專利名稱：含有ape1/ref-1的膀胱癌診斷用組合物及利用其的膀胱癌診斷儀的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有ΑΡΕΙ/Ref-l的膀胱癌診斷用組合物及利用其的膀胱癌診斷儀。
背景技術(shù)：
膀胱癌是在泌尿系統(tǒng)癌癥中最常見的癌癥，其產(chǎn)生原因也較多地被查明。主要被認(rèn)為吸煙或者各種化學(xué)物質(zhì)(例如，皮革等染色涂料、大氣污染物、人造甜味劑、硝酸鹽)被吸入到體內(nèi)后，通過小便排泄出來的同時(shí)刺激膀胱壁，從而誘發(fā)癌癥。在傳統(tǒng)的膀胱癌檢查中使用從小便中找出非正常細(xì)胞的方法，但是其精確度低。此外，將導(dǎo)液管(導(dǎo)管)插入到膀胱后，摘除并檢查疑似癌變組織的膀胱鏡檢查是侵入式方法，從而具有較高的精確度。通常，如果在早期診斷出膀胱癌，則患者的生存率高，但是實(shí)際上不易在早期診斷出膀胱癌?，F(xiàn)有使用的膀胱癌診斷方法是使用切開身體的一部分的方法，但是其很難在早期診斷出膀胱癌。膀胱癌根據(jù)是否侵襲到膀胱肌層來區(qū)分為淺表性或者浸潤性癌癥，在診斷時(shí)平均大約30%的患者屬于浸潤性膀胱癌。由此，如果要延長患者的生存期，則最好在病變范圍小時(shí)進(jìn)行早期診斷。由此，迫切需要開發(fā)與現(xiàn)有的各種膀胱癌診斷方法相比更有效率的診斷方法，換句話說，膀胱癌特異性生物標(biāo)記物，其可進(jìn)行早期診斷，并且可大量處理臨床標(biāo)本，并且靈敏度及特異性高。另夕卜，APEl/Ref-1 (apurinic/apyrimidinic endonuclease/redox factor-1)是由包括氧化還原區(qū)(redox region)、DNA修復(fù)區(qū)(DNA repair region)的318個(gè)氨基酸構(gòu)成的多功能蛋白質(zhì)。上述蛋白質(zhì)被認(rèn)為具有如下功能:在DNA損傷時(shí)復(fù)原損傷部位的APEl的功能，以及如AP-1、NF-kB 一樣的轉(zhuǎn)錄因子的還原性調(diào)節(jié)功能(redox function)(Gurusamy, Malik et al.2007)。APEl/Ref-1的轉(zhuǎn)錄因子還原性調(diào)節(jié)功能在許多轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合區(qū)中將作為氧化型半胱氨酸(cysteine)的殘余物進(jìn)行還原，從而執(zhí)行易于轉(zhuǎn)錄的作用(Xanthoudakis, Miao et al.1994; Tell, Damante et al.2005)。APEl/Ref-1存在于所有的細(xì)胞及組織，并且細(xì)胞內(nèi)表達(dá)位置被認(rèn)為根據(jù)細(xì)胞而有所不同。在轉(zhuǎn)錄階段及轉(zhuǎn)錄后階段的水平時(shí)對ΑΡΕΙ/Ref-l的表達(dá)調(diào)節(jié)進(jìn)行調(diào)節(jié)。增加ΑΡΕΙ/Ref-l的表達(dá)的主要原因是活性氧簇(reactive oxygen species ;R0S)。在巨卩遼細(xì)胞及淋巴球?qū)^氧化氫及次氯酸(hypochlorous acid ；H0CI)進(jìn)行處理時(shí)，細(xì)胞內(nèi)APEl/Ref-1的表達(dá)會(huì)增加，上述APEl/Ref-Ι的表達(dá)增加被認(rèn)為用于保護(hù)細(xì)胞的毒性及氧化性損傷的細(xì)胞的適應(yīng)反應(yīng)(R_ana Boldogh et al.1998)。對于APEl/Ref-Ι的細(xì)胞內(nèi)位置的報(bào)告有各種各樣。如果對ΑΡΕΙ/Ref-l的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析，則可想到上述各種細(xì)胞內(nèi)位置的多樣性。在APEl/Ref-Ι的氨基酸末端部位(endsite)存在有核定位信號(hào)(nuclear localization signal; NLS ) (Jackson, Theriotet al.2005)，并且被認(rèn)為在作為半胱氨酸的93號(hào)和310號(hào)氨基酸的氮化合中存在有核輸出信號(hào)(nuclear export si gnal; NES)，上述核輸出信號(hào)將存在于核內(nèi)的ΑΡΕΙ/Ref-l移動(dòng)至細(xì)胞質(zhì)(Qu，Liu et al.2007)。另外，在線粒體中也被確認(rèn)有ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)的表達(dá)(Chattopadhyay, Wiederhold et al.2006)。生成于細(xì)胞內(nèi)的APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)可游離至細(xì)胞外。在巨噬細(xì)胞中，根據(jù)內(nèi)毒素的細(xì)胞活性及炎癥反應(yīng)將ΑΡΕΙ/Ref-l游離至細(xì)胞外。由此，正確測定ΑΡΕΙ/Ref-l的能力被認(rèn)為在心腦血管疾病、傳染疾病及腫瘤等許多生物學(xué)過程中對ΑΡΕΙ/Ref-l的潛在性作用等進(jìn)行理解時(shí)很重要。但是，到目前為止還沒有對于ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)是否作為膀胱癌診斷用標(biāo)記物進(jìn)行作用的報(bào)告，與此相關(guān)的研究也處于全無的狀態(tài)。由此，迫切需要生物標(biāo)記物的開發(fā)，其在健康檢查時(shí)，從血液中簡便地早期診斷出膀胱癌，從而可增加患者的生存率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者在對早期可迅速簡便正確地診斷出膀胱癌的生物標(biāo)記物進(jìn)行研究中，APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度在與正常人的血清中ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)的濃度相比較，在膀胱癌患者的血清中，特別是在2期以上的膀胱癌患者的血清中明顯地增加，并且與復(fù)發(fā)次數(shù)無關(guān)，對如下進(jìn)行確認(rèn)后完成了本發(fā)明:APE1/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度在膀胱癌患者的血清中增加。本發(fā)明提供含有ΑΡΕΙ/Ref-l的膀胱癌診斷用組合物。另外，本發(fā)明提供膀胱癌診斷儀，其含有特異性地結(jié)合于ΑΡΕΙ/Ref-l的抗體。另外，本發(fā)明提供一種測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，該方法通過利用了特異性地結(jié)合于膀胱癌標(biāo)記物即APEl/Ref-Ι的抗體的抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)在生物試樣中測定APEl/Ref-Ι 的濃度。本發(fā)明的APEl/Ref-Ι的濃度與正常人的血清中ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度相比較，在膀胱癌患者的血清中，特別是在2期以上的膀胱癌患者的血清中明顯地增加。另外，在膀胱癌復(fù)發(fā)的情況下，與復(fù)發(fā)次數(shù)無關(guān)，APEl/Ref-Ι的蛋白質(zhì)濃度與未復(fù)發(fā)的初期膀胱癌患者的血清中ΑΡΕΙ/Ref-l的蛋白質(zhì)濃度相比較，在膀胱癌患者的血清中有明顯地增加。由此，本發(fā)明的ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)可早期預(yù)測膀胱癌的診斷或者預(yù)后，因此可有效地使用為膀胱癌診斷用標(biāo)記物。


圖1是表示ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖。圖2是在膀胱癌患者和正常人的血清中通過夾心酶聯(lián)免疫分析(SANDWICHELISA)法測定APEl/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度后進(jìn)行比較的圖。圖3是表示根據(jù)膀胱癌各個(gè)階段的膀胱癌患者的血清中APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度的圖。圖4是表示根據(jù)膀胱癌的復(fù)發(fā)次數(shù)及病變數(shù)的膀胱癌患者的血清中APEl/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度的圖[(A)Rtl:未復(fù)發(fā)，R1:復(fù)發(fā)次數(shù)為I次，R3:復(fù)發(fā)次數(shù)為3次，R7:復(fù)發(fā)次數(shù)為7次；⑶single:單發(fā)性 ，multiple:多發(fā)性]。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供含有ΑΡΕΙ/Ref-l的膀胱癌診斷用組合物。另外，本發(fā)明提供含有抗體的膀胱癌診斷儀，上述抗體特異性地結(jié)合于APEl/Ref-10另外，本發(fā)明提供一種測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，該方法通過利用了特異性地結(jié)合于膀胱癌標(biāo)記物即APEl/Ref-Ι的抗體的抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)在生物試樣中測定APEl/Ref-Ι的濃度。以下，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明的APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度在膀胱癌患者的血清中高于正常人的血清中APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)濃度的1.5 3.5倍，并且患膀胱癌的階段越高，特別是在2期以上的膀胱癌患者的血清中明顯地增加。另外，當(dāng)膀胱癌復(fù)發(fā)時(shí)，與復(fù)發(fā)次數(shù)無關(guān)，ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)的濃度在膀胱癌患者的血清中與在未復(fù)發(fā)的初期膀胱癌患者的血清中的APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度相比較明顯地增加。由此，本發(fā)明的ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)可早期預(yù)測膀胱癌的診斷或者預(yù)后，因此可有效地使用為膀胱癌診斷用標(biāo)記物。另外，利用上述ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)并根據(jù)通常使用于所屬領(lǐng)域的制造方法可易于制造本發(fā)明的膀胱癌診斷儀，本發(fā)明的上述膀胱癌診斷儀包括有特異性地結(jié)合于APEl/Ref-1的抗體。上述膀胱癌診斷儀可包括與抗體、二次抗體接合物、標(biāo)志物進(jìn)行發(fā)色反應(yīng)的發(fā)色基質(zhì)溶液、清洗溶液及酶反應(yīng)停止溶液等，上述抗體特異性地結(jié)合于ΑΡΕΙ/Ref-l，上述二次抗體接合物(conjugate)接合有通過與基質(zhì)反應(yīng)而發(fā)色的標(biāo)志物。優(yōu)選地，上述二次抗體接合物的標(biāo)志物為進(jìn)行發(fā)色反應(yīng)的通常的發(fā)色劑，并且可使用辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、喊性憐酸酶(alkaline phosphatase)、膠體金(coloid gold)、異硫氰酸突光素(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate)、羅丹明B異硫氰酸鹽(rhodamine-B-1sothiocyanate)等突光物質(zhì)(fluorescein)及色素(dye)等。

優(yōu)選地，上述發(fā)色基質(zhì)溶液根據(jù)標(biāo)志物進(jìn)行使用，可使用四甲基聯(lián)苯胺(3，3’，5，5’-Tetramethyl benzidine)、2, 2_聯(lián)氮-二(3_ 乙基-苯并噻唑_6_橫酸)二銨鹽(ABTS)、鄰苯二胺(o-phenylenediamine)等。此時(shí)，更優(yōu)選地,發(fā)色基質(zhì)在溶解于緩沖溶液(0.1MNaOAc, Ph5.5)的狀態(tài)下提供。優(yōu)選地，清洗溶液包括磷酸鹽緩沖溶液、氯化鈉(NaCL)及吐溫20，并且更優(yōu)選為由0.02M磷酸鹽緩沖溶液、0.13M氯化鈉(NaCL)及0.05%吐溫20構(gòu)成的緩沖溶液(PBST)。清洗溶液在抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)后，將抗原-抗體結(jié)合物與2次抗體進(jìn)行反應(yīng)，之后將適當(dāng)量添加于固定體，從而進(jìn)行3至6次清洗。反應(yīng)停止溶液可使用為磺酸溶液。另外，本發(fā)明中，通過抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)在生物試樣中測定ΑΡΕΙ/Ref-l蛋白質(zhì)的濃度，從而可早期預(yù)測膀胱癌的診斷或者預(yù)后，上述抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)利用特異性地結(jié)合于作為膀胱癌標(biāo)記物的APEl/Ref-Ι的抗體。具體地，將生物試樣與固定化于固定體的捕獲抗體進(jìn)行接觸，并且將從固定化的捕獲抗體中剩余的試樣進(jìn)行分離后，將固定化的捕獲抗體-分子靶向復(fù)合體與檢測抗體進(jìn)行接觸。之后，利用可認(rèn)知檢測抗體的檢測方法來在生物試樣中測定APEI/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度。換句話說，在膀胱癌患者和正常人的血清中測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度后進(jìn)行比較，從而如果在膀胱癌患者的血清中的APEl/Ref-Ι的濃度高于正常人的血清中的ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度，則診斷為具有膀胱癌或者預(yù)測為會(huì)具有膀胱癌。特別是，APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度在膀胱癌的階段越高，優(yōu)選地，2期以上的膀胱癌患者的血清中有明顯增加。上述生物試樣可包括從哺乳動(dòng)物中提取的如組織、細(xì)胞、全血、血清、血漿、唾液、咳痰、小便一樣的試樣，但是并不限于此。上述試樣在使用之前可通過過濾、蒸餾、提取、濃縮、阻礙成分的失活、試劑的添加等進(jìn)行預(yù)處理。用于上述抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的固定體可使用硝酸纖維膜、聚偏氟乙烯膜(polyvinylidene difluoride membrane)、聚乙烯樹脂或者由聚苯乙烯樹脂合成的96孔板以及形成為玻璃的載片等。上述抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)可利用通常的如下方法來執(zhí)行:酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫分析法(radioimmnoassay, RIA)、夾心酶聯(lián)免疫吸附測試法(SANDWICHELISA)、蛋白質(zhì)印跡法、免疫沉淀法、免疫組織化學(xué)染色法(immnohi stochemicalstaining)、流式細(xì)胞術(shù)測定法(Flow Cytometry)、突光活化細(xì)胞分類法(FACS)、酶基質(zhì)發(fā)色法、抗原-抗體凝沉法等。本發(fā)明中，抗體可以是整體形態(tài)的抗體(以下稱為“全抗體”)或者其功能性的片段。上述全抗體可以是單體或者是結(jié)合有2個(gè)以上的全抗體的聚合體的形態(tài)。上述抗體的功能性片段為具有全抗體的中鏈及輕鏈可變區(qū)的抗體，實(shí)質(zhì)上意味著認(rèn)知與全抗體認(rèn)知相同的抗原結(jié)合區(qū)(印itope)。在上述抗體的功能性的片段中包括有單鏈可變區(qū)片段(scFv)、(scFv) 2、Fab、Fab’及F (ab’)2等，但是并不限于此。上述單鏈可變區(qū)(scFv)意味著抗體片段，上述抗體片段中，中鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過連接肽進(jìn)行連接，從而具有單鏈多肽形態(tài)。上述抗體結(jié)合于如酶、熒光物質(zhì)、輻射物質(zhì)及蛋白質(zhì)等各種分子后可進(jìn)行變形。變形的抗體可通過化學(xué)方法來進(jìn)行變形并提取。上述變形方法通常使用于所屬領(lǐng)域。另外，上述抗體可提取為嵌合抗體(chimeric antibody),上述嵌合抗體結(jié)合有來自于非人類抗體中的可變區(qū)(variable re gion)和來自于人類抗體中的恒定區(qū)(constant region),或者包括有從非人類抗體中誘導(dǎo)的互補(bǔ)性決定區(qū)，從而提取為從人類抗體中誘導(dǎo)的結(jié)構(gòu)區(qū)(framework region, FR)和結(jié)合有不變區(qū)的人源抗體(humanized antibody)。上述抗體可利用已知于所屬領(lǐng)域的方法來制造。以下，為了易于理解本發(fā)明，提供優(yōu)選實(shí)施例。但是以下實(shí)施例只是為了更易于理解本發(fā)明而提供的，而不是通過實(shí)施例限定本發(fā)明的內(nèi)容。實(shí)施例1:在膀胱癌患者的血清中測定APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度為了在膀胱癌患者的血清中測定APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度，利用夾心酶聯(lián)免疫分析法來執(zhí)行如下所述的實(shí)驗(yàn)。1.準(zhǔn)備用于酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELSIA)的試樣為了測定膀胱癌患者和正常人的血清內(nèi)的ΑΡΕΙ/Ref-l的量，利用裝有阻凝劑的全血采集管來采集正常人和膀胱癌患者的血液。從51名膀胱癌患者和56名為了健康檢查而提供幫助的正常人中分別采集IOml左右的血液。將上述采集的血液在常溫中進(jìn)行搖動(dòng)并放置后，在2500rpm的情況下進(jìn)行10分鐘圓心分離，并且將上層液(即，血漿)進(jìn)行分離。將分離的上層液在4°C低溫中保管后，在執(zhí)行夾心酶聯(lián)免疫分析時(shí)，每個(gè)試樣使用100μ I。2.決定用于酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELSIA)的抗體和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
作為認(rèn)知APEl/Ref-Ι的捕獲抗體使用了抗-ΑΡΕΙ/Ref-l多克隆抗體(Abeam, ab64865)。作為認(rèn)知結(jié)合于捕獲抗體的ΑΡΕΙ/Ref-l的檢測抗體使用了抗-APEl/Ref-1單克隆抗體(Abcam，abl94)。作為ΑΡΕΙ/Ref-l的標(biāo)志物質(zhì)將從大腸菌中分離、純化的再組合人類APEl/Ref-1-His每5倍連續(xù)稀釋(0_25ng)而使用。3.夾心酶聯(lián)免疫分析法在涂層緩沖液(05.M碳酸氫鈉緩沖液，pH9.6)中將捕獲抗體按照200ng/ml的濃度進(jìn)行稀釋，從而涂層于用于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的96孔微孔板(BDFalcon3072，F(xiàn)ranklin, NJ)。在4°C中對板進(jìn)行整夜涂層。為了去除未結(jié)合的APEl/Ref-1多克隆抗體，使用清洗溶液(PBS，0.05%Tween20)來將板清洗3次。在清洗后，使用250 μ I封閉溶液(PBS，5%Bovine Serum Albumin, BSA)來在常溫下將板封閉一個(gè)小時(shí)。將每100 μ I膀胱癌患者和正常人的血漿試樣分別添加至96孔板，并且在37°C下反應(yīng)90分鐘。利用清洗溶液將板清洗5次。為了調(diào)查結(jié)合于捕獲抗體的ΑΡΕΙ/Ref-l的程度，將檢測抗體抗-ΑΡΕΙ/Ref-l單克隆抗體稀釋為200ng/ml的濃度，在常溫下反應(yīng)2個(gè)小時(shí)。利用清洗溶液將板清洗7次。將認(rèn)知檢測抗體的HRP-結(jié)合的抗-小鼠IgG 二次抗體按照1:5000進(jìn)行稀釋，并且添加至板上。將板在常溫下反應(yīng)30分鐘，并且使用清洗溶液清洗5次。在板中添加了四甲基聯(lián)苯胺(tetramethyl benzidine, TMB)過氧化物酶基質(zhì)及過氧化物酶溶液(BD555214, Franklin, NJ)0將板在常溫下產(chǎn)生變色開始的同時(shí)反應(yīng)4分鐘，并且有規(guī)則地進(jìn)行搖動(dòng)。將2.5M H2SO4作為反應(yīng)停止液進(jìn)行添加，并且在450nm的情況下測定了吸光度。4.決定根據(jù)本發(fā)明的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的標(biāo)準(zhǔn)范圍將純化并分離的再組合人類APEl/Ref-His在0_25ng范圍內(nèi)連續(xù)稀釋，從而獲得表示直線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且表示于表I及圖1中。1.在膀胱癌患者和正常人的血清中利用夾心酶聯(lián)免疫分析法來測定APEl/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度后進(jìn)行比較的結(jié)果表示于表2及圖2中，根據(jù)處于膀胱癌的各個(gè)階段的膀胱癌患者的血清中的APEl/R·ef-Ι蛋白質(zhì)的濃度表示于圖3中，根據(jù)膀胱癌的復(fù)發(fā)次數(shù)及病變數(shù)的膀胱癌患者的血清中的APEl/Ref-Ι蛋白質(zhì)的濃度表示于圖4中[(A)Rtl:未復(fù)發(fā),R1:復(fù)發(fā)次數(shù)為I次，R3:復(fù)發(fā)次數(shù)為3次，R7:復(fù)發(fā)次數(shù)為7次；(B)single:單發(fā)性，multiple:多發(fā)性]。表I
APEI/Rcf4iK吸光度零標(biāo)準(zhǔn)值(獅standard |
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I iV 1.K:
00.04900.0480 0.0477!). )0.16<1053110.056() 0.05430.01
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20().54400.5110 0.52970.4S表權(quán)利要求
1.一種膀胱癌診斷用組合物，其特征在于，該組合物含有APEl/Ref-1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膀胱癌診斷用組合物，其特征在于， 上述ΑΡΕΙ/Ref-l在2期以上的膀胱癌中具有特異性。
3.—種膀胱癌診斷儀，其特征在于，該診斷儀含有特異性地結(jié)合于ΑΡΕΙ/Ref-l的抗體。
4.一種測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，其特征在于，該方法通過利用了特異性地結(jié)合于膀胱癌標(biāo)記物即ΑΡΕΙ/Ref-l的抗體的抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)在生物試樣中測定APEl/Ref-1的濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，其特征在于，上述生物試樣包含選自由從哺乳動(dòng)物中提取的組織、細(xì)胞、全血、血清、血漿、唾液、咳痰、及小便組成的組中的一種以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，其特征在于， 上述抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)利用選自由酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫分析法(radioimmnoassay, RIA)、夾心酶聯(lián)免疫吸附測試法(SANDWICH ELISA)、蛋白質(zhì)印跡法、免疫沉淀法、免疫組織化學(xué)染色法(immnohistochemical staining)、流式細(xì)胞測定法(FlowCytometry)、突光 活化細(xì)胞分類法(FACS)、酶基質(zhì)發(fā)色法及抗原-抗體凝沉法組成的組中的一種以上方法來進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，其特征在于， 在膀胱癌患者的血清中ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度高于在正常人的血清中ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的1.5 3.5倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測定ΑΡΕΙ/Ref-l的濃度的方法，其特征在于， 上述ΑΡΕΙ/Ref-l在2期以上的膀胱癌中具有特異性。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有APE1/Ref-1的膀胱癌診斷用組合物、含有特異性地結(jié)合于APE1/Ref-1的抗體的膀胱癌診斷儀，以及一種測定APE1/Ref-1的濃度的方法，該方法通過利用了特異性地結(jié)合于膀胱癌標(biāo)記物即APE1/Ref-1的抗體的抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)在生物試樣中測定APE1/Ref-1的濃度。本發(fā)明的APE1/Ref-1的濃度與正常人的血清中APE1/Ref-1蛋白質(zhì)的濃度相比較，在膀胱癌患者的血清中，特別是在2期以上的膀胱癌患者的血清中有明顯地增加。另外，在膀胱癌復(fù)發(fā)的情況下，與復(fù)發(fā)次數(shù)無關(guān)，APE1/Ref-1的濃度與未復(fù)發(fā)的初期膀胱癌患者的血清中APE1/Ref-1的濃度相比較，在膀胱癌患者的血清中有明顯地增加。由此，本發(fā)明的APE1/Ref-1蛋白質(zhì)可早期預(yù)測膀胱癌的診斷或者預(yù)后，因此可有效地使用為膀胱癌診斷用標(biāo)記物。
文檔編號(hào)G01N33/574GK103250055SQ201180059177
公開日2013年8月14日 申請日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月8日
發(fā)明者田炳和, 崔星兒, 申珠賢 申請人:忠南大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)