專利名稱：一種高效液相色譜法測(cè)定西瓜中瓜氨酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種瓜氨酸測(cè)定方法，具體涉及一種高效液相色譜法測(cè)定西瓜中瓜氨酸含量的方法。
背景技術(shù)：
瓜氨酸，英文名稱Citrulline，因其最初發(fā)現(xiàn)于西瓜汁而得名，是一種非蛋白質(zhì)L-a -氨基酸，它具有肽鍵形成的能力，但不參與蛋白質(zhì)的合成。瓜氨酸曾一度被人們認(rèn)為是尿素循環(huán)的中間產(chǎn)物，然而，最近的研究表明，瓜氨酸能廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品保健等各個(gè)方面，具有良好的藥理作用。瓜 氨酸可以使人的血管獲得松弛，用于增強(qiáng)男性性功能，以及治療性功能障礙。維護(hù)健康的肺功能，提高腦力清晰度，有幫助腦神經(jīng)細(xì)胞具貯藏與調(diào)回訊息的功能。瓜氨酸的測(cè)定方法主要包括分光光度法、酶-比色法、柱前衍生-高效液相色譜法。分光光度法主要是利用瓜氨酸結(jié)構(gòu)的某官能團(tuán)反應(yīng)生成有色物質(zhì)比色測(cè)定，由于某些物質(zhì)具有相似結(jié)構(gòu)，此法特異性較差，易造成假陽(yáng)性影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；酶-比色法中，酶可以專一性酶解瓜氨酸，但酶制劑價(jià)格昂貴，限制了其在實(shí)際檢測(cè)中的應(yīng)用；柱前衍生方法，瓜氨酸與特定試劑發(fā)生衍生反應(yīng)后，依靠液相色譜實(shí)現(xiàn)與其他物質(zhì)的分離，方法較為準(zhǔn)確可靠。田瑤等(中藥新藥與臨床藥理，2012，23 (2) =180-183)公開(kāi)了利用鄰苯二甲醛(OPA)作為柱前衍生試劑，反相高效液相色譜測(cè)定家兔關(guān)節(jié)微透析液中精氨酸和瓜氨酸的方法；劉放南等(腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)，2004，11 (2) :116-117)公開(kāi)了將異硫氰酸苯酯(PITC)作為柱前衍生劑，反相高效液相色譜測(cè)定血清中瓜氨酸的方法。本發(fā)明建立了一種新的瓜氨酸測(cè)定方法，9-羥基咕噸作為柱前衍生劑，采用液相色譜-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，本方法具有前處理簡(jiǎn)單、基質(zhì)干擾小、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，能夠滿足日常檢測(cè)工作的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于選擇合適的溶劑，提取西瓜中的瓜氨酸，采用9-羥基咕噸作為衍生劑，酸性條件下進(jìn)行衍生，降低基質(zhì)干擾，開(kāi)發(fā)一種新的測(cè)定西瓜中瓜氨酸的方法。本發(fā)明所述的的技術(shù)問(wèn)題可通過(guò)以下技術(shù)方案得以解決(I)準(zhǔn)確稱取l_2g去皮去籽粉碎后的西瓜樣品于50mL離心管中，加無(wú)水乙醇至10mL，震蕩提取 20-30min ；(2)提取液在5000_8000r/min條件下離心3_5min,取上清液過(guò)0. 45 u m有機(jī)濾
膜，得濾液；(3)取上述濾液0.5-1.01^于1.511^進(jìn)樣瓶中，加入0.0211101/1 9_羥基咕噸衍生劑50-200 uL,1. 5mol/L鹽酸25-100 u L,使得衍生反應(yīng)比例按體積比為試樣提取液0.02mol/L 9-羥基咕噸1. 5mol/L鹽酸=10 2 1-20 2 1，混勻，室溫條件下避光反應(yīng)20-30min ；(4)衍生后的樣液采用高效液相色譜法分離檢測(cè)，外標(biāo)法定量，計(jì)算西瓜中瓜氨酸的含量。 優(yōu)選高效液相色譜條件色譜柱以碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動(dòng)相乙腈+0. 02mol/L乙酸鈉水溶液(梯度洗脫，程序見(jiàn)表I)；流速1.OmL/min ；進(jìn)樣量IOiiL ;柱溫35°C;激發(fā)波長(zhǎng)213nm,發(fā)射波長(zhǎng)308nm。表I液相色譜梯度洗脫條件
權(quán)利要求
1.一種高效液相色譜法測(cè)定西瓜中瓜氨酸含量的方法，其特征包括如下步驟 (1)取l_2g試樣于離心管中，加入有機(jī)溶劑，室溫振蕩提取20-30min，離心，取上清液過(guò)0. 45 濾膜，得濾液； (2)取上述濾液按比例加入0.02mol/L 9-羥基咕噸衍生劑和1. 5mol/L鹽酸，在酸性條件下衍生，室溫條件下避光反應(yīng)20-30min ； (3)衍生后的樣液經(jīng)高效液相色譜分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)I所述的方法，其特征在于，所述加入有機(jī)溶劑為無(wú)水乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)I所述的方法，其特征在于，所用的0.02mol/L9-羥基咕噸衍生劑采用無(wú)水乙醇為溶劑配制。
4.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)I所述的方法，其特征在于，衍生反應(yīng)比例按體積比為試樣提取液0.02mol/L 9-羥基咕噸衍生劑1. 5mol/L 鹽酸為 10 2 1-20 : 2 :1。
全文摘要
本方法公開(kāi)了一種高效液相色譜法測(cè)定西瓜中瓜氨酸含量的方法，包括以下步驟取粉碎后的西瓜樣品加入無(wú)水乙醇，振蕩提取，提取液離心后，取上清液經(jīng)濾膜過(guò)濾，濾液中加入9-羥基呫噸衍生劑，在酸性條件下衍生，衍生產(chǎn)物經(jīng)碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。本方法具定量快速準(zhǔn)確、基質(zhì)干擾小、避免假陽(yáng)性等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103063762SQ20121055872
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月21日
發(fā)明者宋薇 申請(qǐng)人:青島譜尼測(cè)試有限公司