中成藥益腎補骨液的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】中成藥益腎補骨液的控制質(zhì)量方法，用于該藥物生產(chǎn)中的質(zhì)量管控，克服現(xiàn)有技術(shù)中只是一個簡單的顯色反應和一個薄層鑒別，專屬性不夠強，質(zhì)量可控性較差。難于控制藥品的質(zhì)量標準，嚴重影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效的不足。本發(fā)明增加了骨碎補含量測定以及白芍、骨碎補、當歸、續(xù)斷薄層色譜定性鑒別，改進了益腎補骨液的質(zhì)量控制方法，所制定的方法簡便、可行、操作性強，使供試品溶液雜質(zhì)大大減少，薄層斑點清晰、重現(xiàn)性好。保證了藥品的安全性、有效性及質(zhì)量可控性。
【專利說明】中成藥益腎補骨液的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種中成藥益腎補骨液的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中成藥益腎補骨液記載于部頒標準中藥成方制劑第十冊，標準編號為WS3-B-2020-95。其功能主治為滋補肝腎，強壯筋骨。用于肝腎不足，勞傷腰痛，筋骨折傷等。處方及制法為:
[0003]【處方】骨碎補45g何首烏126g茯苓63g續(xù)斷63g白芍 44g
[0004]當歸 63g黨參 75g熟地黃63g黃精63g枸杞子63g
[0005]自然銅(煅，醋淬)45g陳皮 16g
[0006]【制法】以上十二味，加水煎煮二次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮至每Iml溶液相當于原藥材lg，加乙醇2倍量，攪拌，靜置，濾過，回收乙醇，濃縮至適量，加入阿司帕坦、甜菊素、白酒、苯甲酸鈉適量使溶解，濾過，加水至1000ml，攪拌，即得。
[0007]該藥物的質(zhì)量控制方法如下:
[0008]1、取本品5ml，加石油醚(60_90°C) 10ml，振搖，分取石油醚層，揮干，殘渣加5%香
草醛硫酸溶液I~2滴，顯紫紅色。
[0009]2、取本品20ml，加水飽和的正丁醇10ml，振搖，分取正丁醇液，用水洗滌3次，每次10ml，棄去水液，正丁醇液置`水浴上蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材2.5g，加水20ml，加熱回流2小時，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。再取白芍對照藥材lg，加水20ml，加熱回流2小時，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中在與何首烏對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的紫紅色斑點，在與白芍對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍紫色斑點。
[0010]以上原標準只是一個簡單的顯色反應和一個薄層鑒別，專屬性不夠強，質(zhì)量可控性較差。難于控制藥品的質(zhì)量標準，嚴重影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]發(fā)明目的是提供一種中成藥益腎補骨液的控制質(zhì)量方法，用于該藥物生產(chǎn)中的質(zhì)量管控，克服現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法操作的上述不足。
[0012]本發(fā)明意在增加君藥骨碎補中柚皮苷的含量測定，增加骨碎補、當歸、續(xù)斷的薄層色譜鑒別，同時對原標準中白芍薄層鑒別進行了方法的改進，在白芍供試品溶液處理方法上增加了柱層析。
[0013]本發(fā)明的方法包括:
[0014]1、鑒別
[0015](I)白芍的薄層鑒別:取益腎補骨液30~50ml，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，加中性氧化鋁(100?200目)1?2g，拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱(100?200目，2?3g，內(nèi)徑為1.5cm)上，用甲醇-乙酸乙酯(1:3)40?50ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇-乙酸乙酯(1:1 )40?50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇或乙醇I?3ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇或乙醇制成每Iml含0.5?Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供對照品溶液和試品溶液各3?5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水為展開劑，四組份的配比為38:10:5:0.2或40:10:5:0.2，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 °C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0016](2)骨碎補的薄層鑒別:取柚皮苷對照品，加甲醇或乙醇或70%乙醇制成每Iml含I?1.5mg的溶液，作為對照品溶液。取[鑒別](I)項下的供試品溶液作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各5?10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，四組份的配比為1:12:2.5:3或1:10:2:3或1.5:12:2.5:2.5，展開，取出，晾干，噴以5?10%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱3?5分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0017](3)當歸的薄層鑒別:取益腎補骨液30?40ml,加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，繼用1%碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30?40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇或乙酸乙酯I?2ml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材I?2g，用1%碳酸氫鈉溶液40?50ml，超聲處理20?25分鐘，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30?40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇或乙酸乙酯I?2ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取阿魏酸對照品，加乙醇或乙酸乙酯制成每Iml含I?1.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各5?10 μ 1、對照品溶液2?4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-冰醋酸為展開劑，三組份的配比為6:1:0.5或6:2:0.8或6:1:1，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0018](4)續(xù)斷的薄層鑒別:取益腎補骨液30?40ml，加乙醚振搖提取2次，每次20?30ml，棄去乙醚液。水層用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30?40ml，合并正丁醇液。正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次30?40ml，棄去洗滌液。正丁醇液再用30?40ml的氨試液洗滌，棄去洗液。將正丁醇液蒸干。殘渣加甲醇或乙醇I?2ml使溶解，作為供試品溶液。另取續(xù)斷對照藥材I?1.5g，加甲醇或乙醇25?35ml，冷浸30分鐘，超聲處理30?40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20?25ml使溶解，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取川續(xù)斷皂苷VI對照品，加甲醇或乙醇制成每Iml含3?5mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5?10 μ 1、對照藥材溶液3?5 μ 1、對照品溶液5?8 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水10°C以下放置的下層溶液為展開劑，三組份的配比為13:7:2或13:6:1，展開，取出，晾干，噴以8?10%的磷鑰酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0019]2、骨碎補的含量測定
[0020](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑:以甲醇-水-冰醋酸=30?35:69?64:1為流動相；檢測波長為284nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應不低于3000 ；
[0021](2)對照品溶液的制備:取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加70?80%乙醇制成每Iml含60?80 μ g的溶液，即得。
[0022](3)供試品溶液的制備:精密量取益腎補骨液5?10ml，置IOOml量瓶，加70?80%乙醇80ml，超聲處理20?30分鐘，放冷，加70?80%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0023](4)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?10μ 1，注入液相色譜儀，測定，得數(shù)據(jù)；本品每Iml含骨碎補以柚皮苷計，不得少于0.20mg。
[0024]本發(fā)明的有益效果是:增加了骨碎補含量測定以及白芍、骨碎補、當歸、續(xù)斷薄層色譜定性鑒別，改進了益腎補骨液的質(zhì)量控制方法，所制定的方法簡便、可行、操作性強，使供試品溶液雜質(zhì)大大減少，薄層斑點清晰、重現(xiàn)性好。保證了藥品的安全性、有效性及質(zhì)量可控性。
【具體實施方式】
[0025]實施例1
[0026]1、鑒別
[0027](I)白芍的薄層鑒別:取益腎補骨液40ml，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml,合并正丁醇液,蒸干,殘洛加甲醇Iml使溶解,加中性氧化招(100?200目)lg,拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱(100?200目，2g，內(nèi)徑為1.5cm)上，用甲醇-乙酸乙酯(l:3)40ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇-乙酸乙酯(1:1 )40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述對照品溶液和供試品溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(38:10:5:0.2 )為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 °C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0028](2)骨碎補的薄層鑒別:取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。取[鑒別](I)項下的供試品溶液作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1: 12:2.5:3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0029](3)當歸的薄層鑒別:取益腎補骨液30ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，繼用1%碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至2?3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材lg，用1%碳酸氫鈉溶液40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為對照藥材溶液。再取阿魏酸對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各8 μ 1、對照品溶液3 μ I，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-冰醋酸(6:1:0.5 )為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0030](4)續(xù)斷的薄層鑒別:取益腎補骨液30ml，加乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液。水層用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液。正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次30ml，棄去洗滌液。正丁醇液再用30ml的氨試液洗滌，棄去洗液。將正丁醇液蒸干。殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取續(xù)斷對照藥材lg，加甲醇25ml，冷浸30分鐘，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取川續(xù)斷皂苷VI對照品，加甲醇制成每Iml含3mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液7 μ 1、對照藥材溶液5 μ 1、對照品溶液8 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2) 10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8%的磷鑰酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0031]2、骨碎補的含量測定
[0032](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑:以甲醇-水-冰醋酸=30:69:1為流動相；檢測波長為284nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應不低于 3000 ；
[0033](2)對照品溶液的制備:取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每Iml含70 μ g的溶液，即得。
[0034](3)供試品溶液的制備:精密量取益腎補骨液5ml，置IOOml量瓶，加70%乙醇80ml，超聲處理20分鐘，放冷，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0035](4)測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，得數(shù)據(jù)，本品每Iml含骨碎補以柚皮苷計，不得少于0.20mg。
[0036]實施例2
[0037]I 鑒別
[0038](I)白芍的薄層鑒別:取益腎補骨液50ml，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，加中性氧化鋁(100?200目)2g，拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱(100?200目，3g，內(nèi)徑為1.5cm)上，用甲醇-乙酸乙酯(1:3)50ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇-乙酸乙酯(1:1)50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述對照品溶液和試品溶液各3 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(40:10:5:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0039](2)骨碎補的薄層鑒別:取柚皮苷對照品，加乙醇制成每Iml含1.2mg的溶液，作為對照品溶液。取[鑒別](I)項下的供試品溶液作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各8μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1: 10:2:3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱4分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0040](3)當歸的薄層鑒別:取益腎補骨液40ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，繼用1%碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至2?3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材1.5g，用1%碳酸氫鈉溶液50ml，超聲處理25分鐘，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2?3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次35ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為對照藥材溶液。再取阿魏酸對照品，加乙酸乙酯制成每Iml含1.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各5 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-冰醋酸(6:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0041](4)續(xù)斷的薄層鑒別:取益腎補骨液40ml，加乙醚振搖提取2次，每次30ml，棄去乙醚液。水層用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次40ml，合并正丁醇液。正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次40ml，棄去洗滌液。正丁醇液再用40ml的氨試液洗滌，棄去洗液。將正丁醇液蒸干。殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取續(xù)斷對照藥材1.5g，加乙醇30ml，冷浸30分鐘，超聲處理35分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25ml使溶解，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取川續(xù)斷皂苷VI對照品，加乙醇制成每Iml含5mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10 μ 1、對照藥材溶液3 μ 1、對照品溶液6 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:6:1)10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的磷鑰酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0042]2、骨碎補的含量測定
[0043](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑:以甲醇-水-冰醋酸=32:67:1為流動相；檢測波長為284nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應不低于 3000 ；
[0044](2)對照品溶液的制備:取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加80%乙醇制成每Iml含75 μ g的溶液，即得。
[0045](3)供試品溶液的制備:精密量取益腎補骨液10ml，置IOOml量瓶，加80%乙醇80ml，超聲處理25分鐘，放冷，加80%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0046](4)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，測定，得數(shù)據(jù)，本品每Iml含骨碎補以柚皮苷計，不得少于0.20mg。
【權(quán)利要求】
1.一種中成藥益腎補骨液的控制質(zhì)量方法，其特征是包括以下步驟: (I)鑒別 ①白芍的薄層鑒別:取益腎補骨液30~50ml，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml,合并 正丁醇液,蒸干,殘洛加甲醇Iml使溶解,加中性氧化招(100~200目)I~2g,拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱(100~200目，2~3g，內(nèi)徑為1.5cm)上，用甲醇-乙酸乙酯(1:3) 40~50ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇-乙酸乙酯(1:1) 40~50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇或乙醇I~3ml使溶解，作為供試品溶液，另取芍藥苷對照品，加甲醇或乙醇制成每Iml含0.5~Img的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供對照品溶液和試品溶液各3~5μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水為展開劑，四組份的配比為38:10:5:0.2或40:10:5:0.2，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 °C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； ②骨碎補的薄層鑒別:取柚皮苷對照品，加甲醇或乙醇或70%乙醇制成每Iml含I~1.5mg的溶液，作為對照品溶液。取[鑒別](I)項下的供試品溶液作為供試品溶液，照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各5~10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，四組份的配比為1:12:2.5:3或1:10:2:3或1.5:12:2.5:2.5，展開，取出，晾干，噴以5~10%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱3~5分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； ③當歸的薄層鑒別:取益腎補骨液30~40ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2~3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，繼用1%碳酸氫鈉溶液振搖提取2次，每次30ml，合并碳酸氫鈉溶液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至2~3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30~40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇或乙酸乙酯I~2ml使溶解，作為供試品溶液，另取當歸對照藥材I~2g，用1%碳酸氫鈉溶液40~50ml，超聲處理20~25分鐘，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2~3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30~40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加乙醇或乙酸乙酯I~2ml使溶解，作為對照藥材溶液，再取阿魏酸對照品，加乙醇或乙酸乙酯制成每Iml含I~1.2mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各5~10 μ 1、對照品溶液2~4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-冰醋酸為展開劑，三組份的配比為6:1:0.5或6:2:0.8或6:1:1，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； ④續(xù)斷的薄層鑒別:取益腎補骨液30~40ml，加乙醚振搖提取2次，每次20~30ml，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30~40ml，合并正丁醇液，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次30~40ml，棄去洗滌液，正丁醇液再用30~40ml的氨試液洗滌，棄去洗液。將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇或乙醇I~2ml使溶解，作為供試品溶液，另取續(xù)斷對照藥材I~1.5g,加甲醇或乙醇25~35ml，冷浸30分鐘，超聲處理30~40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20~25ml使溶解，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液，再取川續(xù)斷皂苷VI對照品，加甲醇或乙醇制成每Iml含3~5mg的溶液作為對照品溶液，照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5~10 μ 1、對照藥材溶液3~5μ 1、對照品溶液5~8μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水10°c以下放置的下層溶液為展開劑，三組份的配比為13:7:2或13:6:1，展開，取出，晾干，噴以8~10%的磷鑰酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (2)骨碎補的含量測定 ①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-冰醋酸=30~35:69~64:1為流動相，檢測波長為284nm，理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應不低于.3000 ； ②對照品溶液的制備:取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加70~80%乙醇制成每Iml含.60~80 μ g的溶液，即得； ③供試品溶液的制 備:精密量取益腎補骨液5~10ml，置100ml量瓶，加70~80%乙醇80ml，超聲處理20~30分鐘，放冷，加70~80%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ④測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5~10μ 1，注入液相色譜儀，測定，得數(shù)據(jù)，本品每1ml含骨碎補以柚皮苷計，不得少于0.20mg。
【文檔編號】G01N30/90GK103675190SQ201310699363
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】付成國, 徐建, 白冰, 徐國強, 徐云, 王婷婷, 趙俞, 任晶 申請人:吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司