一種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法，包括以下步驟：1）已知來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料樣本收集與制備；2）脂肪酸測(cè)定；3）確定脂肪酸檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；4）建立判別分析模型；5）評(píng)價(jià)判別分析模型；6）確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入模型進(jìn)行種屬鑒別分析。本發(fā)明采用常規(guī)索氏法進(jìn)行脂質(zhì)樣品提取，可準(zhǔn)確獲取不同種屬動(dòng)物源性飼料的脂肪酸檢測(cè)結(jié)果，直觀并顯著體現(xiàn)不同種屬動(dòng)物源性飼料中脂肪酸的組成差異特性，有效保證判別模型穩(wěn)定性的同時(shí)并直觀顯示鑒別分析結(jié)果。本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)不同種屬動(dòng)物源性飼料的有效鑒別分析，從而滿足飼料質(zhì)量安全監(jiān)管對(duì)于動(dòng)物源性飼料的分析要求。
【專利說(shuō)明】一種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于動(dòng)物源性飼料的鑒別領(lǐng)域，特別涉及一種基于脂肪酸檢測(cè)的不同種屬動(dòng)物源性蛋白飼料的鑒別分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，“瘋牛病”事件對(duì)歐盟乃至世界范圍的畜牧業(yè)、公共安全、飼料工業(yè)和畜產(chǎn)品國(guó)際貿(mào)易均帶來(lái)了巨大沖擊，嚴(yán)重威脅動(dòng)物和人類健康的同時(shí)，也造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了從源頭上切斷瘋牛病的傳播途徑，世界各國(guó)紛紛制定法律、法規(guī)限制或禁用肉骨粉等動(dòng)物源性飼料的使用。但是由于蛋白質(zhì)飼料資源匱乏，加之利益的驅(qū)使，非法進(jìn)口、制假售假和違禁添加等違規(guī)使用動(dòng)物源性飼料的行為屢禁不止，這不僅嚴(yán)重?cái)_亂市場(chǎng)秩序，侵害消費(fèi)者的利益，也造成了很大的瘋牛病隱患。
[0003]要滿足飼料質(zhì)量安全監(jiān)管需求，確保相關(guān)法律法規(guī)的有效實(shí)施，科學(xué)可靠的檢測(cè)技術(shù)和方法是重要的保障。而為了更好地實(shí)施飼料產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和循環(huán)利用，逐步細(xì)化至不同種屬之間是否相互飼用是動(dòng)物源性飼料禁用法律法規(guī)的必然發(fā)展趨勢(shì)，這也對(duì)不同種屬動(dòng)物源性飼料的鑒別技術(shù)提出更高的要求。目前，國(guó)際范圍內(nèi)用于官方仲裁的動(dòng)物源性飼料檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法主要為顯微鏡分析法和聚合酶鏈反應(yīng)法，這兩種方法雖然可以進(jìn)行不同種屬動(dòng)物源性成分的鑒別分析，但均存在一定的局限性，單一使用難以滿足高效準(zhǔn)確的種屬鑒別分析要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)本領(lǐng)域存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種基于脂肪酸檢測(cè)的不同種屬動(dòng)物源性飼料原料的鑒別分析方法。
[0005]本發(fā)明所述的動(dòng)物源性飼料原料包括陸生動(dòng)物肉骨粉、陸生動(dòng)物肉粉、陸生動(dòng)物骨粉和魚粉等蛋白飼料。當(dāng)前市場(chǎng)上動(dòng)物源性飼料多為單一種屬動(dòng)物制成，本發(fā)明也是針對(duì)多種不同的單一種屬動(dòng)物制成的動(dòng)物源性飼料進(jìn)行鑒別分析。
[0006]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為:
[0007]—種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法，包括以下步驟:
[0008]I)已知來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料樣本收集與制備；
[0009]2) 2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見脂肪酸測(cè)定；
[0010]3)確定脂肪酸檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；
[0011]4)依據(jù)步驟3)中確定的脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，建立不同種屬動(dòng)物源性飼料判別分析模型；
[0012]5)評(píng)價(jià)步驟4)所建立的判別分析模型；
[0013]6)確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入步驟4)中所建立的判別分析模型進(jìn)行種屬鑒別分析。
[0014]其中，所述步驟I)還包括對(duì)所收集與制備的已知來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料進(jìn)行旋風(fēng)磨粉碎，然后過(guò)1.0mm篩。
[0015]優(yōu)選地，在步驟2)中，采用索氏提取法提取脂質(zhì)樣品，采用氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸。
[0016]其中，所述步驟3)中脂肪酸的檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)確定方式為將某種脂肪酸檢出定義為“ 1”，未檢出定義為“O”。
[0017]其中，所述步驟4)中，采用回歸法和留一法交互驗(yàn)證，建立不同種屬動(dòng)物源性飼料偏最小二乘判別分析模型。
[0018]其中，所述步驟5)中，采用識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity兩個(gè)指標(biāo)對(duì)判別模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，Sensitivity和Specificity越接近于1，判別模型精度越高。
[0019]Sensitivity=PA/ (PA+ND) (I)
[0020]Specificity=NA/ (PD+NA) (2)
[0021]式中:PA為判別陽(yáng)性樣品數(shù)，ND為判別假陰性樣品數(shù)，NA為判別陰性樣品數(shù)，PD為判別假陽(yáng)性樣品數(shù)。
[0022]優(yōu)選地，所述識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity為0.85-1.0時(shí),所述判別分析模型有效。
[0023]其中，在步驟6)中采用索氏提取法提取待測(cè)動(dòng)物源性飼料脂質(zhì)樣品，氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸，并通過(guò)將脂肪酸檢出定義為“1”，未檢出定義為“O”確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中不同種類脂肪酸的檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入步驟4)中所建立的判別分析模型進(jìn)行種屬鑒別分析。
[0024]本發(fā)明的優(yōu)良效果在于:
[0025]I)本發(fā)明采用常規(guī)索氏提取法進(jìn)行脂質(zhì)樣品提取，采用氣相色譜經(jīng)典方法進(jìn)行2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸的測(cè)定，可常規(guī)準(zhǔn)確獲取不同種屬動(dòng)物源性飼料的脂肪酸檢測(cè)結(jié)果。
[0026]2)本發(fā)明通過(guò)將某種脂肪酸檢出定義為“1”，未檢出定義為“O”的方式，確定脂肪酸的檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，可直觀并顯著體現(xiàn)不同種屬動(dòng)物源性飼料中脂肪酸的組成差異特性。
[0027]3)本發(fā)明利用回歸法和留一法交互驗(yàn)證建立不同種屬動(dòng)物源性飼料偏最小二乘判別分析模型，并通過(guò)識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),有效保證判別模型穩(wěn)定性的同時(shí)并直觀顯示模型的鑒別分析能力。
[0028]4)本發(fā)明提供的鑒別方法，可實(shí)現(xiàn)不同種屬動(dòng)物源性飼料的有效鑒別分析，從而滿足飼料質(zhì)量安全監(jiān)管對(duì)于動(dòng)物源性飼料種屬鑒別的分析要求，可保證在高效防范“瘋牛病”的同時(shí)有效實(shí)施飼料產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和循環(huán)利用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1是本發(fā)明實(shí)施例中基于脂肪酸檢測(cè)的不同種屬動(dòng)物源性飼料主成分分析圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0030]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0031]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。[0032]本發(fā)明包括以下步驟:
[0033]I)收集與制備可靠來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料樣本，用旋風(fēng)磨粉碎過(guò)1.0mm篩。
[0034]2)采用索氏提取法提取上述樣品脂質(zhì)樣品后，采用氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸。
[0035]3)將某種脂肪酸檢出定義為“1”，未檢出定義為“0”，確定不同種類脂肪酸的檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；
[0036]4)依據(jù)所確定的脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，采用回歸法和留一法交互驗(yàn)證，建立不同種屬動(dòng)物源性飼料偏最小二乘判別分析模型。
[0037]5)采用識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity兩個(gè)指標(biāo)對(duì)判別模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中Sensitivity和Specificity越接近于1，判別模型精度越高。
[0038]Sensitivity=PA/ (PA+ND) (I)
[0039]Specificity=NA/ (PD+NA) (2)
[0040]式中:PA為判別陽(yáng)性樣品數(shù)，ND為判別假陰性樣品數(shù)，NA為判別陰性樣品數(shù)，PD為判別假陽(yáng)性樣品數(shù)。
[0041 ] 6 )相同方法采用索氏提取法提取待測(cè)動(dòng)物源性飼料脂質(zhì)樣品后，氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸，并通過(guò)將某種脂肪酸檢出定義為“1”，未檢出定義為“O”確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中不同種類脂肪酸的檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入步驟4)中所建立的判別分析模型進(jìn)行種屬鑒別分析。
[0042]下面列舉一具體實(shí)施例，將本發(fā)明應(yīng)用于鑒別分析五個(gè)不同種屬(豬源、雞源、牛源、羊源和魚源)動(dòng)物源性飼料樣品。
[0043]實(shí)施例1
[0044]I)研究樣本收集與制備
[0045]研究樣本為51份已知?jiǎng)游锓N屬的動(dòng)物源性飼料，包括經(jīng)相關(guān)質(zhì)檢部門收集自國(guó)內(nèi)和國(guó)外蛋白飼料企業(yè)的產(chǎn)品和自制樣本兩部分，樣本涵蓋了陸生動(dòng)物肉粉、骨粉、肉骨粉、羽毛粉和魚粉等，其中豬源樣本10個(gè)，雞源樣本8個(gè)，牛源樣本9個(gè)，羊源樣本11個(gè)和魚源樣本13個(gè))。
[0046]所有研究樣本采用旋風(fēng)磨進(jìn)行粉碎，然后過(guò)1.0mm篩。
[0047]2)樣本脂肪酸測(cè)定
[0048]采用索氏提取法利用全自動(dòng)脂肪測(cè)定儀(SoxtecTM2050，丹麥FOSS公司)提取上述研究樣本脂質(zhì)樣品，然后采用氣相色譜儀(GC-2014C，日本SHIMADZU公司)測(cè)定2_24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸，其中脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品(47885-U)購(gòu)于Sigma-Aldrich公司。
[0049]3)脂肪酸檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)確定
[0050]將某種脂肪酸檢出標(biāo)記為“1”，未檢出標(biāo)記為“0”，確定不同種類脂肪酸的檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，所有來(lái)源樣本的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1，不同種屬樣本之間無(wú)差異的脂肪酸組成在此表中未列出。
[0051]表I
【權(quán)利要求】
1.一種基于脂肪酸檢測(cè)的動(dòng)物源性飼料原料鑒別方法，包括以下步驟: 1)已知來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料樣本收集與制備； 2)2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見脂肪酸測(cè)定； 3)確定脂肪酸檢出與未檢出信息基礎(chǔ)數(shù)據(jù)； 4)依據(jù)步驟3)中確定的脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，建立不同種屬動(dòng)物源性飼料判別分析模型； 5)評(píng)價(jià)步驟4)所建立的判別分析模型； 6)確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入步驟4)中所建立的判別分析模型進(jìn)行種屬鑒別分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟I)中，還包括對(duì)收集與制備的已知來(lái)源的不同種屬動(dòng)物源性飼料進(jìn)行旋風(fēng)磨粉碎，然后過(guò)1.0mm篩的步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟2)中，采用索氏提取法提取脂質(zhì)樣品，然后采用氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟3)中脂肪酸的檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)確定方式為將該種脂肪酸檢出定義為“ 1”，未檢出定義為“O”。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟4)中，采用回歸法和留一法交互驗(yàn)證所述脂肪酸檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，建立不同種屬動(dòng)物源性飼料偏最小二乘判別分析模型。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟5)中，采用識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity兩個(gè)指標(biāo)對(duì)判別分析模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，Sensitivity和Specificity越接近于1，所述判別分析模型精度越高； 所述識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity計(jì)算方法如下: Sensitivity=PA/ (PA+ND) (I) Specificity=NA/ (PD+NA) (2) 式中=PA為判別陽(yáng)性樣品數(shù)，ND為判別假陰性樣品數(shù)，NA為判別陰性樣品數(shù)，PD為判另IJ假陽(yáng)性樣品數(shù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述識(shí)別率Sensitivity和拒絕率Specificity為0.85-1.0時(shí)，所述判別分析模型有效。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別方法，其特征特在于，所述步驟6)中，用索氏提取法提取待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品的脂質(zhì)樣品，用氣相色譜法測(cè)定2-24個(gè)碳原子數(shù)的常見37種脂肪酸，將脂肪酸檢出定義為“1”，未檢出定義為“0”，確定待測(cè)動(dòng)物源性飼料樣品中不同種類脂肪酸的檢出與未檢出信息數(shù)據(jù)，輸入步驟4)中所建立的判別分析模型進(jìn)行不同種屬動(dòng)物源性飼料原料的鑒別分析。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103558296SQ201310492898
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】劉賢, 蒲乾坤, 韓魯佳, 周興藩 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)