專利名稱：一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法
一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域，具體涉及一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法。
技術(shù)背景
中藥成分復(fù)雜，特別是中藥復(fù)方往往含多類、多種成分，構(gòu)成了一個(gè)非常復(fù)雜的系統(tǒng)。目前，新的有效部位中藥制劑和現(xiàn)代復(fù)方中藥制劑的研發(fā)不斷增多，新的工藝及多種不同提取方式并用于藥品的研究及生產(chǎn)。
隨著現(xiàn)代分析測(cè)試技術(shù)、設(shè)備儀器的迅猛發(fā)展，中藥的含量測(cè)定、色譜鑒別成為檢測(cè)的重要手段。但目前一般只建立某一指標(biāo)化學(xué)成分的含量測(cè)定或鑒別，針對(duì)上述多種新工藝同時(shí)應(yīng)用的情況，僅建立某單一成分的含量測(cè)定或鑒別在很大程度上帶有較大的片面性。
血栓心脈寧膠囊具有益氣活血，開(kāi)竅止痛功能，用于氣虛血瘀所致的中風(fēng)、胸痹， 癥見(jiàn)頭暈?zāi)垦?、半身不遂、胸悶心痛、心悸氣短；缺血性中風(fēng)恢復(fù)期、冠心病心絞痛見(jiàn)上述癥候者。
其處方是川芎、丹參、槐花、水蛭、毛冬青、人工麝香、人工牛黃、人參莖葉總皂苷、 冰片、蟾酥；
制法以上十味，取丹參、毛冬青、川芎用60%乙醇提取3次，依次加8、5、5倍量乙醇，分別提取3、2、1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎，備用；另取水蛭粉碎成細(xì)粉，備用；再取槐花，加5倍量水，用飽和氫氧化鈣溶液調(diào)節(jié)pH值至8 9，加熱至微沸，保溫30分鐘，趁熱濾過(guò)，藥渣如上法再提取2次，合并濾液，減壓濃縮，低溫60°C干燥， 粉碎，備用。將人工麝香、蟾酥的人工牛黃粉碎成細(xì)粉，按配研法與冰片細(xì)粉、人參莖葉總皂苷和上述兩種粉末混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。每粒重0. 50g, 口服，一次4粒。
方中以辛溫、入肝膽經(jīng)，行氣開(kāi)郁，祛風(fēng)燥濕，活血止痛的川芎及苦微溫，入心肝經(jīng)，活血祛瘀，安神寧心之痛，養(yǎng)血的丹參共為君藥。臣以毛冬青、水蛭、槐花、人工麝香，活血化瘀，開(kāi)竅醒神、通絡(luò)止痛。佐以冰片、人工牛黃、人參莖葉總皂苷三藥佐君臣活血化瘀， 開(kāi)竅醒神，通絡(luò)止痛，清心肝堅(jiān)腎水，治標(biāo)為主，兼顧本虛及郁化熱之勢(shì)。使以蟾酥，引藥直達(dá)病所，強(qiáng)身止痛，通行經(jīng)絡(luò)。
血栓心脈寧膠囊原來(lái)檢測(cè)方法中的鑒別包括丹參的鑒別、川芎的鑒別和冰片的鑒別，上述鑒別是分開(kāi)進(jìn)行的，存在專屬性不強(qiáng)、需分次操作等缺點(diǎn)。在含量測(cè)定方面，目前有對(duì)丹參中丹酚酸B的含量測(cè)定，但同為方中君藥的川芎并沒(méi)有含量測(cè)定，使得僅對(duì)君藥中丹酚酸B的含量測(cè)定在很大程度上帶有較大的片面性；原來(lái)檢測(cè)方法中對(duì)臣藥的鑒別及含量測(cè)定方面僅有對(duì)槐花的鑒別及含量測(cè)定，但同為方中臣藥的人工麝香并沒(méi)有鑒別方法， 而臣藥是輔助君藥加強(qiáng)治療主病和主證的藥物，且因人工麝香價(jià)格昂貴，如沒(méi)有相應(yīng)的檢測(cè)手段容易造成不法企業(yè)不填或少填人工麝香，使得僅對(duì)槐花的鑒別及含量測(cè)定在很大程度上帶有較大的片面性，不能全面的反映血栓心脈寧膠囊重要成份的含量。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法，以解決目前檢測(cè)方法存在的專屬性不強(qiáng)、需分次操作、不全面的問(wèn)題。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，包括如下鑒別方法和含量測(cè)定方法
(一)鑒別方法
取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另分別取丹參對(duì)照藥材lg、川芎對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取丹參酮IIA對(duì)照品、冰片對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各1 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以石油醚60 90°C-乙酸乙酯11 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與丹參對(duì)照藥材、丹參酮Π A對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)； 置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與川芎對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中， 在與冰片對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；
人工麝香的氣相色譜鑒別取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取麝香酮對(duì)照品適量， 加無(wú)水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照氣相色譜法試驗(yàn)，DB-FFAP 毛細(xì)管柱柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為0. 32mm,膜厚度為0. 5 μ m，柱溫為程序升溫起始溫度為 200°C，保持10分鐘，以每分鐘20°C的速率升溫至250°C，保持10分鐘；分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各1μ 1，注入氣相色譜儀，測(cè)定；記錄供試品色譜中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰；
(二)含量測(cè)定方法
川芎含量測(cè)定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得；
供試品溶液的制備取本膠囊20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.3g 0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W， 頻率50kHz，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μ 1和供試品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)簡(jiǎn)單步驟的提取，同一個(gè)薄層系統(tǒng)展開(kāi)，達(dá)到鑒別三種成分的目的，具有專屬性強(qiáng)、快速、經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)；通過(guò)建立對(duì)人工麝香的鑒別，并配合原有的槐花的鑒別及含量測(cè)定，能更全面的檢測(cè)臣藥的成分和其配伍，本發(fā)明建立多指標(biāo)含量測(cè)定，具體通過(guò)增加對(duì)川芎的含量測(cè)定，配合現(xiàn)有的對(duì)丹參、槐花的含量測(cè)定，能更全面的檢測(cè)君藥的成分，了解其含量和穩(wěn)定性，也有助于說(shuō)明藥物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)。
具體實(shí)施方式
血栓心脈寧膠囊由吉林華康藥業(yè)股份有限公司按背景技術(shù)中處方和工藝生產(chǎn)提{共。
實(shí)施例1
取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另分別取丹參對(duì)照藥材lg、川芎對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取丹參酮IIA對(duì)照品、冰片對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各1 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以石油醚60 90°C-乙酸乙酯11 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與丹參對(duì)照藥材、丹參酮Π A對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)； 置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與川芎對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中， 在與冰片對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；
人工麝香的氣相色譜鑒別取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取麝香酮對(duì)照品適量， 加無(wú)水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照氣相色譜法試驗(yàn)，DB-FFAP 毛細(xì)管柱柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為0. 32mm,膜厚度為0. 5 μ m，柱溫為程序升溫起始溫度為 200°C，保持10分鐘，以每分鐘20°C的速率升溫至250°C，保持10分鐘；分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各1μ 1，注入氣相色譜儀，測(cè)定；記錄供試品色譜中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰；
( 二)含量測(cè)定方法
川芎含量測(cè)定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得；
供試品溶液的制備取本膠囊20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0. 3g，精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率 50kHz，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μ 1和供試品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
實(shí)施例2
包括如下鑒別方法和含量測(cè)定方法
(一)鑒別方法，同實(shí)施例1；
(二)川芎含量測(cè)定方法
供試品溶液的制備取本膠囊20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0. 4g，精密稱定， 其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例3
包括如下鑒別方法和含量測(cè)定方法
(二)鑒別方法，同實(shí)施例1 ；
(二)川芎含量測(cè)定方法
供試品溶液的制備取本膠囊20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0. 5g，精密稱定， 其余同實(shí)施例1。
本品每粒含川芎以阿魏酸(CiqHiqO4)計(jì)，不少于0. 10mg。
試驗(yàn)例1，下面通過(guò)試驗(yàn)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明川芎含量測(cè)定方法。
儀器、試劑與樣品
Agilent 1200高效液相色譜儀；阿魏酸對(duì)照品，批號(hào)110773_200611，由中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供，供含量測(cè)定用；試劑甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。樣品由吉林華康藥業(yè)股份有限公司提供。
檢測(cè)方法按本發(fā)明實(shí)施例3的方法。
1精密度試驗(yàn)
儀器精密度試驗(yàn)對(duì)同一份供試品溶液，按本發(fā)明的色譜條件，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果峰面積平均值為359. 1244, RSD為0. 12% (n = 6)，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1阿魏酸儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1. 一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法，其特征在于包括如下鑒別方法和含量測(cè)定方法(一)鑒別方法取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另分別取丹參對(duì)照藥材lg、川芎對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取丹參酮II A對(duì)照品、冰片對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液， 作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各 μ ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚60 90°C -乙酸乙酯11 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與丹參對(duì)照藥材、丹參酮II A對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與川芎對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；再噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與冰片對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；人工麝香的氣相色譜鑒別取本膠囊20粒的內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚40ml冷浸1小時(shí)，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取麝香酮對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照氣相色譜法試驗(yàn)，DB-FFAP毛細(xì)管柱 柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為0. 5Mm，柱溫為程序升溫起始溫度為200°C，保持10 分鐘，以每分鐘20°C的速率升溫至250°C，保持10分鐘；分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各ιμ ，注入氣相色譜儀，測(cè)定；記錄供試品色譜中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰；(二)含量測(cè)定方法 川芎含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液25 75為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每Iml含的溶液，即得；供試品溶液的制備取本膠囊20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0. 3g^0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率 50kHz，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μ1和供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血栓心脈寧膠囊的檢測(cè)方法，屬于中藥檢測(cè)方法。包括丹參、川芎、冰片同一個(gè)薄層系統(tǒng)展開(kāi)鑒別，人工麝香的氣相色譜鑒別和川芎的含量測(cè)定，具有專屬性強(qiáng)、快速、經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)；通過(guò)建立對(duì)人工麝香的鑒別，并建立多指標(biāo)含量測(cè)定，具體通過(guò)增加對(duì)川芎的含量測(cè)定，配合現(xiàn)有的對(duì)丹參、槐花的含量測(cè)定，能更全面的檢測(cè)君藥的成分，了解其含量和穩(wěn)定性，也有助于說(shuō)明藥物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)G01N30/90GK102507845SQ20111035751
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月13日
發(fā)明者劉傳貴, 李振偉, 杜鶴, 王麗, 王鑫華 申請(qǐng)人:吉林華康藥業(yè)股份有限公司