計(jì)數(shù)池，如果 所需的計(jì)數(shù)深度不同，則可通過選取不同直徑的微球而實(shí)現(xiàn)所需。
所述支撐部件可以是玻璃或金屬材質(zhì)，也可以是塑料材質(zhì)；所述底 部固相支撐平面為玻片或塑料載片，還可以是其他表面平整的固相材料。 支撐部件的形狀釆用微球制作和使用簡便，但也可以采用其他形狀，諸 如圓柱體等。微球的個(gè)數(shù)也可以采用三個(gè)，也能穩(wěn)定的支撐出計(jì)數(shù)池的 深度。
本發(fā)明的有形成份計(jì)數(shù)池的制作可采用如下方法 一、微球準(zhǔn)備
1. 以無水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力攪拌器攪拌，傾去乙 醇或丙酮。如此重復(fù)洗滌2次。用蒸餾水沖洗5次。
2. 用lmol/L HC1浸泡微球，置于磁力攪拌器攪拌30分鐘，傾去鹽 酸。用蒸餾水沖洗5次。
3. 用去離子水洗滌10次，每次磁力攪拌2分鐘。
4. 將微球傾倒鋪展于托盤或其他平底容器內(nèi)在烘箱中烘干(使用塑 料微球時(shí)注意控制烘烤溫度防止微球變形)，待用。
95. 將高度真空硅酮脂與上述處理后的微球按體積比2~15: 1倒入燒 杯，并充分混勻，其中，優(yōu)選體積比為5:1。
6. 拔出10ml注射器的針?biāo)?，將步驟5處理后的脂質(zhì)與微球混合物加 入其中，裝上針?biāo)ā?br> 7. 排盡注射器中的空氣，將10號鈍針頭裝在注射器上，待用。 二、點(diǎn)樣與貝i藏
8. 推動裝有脂質(zhì)與微球混合物的注射器針?biāo)?，將脂質(zhì)與微球混合物 推壓出鈍針頭尖少許，在玻片或其他平整固相材料表面點(diǎn)樣，每個(gè)計(jì)數(shù) 池點(diǎn)四個(gè)呈方形排列的支撐點(diǎn)(參見圖1)，四個(gè)支撐點(diǎn)點(diǎn)樣的范圍不得 超過蓋片的覆蓋范圍。
9. 將點(diǎn)樣后的玻片豎直貯存在玻片盒內(nèi)，以使玻片間保持一定的距 離，從而防止粘附在玻片上的支撐點(diǎn)與另一張玻片粘連。室溫保存，有 效期至少可達(dá)3年。
結(jié)合顯微鏡，使用本發(fā)明的有形成份計(jì)數(shù)池檢測有形成份密度的方 法，包括如下步驟
1. 檢測標(biāo)本中有形成份的密度時(shí)，取上述步驟9制備的玻片一塊， 將待測標(biāo)本加于微球形成的四個(gè)支撐點(diǎn)之間(參見圖2)。
2. 將蓋片覆蓋在4個(gè)支撐點(diǎn)上，并以手指在蓋片上向下輕輕施壓， 直至最低位置(參見圖3)，即裝配成可供檢測應(yīng)用的計(jì)數(shù)池。此步驟中 通過對蓋片輕輕按壓，使包埋在脂質(zhì)材料內(nèi)的微球處于同一高度(即微 球直徑的距離)。
3. 將裝有標(biāo)本的計(jì)數(shù)池置于顯微鏡下計(jì)數(shù)若干個(gè)視野，計(jì)算平均每個(gè)視野待測有形成份的個(gè)數(shù)，并按公式計(jì)算有形成份密度有形成份密 度-平均每視野有形成份的個(gè)數(shù)+計(jì)數(shù)池的計(jì)數(shù)體積=平均每視野有形成 份的個(gè)數(shù)+ (計(jì)數(shù)池深度x顯微鏡視野面積)-平均每視野有形成份個(gè)數(shù) + (微球直徑x顯微鏡視野面積)。
計(jì)算例若微球直徑10 0 u m,顯微鏡采用4 0倍物鏡和10倍廣角視 野目鏡(孔徑為20mm),平均每個(gè)^L野;險(xiǎn)測到的細(xì)胞數(shù)為10個(gè)，則有形 成份密度(/mm3) = 10+ {0. lx [(20/40 ) + 2]2x tt } =509個(gè)細(xì)胞/mm3 。
權(quán)利要求
1、一種有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，包括底部固相支撐平面(1)，在所述底部固相支撐平面上間隔設(shè)有用來控制計(jì)數(shù)深度的三個(gè)或三個(gè)以上支撐部件(2)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，所述支撐部件頂部蓋有蓋片(3)。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，所述支撐部件(2)為微球。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，所述支撐部件(2)以粘稠度高、難揮發(fā)性的材料粘附在底部固相支撐平面(1)上。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，所述支撐部件(2)為四個(gè)；所述支撐部件以粘稠度高、難揮發(fā)性的真空硅酮脂質(zhì)材料粘附在底部固相支撐平面(l)上；所述支撐部件為玻璃或金屬或塑料材質(zhì)；所述底部固相支撐平面為玻片或塑料載片。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的有形成份計(jì)數(shù)池，其特征在于，每一個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的支撐部件高度相同，所述支撐部件高度根據(jù)有形成份計(jì)數(shù)池所需的深度而定。
7、 一種制作權(quán)利要求1所述的有形成份計(jì)數(shù)池的方法，包括如下步驟步驟一清洗支撐部件(2);步驟二將支撐部件干燥；步驟三將高度真空硅酮脂與支撐部件按體積比2 15: l充分混勻； 步驟四將支撐部件設(shè)置于底部固相支撐平面(1),形成至少3個(gè) 支撐點(diǎn)。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制作有形成份計(jì)數(shù)池的方法，其特征在于， 所述步驟一中洗滌支撐部件的方法為A. 以無水乙醇或丙酮浸泡50ml微球，置于磁力攪拌器攪拌，傾去 乙醇或丙酮。如此重復(fù)洗滌2次。用蒸餾水沖洗5次。B. 用lmol/L HC1浸泡微球，置于磁力攪拌器攪拌30分鐘，傾去鹽 酸。用蒸餾水沖洗5次。C. 用去離子水洗滌10次，每次磁力攪拌2分鐘。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制作有形成份計(jì)數(shù)池的方法，其特征在于， 當(dāng)支撐部件為微球時(shí)，所述步驟四中將支撐部件設(shè)置于底部固相支撐平 面上的方法為點(diǎn)樣法，具體步驟如下A. 拔出10ml注射器的針?biāo)?，將所述步驟三的脂質(zhì)與微球混合物加 入其中，裝上針?biāo)?；B. 排盡注射器中的空氣，將10號鈍針頭裝在注射器上，待用；C. 推動裝有脂質(zhì)與微球混合物的注射器針?biāo)?，將脂質(zhì)與微球混合物 推壓出鈍針頭尖少許，在底部固相支撐平面點(diǎn)樣，每個(gè)計(jì)數(shù)池點(diǎn)四個(gè)呈 方形排列的支撐點(diǎn)，四個(gè)支撐點(diǎn)點(diǎn)樣的范圍不得超過蓋片的覆蓋范圍。
10、 使用權(quán)利要求1或7所述的有形成份計(jì)數(shù)池檢測有形成份密度 的方法，包括如下步驟A. 取帶有支撐部件(2 )的底部固相支撐平面(1 )，將待測標(biāo)本(4 ) 加于支撐部件之間的區(qū)域；B. 在幾個(gè)支撐部件上蓋予蓋片(3)，并自蓋片上向下輕輕施壓，直 至最低位置；C. 將裝有標(biāo)本的計(jì)數(shù)池置于顯孩￡鏡下計(jì)數(shù)若干個(gè)—見野，計(jì)算平均每 個(gè)視野待測有形成份的個(gè)數(shù)，并按公式計(jì)算有形成份密度有形成份密 度=平均每視野有形成份的個(gè)數(shù)+計(jì)數(shù)池的計(jì)數(shù)體積=平均每視野有形成 份的個(gè)數(shù)+ (計(jì)數(shù)池深度x顯微鏡視野面積)=平均每視野有形成份個(gè)數(shù)+ (支撐部件高度x顯微鏡視野面積)。
全文摘要
一種有形成份計(jì)數(shù)池，包括底部固相支撐平面(1)，其上設(shè)有用來控制計(jì)數(shù)深度的三個(gè)或三個(gè)以上支撐部件(2)。其制作方法包括如下步驟清洗支撐部件；將支撐部件干燥；將高度真空硅酮酯與支撐部件按體積比2～15∶1充分混勻；將支撐部件設(shè)置于底部固相支撐平面，形成至少3個(gè)支撐點(diǎn)。使用方法待測標(biāo)本(4)加于計(jì)數(shù)池底部固相支撐平面的支撐部件之間；蓋予蓋片(3)，將蓋片壓至最低位置；計(jì)數(shù)池置于顯微鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算公式為有形成份密度＝平均每視野有形成份個(gè)數(shù)÷(支撐部件高度×顯微鏡視野面積)。本發(fā)明計(jì)數(shù)深度可據(jù)檢測需要調(diào)整支撐部件高度來獲得。成本低，制作簡單，使用方便，有效期長，一次性使用可減少傳染性標(biāo)本對健康的威脅。
文檔編號G01N15/10GK101477024SQ200810241789
公開日2009年7月8日 申請日期2008年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日
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