專利名稱：：阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種試劑的新用途。
背景技術(shù)：
：血液標(biāo)本是臨床實驗室使用最多的標(biāo)本類型。常用的血標(biāo)本抗凝劑如EDTA-K2、肝素鋰等可干擾某些項目檢測，故僅局限于某類標(biāo)本的抗凝[1—3]。當(dāng)患者檢査不同項目時，需使用多種抗凝管，而每類標(biāo)本又未盡其用，造成標(biāo)本的極大浪費，并增加患者痛苦和醫(yī)療成本。因此，尋求一種通用抗凝劑是亟待解決的問題，但目前國內(nèi)外對臨床實驗室使用新抗凝劑的研究報道很少。阿加曲班(Argatroban)能強(qiáng)烈地直接抑制凝血酶(IIa)活性，阻止血液凝固，且不會引起出血等副作用，因而在臨床抗血栓治療領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種阿加曲班的新用途，是阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用。所述的阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用，在進(jìn)行血細(xì)胞和生化常規(guī)分析時，阿加曲班濃度約為0.70-0.75mg/ml。本發(fā)明選用的阿加曲班是一種活性強(qiáng)、高度選擇性的凝血酶抑制劑，能直接與凝血酶(因子IIa)結(jié)合，不但滅活血液中游離狀態(tài)的凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白結(jié)合的凝血酶，極低濃度時即可抑制由凝血酶所致的纖維蛋白形成和血小板聚集，達(dá)到抗凝目的。目前大多數(shù)臨床實驗室在一個工作日(8h)內(nèi)出具血細(xì)胞和生化常規(guī)分析報告。本發(fā)明通過實驗選定重復(fù)性、穩(wěn)定性和干擾性實驗的阿加曲班濃度約為0.7mg/ml，因為其可保證血液在10h內(nèi)不凝固。下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明圖1是不同濃度阿加曲班的抗凝效果圖。圖2是10例WBC和PLT在一定時間段內(nèi)的變化情況圖。具體實施例方式一種阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用。所述的阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用，在進(jìn)行血細(xì)胞和生化常規(guī)分析時，阿加曲班濃度約為0.70-0.75mg/ml。本發(fā)明的實驗材料如下1.材料阿加曲班(Argatroban)購自天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司。外觀呈白色晶狀粉末，純度99.2%，批號070814，CAS登記號74863-84-6，有效期3年。無任何添加劑的空白試管(硅化玻璃)購自江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，批號080718，有效期2年，規(guī)格3ml，13x75mm。按照實驗設(shè)計方案稱取一定量阿加曲班加入空白試管內(nèi)制成實驗用試管。2.標(biāo)本收集共93例標(biāo)本，來自志愿者和本院門診就醫(yī)者(排除影響血液凝固的血液病、肝臟疾病等患者)，其中男41例，女52例，年齡(31士3)歲(2041歲)。由2名熟練的專業(yè)技術(shù)人員從肘靜脈、嚴(yán)格按實驗要求定量采集血液。3.儀器、試劑和檢測方法檢測儀器為全自動血細(xì)胞分析儀(SysmexXE-2100)和全自動生化分析儀(Hitachi7600-020)，血細(xì)胞分析采用儀器配套試劑，生化分析采用實驗室日常檢測用試劑。室內(nèi)質(zhì)控品為Sysmexe-CHECKlevel2，批號82030802(血細(xì)胞分析)和BeckmanCoulterTriadNYSSPATHlevel2，批號M705512(生化分析)。檢測時儀器均在控。表l分析項目、檢測方法和試劑來源。，，2英Jf寫方法原理試劑廠商批號目名稱(單位)AST(U/L)ALT(U/L)ALP(U/L)LDH(U/L)GGT(U/L)CHE(KU/L)TB(umol/L)DB(umol/L)總蛋白TP(g/L)白蛋白Alb(g/L)葡萄糖Glu(mmol/L)尿素Urea(mmol/L)肌酐Cr(umol/L)AST-蘋果酸脫氫酶法ALT-乳酸脫氫酶法AMP緩沖液法乳酸-丙酮酸法(L—P)連續(xù)監(jiān)測法(甘氨酰甘氨酸)連續(xù)監(jiān)測法(丁酰硫代膽堿)重氮鹽法重氮鹽法雙縮脲法溴甲酚綠法葡萄糖氧化酶法(Trinder)尿素酶-谷氨酸脫氫酶法堿性苦味酸法上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司溫州東甌津瑪生物科技有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司溫州東甌津瑪生物科技有限公司上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司自配080801D080932081001D080913D0810232008080032L080514L080524L080924L0809842008090047080701氨基酶酸轉(zhuǎn)磷脫氣移酯紅膽冬氨移氨基酶性酶酸酶t轉(zhuǎn)堿膽接素天酸轉(zhuǎn)丙氨移堿酸乳氫^酰酶膽酶總素直紅續(xù)表l檢測項英文縮寫目名稱(單位)方法原理試劑廠商批號尿酸UA(umol/L)膽固醇Choi(mmol/L)三酰甘油高密度脂蛋白膽固醇低密度脂蛋白膽固醇載脂蛋白Al載脂蛋白B鉀、鈉、氯鈣磷白細(xì)胞中性粒細(xì)胞數(shù)淋巴細(xì)胞數(shù)單核細(xì)胞數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)紅細(xì)胞血紅蛋白紅細(xì)胞壓積平均紅細(xì)胞體積TG(mmol/L)HDL-c(mmol/L)LDL-c(mmol/L)apoAl(mg/dl)apoB(mg/dl)K、Na、Cl(mmol/L)Ca(mmol/L)P(薩ol/L)WBC(x09/L)NE(#)LY(#)MO(#)EO(#)BA(#)RBC(xl012/L)訓(xùn)抓)HCT(L/L)MCV(fl)尿酸酶-過氧化物酶法(Trinder)膽固醇氧化酶法(Trinder)氧化酶法(Trinder)直接一步法(Trinder)直接一步法(Trinder)免疫透射比濁法免疫透射比濁法離子選擇電極法(間接ISE)鄰甲酚酞絡(luò)合酮法紫外分光光度法(磷鉬酸法)激光流式激光流式+細(xì)胞化學(xué)激光流式+細(xì)胞化學(xué)激光流式+細(xì)胞化學(xué)激光流式+細(xì)胞化學(xué)激光流式雙鞘流電阻抗法(十二烷基硫酸鈉)SLS-HGB法雙鞘流電阻抗法計算上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司上海北海生物技術(shù)工程有限公司上海北海生物技術(shù)工程有限公司上海北海生物技術(shù)工程有限公司上海北海生物技術(shù)工程有限公司上海申峰生物技術(shù)有限公司上海申峰生物技術(shù)有限公司日立儀器(蘇州)有限公司曰本第一化學(xué)藥品株式會社曰本和光純藥工業(yè)株式會社D080813BH-20808BH-20卯7BH-20707BH-208070808330讓5L1046/J1191/K1042803RIFAR155Sysmex公司配套試劑平均紅細(xì)胞血紅蛋白MCH(pg)計算量平均紅細(xì)胞血紅蛋白MCHCCg/L)計算濃度紅細(xì)胞直方圖分布寬RDW(%)度血小板PLT(xl09/L)雙鞘流電阻抗法平均血計算小板體MPV(fl)積血小板直方圖分布寬PDW(%)度血小板壓積PCT(L/L)雙鞘流電阻抗法4.凝固時間與劑量的關(guān)系共5位受試者參與本實驗，每人采集定量全血分別加入1支空白管和4支自制阿加曲班抗凝管，各管阿加曲班最終濃度依次約為0、0.13、0.33、0.52、0.74mg/ml,再分別于0.5、2、5、10、14、24h觀察標(biāo)本凝固情況。傾斜試管，如血液保持正常流動狀態(tài)為未凝固，記為0分，輕度粘稠記為l分，重度粘稠記為2分，完全凝固記為3分。5.重復(fù)性實驗共IO位受試者，第1組(5人)進(jìn)行血細(xì)胞常規(guī)分析的重復(fù)性實驗，第2組(另5人)進(jìn)行生化常規(guī)分析的重復(fù)性實驗。阿加曲班最終濃度約為0.70mg/ml。所有標(biāo)本連續(xù)重復(fù)檢測5次，1h內(nèi)完成。6.穩(wěn)定性實驗共20位受試者，第1組(10人)進(jìn)行血細(xì)胞常規(guī)分析的穩(wěn)定性實驗，第2組(另10人)進(jìn)行生化常規(guī)分析的穩(wěn)定性實驗。阿加曲班最終濃度約為0.75mg/ml。標(biāo)本分別于采血后1、3、5、7、9、11h(血細(xì)胞分析)禾B1、2、4、6、8h(生化分析)檢測，以1h檢觀lj結(jié)果為參照值。實驗過程中，血細(xì)胞分析標(biāo)本始終置于室溫，而生化分析標(biāo)本在全血離心后將血清或血漿移入另一試管置于2°C8°C冰箱保存，分別于相應(yīng)檢測時間點取出檢測。7.干擾性實驗共58位受試者，分為2組(每組29人)。第1組每人抽取定量全血注入1支EDTA-K2抗凝管和2支自制阿加曲班抗凝管，第2組每人抽取定量全血注入1支空白管和2支自制阿加曲班抗凝管，各管抗凝劑最終濃度約為1.8mg/ml(EDTA-K2)和0.7、1.5mg/ml(阿加曲班)。血細(xì)胞分析以EDTA-K2抗凝血檢測值為參照，生化分析以空白管血清值為參照。8.統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SigmaStat3.5和SigmaPlot10.0處理。根據(jù)數(shù)據(jù)分布特點，穩(wěn)定性實驗數(shù)據(jù)采用單因素重復(fù)測量方差分析或基于秩的Friedman重復(fù)測量方差分析，干擾性實驗數(shù)據(jù)采用單因素方差分析或基于秩的Kruskal-Wallis方差分析。臨床可接受范圍(clinicallyacceptablelimits,CAL)=參考值±參考值乂[1.65乂<:￥八+0.25x(CVw.s2+CVB.s2)1/2]，其中CVA我們?nèi)∪粘Ｊ覂?nèi)質(zhì)控結(jié)果的變異系數(shù)，CVw.s和CVB-s分別為個體內(nèi)和個體間生理變異系數(shù)m。結(jié)果1.凝固時間與劑量的關(guān)系阿加曲班濃度越高，抗凝時間越長。當(dāng)阿加曲班濃度為0.74mg/ml時，抗凝時間可達(dá)10h，見圖l。2.重復(fù)性實驗阿加曲班抗凝標(biāo)本中，各檢測項目的變異系數(shù)(CV。X)均小于或接近TEa的1/4[8]或本實驗室批內(nèi)精密度，見表2。_表2重復(fù)性實驗結(jié)果_項目實驗濃度實驗cvx1、本科室cvxAST(U/L)ALT(U/L)ALP(U/L)LDH(U/L)GGT(U/L)CHE(KU/L)TB(umol/L)續(xù)表2項目實驗濃度實驗cvxCLIA'88(1/4TEa,%)本科室cv%DB(umol/L)3.321.22±0.715.001.66TP(g/L)75.10.80±0.142.501.61Alb,)45.20.70±0.132.500.57Glu(mmol/L)5.720.86±0.592.500.78Urea(mmol/L)4.661.49±0,402.250.73Cr(umol/L)60.21.81±0.693.751.29UA(u咖l/L)328.90.86±0.194.250.58Chol(mmol/L)4.021.09±0.662.501.29TG(mmol/L)1.262.21±U06.251.66HDL-c(mmol/L)1.500.70±0.297.501,45LDL-c(mmol/L)1.981.52±0.727.502.31叩oAl(mg/dl)131.2Ul±0.171.45apoB(mg/dl)63.11.03±0.480.95K(mmol/L)3.651.24±0.卯3.420.75Na(mmol/L)139.41.13±0.810.720,80Cl(mmol/L)107.81.92±1.111.251.73Ca(mmol/L)2.250.89±0.332.780.79P(mmol/L)0.921.57±0.782.681.03WBC(xl09/m8.01.69±0.483.752.02NE(%)80.90.78±0.310.59LY(%)15.26.93±3.355.20MO(%)3.425.20±5.8718.卯EO(%)0.537.99±30.3528.49BA(%)0,0681.03±84.0960.77RBC(xl012/L)4.40.67±0.211.500.54HGB(g/L)133.90.39±0.081,750.43HCT(L/L)38.00.62±0.231.501.28MCV(fl)86.80.21±0.110.24MCH(pg)30.50.66±0.190.64MCHC(g/L)351.90.60±0.160.70RDW(%)13.10.50±0.090.64PLT(xl09/L)167.52.43±U36.251.49MPV(fl)10.22.01±1.740.81PDW(%)12.53.63±2.042.16PCT(L/L)0.34.05±3.062.28注實驗CV。/。以5人的CVT。均值士SD表示；空格處為無CLIA'88的TEa值或本科室CV%。3.穩(wěn)定性實驗部分生化項目(ALP、LDH、TB、TP、Alb、Urea、UA、Chol、TG、HDL-c、LDL-c、apoAl、apoB、K、Na、Cl、Ca、P)和血細(xì)胞項目(WBC、NE#、PLT)各測試點的檢測值間有統(tǒng)計學(xué)差異，其中僅WBC檢測值超出該項目臨床可接受范圍(表3)，差異具有臨床意義，但從圖2看出，WBC在采血5h后趨于穩(wěn)定。雖然PLT檢測值在臨床可接受范圍內(nèi)，但9h后有下降趨勢(圖2)。中性粒細(xì)胞數(shù)(NE#)變化情況與WBC相似。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>續(xù)表3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>續(xù)表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用xis表示；偏態(tài)分布時，采用中位數(shù)(25%百分位數(shù)，75%百分位數(shù))表示。CAL:clinicallyacceptablelimits,臨床可接受范圍。*:表示此測試點檢測值超出臨床可接受范圍，差異具有臨床意義。4.干擾性實驗0.7、1.5mg/ml阿加曲班抗凝標(biāo)本的TP和Na檢測值與血清標(biāo)本檢測值間有統(tǒng)計學(xué)差異，但均在臨床可接受范圍內(nèi)，差異不具有臨床意義(表4)。抗凝血K檢測值低于臨床可接受范圍，MCHC值略高于臨床可接受范圍。其它血細(xì)胞和生化分析項目均無統(tǒng)計學(xué)差異且都在臨床可接受范圍內(nèi)。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>權(quán)利要求1、一種阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用，其特征是在進(jìn)行血細(xì)胞和生化常規(guī)分析時，阿加曲班濃度約為0.700.75mg/ml。全文摘要本發(fā)明公開了一種阿加曲班在血細(xì)胞和生化常規(guī)分析中的應(yīng)用。本發(fā)明選用的阿加曲班是一種活性強(qiáng)、高度選擇性的凝血酶抑制劑，能直接與凝血酶(因子IIa)結(jié)合，不但滅活血液中游離狀態(tài)的凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白結(jié)合的凝血酶，極低濃度時即可抑制由凝血酶所致的纖維蛋白形成和血小板聚集，達(dá)到抗凝目的。目前大多數(shù)臨床實驗室在一個工作日(8h)內(nèi)出具血細(xì)胞和生化常規(guī)分析報告。本發(fā)明通過實驗選定重復(fù)性、穩(wěn)定性和干擾性實驗的阿加曲班濃度約為0.7mg/ml，因為其可保證血液在10h內(nèi)不凝固。文檔編號G01N33/50GK101598725SQ20091003167公開日2009年12月9日申請日期2009年6月23日優(yōu)先權(quán)日2009年6月23日發(fā)明者明崔,王惠民申請人:南通大學(xué)附屬醫(yī)院