一種藏藥材塞北紫堇的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其采用紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，包括配置原阿片堿對(duì)照品溶液、制備標(biāo)準(zhǔn)溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品溶液的制備，樣品溶液配制方法為將塞北紫堇藥材細(xì)粉處用甲醇回流提取，過(guò)濾后的殘?jiān)昧蛩崛芤喝芙?，獲得樣品溶液，在410nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥材中的總生物堿含量。本發(fā)明使用原阿片堿作為對(duì)照，在供試品的制備中采用加熱回流利用和硫酸溶液溶解的方式除去干擾因素，并利用生物堿與溴甲酚綠和磷酸鹽緩沖液發(fā)生特征反應(yīng)，采用二氯甲烷萃取特征反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定，由于二氯甲烷只對(duì)特征反應(yīng)中生成的產(chǎn)物進(jìn)行萃取，避免了非生物堿類成分的干擾，增加了結(jié)果的準(zhǔn)確性及科學(xué)性。
【專利說(shuō)明】一種藏藥材塞北紫堇的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥材的檢測(cè)方法，具體地說(shuō)，涉及一種藏藥材塞北紫堇的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫堇屬全球約320種，主要產(chǎn)于亞洲，我國(guó)約200余種，全國(guó)均有分布，以西南部種類分布最多，其中青藏高原約120余種，僅西藏就多達(dá)94種。塞北紫堇為罌科紫堇屬植物塞北紫堇(別名賽北紫堇)的干燥全草，分布在青海、西藏、甘肅、四川等地，為藏成藥中的常用藥，數(shù)據(jù)顯示有25%的藏成藥中含有該藥材，用于治療各種出血、肝炎、膽囊炎、流感等疾病，也有將其用于治療跌打損傷或其它外傷、發(fā)燒、腸胃炎等。
[0003]從目前對(duì)該屬植物的化學(xué)成分研究結(jié)果來(lái)看，本屬植物主要含原托品堿類、原小檗堿類、苯酚異喹啉類、苯駢菲啶類、卞基異喹啉類、阿樸堿類、螺芐異喹啉類、枯拉靈類等結(jié)構(gòu)類型的生物堿。該屬植物及其提取物大多具有廣泛的藥理活性，如調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、抗菌等。李吉昌等人發(fā)表的《賽北紫堇的生物堿成分研究》對(duì)采自云南省迪慶藏族自治州香格里拉縣的賽北紫堇的根進(jìn)行了提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定，首次報(bào)道了從其中分離并鑒定出7種生物堿。該文獻(xiàn)的主要目的是對(duì)塞北紫堇植株中的有效成分進(jìn)行鑒定，確定其中所含生物堿的具體種類，其對(duì)采摘植株是否是塞北紫堇的質(zhì)量控制是由迪慶自治洲藏醫(yī)院扎西澤仁醫(yī)師憑經(jīng)驗(yàn)確定的，并沒(méi)有具體的檢測(cè)方法，而塞北紫堇標(biāo)準(zhǔn)收載于《青海省藏藥炮制規(guī)范》2010年版第60頁(yè)，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)落后，僅有性狀、薄層鑒別項(xiàng)，沒(méi)有任何含量測(cè)定指標(biāo)，并且由于紫堇屬植物種類繁多，性狀結(jié)構(gòu)基本類似，面對(duì)大量的備選紫堇屬藥材植物，不能準(zhǔn)確的鑒別出塞北紫堇，有效的控制成藥的質(zhì)量。此外藏成藥中多將生長(zhǎng)于西藏的塞北紫堇作為原料藥入味，但是根據(jù)植物生長(zhǎng)機(jī)理可知，即使是同一種植物，由于其使用的部位不同，生成的環(huán)境不同，則植株中有效成分及其含量也會(huì)存在一定的差異，造成塞北紫堇質(zhì)量參差不齊，因此需要對(duì)該種植物進(jìn)行嚴(yán)格篩選，保證以其為原料的成藥的安全性、有效性。
[0004]李吉昌、林躍華等人發(fā)表的《紫外分光光度法測(cè)定賽北紫堇中總生物堿含量》中采用對(duì)照品鹽酸小檗堿作為對(duì)照品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，但本實(shí)驗(yàn)采用超聲后過(guò)氧化鋁柱的辦法制備樣品，使用鹽酸小檗堿為對(duì)照品，使用直接測(cè)定的辦法對(duì)賽北紫堇全草中的總生物堿含量進(jìn)行測(cè)定，由于全草中含有大量的葉綠素，直接測(cè)定的方法無(wú)法避免葉綠素等有色雜質(zhì)的干擾，即直接測(cè)定法無(wú)法保證其他非生物堿的的吸收干擾，尤為重要的是，塞北紫堇中并不存在鹽酸小檗堿，使用鹽酸小檗堿來(lái)作為對(duì)照品進(jìn)行總生物堿的測(cè)定，明顯是不科學(xué)的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的所要解決的技術(shù)問(wèn)題是現(xiàn)行的塞北紫堇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)落后，僅有性狀、薄層鑒別項(xiàng)，沒(méi)有任何含量測(cè)定指標(biāo)，不能準(zhǔn)確有效的控制藥材的質(zhì)量，進(jìn)而提供一種藏藥材塞北紫堇的質(zhì)量檢測(cè)方法。[0006]為此，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0007]—種塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，包括采用紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，其步驟如下，
[0008](I)第一對(duì)照品溶液的配置，稱取干燥至恒重的原阿片堿5_8mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液l_3ml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得；
[0009](2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，吸取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2-4ml、磷酸鹽緩沖液2-3ml，用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機(jī)層于400nm-450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0010](3)樣品溶液的制備，取塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘?jiān)?，所述殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸溶液Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液；
[0011](4)測(cè)定，精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量；以干燥的塞北紫堇藥材計(jì)算，生物堿總含量以原阿片堿(C20H19N05)計(jì)，不得少于 0.5%。
[0012]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，包括如下步驟，
[0013](I)第一對(duì)照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液Iml使溶解,用水定容至100ml，搖勻，即得。
[0014](2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備吸取對(duì)照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml，用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機(jī)層于400nm-450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0015](3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘?jiān)?，所述殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液。
[0016](4)測(cè)定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中，按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量。
[0017]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，包括如下步驟，
[0018](I)第一對(duì)照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液Iml使溶解,用水定容至100ml，搖勻，即得；
[0019](2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備吸取對(duì)照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml，用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置，分出有機(jī)層于，410nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020](3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細(xì)粉1.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得到殘?jiān)?，所述殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液；[0021](4)測(cè)定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量。
[0022]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述磷酸鹽緩沖液由38g磷酸二氫鈉與5.04g磷酸氫二鈉，加水定容至IOOOml，搖勻配制得到。
[0023]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述方法還包括采用高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿的含量的步驟，其包括，
[0024]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為(70-80): (20-30)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280-290nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
[0025]第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0026]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)?。所述第一殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0027]測(cè)定法分別精密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；
[0028]以干燥的塞北紫堇藥材計(jì)算，塞北紫堇含原阿片堿(C20H19N05)，不得少于0.5mg/g0
[0029]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿含量的步驟，包括，
[0030]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25，檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于3000 ；
[0031]第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0032]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉2.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)?。所述第一殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0033]測(cè)定法分別精密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0034]上述塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿的含量，包括，
[0035]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于3000 ；
[0036]第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得；
[0037]供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉2g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)?。所述第一殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液；
[0038]測(cè)定法分別精密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0039]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明使用塞北紫堇中主要的有效成分原阿片堿作為對(duì)照，更為科學(xué)，在供試品的制備中首先采用加熱回流利用高溫環(huán)境去除葉綠素，進(jìn)一步的采用硫酸溶液溶解的方式再一次除去干擾雜質(zhì)，進(jìn)而避免了大量的葉綠素對(duì)測(cè)定產(chǎn)生的干擾；更為科學(xué)的是，本發(fā)明使用生物堿與溴甲酚綠和磷酸鹽緩沖液發(fā)生特征反應(yīng)，并采用二氯甲烷萃取特征反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定，由于二氯甲烷只對(duì)特征反應(yīng)中生成的產(chǎn)物進(jìn)行萃取，避免了非生物堿類成分的干擾，進(jìn)一步增加了結(jié)果的準(zhǔn)確性及科學(xué)性。
[0040]實(shí)驗(yàn)例1:塞北紫堇中總生物堿的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0041]1.儀器、試劑和供試樣品
[0042]儀器:電子天平:島津AUW220D型；滴定管(北京玻璃儀器廠，25ml);島津UV-2450型紫外分光光度儀。
[0043]對(duì)照品:原阿片喊對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，批號(hào):0853-200201。
[0044]樣品:塞北紫堇(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司提供)，批號(hào)分別為:110801、110802、110803。
[0045]2.總生物堿含量測(cè)定
[0046]對(duì)照品溶液的配置精密稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，體積份數(shù)1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得。
[0047]標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密吸取對(duì)照品溶液O、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1% (質(zhì)量體積比，即IOOml溶液中溴甲酚綠含量為0.1g)溴甲酚綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置,分出有機(jī)層于410nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪制吸收度與標(biāo)準(zhǔn)溶液中原阿片堿濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0048]樣品溶液的制備取本品藥材細(xì)粉約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定藥材與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得殘?jiān)?。所述殘?jiān)皿w積份數(shù)10%的硫酸溶液Iml溶解，用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液，即所需的樣品溶液備測(cè)。[0049]精密吸取樣品溶液Iml置分液漏斗中，按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收度的方法測(cè)定樣品溶液的吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量。
[0050]磷酸鹽緩沖液的配置磷酸二氫鈉38g與磷酸氫二鈉5.04g，加水定容至1000ml，搖勻，即得。
[0051]3.重現(xiàn)性試驗(yàn)
[0052]取110801批號(hào)塞北紫堇藥材樣品6份，按總生物堿含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算總生物堿含量及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明:該方法重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0053]表1總生物堿含量測(cè)定重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于，采用紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，其步驟如下， (1)第一對(duì)照品溶液的配置，稱取干燥至恒重的原阿片堿5-8mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液l_3ml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，吸取對(duì)照品溶液0、l、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酚綠試液2-4ml、磷酸鹽緩沖液2-3ml，用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲烷10ml，振搖2min,靜置,分出有機(jī)層于400nm-450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3)樣品溶液的制備，取塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘?jiān)?，所述殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸溶液Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測(cè)定，精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量；以干燥的塞北紫堇藥材計(jì)算，生物堿總含量以原阿片堿(C20H19N05)計(jì)，不得少于 0.5%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于，所述紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，包括如下步驟， (1)第一對(duì)照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備吸取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酹綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置，分出有機(jī)層于400nm-450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；` (3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干，得到殘?jiān)鰵堅(jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測(cè)定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中，按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于，所述紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿的含量，包括如下步驟， (1)第一對(duì)照品溶液的配置稱取干燥至恒重的原阿片堿5mg，加體積份數(shù)比1%的硫酸溶液Iml使溶解，用水定容至100ml，搖勻，即得； (2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備吸取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5ml，分別置分液漏斗中，各加0.1%溴甲酹綠試液2ml、磷酸鹽緩沖液2ml,用水補(bǔ)足溶液至10ml。加二氯甲燒IOml,振搖2min,靜置，分出有機(jī)層于，410nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3)樣品溶液的制備取塞北紫堇藥材細(xì)粉1.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材細(xì)粉與甲醇的總重量，加熱回流I小時(shí)，過(guò)濾得到第一濾液，取所述第一濾液25ml，蒸干得到殘?jiān)?，所述殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，再用水稀釋并定容至5ml后，過(guò)濾得到第二濾液即所需的樣品溶液； (4)測(cè)定精密吸取所述樣品溶液Iml置分液漏斗中按所述步驟(2)的方法測(cè)定吸收度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線求算含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于， 所述磷酸鹽緩沖液由38g磷酸二氫鈉與5.04g磷酸氫二鈉，加水定容至1000ml，搖勻配制得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法還包括采用高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿的含量的步驟，其包括， 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比.0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為(70-80): (20-30)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280-290nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ； 第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉l_5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)?。所述第一殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測(cè)定法分別精密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 以干燥的塞北紫堇藥材計(jì)算，塞北紫堇含原阿片堿(C20H19N05)，不得少于0.5mg/g。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿含量的步驟，包括， 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25，檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于3000 ； 第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉2.5g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)Ｋ龅谝粴堅(jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測(cè)定法分別精密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的塞北紫堇藥材的檢測(cè)方法，其征征在于，所述高效液相色譜法測(cè)定原阿片堿的含量，包括，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以由體積份數(shù)比.0.2%冰醋酸與體積份數(shù)比0.5%三乙胺的緩沖溶液形成的pH為6.0的第一混合溶液與乙腈形成的第二混合液為流動(dòng)相，其中所述第一混合溶液與乙腈的體積比為75:25 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm ;理論板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于3000 ； 第二對(duì)照品溶液的制備取原阿片堿對(duì)照品5mg，加體積份數(shù)比1%硫酸使溶解，用水定容至100ml，即得； 供試品溶液的制備取所述塞北紫堇藥材細(xì)粉2g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第一總重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再次稱定所述塞北紫堇藥材與甲醇的總重量得到第二總重量，并用甲醇補(bǔ)足第二總重量中減失的重量使其與第一總重量相等，搖勻，過(guò)濾得到第三濾液，取所述第三濾液25ml，蒸干得到第一殘?jiān)?。所述第一殘?jiān)皿w積份數(shù)比10%的硫酸Iml溶解，用水稀釋并定容至IOml后，過(guò)濾得到第四濾液即所需的供試品溶液； 測(cè)定法分別精 密吸取第二對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK103616344SQ201310681198
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】李懷平, 任松鵬, 單玉剛, 魏永義 申請(qǐng)人:山東阿如拉藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司