專利名稱：甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于采用現(xiàn)代分析檢測(cè)手段和信息處理手段對(duì)中藥材的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種中藥材質(zhì)量的控制方法，更具體的說(shuō)是一種甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部記載本品為豆科植物甘草、脹果甘草或光果甘草的干燥根和根莖。始載于神農(nóng)本草經(jīng)，列為上品。本品藥性平和通行十二經(jīng)脈，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其有益氣補(bǔ)中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥等功效，有“十方九草”之說(shuō)。臨床主要用于慢性肝炎硬變、潰瘍病、初發(fā)勞力性心絞痛、妊娠惡阻重癥、氣滯血瘀型痛經(jīng)、腰椎間盤突出等疾病的治療及慢性肝病肝組織學(xué)改善、慢性肝病肝癌變的抑制等。在我國(guó)，甘草主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、東北、山西等地區(qū)。甘草中主要含三萜類和黃酮類成分，其中三萜類成分主要有甘草酸、甘草次酸等；黃酮類成分主要有甘草苷、甘草苷元、異甘草苷等。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)代先進(jìn)分析檢測(cè)儀器的普遍使用以及信息處理技術(shù)的逐步完善，使中藥分析檢測(cè)水平有了顯著提高，中藥質(zhì)量控制方法得到不斷改進(jìn)。近年來(lái)通過(guò)建立指紋圖譜對(duì)中藥材指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定成為中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的一種發(fā)展趨勢(shì)。 中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中成藥經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后，利用現(xiàn)代信息采集技術(shù)和質(zhì)量分析手段得到的能夠顯現(xiàn)中藥材或中成藥化學(xué)特征的光譜圖或色譜圖。由于在兩個(gè)不同色譜條件下使用不同的前處理方法對(duì)甘草中甘草苷、異甘草苷和甘草酸單銨鹽分別進(jìn)行檢測(cè)是無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)甘草指紋圖譜進(jìn)行全面和整體評(píng)價(jià)的，因此，遵循信息最大化原則建立甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜并對(duì)其指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定可以獲取一種較為有效的質(zhì)量控制方法，從而保證甘草藥材質(zhì)量的安全、穩(wěn)定和可靠。甘草藥材在中藥材中占有十分重要的地位。目前，市售的甘草藥材質(zhì)量參差不齊， 因此甘草藥材的穩(wěn)定性難以保證。2010版中國(guó)藥典規(guī)定的含量測(cè)定本品按干燥品計(jì)算， 含甘草苷不得少于0. 50% ；甘草酸以甘草酸銨計(jì)不得少于2. 0%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于采用現(xiàn)代分析檢測(cè)手段和信息處理手段建立甘草藥材的全新指紋圖譜，及以該指紋圖譜為基礎(chǔ)的全時(shí)段多波長(zhǎng)融合的含量測(cè)定方法，以確保甘草藥材的質(zhì)量控制方法更加簡(jiǎn)便、合理、可靠。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行
(1)供試品溶液的制備取甘草藥材粉末約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水 IOOmL,稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20mL，加在AB-8樹脂柱上，用蒸餾水120mL洗滌，再用100mL95%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙腈使溶解并轉(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得；
(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對(duì)照品、甘草苷對(duì)照品和異甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每ImL含甘草酸單銨鹽對(duì)照品0. 15%ig、甘草苷對(duì)照品0. 587mg和異甘草苷對(duì)照品0. 362mg的溶液，即得；
(3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的AgilentTC-C18 色譜柱；以0. 2%。甲酸水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫(TlOmin為5°/Γ Ο%Β， 10 61min 為 10% 27%B，61 70min 為 27% 40%B，70 90min 為 40% 50%B ；流速 1. OmL/min ；柱溫30°C ；DAD檢測(cè)器在波長(zhǎng)254nm、279nm和362 nm下同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)；進(jìn)樣量10 μ L ；理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000;
(4)全時(shí)段多波長(zhǎng)融合采用多波長(zhǎng)融合指紋圖譜技術(shù)將254nm、279nm和362nm三個(gè)波長(zhǎng)下的譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行全時(shí)段融合，得到一張能夠同時(shí)包含三個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。(5)樣品含量測(cè)定應(yīng)用融合后的指紋圖譜數(shù)據(jù)，計(jì)算樣品中指標(biāo)成分的含量。(6)對(duì)上述確定的含量測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性、范圍以及耐用性。本發(fā)明所述甘草藥材的質(zhì)量控制方法，優(yōu)選的供試品溶液的制備取甘草藥材粉末約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水IOOmL,稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20mL，加在AB-8樹脂柱上，用蒸餾水120mL洗滌，再用100mL95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙腈使溶解并轉(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得；
本發(fā)明所述甘草藥材質(zhì)量控制方法，優(yōu)選的檢測(cè)方法用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的Agilent TC-C18色譜柱；以0. 2%。甲酸水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫0 10min 為 5% 10%B，10 61min 為 10% 27%B，61 70min 為 27% 40%B，70 90min 為 40% 50%B ；流速1. OmL/min ；柱溫30°C ；DAD檢測(cè)器在波長(zhǎng)254nm、279nm和362 nm下同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)；進(jìn)樣量10 μ L ；理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000 ；
本發(fā)明所述的甘草藥材質(zhì)量控制方法，由分析檢測(cè)儀器得到254nm、279nm和362 nm 三個(gè)波長(zhǎng)下的譜圖數(shù)據(jù)，運(yùn)用信息處理手段全時(shí)段融合三個(gè)波長(zhǎng)下的譜圖數(shù)據(jù)，得到一張能夠同時(shí)包含三個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。本發(fā)明所述的甘草藥材質(zhì)量控制方法，將254歷、279nm和362 nm三個(gè)波長(zhǎng)下的
譜圖數(shù)據(jù)全時(shí)段融合后可獲得一組譜圖數(shù)據(jù)。本發(fā)明所述的甘草藥材質(zhì)量控制方法，得到的指紋圖譜數(shù)據(jù)，可以用于甘草藥材的指紋定性分析。本發(fā)明所述的甘草藥材質(zhì)量控制方法，得到的指紋圖譜數(shù)據(jù)，可以用于甘草藥材指標(biāo)成分的定量分析。本發(fā)明所述的甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜質(zhì)量控制方法與現(xiàn)有的中國(guó)藥典規(guī)定的測(cè)定方法相比所具有的積極效果在于
(1)本發(fā)明首次公開通過(guò)建立甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜并對(duì)其指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定的方法，此方法對(duì)同一樣品不同成分多波長(zhǎng)同時(shí)定性定量分析，從而完善了甘草藥材質(zhì)量控制方法。(2)本發(fā)明采用現(xiàn)代先進(jìn)分析檢測(cè)技術(shù)，對(duì)甘草藥材多個(gè)指標(biāo)成分進(jìn)行分析檢測(cè)， 從而獲得極其豐富的信息量。(3)本發(fā)明通過(guò)信息處理手段將甘草藥材多波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行全時(shí)段融合，在保證數(shù)據(jù)信息損失最小的前提下，獲得一張同時(shí)反應(yīng)多個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。(4)本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定可靠，精密度、重復(fù)性、回收率均達(dá)到定量分析要求，能夠綜合宏觀地分析甘草藥材的質(zhì)量。(5)本發(fā)明通過(guò)建立甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜，對(duì)甘草藥材中的各類成分進(jìn)行指紋定性和定量分析，較全面真實(shí)地揭示甘草藥材的內(nèi)在質(zhì)量特征，從而保證了甘草藥材的安全、有效、可靠、穩(wěn)定，確保了其質(zhì)量的均衡穩(wěn)定和工藝的規(guī)范化。


圖1為2Mnm波長(zhǎng)下對(duì)照品甘草苷、異甘草苷、甘草酸單銨鹽色譜圖。圖2為279nm波長(zhǎng)下對(duì)照品甘草苷、異甘草苷、甘草酸單銨鹽色譜圖。圖3為362nm波長(zhǎng)下對(duì)照品甘草苷、異甘草苷、甘草酸單銨鹽色譜圖。圖4為甘草苷的紫外掃描圖。圖5為異甘草苷的紫外掃描圖。圖6為甘草酸單銨鹽的紫外掃描圖。圖7為甘草藥材254nm波長(zhǎng)下HPLC指紋圖譜。圖8為甘草藥材279nm波長(zhǎng)下HPLC指紋圖譜。圖9為甘草藥材362nm波長(zhǎng)下HPLC指紋圖譜。圖10為甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合的色譜圖及融合峰。
權(quán)利要求
1.甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行(1)供試品溶液的制備取甘草藥材粉末約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水 IOOmL,稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20mL，加在AB-8樹脂柱上，用蒸餾水120mL洗滌，再用100mL95%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙腈使溶解并轉(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取甘草酸單銨鹽對(duì)照品、甘草苷對(duì)照品和異甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每ImL含甘草酸單銨鹽對(duì)照品0. 15%ig、甘草苷對(duì)照品0. 587mg和異甘草苷對(duì)照品0. 362mg的溶液，即得；(3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基鍵合硅膠為填充劑AgilentTC-C18色譜柱；以0. 2%。甲酸水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫(Tl0min為5°/Γ Ο%Β， 10 61min 為 10% 27%B，61 70min 為 27% 40%B，70 90min 為 40% 50%B ；流速 1. OmL/min ；柱溫30°C ；DAD檢測(cè)器在波長(zhǎng)254nm、279nm和362 nm下同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)；進(jìn)樣量10 μ L ；理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000;(4)全時(shí)段多波長(zhǎng)融合采用多波長(zhǎng)融合指紋圖譜技術(shù)將254nm、279nm和362nm三個(gè)波長(zhǎng)下的譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行全時(shí)段融合，得到一張能夠同時(shí)包含三個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖；(5)樣品含量測(cè)定應(yīng)用融合后的指紋圖譜數(shù)據(jù)，計(jì)算樣品中指標(biāo)成分的含量；(6)對(duì)上述確定的含量測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性、范圍以及耐用性。
2.如權(quán)利要求1所述的甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法供試品溶液的制備取甘草藥材粉末約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水IOOmL,稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20mL，加在AB-8樹脂柱上，用蒸餾水120mL洗滌，再用100mL95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙腈使溶解并轉(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。
3.如權(quán)利要求1所述的甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的Agilent TC-C18色譜柱；以0. 2%。甲酸水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫(Tl0min為 5% 10%B，10 61min 為 10% 27%B，61 70min 為 27% 40%B，70 90min 為 40% 50%B ；流速 1. OmL/ min ；柱溫30°C;DAD檢測(cè)器在波長(zhǎng)254nm、279nm和362 nm下同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)；進(jìn)樣量10 μ L ； 理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000。
4.如權(quán)利要求1所述的甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于，全時(shí)段多波長(zhǎng)融合采用多波長(zhǎng)融合指紋圖譜技術(shù)將254nm、279nm和362 nm三個(gè)波長(zhǎng)下的譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行全時(shí)段融合，得到一張能夠同時(shí)包含三個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。
全文摘要
本發(fā)明公開了甘草藥材全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，它是將現(xiàn)代分析檢測(cè)手段和信息處理手段結(jié)合起來(lái)，有效融合中藥材指標(biāo)成分的譜圖信息，可以克服單一波長(zhǎng)單一指標(biāo)檢測(cè)時(shí)信息量不足的缺點(diǎn)，從而可以較完善地反映中藥材的內(nèi)在質(zhì)量。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠、重現(xiàn)性較好，可用于中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制及中藥新藥研發(fā)中。特別是可將其作為甘草藥材質(zhì)量控制及真?zhèn)舞b別的指標(biāo)之一。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102297912SQ201110202169
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者包永睿, 吳寅萍, 姚東, 孟憲生, 王帥 申請(qǐng)人:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)