專利名稱：一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，尤其是涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿病(血糖)一旦控制不好會引發(fā)并發(fā)癥，導致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。臨床觀察胰島素抵抗普遍存在于II型糖尿病中，高達90%左右。II型糖尿病可導致感染、心臟病變、腦血管病變、腎功能衰竭、雙目失明、下肢壞疽等而成為致死致殘的主要原因。糖尿病高滲綜合癥是糖尿病的嚴重急性并發(fā)癥，初始階段可表現(xiàn)為多尿、多飲、倦怠乏力、反應(yīng)遲鈍等，隨著機體失水量的增加病情急劇發(fā)展，出現(xiàn)嗜睡、定向障礙、癲癇樣抽搐，偏癱等類似腦卒中的癥狀，甚至昏迷。糖化血紅蛋白是人體血液中紅細胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物。糖化血紅蛋白于1958年被使用色譜法首次從其它類型的血紅蛋白中分離出來，并于1968年被分類為一種糖蛋白。1969年，人們發(fā)現(xiàn)糖化血紅蛋白在糖尿病患者中的數(shù)量增加。1975年研究者們得到了生成糖化血紅蛋白的反應(yīng)式。人體血液中紅細胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物是糖化血紅蛋白，血糖和血紅蛋白的結(jié)合生成糖化血紅蛋白是不可逆反應(yīng)，并與血糖濃度成正比，糖化血紅蛋白則能更全面地反映II型糖尿病患者的血糖控制情況。人體血液中紅細胞內(nèi)的血紅蛋白容易與血糖結(jié)合，結(jié)合的產(chǎn)物就是糖化血紅蛋白。這種結(jié)合基本上是一個不可逆的過程，一旦結(jié)合就難以解離。紅細胞的生命周期為120天，只有等到紅細胞衰亡，這種結(jié)合才會終止。當然，紅細胞不斷生存，也不斷死亡。所以，臨床上檢測到的糖化血紅蛋白值反映了患者最近2-3個月的血糖平均水平，并不受一時一刻血糖波動的影響，更客觀，更具有較長的時間性，也更少受到飲食、運動等因素的干擾。目前反應(yīng)II型糖尿病血糖的指標有多種，如直接反映血糖水平的空腹血糖、餐后 2小時血糖等。雖然這些指標都能反映血糖水平，但臨床意義還是有所不同的。通過空腹血糖，我們能了解患者血糖控制的一般狀況?？崭寡歉?，意味著患者基礎(chǔ)胰島素分泌能力差。餐后血糖高，則往往提示分泌胰島素的儲備能力差或存在胰島素抵抗。如何根據(jù)糖化血紅蛋白指標來進行II型糖尿病患者的監(jiān)測和規(guī)范化用藥已經(jīng)成了醫(yī)學上一個難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于本發(fā)明涉及一種糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)， 尤其是涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，該系統(tǒng)采用本發(fā)明研制的試劑盒進行糖化血紅蛋白檢測具有較高的靈敏度和特異性，可以用來指導臨床II型糖尿病臨床。
本發(fā)明提供的II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置，所述取血裝置可以為醫(yī)藥領(lǐng)域任何常用的取血裝置，例如靜脈留置針、注射器以及采血筆等。所述糖化血紅蛋白檢測裝置為糖化血紅蛋白檢測試劑盒，其包含的試劑有糖化血紅蛋白磁分離試劑，酶標抗體，增強劑，校準品、控制品，濃縮液以及底物。所述的磁分離試劑含有標記有抗糖化血紅蛋白單克隆抗體的磁性微球。所述的酶標抗體是含有辣根過氧化物酶標記的抗糖化血紅蛋白單克隆抗體。所述的增強劑是含有Tris的緩沖液。所述的校準品及控制品是含有一定量的糖化血紅蛋白抗原的溶液。所述濃縮液是含有TWEEN-20和ftx)clin-300的緩沖液。所述的底物為酶促化學發(fā)光底物。本發(fā)明糖化血紅蛋白的定量檢測試劑盒的制備方法，包括下述步驟第一步磁分離試劑的制備步驟1、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；2、用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中， 置室溫90min ；3、將步驟2獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取
上清；5、每次加入1. 5ml PH9. 50. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟3獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分鐘；7、每次加入1. 5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標記的磁珠，混勻30秒，上架，去
上清，重復(fù)操作3次；8、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方(質(zhì)量體積比) 為 0. 1% BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20% 乙醇，4°C保存。9、將步驟8獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得本發(fā)明試劑盒中磁分離試劑；所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。第二步酶標抗體制備步驟1、2. 5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml 的10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2、將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0. 15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液；然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將收集到的辣根過氧化物酶與糖化血紅蛋白單克隆抗體的偶聯(lián)物用酶標抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標抗體；所述酶標抗體稀釋液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。第三步增強劑配制步驟1、稱取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin-300量取0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分攪拌，直至完全溶解調(diào)PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之間；3、稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾
器過濾ο第四步校準品和控制品的配制校準品濃度分別為50、100、200、400、800ng/ml ；控制品濃度分別為100、400ng/ ml ο第五步清洗濃縮液配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；2、稱取5g Tween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容
器中；3、用移液器將Proclin-300量取0. 2ml于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后， 倒入上述IL容器中；4、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分攪拌，直至完全溶解；5、調(diào)PH，控制其范圍在7. 35-7. 45之間；6、最后定容1000ml，完全溶解后用0. 2um濾器過濾即得。第六步底物配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 2. 35g、NaCl 6. 41g, Na2SO3 0. 002g 禾口 Proclin-3000. 2ml 于 IL 燒杯中；2、用量筒量取600ml純化水于IL燒杯中，充分攪拌，直至完全溶解，調(diào)PH，控制其范圍在7. 95-8. 05之間；3、加入250ml Lumi-Phos 530后，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。本發(fā)明的主要創(chuàng)新之處在于本發(fā)明II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)可以簡單有效地檢測糖尿病患者的糖化血紅蛋白指標，從而監(jiān)測病人的恢復(fù)情況，以及調(diào)節(jié)用藥。本發(fā)明監(jiān)測管理系統(tǒng)所用的試劑盒將化學發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的反應(yīng)體系，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明試劑盒制備工藝簡單可行、具有更高的檢測靈敏度和特異性，實驗結(jié)果穩(wěn)定有效，并達到了較佳的性能參數(shù)。
具體實施例方式實施例1、一、磁分離試劑的制備步驟1、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取^iig糖化血紅蛋白單克隆抗體(Santa Cruz公司產(chǎn)品)溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；
2、用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中， 置室溫90min ；3、將步驟2的溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮30min至體積為0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取
上清；磁珠為本領(lǐng)域常用磁珠，優(yōu)選濃度25mg/mL，直徑為800nm。5、每次加入1. 5ml PH9. 50. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟3獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分鐘；7、每次加入1. 5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標記的磁珠，混勻30秒，上架，去
上清，重復(fù)操作3次；8、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方(均為質(zhì)量體積比)為 0. BSA，0.05%吐溫-20，0.02% NaN3，20% 乙醇，4°C保存。9、將步驟8獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得本發(fā)明試劑盒中磁分離試劑；所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。實施例2一、酶標抗體的制備步驟1、2. 5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml 的10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2、將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0. 15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液；然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將收集到的辣根過氧化物酶與糖化血紅蛋白單克隆抗體的偶聯(lián)物用酶標抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標抗體；所述酶標抗體稀釋液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。實施例3增強劑配制步驟1、稱取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin-300量取 0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分攪拌，直至完全溶解調(diào)PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之間；3、稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾。Mak33是羅氏公司的商品化的試劑。實施例4校準品和控制品的配制步驟1、最高點最高濃度點為X，目標點濃度為A，B，C，D，E，F(xiàn)，配制V體積的溶液時，需加入原料的體積為分別為
權(quán)利要求
1. 一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，其特征在于，所述監(jiān)測管理系統(tǒng)包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置；所述取血裝置為靜脈留置針或采血筆；所述糖化血紅蛋白檢測裝置為糖化血紅蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒包括糖化血紅蛋白磁分離試劑，酶標抗體，增強劑，校準品、控制品，濃縮液以及底物；所述試劑盒按照如下步驟制備第一步磁分離試劑的制備步驟1)將1.Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取^iig抗糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；2)用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫 90min ；3)將步驟2獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下濃縮 30min至體積為0. 5ml ；4)取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；5)加入步驟3獲得的溶液到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6)加入0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37°C 15 分鐘；7)加入1.5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標記的磁珠，混勻30秒，上架，去上清；8)用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方為0.1 % BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20% 乙醇；9)將步驟8獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得磁分離試劑； 所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液；第二步酶標抗體制備步驟1)2.5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml的 10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2)將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0.15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液； 然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將上述溶液用酶標抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標抗體；所述酶標抗體稀釋液為濃度是lmol/L的 TRIS-HCl緩沖液；第三步增強劑配制步驟1)稱取TRIS1.56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin_300量取0. 2ml 于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2)用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分攪拌，直至完全溶解，調(diào)PH在 7. 35-7. 45 之間；3)稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾；第四步校準品和控制品的配制將糖化血紅蛋白抗原配成濃度分別為50、100、200、400、800ng/ml的校準品；將糖化血紅蛋白抗原配成濃度分別為100、400ng/ml的控制品；第五步濃縮液配制步驟，配制IL :1)稱取TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；2)稱取5gTween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容器中；3)用移液器將ftx)Clin-300量取0.2ml于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；4)用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分攪拌，直至完全溶解；5)調(diào)PH，控制其范圍在7.35-7. 45之間；6)最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過濾即得； 第六步底物配制步驟，配制IL :1)稱取TRIS 2. 35g、NaCl 6. 41g、Na2SO3 0. 002g 和 Proclin-3000. 2ml 于 IL 燒杯中；2)用量筒量取600ml純化水于IL燒杯中，充分攪拌，直至完全溶解，調(diào)PH，控制其范圍在 7. 95-8. 05 之間；3)加入250mlLumi-Phos 530后，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。
2.如權(quán)利要求1所述的監(jiān)測管理系統(tǒng)在指導病人用藥中的用途。
3.如權(quán)利要求1所述監(jiān)測管理系統(tǒng)的使用方法，其特征在于，1)采用取血裝置對病人取血獲得檢測樣本；2)加15μ 1糖化血紅蛋白校準品、控制品、檢測樣本至對應(yīng)試管底部；3)加30μ 1酶標抗體、30 μ 1增強劑以及30 μ 1磁分離試劑至每一試管中；4)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；5)試管連架放至磁分離器上，沉淀2分鐘，然后緩慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液；6)濃縮液用純化水稀釋20倍后，加200μ1稀釋后的濃縮液至每一試管中，置多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s ；7)加200μ1底物至試管中混勻3秒，迅速用準備好的發(fā)光檢測儀進行檢測。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，尤其涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，所述監(jiān)測管理系統(tǒng)包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置。本發(fā)明還公開了該監(jiān)測管理系統(tǒng)的制備方法。本發(fā)明II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)可以簡單有效地檢測糖尿病患者的糖化血紅蛋白指標，從而監(jiān)測病人的恢復(fù)情況，以及調(diào)節(jié)用藥。
文檔編號G01N33/72GK102495217SQ201110399730
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者謝文茹 申請人:謝文茹