一種可溶性抗體抗原表位篩選的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種可溶性抗體抗原表位篩選的方法。其步驟為，首先用合成的P－gp肽段10肽、12肽、16肽包被ELISA反應(yīng)21板;3%BSA4℃封閉過(guò)夜;次日加入含F(xiàn)ab抗體的樣品，陰性對(duì)照加pComb3裂菌上清，空白對(duì)照加TBS，37℃孵育2h;分別加入1:800稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體，37℃孵育2h;TBST洗板后，熒光酶標(biāo)儀讀值:激發(fā)波長(zhǎng)為495nm，吸收波長(zhǎng)為535nm。同樣條件下重復(fù)3次，最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時(shí)為后續(xù)展開(kāi)的人源化提供依據(jù)和支持。
【專利說(shuō)明】一種可溶性抗體抗原表位篩選的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化的檢測(cè)方法，具體來(lái)說(shuō)，是指一種可溶性抗體抗原表位篩選 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]化療是人民目前治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的主要方法，在化療過(guò)程中出現(xiàn)的多藥 耐藥是腫瘤化療的最主要障礙，其中可溶性抗體的過(guò)表達(dá)是引發(fā)腫瘤細(xì)胞的最主要原因。 目前用于腫瘤多藥耐藥性檢測(cè)和治療的大多為完整抗體，組織穿透能力差，在血液和非瘤 組織的清除速度比較慢。本發(fā)明試圖探究一種構(gòu)建大腸癌抗體的原核表達(dá)載體，制備純化 處具有一定生物活性的抗體，該抗體的篩選有望為大腸癌等腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性的檢測(cè) 和治療提供新的選擇。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種可溶性抗體抗原表位篩選的方法，用合成的P — gp肽段10肽、12肽、16肽包被 ELISA反應(yīng)21板；3% BSA 4 °C封閉過(guò)夜；次日加入含F(xiàn)ab抗體的樣品，陰性對(duì)照加pComb3 裂菌上清，空白對(duì)照加TBS，37°C孵育2 h;分別
加入1: 800稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體，37°C孵育2 h; TBST洗板后，熒 光酶標(biāo)儀讀值:激發(fā)波長(zhǎng)為495 nm,吸收波長(zhǎng)為535nm。
[0004]本發(fā)明中，同樣條件下重復(fù)3次，最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
[0005]本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可以定性、定量分析，同時(shí)為后續(xù)展開(kāi)的人 源化提供依據(jù)和支持。
【具體實(shí)施方式】
[0006]其步驟為，首先用合成的P — gp肽段10肽、12肽、16肽包被ELISA反應(yīng)21板； 3% BSA 4 1:封閉過(guò)夜；次日加入含F(xiàn)ab抗體的樣品，陰性對(duì)照加pComb3裂菌上清，空白對(duì) 照加TBS，37°C孵育2 h;分別加入1: 800稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體，37°C孵 育2 h; TBST洗板后，熒光酶標(biāo)儀讀值:激發(fā)波長(zhǎng)為495 nm，吸收波長(zhǎng)為535nm。同樣條件 下重復(fù)3次，最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
[0007]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此， 任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其 發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種可溶性抗體抗原表位篩選的方法，其特征在于，用合成的P — gp肽段10肽、12 肽、16肽包被ELISA反應(yīng)21板；3% BSA 4 °〇封閉過(guò)夜；次日加入含F(xiàn)ab抗體的樣品，陰性對(duì)照加pComb3裂菌上清，空白對(duì)照加TBS，37°C孵育2 h;分別加入1: 800稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體，37°C孵育2 h; TBST洗板后，熒光酶標(biāo)儀讀值:激發(fā)波長(zhǎng)為495 nm，吸收波長(zhǎng)為535nm。
2.如權(quán)利要求1所述的一種·可溶性抗體抗原表位篩選的方法，其特征在于，同樣條件下重復(fù)3次，最后對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK103592440SQ201310519879
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】王景文 申請(qǐng)人:王景文