生物標記用于制備心臟衰竭診斷組合物的用途及診斷裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途，所述診斷組合物用于評估個體的心臟衰竭可能性；再者，本發(fā)明進一步根據(jù)所述可能性將所述個體的心臟衰竭分類到美國心臟學會的A、B、C及D期或心臟衰竭的預后分類為死亡或再住院，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、丁酰肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一種。再者，本發(fā)明進一步提供一種用于診斷心臟衰竭的裝置。相較于BNP與傳統(tǒng)生物標記，本發(fā)明通過使用代謝組學分析而辨識出新的生物標記，由此提供心臟衰竭患者更好的診斷值與預后值。
【專利說明】生物標記用于制備心臟衰竭診斷組合物的用途及診斷裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明關(guān)于個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途以及含有該 生物標記的診斷裝置。

【背景技術(shù)】
[0002] 心臟衰竭（heartfailure)是多種心血管疾病發(fā)展到最后階段所呈現(xiàn)的一個臨床 綜合征。在過去數(shù)十年來，對于基礎(chǔ)病理生理學與血液動力學的了解以及新穎藥物與侵入 性治療的發(fā)展已有大幅的進步。盡管如此，短期及長期與心臟衰竭相關(guān)的再住院率與死亡 率仍高，且需大量的健康照護資源?，F(xiàn)有的治療策略在心臟衰竭晚期的效果有限，迫切需要 新的介入性措施以降低在亞臨床（sub-clinical)階段時的不當分子進程，以避免心臟衰 竭病程進展到下一階段。
[0003] 多種用于心臟衰竭的生物標記已被證實。B型利尿勝肽（B-typenatriuretic p印tide，BNP)及其N端片段已成為臨床上有用于診斷心臟衰竭及預后的生物標記。最近的 研究顯示，利尿勝肽亦提供無明顯癥狀的具有中度風險的心血管疾病個人的預后。不幸的 是，此等生物標記無法對用于侵入性治療的分子標靶提供額外資訊。此外，單一生物標記的 應用可能不足以用來評估心臟衰竭患者，需通過多種分子的組合以獲得補償。
[0004] 根據(jù)目前對心血管風險因子的認知，大部分心臟衰竭患者的病因仍無法解釋。不 論何種異質(zhì)病因，心臟衰竭的發(fā)展與心臟不能滿足身體的代謝需求息息相關(guān)。整體代謝作 用中伴隨的變化對于心臟衰竭特定性代謝組（metabolome)的臨床應用（診斷與預后目 的）具有暗示性。目前心臟衰竭期別的評估并非根據(jù)致病機制，而是根據(jù)源自于美國心 臟病學會與美國心臟協(xié)會（AmericanCollegeofCardiologyandtheAmericanHeart Association，ACC/AHA)的共識。ACC/AHA將心臟衰竭分類成四個期別，舉例而言，A期為尚 未發(fā)生心臟結(jié)構(gòu)性病變，但具有罹患心臟衰竭的風險者（如具有冠心病但未出現(xiàn)梗塞的糖 尿患者者）期為具有心臟結(jié)構(gòu)性病變（即心輸出量下降、左心室肥大及心室心房擴張）， 但未發(fā)生任何心臟衰竭癥狀的個人；C期指發(fā)展出臨床心臟衰竭的患者；D期指具有難治性 心臟衰竭且需使用進階侵入性治療（例如：雙心室心律調(diào)節(jié)器、左心室輔助裝置或移植）的 患者。
[0005] 除了ACC/AHA所定義的心臟衰竭期別，尚有依心臟衰竭功能狀態(tài)所定義的其他分 類方式，稱之為紐約心臟學會功能分類（I級至IV級），此分類涉及每日活動的癥狀與患者 的生活品質(zhì)。I級：體能活動不受限制，普通體能活動不會造成過度疲勞、心悸或呼吸困難 (呼吸短促）；11級：體能活動稍受限制，靜止時感到舒適，但普通體能活動會造成過度疲 勞、心悸或呼吸困難；III級：體能活動受到明顯限制，靜止時感到舒適，但少量的普通活動 就會造成過度疲勞、心悸或呼吸困難；IV級：無法進行任何體能活動而不發(fā)生不適，靜止時 感到心功能不全，若進行任何體能活動則不適感會增加。
[0006] 發(fā)展多種生物標記的高產(chǎn)出量及潛力所帶來的優(yōu)勢在于代謝組學為辨識代謝特 征的平臺，該代謝特征與前心臟衰竭階段至進階心臟衰竭階段的亞型（subtype)相關(guān)，且 獨立于既定的傳統(tǒng)風險因子所形成的限制。徹底了解心臟衰竭中波動的代謝作用，并配合 營養(yǎng)基因體學的研究進展，將有潛力發(fā)展出個人化的預防措施。
[0007] US2012/0286157A1揭露一種于個體中診斷心臟衰竭的方法，其中，該方法包括從 個體的樣本中測定至少一種生物標記的量，該生物標記諸如甘露糖（mannose)、次黃嘌呤 (hypoxanthine)、谷氨酸鹽（glutamate)、尿酸（uricacid)、天冬氨酸鹽（aspartate)等。 此外，該專利也揭露該方法可用于辨識個體是否需要治療心臟衰竭，或測定心臟衰竭療程 是否成功。
[0008] 雖然幾種生物標記（如甘露糖、次黃嘌呤、天冬氨酸鹽）已被用于診斷心臟衰竭， 仍有醫(yī)療上的需求以尋找更具靈敏性及專一性的生物標記，以用于診斷心臟衰竭（特別是 在心臟衰竭早期階段）及評估心臟衰竭預后。
[0009] 為了診斷心臟衰竭及評估心臟衰竭預后，本發(fā)明的目的用來測定代謝組學分析的 臨床應用及重要性，以及探究心臟衰竭患者的復雜的整體代謝波動，且在不同心臟衰竭期 別或在侵入性治療后復原階段中提供靈敏評估。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 有鑒于現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備 診斷組合物的用途，所述診斷組合物用于評估個體的心臟衰竭可能性，其中，該生物標記選 自黃噪呤（xanthine)、亞精胺（spermidine)、丙酰肉堿（propionylcarnitine)、丁酰肉堿 (butyrylcarnitine)及對硫甲酚（p-cresylsulfate)所組成組的至少一種。
[0011] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物樣本選自血液、血漿、血清及尿液所組成組的 至少一種。
[0012] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0013] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該氨基酸選自谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、 精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸所組成組的 至少一種。
[0014] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括次黃噪呤（hypoxanthine)。
[0015] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿 (phosphatidylcholine)〇
[0016] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該磷脂酰膽堿選自二?；字Ｄ憠AC34:4、酰 基-烷基磷脂酰膽堿C36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3、二酰基磷脂酰膽堿C36:0、二酰基磷脂酰膽堿C36:1、二?；字Ｄ憠AC36: 3、二?；?脂酰膽堿C38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二酰基磷脂酰膽堿C38:5、二?；字Ｄ憠A C40:5、二酰基磷脂酰膽堿C36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C36:5、二酰基磷脂酰膽堿C38:0、 酰基-烷基磷脂酰膽堿C32: 3、二酰基磷脂酰膽堿C40: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C38:3及 二?；字Ｄ憠AC42:6所組成組的至少一種。
[0017] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該磷脂酰膽堿較佳選自酰基-烷基磷脂酰膽堿 C34:2、酰基-烷基磷脂酰膽堿C34:3及二?；字Ｄ憠AC34:4所組成組的至少一種。
[0018] 本發(fā)明進一步提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途， 所述診斷組合物用于評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體的心臟衰竭分類到美國心臟 學會的A、B、C及D期，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺及丙酰肉堿所組成組的至少一 種。
[0019] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0020] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該氨基酸選自谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、 精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸所組成組的 至少一種。
[0021] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括次黃嘌呤。
[0022] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿。
[0023] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該磷脂酰膽堿選自二?；字Ｄ憠AC34:4、酰 基-烷基磷脂酰膽堿C36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3、 二?；字Ｄ憠AC36:0、二?；字Ｄ憠AC36:1、二?；字Ｄ憠AC36: 3、二?；?脂酰膽堿C38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二?；字Ｄ憠AC38:5、二?；字Ｄ憠A C40:5、二?；字Ｄ憠AC36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C36:5、二?；字Ｄ憠AC38:0、 ?；?烷基磷脂酰膽堿C32:3、二?；字Ｄ憠AC40: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C38:3及 二?；字Ｄ憠AC42:6所組成組的至少一種。
[0024] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該磷脂酰膽堿較佳選自酰基-烷基磷脂酰膽堿 C34:2、酰基-烷基磷脂酰膽堿C34:3及二?；字Ｄ憠AC34:4所組成組的至少一種。
[0025] 本發(fā)明進一步提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途， 所述診斷組合物用于評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體的心臟衰竭預后分類為死亡 或再住院，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丁酰肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一 種。
[0026] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0027] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該氨基酸為必需氨基酸。
[0028] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該必需氨基酸選自組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨 酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸及纈氨酸所組成組的至少一種。
[0029] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該必需氨基酸較佳選自亮氨酸、蘇氨酸及色氨酸所 組成組的至少一種。
[0030] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括二甲基精氨酸 (dimethylarginine)、及二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
[0031] 于本發(fā)明的一具體實施例中，該生物標記進一步包括對稱性二甲基精氨酸、及對 稱性二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
[0032] 本發(fā)明進一步提供一種用于診斷心臟衰竭的診斷裝置，其包括：檢測器，用于檢測 選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、丁酰肉堿、對硫甲酚及其組合所組成組的生物標記。
[0033] 于本發(fā)明的若干具體實施例中，代謝組學技術(shù)（metabonomics/metabolomics technology)可使用多變量統(tǒng)計技術(shù)（multivariatestatisticaltechniques)來分析高 度復雜的數(shù)據(jù)組，該數(shù)據(jù)組產(chǎn)生自高產(chǎn)出量光譜，如核磁共振（NMR)光譜及質(zhì)譜（MS)。于本 發(fā)明的若干具體實施例中，可結(jié)合使用不同種類的光譜平臺，如氣相色譜_質(zhì)譜法（GC-MS) 及液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS)，其可帶來補充分析結(jié)果的優(yōu)勢，因此可提供擴大的用以解釋 與病理生理條件相關(guān)的生物性變異的代謝"窗（window)"。于本發(fā)明的某些具體實施例中， 辨識可用以說明具有心臟衰竭的患者及健康者的代謝物譜型（metaboliteprofile)間差異 的代謝物，能夠顯示該疾病的重要基本分子機制。
[0034] 于本發(fā)明的若干具體實施例中，分析方法可包括氣相色譜法與質(zhì)譜法。舉例 而言，根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該分析方法可包括氣相色譜-飛行時間質(zhì)譜法（gas chromatography-time-of-flightmassspectrometry,GC-T0FMS)及超效液相色譜-四 偶極-飛行時間質(zhì)譜法(ultra-performanceliquidchromatography-quadrupoIe time-〇f-flightmassspectrometry,UPLC-QT0FMS)。于某些具體實施例中，可使用超過一 種分析方法以于患者樣本中獲得有關(guān)代謝物的數(shù)據(jù)。于若干具體實施例中，可將一種或多 種分析方法與多變數(shù)統(tǒng)計技術(shù)（multivariatestatisticaltechniques) -起使用，藉此 判定患者樣本中的代謝物譜型。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035] 圖1顯示針對心臟衰竭的全代謝組學的診斷數(shù)值。收集來自不同心臟衰竭期別（A 期、B期及C期）患者及正常者的血漿樣本，通過LC-MS/MS測定該樣本的全代謝物濃度。圖 1中，（A)正交投影潛在結(jié)構(gòu)判別分析（OPLS-DA)得分圖（scoreplot)顯示正常對照組與 A期及C期的心臟衰竭患者間有明顯的區(qū)別。為了區(qū)分正常對照組與C期患者，使用所有 全代謝組學數(shù)據(jù)組并計算出全代謝組學衍生參數(shù)，稱之為t[l](如X軸所示）；為了區(qū)分正 常對照組與A期患者，使用所有全代謝組學數(shù)據(jù)組并計算出另一全代謝組學衍生參數(shù)，稱 之為t[0](如y軸所示）。于t[l]標尺中，A期患者的集聚區(qū)相似于正常對照組，然而相較 于正常對照組于t[0]標尺上向上位移。（B)依同樣的全代謝組學衍生參數(shù)計算方式，計算 出B期患者的t[l]與t[0]值。B期患者的得分圖廣布的區(qū)域位于A期、C期及正常對照組 間。
[0036] 圖2顯示心臟衰竭（HF)致病機制相關(guān)的代謝途徑，辨別HF患者中尿素（urea) 循環(huán)（a)、生物蝶呤（biopterin)循環(huán)（b)、甲硫腺苷（methylthioadenosine，MTA)循環(huán) (c)、甲硫氨酸循環(huán)（d)、鳥氨酸-脯氨酸-谷氨酸（e)、多胺（polyamine)合成（f)、多巴 胺（dopamine)合成（g)、甲基化（肌酸酐（creatinine)及磷脂酰膽堿）（h)、轉(zhuǎn)硫化反應 (transsulfuration)(?；撬幔╰aurine)) (i)、對硫甲酚合成（j)及噪呤（purine)代謝（k) 的變異。在HF患者中，代謝物（實線框）顯著增加、代謝物（虛線框）顯著減少、代謝物 (黑色）不變，而代謝物（灰色）則未檢測。
[0037] 圖3顯示于急性心臟衰竭后的一系列追蹤，BNP及tPS[l]數(shù)值示于32個患者中， 該些患者存活超過12個月，且于12個月結(jié)束時顯著改善成紐約心臟學會功能分類級別I。N 表示正常對照組；M0、M6及M12分別表示出院前及出院后6個月與12個月的數(shù)值；tPS[l]: 根據(jù)四種代謝物（組氨酸、苯丙氨酸、亞精胺及次黃嘌呤）的組合所產(chǎn)生的參數(shù)，稱之為 tPS[l]。
[0038] 圖4顯示BNP與一些目標代謝物及目標代謝物組合的診斷值。該ROC曲線是通過 B型利尿勝肽（B-typenatriureticpeptide、BNP)、t[2]及tPS[2]顯示C期心臟衰竭的 診斷（相較于正常對照組）。t[2]:衍生自計算所有目標代謝物的參數(shù)；tPS[2]:根據(jù)四種 代謝物（組氨酸、苯丙氨酸、亞精胺及二酰基磷脂酰膽堿C34:4)的組合所產(chǎn)生的參數(shù)，稱之 為tPS[2]。
[0039] 圖5顯示代謝組學的預后值。圖5中，（A)該ROC曲線用以比較B型利尿勝肽 (BNP)、t[2]、tPS[2]及tPS[3]的預后值。⑶及（C)分別表示tPS[3]與BNP的卡本-麥 爾曲線（Kaplan-Meiercurve),用以預測所有案例的全因死亡（all-causedeath)與心臟 衰竭相關(guān)的再住院率的組合事件。tPS[3]:根據(jù)四種代謝物（二甲基精氨酸/精氨酸的比 率、亞精胺、丁酰肉堿及必需氨基酸總量）的組合所產(chǎn)生的參數(shù)，稱之為tPS[3]。

【具體實施方式】
[0040] 以下特定的實施例用以例示本發(fā)明，本發(fā)明所屬的【技術(shù)領(lǐng)域】人員可以輕易確信本 發(fā)明的其他優(yōu)點及效果。本發(fā)明能以經(jīng)制訂的不同特定案例或應用來實施，說明的細節(jié)亦 能根據(jù)不同觀點及應用而做出多種修改或變化，且不悖離本發(fā)明的范圍及精神。
[0041] 尚需注意的是，本文中，除非特別表示或明確意指為單數(shù)，單數(shù)形式的術(shù)語"一 (a，an)"、"該（the)"須解釋為亦涵蓋復數(shù)。除非內(nèi)文清楚指明，否則術(shù)語"或"可與術(shù)語 "及/或"互相取代。
[0042] 本文中，術(shù)語"個體"或"個人"可為動物，舉例而言，該個體或個人可為哺乳動物， 再者，該個體或個人可為人類。該個體或個人可為男性或女性，該個體或個人亦可為患者， 其中，該患者為正進行牙科或醫(yī)療照護者，及/或為了失調(diào)或疾病而積極尋求醫(yī)療照護者。 [0043] 本文中者，術(shù)語"健康"意指不具有心臟衰竭或其他相關(guān)失調(diào)的個人。
[0044] 本文中，術(shù)語"代謝作用"意指發(fā)生于有機活體內(nèi)的一套化學反應，用以維持生命。 代謝作用通常可分為兩種類別：分解代謝與合成代謝。分解代謝為分解有機物質(zhì)的一套化 學反應（例如從細胞呼吸作用中取得能量）；合成代謝為消耗能量來建構(gòu)細胞組成物的一 套化學反應（例如蛋白質(zhì)合成與核苷酸合成）。
[0045] 本文中，術(shù)語"生物標記"意指為分子種類，該分子種類作為過程、事件或狀態(tài)（例 如：老化、疾病或曝露于有毒物質(zhì)）的獨特生物性或生物衍生性指標（例如：體內(nèi)生化代謝 物）。
[0046] 本文中者，術(shù)語"代謝物"意指代謝作用的中間產(chǎn)物或產(chǎn)物。該術(shù)語"代謝物"一般 限制為小分子。"初級代謝物"為直接參與正常生長、發(fā)育及生殖的代謝物（例如：乙醇）； "次級代謝物"為未直接參與上述過程的代謝物，但其通常具有重要的生態(tài)功能（例如：抗 生素及色素）。有些抗生素使用初級代謝物作為前體，例如自初級代謝物色氨酸所產(chǎn)生的放 射菌霉素（actinomycin)。然而，為了本發(fā)明的目的，該術(shù)語"代謝物"意指參與在代謝途徑 中的小分子（< 1000道爾頓（Dalton))中間產(chǎn)物及產(chǎn)物，該代謝途徑如糖解作用、檸檬酸 (TCA)循環(huán)、氨基酸合成及脂肪酸代謝作用等等。
[0047] 本文中者，術(shù)語"代謝組學（metabolomics或metabonomics) "意指代謝物 譜型的系統(tǒng)研究，該代謝物譜型是在一給定條件下的生物系統(tǒng)的生物過程。"代謝組 (metabolome) "意指一組完整的小分子代謝物（如代謝中間產(chǎn)物、激素及其他訊號分子，以 及次級代謝物），該小分子代謝物于生物樣本（如生物細胞、組織、器官或有機體）中被發(fā)現(xiàn) 且為細胞過程的最終產(chǎn)物。代謝組學為可提供由上至下、全面性及無偏執(zhí)（unbiased)資訊 的技術(shù)平臺。現(xiàn)有兩種代謝組學方法：全面性代謝組學及目標代謝組學。
[0048] 本文中，術(shù)語"代謝物譜型"或"代謝物生物標記譜型"意指代謝物概況，其在健康 的個體中，相較于不健康的個體（如具有心臟衰竭個體）或在疾病的不同狀態(tài)（如疾病的 不同階段），會測定出不同含量（如增加或減少）。
[0049]本文中，術(shù)語"心臟衰竭（HF) "意指心臟功能受損的情況，導致心臟無法以足夠的 速率或足夠的量輸送血液。心臟衰竭可為收縮期受損，造成心臟輸出血液的量顯著下降，因 而降低血流量。因此，收縮期心臟衰竭的特征為左心室的排出量（LVEF)顯著降低，較佳地， 排出量低于50%。或者，心臟衰竭可為舒張期受損，即心室未能妥善放松，且通常伴隨有心 室壁僵硬。舒張期心臟衰竭造成心室的充填不足，因而影響血液流量。因此，舒張期功能失 調(diào)亦導致舒張末期壓力上升。故心臟衰竭可影響右心（肺循環(huán)）及左心（體循環(huán)）或兩 者。測量心臟衰竭的技術(shù)為本領(lǐng)域所公知，包括超聲波心動掃描儀、電生理學、血管造影，以 及血中勝肽生物標記（例如：B型利尿勝肽（B-typenatriureticpeptide,BNP)或其前肽 的N端片段）的測定。應理解心臟衰竭可持續(xù)發(fā)生或僅于某些壓力或活動的情況下發(fā)生。 典型的心臟衰竭特征包括呼吸困難、胸痛、頭暈、意識模糊，以及肺部及/或末梢水腫。根據(jù) 美國心臟病學會與美國心臟協(xié)會的2001指南，心臟衰竭可分為A、B、C及D期，A期：在未來 具有發(fā)展成心臟哀竭的1?風險，但未有功能或結(jié)構(gòu)性心臟失調(diào)的患者；B期：具有結(jié)構(gòu)性心 臟失調(diào)，但于任何時期皆無癥狀者；C期：在具有基本結(jié)構(gòu)性心臟問題的情況下，先前或目 前有心臟衰竭癥狀，但以醫(yī)療處理者；D期：具有難治性心臟衰竭且需進階侵入性治療的患 者。
[0050]本文中，術(shù)語"全代謝物（globalmetabolite) "意指獲得全面性且廣泛的代謝物 譜型，其在特定條件或在不同條件的數(shù)個跨群組中，可用以比較大量的分析物。可通過分析 來自不同處理條件（如藥物處理組與對照組）或不同病理生理情況（如糖尿病組與正常 組）的復制樣本而獲得全代謝物。為了此目的，將生物樣品（細胞、血漿、尿液、唾液或病理 樣品）進行分析（通過分析工具，如LC-MS)以產(chǎn)生數(shù)據(jù)組，隨后進行單變數(shù)或多變數(shù)統(tǒng)計 分析。全代謝組學的目的在于辨別特征，該特征可系統(tǒng)性將大量的代謝物分組（種類）。
[0051]本文中，術(shù)語"目標代謝物"意指經(jīng)定義的代謝物組的辨識與量化，該代謝物為結(jié) 構(gòu)上已知且經(jīng)標注，且根據(jù)經(jīng)完整建立的生物化學途徑而來。
[0052]本發(fā)明提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途，所述診 斷組合物用于評估個體的心臟衰竭可能性，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉 堿、丁酰肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一種。
[0053]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物樣本選自血液、血漿、血清及尿液所組成組的 至少一種。
[0054]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0055]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該氨基酸選自谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、 精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸所組成組的 至少一種。
[0056]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括次黃嘌呤。
[0057]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿。
[0058]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該磷脂酰膽堿選自二?；字Ｄ憠AC34:4、酰 基-烷基磷脂酰膽堿C36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3、 二?；字Ｄ憠AC36:0、二酰基磷脂酰膽堿C36:1、二酰基磷脂酰膽堿C36: 3、二?；?脂酰膽堿C38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二?；字Ｄ憠AC38:5、二?；字Ｄ憠A C40:5、二酰基磷脂酰膽堿C36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C36:5、二酰基磷脂酰膽堿C38:0、 ?；?烷基磷脂酰膽堿C32: 3、二酰基磷脂酰膽堿C40: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C38:3及 二?；字Ｄ憠AC42:6所組成組的至少一種。
[0059] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該磷脂酰膽堿較佳選自?；?烷基磷脂酰膽堿 C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3及二酰基磷脂酰膽堿C34:4所組成組的至少一種。
[0060] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，在心臟衰竭C期的患者中，一些與精氨酸代謝有關(guān) 的代謝物（如谷氨酰胺及瓜氨酸）的含量較低；次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸、谷氨酸、脯氨酸、鳥 氨酸、精胺與亞精胺的含量則上升；芳香氨基酸（如酪氨酸及苯丙氨酸）的含量較高。此 夕卜，數(shù)種磷脂酰膽堿的含量降低，而?；撬岬暮縿t增加。
[0061] 本發(fā)明進一步提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途， 所述診斷組合物用于評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體的心臟衰竭分類到美國心臟 學會的A、B、C及D期，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺及丙酰肉堿所組成組的至少一 種。
[0062]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0063]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該氨基酸選自谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、 精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸所組成組的 至少一種。
[0064]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括次黃嘌呤。
[0065]根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿。
[0066] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該磷脂酰膽堿選自二酰基磷脂酰膽堿C34:4、酰 基-烷基磷脂酰膽堿C36:2、酰基-烷基磷脂酰膽堿C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3、 二酰基磷脂酰膽堿C36:0、二?；字Ｄ憠AC36:1、二?；字Ｄ憠AC36: 3、二?；?脂酰膽堿C38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二?；字Ｄ憠AC38: 5、二?；字Ｄ憠A C40:5、二?；字Ｄ憠AC36:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C36:5、二?；字Ｄ憠AC38:0、 酰基-烷基磷脂酰膽堿C32: 3、二酰基磷脂酰膽堿C40:4、酰基-烷基磷脂酰膽堿C38:3及 二?；字Ｄ憠AC42:6所組成組的至少一種。
[0067] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該磷脂酰膽堿較佳選自?；?烷基磷脂酰膽堿 C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3及二酰基磷脂酰膽堿C34:4所組成組的至少一種。
[0068] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，在心臟衰竭期別（例如：A期、B期及C期）的判斷上， 相較于BNP值，檢驗組合下列所組成組的至少二種生物標記的含量以及比對該生物標記的 參考值較為靈敏：黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、氨基酸、次黃嘌呤及磷脂酰膽堿。
[0069]本發(fā)明進一步提供一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途， 所述診斷組合物用于評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體心臟衰竭的預后分類為死亡 或再住院，其中，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丁酰肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一 種。
[0070] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括氨基酸。
[0071] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該氨基酸為必需氨基酸。
[0072] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該必需氨基酸選自組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨 酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸及纈氨酸所組成組的至少一種。
[0073] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該必需氨基酸較佳選自亮氨酸、蘇氨酸及色氨酸所 組成組的至少一種。
[0074] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括二甲基精氨酸 (dimethylarginine)、及二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
[0075] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，該生物標記進一步包括對稱性二甲基精氨酸、及對 稱性二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
[0076] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，在急性心臟衰竭后預后的狀態(tài)預估中，以檢驗組合 四種代謝物（例如：組氨酸、苯丙氨酸、亞精胺及次黃嘌呤）的診斷值，相較于BNP，該診斷 值較為靈敏。
[0077] 根據(jù)本發(fā)明的一具體實施例，在心臟衰竭預后的判斷上，相較于BNP值，檢驗組合 下列所組成組的至少二種生物標記的含量以及比對該生物標記的參考值較為靈敏：黃嘌 呤、亞精胺、丁酰肉堿、氨基酸、次黃嘌呤及磷脂酰膽堿。
[0078] 本發(fā)明進一步提供一種用于診斷心臟衰竭的診斷裝置，其包括：檢測器，用于檢測 選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、丁酰肉堿、對硫甲酚及其組合所組成群組的生物標記。
[0079] 以下多個實施例用以例示本發(fā)明，以下所述的實施例不限制本發(fā)明的范圍。
[0080] 實施例
[0081] 代謝組學分析的材料與方法
[0082] 一、患者與研究設(shè)計：
[0083] 本研究于2005年1月至2009年12月期間內(nèi)招收具有B期及C期心臟衰竭患者， 于2008年5月至2009年12月，招收A期心臟衰竭患者與正常對照組。C期患者因急性心 因性肺水腫而住院的，其年齡為20至85歲，具有收縮期及舒張期心臟衰竭的患者皆包括其 中。B期患者，與其左心室的排出量（LVEF)無關(guān)，其具有后期急性心肌梗塞，且具有任何的 嚴重結(jié)構(gòu)異?；颉?0%的LVEF，但B期的患者無癥狀。A期患者為（1)具有冠狀動脈疾病的 血管造影圖像、> 50%的LVEF且無癥狀；或（2)具有風險因子，但無癥狀，亦無冠心病的血 管造影圖像。正常對照組為年齡20-85歲，且無顯著的全身性疾病，如高血壓、糖尿病或冠 狀動脈疾病，其未進行任何藥物治療，且LVEF> 60%。
[0084]排除條件包括：⑴具有全身性疾病，如甲狀腺機能減退、失代償性肝硬化(decompensatedlivercirrhosis)及全身性紅斑性狼瘡；（2)具有非心臟衰竭的失調(diào)，且 已妥協(xié)存活6個月；（3)臥床不起>3個月及/或無法獨自站立的患者；（4)血清肌酸酐>3 毫克/分升（mg/dl)的患者；以及（5)患有嚴重冠狀動脈疾病但未進行血管再造的患者。 從所有患者處皆獲得知情同意。本研究設(shè)計及實行皆符合赫爾辛基宣言（Declarationof Helsinki)的原則，且經(jīng)長庚紀念醫(yī)院人體試驗倫理委員會批準。
[0085] 二、血液樣本與試驗
[0086] 于出院前及出院后6個月與12個月，將血液樣本收集于含有EDTA的管中。同 后續(xù)章節(jié)所描述的代謝組學工作流程分析血漿。以分級BNP試驗（TriageBNPTest) (Biosite，SanDiego,CA)三重復測量BNP，該試驗以熒光免疫分析法進行血漿BNP的定量。 其它測量，包括腎功能、血紅素及C反應蛋白，于核心實驗室中進行。
[0087] 三、疾病管理計劃
[0088]C期患者由HF小組進行照護，該小組由三位專門從事HF照護的心臟病專家、一位 心理學家、一位膳食助理及兩位個案經(jīng)理所組成。
[0089] 四、后續(xù)追蹤計劃
[0090] 預期每個月來自醫(yī)院紀錄、與患者的醫(yī)生進行個人溝通、電話訪談，以及患者例行 探訪的醫(yī)生門診以獲得后續(xù)數(shù)據(jù)。"再住院率"定義為與心臟衰竭相關(guān)的再住院率。三位心 臟病專家組成的委員會不考量患者的臨床可變值而對所有的住院率進行裁定，決定何為與 心臟衰竭惡化相關(guān)的事件。將"全因死亡（all-cause)"選擇作為終點（endpoint)的原因 為在患者分群中HF與其他并發(fā)癥的相互關(guān)系。最嚴重的事件被認為于后續(xù)的期間的終點。 為了預后的目的，僅分析與HF相關(guān)的再住院率與全因死亡的復合事件。
[0091] 五、血漿代謝組分析
[0092] (1)通過LC-TOFMS分析血漿全代謝物
[0093]于50微升（ii1)血漿中添加200ii1乙腈（ACN)，將該混合物震蕩30秒，超聲波 震蕩15分鐘，接著以10,OOOXg離心25分鐘，收集上清液且放入分離式玻璃管，該沉淀物 以200iU50%甲醇重新萃取。將甲醇上清液與乙腈上清液兩種水性溶液收集在一起并于 氮氣蒸發(fā)器中干燥，將殘留物保留并儲存于_80°C。為了代謝組學分析，將該殘留物溶于 IOOiil95:5水/乙腈，并以14,OOOXg離心5分鐘。收集澄清的上清液以進行LC-MS分 析。
[0094]使用ACQUITYTMUPLC系統(tǒng)（WatersCorp.，Milford,USA)且于 100 毫米 (mm)X2.ImmAcquityL7微米〇m)的C8柱上完成液相色譜分離，將該柱維持于45°C 以及流速〇. 5毫升/分鐘（ml/min)。使用線性梯度：0至2. 5分鐘：1至48%B;2. 5至 3分鐘：48至98%B;3至4. 2分鐘：98%B;4. 3至6分鐘：1%B，將樣本自LC柱中洗脫 (elute)，并用以重新平衡。移動相為0.1 %甲酸于水中（溶劑A)以及0.1 %甲酸于乙腈中 (溶劑B)。
[0095] 將該洗出液（eluent)導入TOGMS系統(tǒng)（SYNAPTGl高解析質(zhì)譜儀，Waters Corp. ,Milford,USA),并于ESI正離子模式下操作，其條件如下：去溶氣體（desolvation gas)設(shè)定為700公升/小時（1/h)，溫度300°C;錐孔氣體（conegas)設(shè)定為251/h，且 來源溫度設(shè)定為80°C;毛細管電壓與錐孔電壓分別設(shè)定為3, 000V與35V;MCP檢測器電壓 設(shè)定為1，650伏特（V);數(shù)據(jù)取得率設(shè)定為0. 1秒且內(nèi)掃描延遲為0. 02秒，該數(shù)據(jù)于質(zhì)心 模式（centroidmode)下自20至990m/z下收集。為了取得準確的質(zhì)量，磺胺二甲氧啼陡 (sulfadimethoxine)的鎖定質(zhì)量（lock-mass)為濃度60納克（ng)/毫升（ng/ml)而流速 為6y1/min(ESI正離子模式下，[M+H]+離子為311. 0814Da)。
[0096]使用MassLynxV4. 1 及MarkerLynx軟件（WatersCorp.，Milford,USA)處理 原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)。各質(zhì)量離子的強度關(guān)于總離子數(shù)，其經(jīng)標準化以產(chǎn)生數(shù)據(jù)矩陣（data matrix)，該數(shù)據(jù)矩陣包括滯留時間、m/z值及經(jīng)標準化的峰面積。通過SMCA-P軟件（版 本13. 0,UmetricsAB,Umea,瑞典）分析多變數(shù)數(shù)據(jù)矩陣，于使用帕雷托標度化（Pareto scaling)前先進行OPLS-DA模式。將SIMCA-P用于多變數(shù)數(shù)據(jù)分析與表現(xiàn)。
[0097] 接著將于兩群組間顯示顯著差異的確切分子質(zhì)量數(shù)據(jù)提交至數(shù)據(jù)庫中搜尋，使用 內(nèi)部數(shù)據(jù)庫或線上數(shù)據(jù)庫HMDB(http: //www.hmdb.ca/)及KEGG(http: //www.genome,jp/ kegg/)。為了鑒定特定的代謝物，在與進行譜型實驗相同的條件下，將標準品進行UPLC-MS/ MS分析。于每秒0. 1質(zhì)譜及大約4m/z的中型隔離視窗下收集MS/MS質(zhì)譜。碰撞能設(shè)定為 自5至35V。
[0098] 根據(jù)包括KEGG與HMDB的數(shù)據(jù)庫以MetaboAnalyst軟件進行有潛力的生物標記的 構(gòu)建、相互作用及途徑分析，藉此辨識受影響的代謝途徑并將其視覺化。通過大量的分析來 評估可能的生物性要素。
[0099] (2)血漿目標代謝物的定量（濃度測定）
[0100] 目標代謝物分析以AbsolutelDQ?pl80 試劑盒（BiocratesLifeScienceAG, Innsbruck，澳洲）來實施。該試劑盒用以辨識及定量184種代謝物，這些代謝物涵蓋五種 代謝物種類，包括90種甘油磷脂（glycerophospholipid)與15種鞘脂（sphingolipid) (76種磷脂酰膽堿、14種溶血磷脂酰膽堿（Iysophosphatidylcholine)及15種神經(jīng)鞘磷脂 (sphingomyelin))、19種生物胺、40種酰基肉堿（acylcarnitine)、19種氨基酸及六碳糖。 于96孔盤中將每10yL的血漿樣本與經(jīng)同位素標定的內(nèi)標物混合，并在氮氣流中干燥。以 5%異硫氰酸苯酯（卩1161^118〇1：11；[0073仙丨6，？11'0將氨基酸與生物胺衍生20分鐘，隨后于 氮氣中干燥。加入300yL的萃取溶液（5mM乙酸胺于甲醇中），反應30分鐘后將混合物以 IOOXg離心2分鐘。隨后將濾液以150iiL等分轉(zhuǎn)移至微孔盤中，再以150iiL水稀釋，藉此 使用LC-MS/MS進行氨基酸與生物胺分析。將殘留的濾液與試劑盒的MS流動溶劑400iiL 混合，并進行流動注射分析暨串聯(lián)式質(zhì)譜儀分析（flowinjectionanalysiscoupledwith tandemmassspectrometricanalysis,FIA-MS/MS)。該分析以正極及負極電噴灑離子化 模式來進行。通過多反應監(jiān)視（multiplereactionmonitoring,MRM)完成辨識與定量， 并通過訂定經(jīng)同位素標定的標準品而將之標準化。于LC-MS分析中，MS配合UPLC(Waters Corp,Milford,USA) 一起使用，而代謝物于反相柱（2.ImmX50mm,BEHC18,WatersCorp, Milford，USA)中分離。移動相由溶劑A(0. 2%甲酸于水中）與溶劑B(0. 2%甲酸于乙腈中） 的梯度混合物所組成（0分鐘0 %B，3. 5分鐘60 %B，3. 8分鐘0 %B，3. 9分鐘0 %B)。以流 速900iiL/min進行洗脫。柱溫維持在50°C。FIA使用等強度法（isocraticmethod)，以試 劑盒的MS流動溶劑作為移動相，其具有不同的流動條件（Omin，30iiL/min;I. 6min，30iiL/ min;2. 4min，200uL/min;2. 8min，200uL/min;3min，30uL/min)。所對應的MS如以下設(shè) 定：暫留時間0. 019-0. 25秒；3. 92KV正電壓模式；I. 5KV負電壓模式；氮氣作為碰撞氣體 介質(zhì)；來源溫度為150°C。用于LC-MS的參數(shù)為：暫留時間0. 006至0. 128秒；來源溫度為 150°C;電壓為3. 20KV;氮氣作為碰撞氣體介質(zhì)。用于目標MS數(shù)據(jù)分析的數(shù)據(jù)輸入與前處 理步驟使用TargetLynx(Waters,MA，USA)完成。通過自動化的代謝產(chǎn)物濃度計算將整合的 MetIDQ軟件（Biocrates，Innsbruck,澳洲）應用于流線型（streamline)數(shù)據(jù)分析。
[0101] (3)血楽中對硫甲酚與硫酸卩引哚酚（indoxylsulfate)的定量
[0102] 血漿樣本的制備是使用500L甲醇（以40ng/mld4-硫酸吲哚酚作為內(nèi)標準品） 將蛋白質(zhì)沉淀，接著于4°C以12,OOXg離心10分鐘。收集上清液用于對硫甲酚與硫酸吲哚 酌分析。于XevoTQMSAcquityUPLC系統(tǒng)（WatersCorp，Milford，USA)中實施LC-MS/ MS。于反相AcquityUPLCBEHC18柱（1.7iim，100mmX2.1mm)中完成分離。該柱維持于 40°C，流速為0. 5ml/min。將樣本自LC柱中洗脫是使用線性梯度：0至0. 5分鐘：10-20%B; 0. 5至3分鐘：20至70%B;3至3. 5分鐘：98%B;5. 1至7分鐘：10%B用于再平衡。移 動相為水（溶劑A)及甲醇（溶劑B)。串聯(lián)式四極質(zhì)譜法中的質(zhì)譜離子化、分裂及獲得條件 的優(yōu)化使用負極模式的電噴灑離子化（electrosprayionization,ESI)。條件如下：去溶 氣體設(shè)定為10001/h，溫度500°C;錐孔氣體設(shè)定為301/h，且來源溫度設(shè)定為150°C。毛細 管電壓與錐孔電壓分別設(shè)定為800V與30V。質(zhì)譜法操作于多反應監(jiān)測（MRM)模式，暫留時 間及內(nèi)掃描延遲時間分別為〇. 2秒及0. 1秒。數(shù)據(jù)的收集與處理使用Masslynx軟件（版 本 4. 0)。
[0103] (4)統(tǒng)計分析
[0104] 該結(jié)果表示為連續(xù)變數(shù)的平均值土SD以及分類變數(shù)的數(shù)目（百分比）。通過適當 的兩樣品的t_tests、AN0VA及卡方檢定（Chi-square)比較數(shù)據(jù)。使用指定的軟件來進行代 謝物組學分析。為了最大化各組間的代謝譜型的辨識差異，利用正交投影潛在結(jié)構(gòu)判別分 析（OPLS-DA)模式，并以SIMCA-P(版本13. 0,UmetricsAB,Umea,瑞典）來進行。計算該模 式中各變數(shù)的投影值中變數(shù)投影重要性（variableimportanceintheprojection,VIP) 的值，以該值表示對該類別的貢獻。較高的VIP值表示對各組間的區(qū)分有較強的貢獻。這些 變數(shù)的VIP值大于I. 0時被認為具有顯著性差異。代謝物組學以及HF的BNP的診斷值通 過接受者操作特征（receiveroperatingcharacteristic,R0C)曲線的曲線下面積（area underthecurve,AUC)表不。
[0105] 依進度表或最后一個可取得的探訪來收集后續(xù)數(shù)據(jù)。ROC曲線以及Kaplan-Meier 分析被用來測定第一個經(jīng)定義的事件（死亡、或與HF相關(guān)的再住院率）的預測器 (predictor)。為了Kaplan-Meier分析，該截斷值（cutoffvalue)設(shè)定為各變數(shù)的平 均值來獲得對數(shù)等級（Logrank)的數(shù)據(jù)。該AUC及對數(shù)等級的值被用來顯示具有HF 患者的代謝物組學的預后及BNP。所有的統(tǒng)計分析以雙尾及使用SPSS軟件進行（版本 15. 0,SPSS,Chicago,IL，USA)。小于0? 05的P值被認為具顯著性。
[0106] 實施例1:用以診斷及判斷心臟衰竭期別的全代謝組學分析
[0107] 1.各組病人的基本特性
[0108] 本實施例總共招收234名個體，其包括51名正常個體以及183名處于A期（n= 43)、B期（n= 67)及C期（n= 73)的患者，其基線特性與實驗室數(shù)據(jù)如表1所示。在大 部份的變數(shù)中，可注意到自正常對照組至A、B及C期患者間有顯著的改變趨勢。相較于正 常對照組，處于C期的患者的BNP含量明顯較高，QRS波群則較寬，但總膽固醇、低及高密 度脂蛋白膽固醇（lowandhighdensitylipoproteincholesterol)、鈉、血紅素、白蛋白 (albumin)及預估的腎小球過濾率（estimatedglomerularfiltrationrate)則較低。就 年齡而言，各組病人之間雖然沒有顯著的差異，但其年齡皆大于正常對照組。此外，患者中 的男性比例也較高。冠狀動脈疾病是HF患者的主要病因。
[0109]

【權(quán)利要求】
1. 一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途，所述診斷組合物用于 評估個體的心臟衰竭可能性，其特征在于，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、丁酰 肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一種。
2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該生物樣本選自血液、血漿、血清及尿液所 組成組的至少一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括氨基酸。
4. 如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，該氨基酸選自谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨酸、 組氨酸、精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸所 組成組的至少一種。
5. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括次黃嘌呤。
6. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿，該磷 脂酰膽堿選自二?；字Ｄ憠AC34: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C36: 2、?；?烷基磷脂酰 膽堿C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3、二酰基磷脂酰膽堿C36:0、二?；字Ｄ憠A C36:1、二?；字Ｄ憠AC36:3、二?；字Ｄ憠AC38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二酰 基磷脂酰膽堿C38:5、二?；字Ｄ憠AC40:5、二?；字Ｄ憠AC36:2、?；?烷基磷脂 酰膽堿C36:5、二?；字Ｄ憠AC38:0、?；?烷基磷脂酰膽堿C32:3、二?；字Ｄ憠A C40: 4、酰基-烷基磷脂酰膽堿C38:3及二?；字Ｄ憠AC42:6所組成組的至少一種。
7. 如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，該磷脂酰膽堿選自?；?烷基磷脂酰膽堿 C34:2、?；?烷基磷脂酰膽堿C34:3及二?；字Ｄ憠AC34:4所組成組的至少一種。
8. -種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途，所述診斷組合物用于 評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體的心臟衰竭分類到美國心臟學會的A、B、C及D期， 其特征在于，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺及丙酰肉堿所組成組的至少一種。
9. 如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括氨基酸。
10. 如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，該氨基酸選自于谷氨酰胺、酪氨酸、苯丙氨 酸、組氨酸、精氨酸、亮氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及脯氨酸 所組成組的至少一種。
11. 如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括次黃嘌呤。
12. 如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括磷脂酰膽堿，該磷 脂酰膽堿選自二酰基磷脂酰膽堿C34: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C36: 2、?；?烷基磷脂酰 膽堿C34:2、酰基-烷基磷脂酰膽堿C34:3、二?；字Ｄ憠AC36:0、二酰基磷脂酰膽堿 C36:1、二?；字Ｄ憠AC36:3、二?；字Ｄ憠AC38:6、二?；字Ｄ憠AC36:6、二酰 基磷脂酰膽堿C38:5、二?；字Ｄ憠AC40:5、二?；字Ｄ憠AC36:2、?；?烷基磷脂 酰膽堿C36:5、二?；字Ｄ憠AC38:0、?；?烷基磷脂酰膽堿C32:3、二?；字Ｄ憠A C40: 4、?；?烷基磷脂酰膽堿C38:3及二酰基磷脂酰膽堿C42:6所組成組的至少一種。
13. 如權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，該磷脂酰膽堿選自?；?烷基磷脂酰膽堿 C34:2、酰基-烷基磷脂酰膽堿C34:3及二?；字Ｄ憠AC34:4所組成組的至少一種。
14. 一種個體生物樣本中的生物標記用于制備診斷組合物的用途，所述診斷組合物用 于評估可能性，根據(jù)所述可能性將所述個體心臟衰竭的預后分類為死亡或再住院，其特征 在于，該生物標記選自黃嘌呤、亞精胺、丁酰肉堿及對硫甲酚所組成組的至少一種。
15. 如權(quán)利要求14所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括氨基酸。
16. 如權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于，該氨基酸為必需氨基酸。
17. 如權(quán)利要求16所述的用途，其特征在于，該必需氨基酸選自組氨酸、異亮氨酸、亮 氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸及纈氨酸所組成組的至少一種。
18. 如權(quán)利要求17所述的用途，其特征在于，該必需氨基酸選自亮氨酸、蘇氨酸及色氨 酸所組成組的至少一種。
19. 如權(quán)利要求14所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括二甲基精氨酸、及 二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
20. 如權(quán)利要求14所述的用途，其特征在于，該生物標記進一步包括對稱性二甲基精 氨酸、及對稱性二甲基精氨酸/精氨酸的比率。
21. -種用于診斷心臟衰竭的裝置，其包括： 檢測器，用于檢測選自黃嘌呤、亞精胺、丙酰肉堿、丁酰肉堿、對硫甲酚及其組合所組成 組的生物標記。
【文檔編號】G01N33/68GK104515860SQ201410482479
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】王兆弘, 蕭明熙, 鄭美玲 申請人:長庚大學