專利名稱：線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小的數(shù)學(xué)模式測(cè)定法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小測(cè)量，確切說是線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小的數(shù)學(xué)模式測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
線粒體膜(特別是線粒體內(nèi)膜)通常具有嚴(yán)格的緊閉性，僅限于質(zhì)子等透過，對(duì)分子量大于1500Da的分子不具有通透性。在缺血、缺氧等應(yīng)激條件下，線粒體膜通透性發(fā)生病理改變，形成的病理孔道，允許分子量大于1500Da的物質(zhì)自由通過線粒體內(nèi)外膜，進(jìn)入線粒體內(nèi)。該變化被稱為線粒體通透性轉(zhuǎn)換，內(nèi)外膜之間形成的孔道被稱為線粒體通透性轉(zhuǎn)換孑L (mitochondrial permeability transition pore, mPTP)。目前尚不清楚 mPTP 的具體結(jié)構(gòu)和組成，現(xiàn)有的技術(shù)手段很難測(cè)量其大小，只是應(yīng)用形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)的方法， 使用分光光度儀分別測(cè)量應(yīng)激處理前后的線粒體懸浮液的吸光度，通過比較兩者的吸光度似否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而判斷mPTP似否形成。但是，該方法不能定量描述mPTP大小，揭示 mPTP開放的具體情況，所以有必要深入研究和開發(fā)mPTP大小測(cè)量的方法和技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于找到一種方法，使得采用目前實(shí)驗(yàn)室測(cè)量mPTP的分光光度儀就能夠方便、準(zhǔn)確，定量測(cè)量mPTP的大小，從而解決目前mPTP大小無法定量測(cè)量的問題。本發(fā)明解決mPTP定量測(cè)量的技術(shù)方案是mPTP形成后，大分子物質(zhì)進(jìn)入線粒體內(nèi)，由于滲透作用，液體進(jìn)入線粒體，從而引起線粒體膨脹。線粒體膨脹后，透光度增加造成光密度下降，OD值降低。根據(jù)上述分析建立方程如下
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權(quán)利要求
1. 一種線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小的數(shù)學(xué)模式測(cè)定法，包括數(shù)學(xué)模型的建立、測(cè)試所用的封堵溶液和測(cè)試溶液液配方以及根據(jù)該數(shù)學(xué)模型建立的t1/2參數(shù)計(jì)算表，具體內(nèi)容如下數(shù)學(xué)樽型
2.按照權(quán)利要求1所建立的數(shù)學(xué)模型理論依據(jù)是線粒體體積變化規(guī)律是線粒體體積變化率與線粒體體積變化能力成正比，是根據(jù)線粒體體積變化推導(dǎo)mPTP大小。
3.按照權(quán)利要求1所述的封堵溶液配方是0.25M右旋糖酐6000、5mM Tris-Mops ρΗ = 7. 4,0. 2mM EGTA-Tris、10 μ M 魚藤酮。
4.按照權(quán)利要求1所述的測(cè)試溶液配方是0.25Μ蔗糖、5mM Tris-Mops ρΗ = 7. 4、 0. 2mMEGTA-Tris、10yM 魚藤酮。
5.按照權(quán)利要求1所述的計(jì)算t1/2基本測(cè)量數(shù)據(jù)是分光光度儀測(cè)得的OD值，OD值通過數(shù)學(xué)模型擬合，得到曲線方程，最后經(jīng)過一系列計(jì)算才得到t1/2。
全文摘要
本發(fā)明涉及線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小測(cè)量，確切說是線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔大小的數(shù)學(xué)模式測(cè)定方法。本發(fā)明建立線粒體體積改變的數(shù)學(xué)模型，將實(shí)驗(yàn)室常用的儀器分光光度儀測(cè)定的吸光光度值代入數(shù)學(xué)模型，經(jīng)過一系列計(jì)算得到模型參數(shù)t1/2，從而間接定量反映mPTP的大小。該方法能夠簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的測(cè)量出mPTP的大小。
文檔編號(hào)G01N15/08GK102235964SQ20101016501
公開日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2010年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月7日
發(fā)明者李立環(huán), 陳東 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院